ISO 8261:2001

Milk and milk products — General guidance for the preparation of test samples, initial suspensions and decimal dilutions for microbiological examination

ISO 8261|IDF 122:2001 describes general guidelines for the preparation of test samples, initial suspensions and decimal dilutions for the microbiological examination of milk and milk products, including milk-based infant foods.

Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation des échantillons pour essai, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique

L'ISO 8261|FIL 122:2001 donne des lignes directrices générales pour la préparation des échantillons pour essai, des dilutions primaires et des dilutions décimales, en vue de l'examen microbiologique du lait et des produits laitiers, y compris les aliments lactés pour nourrissons.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 13-Jun-2001
• Withdrawal Date: 13-Jun-2001
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 10-Aug-2010

Relations

• Revised: ISO 6887-5:2010 - Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products
• Effective Date: 15-Apr-2008
• Revises: ISO 8261:1989 - Milk and milk products — Preparation of test samples and dilutions for microbiological examination
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 8261
IDF
122
Second edition
2001-06-15
Milk and milk products — General guidance
for the preparation of test samples, initial
suspensions and decimal dilutions for
microbiological examination
Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation
des échantillons pour essai, de la suspension mère et des dilutions
décimales en vue de l'examen microbiologique
Reference numbers
ISO 8261:2001(E)
IDF 122:2001(E)
©
ISO and IDF 2001

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IDF 122:2001(E)
PDF disclaimer
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committees. In the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the ISO Central Secretariat at the address given below.
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or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO or IDF at the respective address below.
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Fax + 41 22 749 09 47
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Printed in Switzerland
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IDF 122:2001(E)
Contents Page
Foreword.iv
Introduction.vi
1 Scope .1
2 Normative references .1
3 Terms and definitions .1
4 Principle.2
5 Diluents.2
5.1 Basic materials.2
5.2 Diluents for general use.2
5.3 Diluents for special purposes .3
5.4 Distribution, sterilization and storage of diluent.5
6 Apparatus .6
7 Sampling.7
8 Procedure .7
8.1 General.7
8.2 Preparation of test portion and initial suspension.7
8.3 Further decimal dilutions.10
8.4 Duration of the procedure.11
Bibliography.12
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IDF 122:2001(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this International Standard may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
International Standard ISO 8261�IDF 122 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products,
Subcommittee SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with
AOAC International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
This edition cancels and replaces the first edition (ISO 8261:1989), which has been technically revised.
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IDF 122:2001(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National Committee in
every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF Standing Committees
carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO and AOAC International in the development of standard
methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the National
Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of National
Committees casting a vote.
International Standard ISO 8261�IDF 122 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products,
Subcommittee SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with
AOAC International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
All work was carried out by the Joint ISO/IDF/AOAC Action Team, Preparations of samples and dilutions for
microbiological examinations, of the Standing Committee on Microbiological methods of analysis, under the aegis
of its project leader, Mr L.J.M. Maturin (US).
This edition cancels and replaces the third edition (IDF 122C:1996).
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IDF 122:2001(E)
Introduction
This International Standard is mainly based on ISO 6887-1. The necessary adaptations to microbiological
laboratory practice in the dairy industry and instructions specific to dairy products, especially in relation to sample
preparation, have been introduced.
The question of which diluent or diluents to specify has been the subject of discussion for some time. In this
International Standard the peptone/saline solution, as well as the buffered peptone water solution as used in
ISO 6887-1, is specified. Three other diluents which are commonly used in dairy microbiological laboratories are
also specified for general use. Furthermore, six diluents are specified for special purposes in dairy microbiological
laboratories.
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ISO 8261:2001(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 122:2001(E)
Milk and milk products — General guidance for the preparation of
test samples, initial suspensions and decimal dilutions for
microbiological examination
1 Scope
This International Standard describes general guidelines for the preparation of test samples, initial suspensions
and decimal dilutions for the microbiological examination of milk and milk products, including milk-based infant
foods.
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this International Standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these
publications do not apply. However, parties to agreements based on this International Standard are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For
undated references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC
maintain registers of currently valid International Standards.
ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and
decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial
suspension and decimal dilutions.
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations.
3 Terms and definitions
For the purposes of this International Standard, the following terms and definitions apply.
3.1
initial suspension
primary dilution
suspension, solution or emulsion obtained after a weighed or measured quantity of the product under examination
(or of a test sample prepared from the product) has been mixed, if necessary, using a blender and observing
appropriate precautions, with a nine-fold quantity of dilution fluid (diluent), allowing large particles, if present, to
settle
NOTE 1 In certain cases and in particular for products giving an initial 1 + 9 suspension which is too viscous or too thick, it
may be necessary to add more diluent. On the other hand, a more concentrated primary dilution than 1 + 9 may be required for
results of tests to relate to certain specification criteria. These factors should be taken into account for subsequent operations
and/or in the expression of results.
NOTE 2 The use of the first dilution is the most appropriate for fitting the requirement of less than 10 microorganisms per
gram. If it is desirable for some enumerations in some products to fall below this threshold, it is possible to use less diluent for
the suspension. However, inoculation of this suspension may result in an unbalanced inoculum/medium ratio.
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IDF 122:2001(E)
NOTE 3 For appropriate precautions, see 8.1.
NOTE 4 For details of diluents, see clause 5.
3.2
further decimal dilutions
suspensions, solutions or emulsions obtained by mixing a specific volume of the primary dilution (3.1) with a nine-
fold volume of diluent, and by repeating this operation with every dilution thus prepared, until a decimal dilution
series, suitable for the inoculation of culture media, is obtained
NOTE See 8.1.
4Principle
An initial suspension (3.1) is prepared and, if necessary, further decimal dilutions (3.2) are prepared to reduce the
number of microorganisms per unit volume to facilitate microbiological examination.
5 Diluents
5.1 Basic materials
In order to improve the precision of the results, it is recommended that, for the preparation of the diluent,
dehydrated basic components or a dehydrated complete preparation be used. The manufacturer's instructions shall
be rigorously followed.
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized water
or water of equivalent quality (see ISO 7218).
Any adjustment necessary to the pH of the media shall be made with solutions of sodium hydroxide (NaOH) or
hydrochloric acid (HCl) of appropriate molarities to minimize the change in media volume and thus composition; i.e.
in general, the lower the volume of medium, the higher the molarity.
5.2 Diluents for general use
5.2.1 Peptone-salt solution
5.2.1.1 Composition
Peptone of enzymatic digest of casein 1,0 g
Sodium chloride (NaCl) 8,5 g
Water 1 000 ml
5.2.1.2 Preparation
Dissolve the components in the water, by heating slightly on a hot plate (6.13) if necessary. Adjust the pH with the
appropriate solution (5.1) so that, after sterilization, it is 7,0� 0,2 at 25�C.
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IDF 122:2001(E)
5.2.2 Quarter-strength Ringer's solution
5.2.2.1 Composition
Sodium chloride (NaCl) 2,25 g
Potassium chloride (KCl) 0,105 g
Calcium chloride, anhydrous (CaCl)0,06g
2
Sodium hydrogen carbonate (NaHCO)0,05g
3
Water 1 000 ml
5.2.2.2 Preparation
Dissolve the salts in the water. Adjust the pH with the appropriate solution (5.1) so that, after sterilization, it is
6,9� 0,2 at 25�C.
5.2.3 Peptone solution
5.2.3.1 Composition
Peptone 1,0 g
Water 1 000 ml
5.2.3.2 Preparation
Dissolve the peptone in the water. Adjust the pH with the appropriate solution (5.1) so that, after sterilization, it is
7,0� 0,2 at 25�C.
5.2.4 Phosphate buffer solution
5.2.4.1 Composition
Potassium dihydrogen phosphate (KH PO ) 42,5 g
2 4
Water 1 000 ml
5.2.4.2 Preparation
Dissolve the salt in 500 ml of water. Adjust the pH with the appropriate solution (5.1) so that, after sterilization, it is
7,2� 0,2 at 25�C. Dilute to 1 000 ml. Store the stock solution under refrigeration.
Add 1 ml of this stock solution (at 20�C) to 1 000 ml of water for use as diluent.
5.3 Diluents for special purposes
These diluents shall only be used for the preparation of initial suspensions.
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5.3.1 Pre-enrichment medium: Buffered peptone water
5.3.1.1 Composition
Peptone of enzymatic digest of animal tissues 10,0 g
Sodium chloride (NaCl) 5,0 g
Disodium hydrogen phosphate dodecahydrate 9,0 g
(Na HPO �12H O)
2 4 2
Potassium dihydrogen phosphate (KH PO)1,5g
2 4
Water 1 000 ml
5.3.1.2 Preparation
Dissolve the components in the water by heating slightly on a hot plate (6.13) if necessary. Adjust the pH with the
appropriate solution (5.1) so that after sterilization it is 7,0� 0,2 at 25 °C.
This diluent is recommended for cases where tests for detecting Salmonella or Listeria monocytogenes arealsoto
be undertaken (see ISO 6579).
5.3.2 Sodium citrate solution [for cheese and (roller) dried milk]
5.3.2.1 Composition
Trisodium citrate dihydrate (Na C H O �2H O) 20,0 g
3 6 5 7 2
Water 1 000 ml
5.3.2.2 Preparation
Dissolve the salt in water by heating on a hot plate (6.13) at a temperature of between 45�Cto 50�C. Adjust the
pH with the appropriate solution (5.1) so that, after sterilization, it is 7,5� 0,2 at 25�C.
5.3.3 Dipotassium hydrogen phosphate solution [for cheese, (roller) dried milk, fermented milk, caseinates,
dried acid whey and sour cream]
5.3.3.1 Composition
Dipotassium hydrogen phosphate (K HPO ) 20,0 g
2 4
Water 1 000 ml
5.3.3.2 Preparation
Dissolve the salt in the water by heating on a hot plate (6.13) at a temperature of between 45�Cto 50�C. For acid
whey powder, adjust the pH with the appropriate solution (5.1) so that for the primary dilution, after sterilization, it is
8,4� 0,2 at 25�C. For cheese, roller-dried milk, fermented milk, caseinates and sour cream, adjust the pH with the
appropriate solution (5.1) so that, after sterilization, it is 7,5� 0,2 at 25�C.
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IDF 122:2001(E)
5.3.4 Dipotassium hydrogen phosphate solution with antifoam agent (for acid casein, lactic casein and
rennet caseins)
5.3.4.1 Composition
Dipotassium hydrogen phosphate (K HPO ) 20,0 g
2 4
Water 1 000 ml
5.3.4.2 Composition of antifoam stock solution
Polyethylene glycol 2000 (BDH) 1 g
Water 1 000 ml
5.3.4.3 Preparation
Dissolve the salt in the water by heating at a temperature of between 45�Cto50�C. Add 1 ml of the antifoam
stock solution to 1 litre of the K HPO solution. Adjust the pH with the appropriate solution (5.1) so that for the
2 4
primary dilution of both acid and lactic casein, after sterilization, it is 8,4� 0,2 at 25�C, and for rennet casein, after
sterilization, it is 7,5� 0,2 at 25�C.
5.3.5 Tripolyphosphate solution (alternative solution for rennet caseins with solubilization problems)
5.3.5.1 Composition
Sodium tripolyphosphate (Na O P ) 20,0 g
3 10 3
Water 1 000 ml
5.3.5.2 Preparation
Dissolve the salt in the water by heating slight
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 8261
FIL
122
Deuxième édition
2001-06-15
Lait et produits laitiers — Lignes directrices
générales pour la préparation des
échantillons pour essai, de la suspension
mère et des dilutions décimales en vue de
l'examen microbiologique
Milk and milk products — General guidance for the preparation of test
samples, initial suspensions and decimal dilutions for microbiological
examination
Numéros de référence
ISO 8261:2001(F)
FIL 122:2001(F)
©
ISO et FIL 2001

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ce fichier par les comités membres de l'ISO et les comités nationaux de la FIL. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème
d'utilisation, veuillez en informer le Secrétariat central de l'ISO à l'adresse donnée ci-dessous.
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Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit soit de l'ISO
soit de la FIL à l’adresse respective ci-après.
ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
Case postale 56 � CH-1211 Geneva 20 41 Square Vergote
Tel. + 41 22 749 01 11 B-1030 Bruxelles
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.ch
Imprimé en Suisse
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ISO 8261:2001(F)
FIL 122:2001(F)
Sommaire Page
Avant-propos.iv
Introduction.vi
1 Domaine d'application.1
2Références normatives .1
3Termesetdéfinitions.1
4 Principe.2
5 Diluants.2
5.1 Composants de base.2
5.2 Diluants d'emploi général .2
5.3 Diluants pour des besoins particuliers .4
5.4 Répartition, stérilisation et conservation du diluant.6
6 Appareillage .6
7 Échantillonnage .7
8 Mode opératoire.7
8.1 Généralités .7
8.2 Préparation de l'échantillon pour essai et de la dilution primaire.7
8.3 Dilutions décimales suivantes .11
8.4 Duréedesopérations .11
Bibliographie .12
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés iii

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ISO 8261:2001(F)
FIL 122:2001(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiéeaux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude aledroit de fairepartie ducomité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments delaprésente Norme internationale peuvent faire
l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
La Norme internationale ISO 8261�FIL 122 a étéélaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers,et laFédération internationale de laiterie (FIL), en
collaboration avec l'AOAC International. Elle est publiée cnjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par l’AOAC
International.
La présente édition annule et remplace la première édition (ISO 8261:1989), dont elle constitue une révision
technique.
iv © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés

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ISO 8261:2001(F)
FIL 122:2001(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l’ISO et avec l’AOAC
International pour l’élaboration de méthodes normalisées d’analyse et d’échantillonnage pour le lait et les produits
laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d’Action et les Comités permanents sont soumis
aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 50 %
au moins des Comités Nationaux votants.
La Norme internationale ISO 8261�FIL 122 a étéélaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers,et laFédération internationale de laiterie (FIL), en
collaboration avec l’AOAC International. Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par
l’AOAC International.
L’ensemble des travaux a été confiéà l’Équipe d’Action mixte ISO/FIL/AOAC Préparations d’échantillons et de
dilutions pour examens microbiologiques du Comité permanent chargé de Méthodes microbiologiques d’analyse,
sous la conduite de son chef de projet, monsieur L.J.M. Maturin (US).
La présente édition annule et remplace la troisième édition (FIL 122C:1996).
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés v

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ISO 8261:2001(F)
FIL 122:2001(F)
Introduction
La présente Norme internationale est principalement baséesur l’ISO 6887-1. Les adaptations nécessaires à son
utilisation par les laboratoires de microbiologie travaillant sur les produits laitiers et diverses instructions spécifiques
en matière de produits laitiers ont été introduites.
La question du ou des diluants à utiliser a fait l'objet d'un long débat. Dans la présente Norme internationale, la
solution peptone-sel ainsi que la solution d’eau peptonnée tamponnée, telles qu’utilisées dans l’ISO 6887-1, sont
spécifiées. Pour une utilisation courante, trois autres diluants sont également indiqués du fait de leur emploi
fréquent dans les laboratoires de microbiologie laitière. En outre, six diluants sont spécifiés pour une utilisation
particulière dans les laboratoires de microbiologie laitière.
vi © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés

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NORME INTERNATIONALE
FIL 122:2001(F)
Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la
préparation des échantillons pour essai, de la suspension mère et
des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale donne des lignes directrices générales pour la préparation des échantillons pour
essai, des dilutions primaires et des dilutions décimales, en vue de l'examen microbiologique du lait et des produits
laitiers, y compris les aliments lactés pour nourrissons.
2Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente Norme internationale. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes
aux accords fondés sur la présente Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les
éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non datées, la dernière
édition du document normatif en référence s’applique. Les membres de l'ISO et de la CEI possèdent le registre des
Normes internationales en vigueur.
ISO 6887-1, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons pour essai, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de la
suspension mère et des dilutions décimales.
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques.
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
suspension mère
dilution primaire
suspension, solution ou émulsion, obtenue après qu'une quantité peséeoumesuréedeproduit à analyser (ou de
l'échantillon préparéà partir de ce produit) a été mélangée, si nécessaire en utilisant un homogénéisateur et en
observant les précautions appropriées, avec une quantité neuf fois plus grande de diluant, en laissant se déposer
les particules grossières éventuellement présentes
NOTE 1 Il peut être nécessaire dans certains cas, notamment pour les produits donnant une dilution primaire 1 + 9 trop
visqueuse ou trop épaisse, d'ajouter davantage de diluant. D'autre part, lorsque les résultats des essais doivent être reliés à
certains critères de spécification, une dilution primaire d'une concentration supérieure à 1 + 9 peut être nécessaire. Il convient
de tenir compte de ces facteurs pour les opérations ultérieures et/ou dans l'expression des résultats.
NOTE 2 La dilution primaire permet de satisfaire au mieux à l'exigence de moins de 10 micro-organismes par gramme. S'il
s'avère souhaitable, dans le cas de dénombrements dans certains produits, de se situer au-dessous de ce seuil, on pourra
utiliser de plus faibles quantités de diluant pour les suspensions. Cependant, il faut tenir compte du fait que l'inoculation de cette
suspension risque d'entraîner un déséquilibre dans le rapport inoculum/milieu.
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés 1

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ISO 8261:2001(F)
FIL 122:2001(F)
NOTE 3 Pour les précautions appropriées, voir 8.1.
NOTE 4 Pour des informations détaillées concernant les diluants, voir l’article 5.
3.2
dilutions décimales suivantes
suspensions, solutions ou émulsions obtenues en mélangeant un volume déterminé de la dilution primaire (3.1)
avec un volume neuf fois plus grand de diluant, et en répétant cette opération sur chaque dilution ainsi préparée,
jusqu'à obtention d'une gamme de dilutions décimales appropriée pour l'inoculation des milieux de culture
NOTE Voir 8.1.
4Principe
Préparationdeladilutionprimaire(suspension mère) (3.1) et, si nécessaire, des dilutions décimales suivantes
(3.2), en vuederéduire le nombre de micro-organismes par unité de volume, afin de faciliter l'examen
microbiologique.
5 Diluants
5.1 Composants de base
Pour améliorer la fidélité des résultats, il est recommandé d'utiliser pour la préparation du diluant des composants
de base déshydratés ou une préparation complète déshydratée. Les instructions du fabricant doivent être suivies
scrupuleusement.
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue, sauf spécifications contraires, et de l'eau distillée
ou déminéraliséeoude l'eau depuretééquivalente (voir l’ISO 7218).
Utiliser des solutions d'hydroxyde de sodium (NaOH) ou d'acide chlorhydrique (HCl) de molarité appropriée pour
ajuster le pH des milieux afin de réduire le plus possible les variations de volume des milieux ainsi que leur
composition; cela revient à dire que plus le volume du milieu sera faible, plus la molarité sera élevée.
5.2 Diluants d'emploi général
5.2.1 Solution peptone-sel
5.2.1.1 Composition
Peptone de digestat enzymatique de caséine 1,0 g
Chlorure de sodium (NaCl) 8,5 g
Eau 1 000 ml
5.2.1.2 Préparation
Dissoudre les composants dans l'eau, en chauffant légèrement sur une plaque chauffante (6.13) si nécessaire.
Ajuster le pH avec la solution appropriée (5.1), de sorte qu'aprèsstérilisation il soit de 7,0� 0,2 à 25 °C.
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5.2.2 Solution de Ringer diluée au quart
5.2.2.1 Composition
Chlorure de sodium (NaCl) 2,25 g
Chlorure de potassium (KCl) 0,105 g
Chlorure de calcium anhydre (CaCl)0,06g
2
Hydrogénocarbonate de sodium (NaHCO)0,05g
3
Eau 1 000 ml
5.2.2.2 Préparation
Dissoudre les sels dans l'eau. Ajuster le pH avec la solution appropriée (5.1), de sorte qu'aprèsstérilisation il soit
de 6,9� 0,2 à 25 °C.
5.2.3 Solution de peptone
5.2.3.1 Composition
Peptone 1,0 g
Eau 1 000 ml
5.2.3.2 Préparation
Dissoudre la peptone dans l'eau. Ajuster le pH avec la solution appropriée (5.1), de sorte qu'aprèsstérilisation il
soit de 7,0� 0,2 à 25 °C.
5.2.4 Solution tampon phosphate
5.2.4.1 Composition
Dihydrogénophosphate de potassium (KH PO ) 42,5 g
2 4
Eau 1 000 ml
5.2.4.2 Préparation
Dissoudre le sel dans 500 ml d'eau. Ajuster le pH à l'aide de la solution appropriée (5.1), de sorte qu'après
stérilisation il soit de 7,2� 0,2 à 25 °C. Diluer à 1 000 ml. Conserver la solution concentréeauréfrigérateur.
Ajouter 1 ml de la solution concentrée(à 20 °C) à 1 000 ml d'eau pour utilisation en tant que diluant.
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5.3 Diluants pour des besoins particuliers
Ces diluants ne doivent être utilisés que pour la préparation des suspensions primaires.
5.3.1 Milieu de préenrichissement: eau peptonnée tamponnée
5.3.1.1 Composition
Peptone de digestat enzymatique de tissus d'animaux 10,0 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5,0 g
Hydrogénophosphate dodécahydrate disodique (Na HPO ,12H O) 9,0 g
2 4 2
Dihydrogénophosphate de potassium (KH PO)1,5g
2 4
Eau 1 000 ml
5.3.1.2 Préparation
Dissoudre les composants dans l'eau en chauffant légèrement sur une plaque chauffante (6.13) si nécessaire.
Ajuster le pH avec la solution appropriée (5.1), de sorte qu'aprèsstérilisation il soit de 7,0� 0,2 à 25 °C.
Ce diluant est recommandé si des tests pour la recherche de Salmonella ou de Listeria monocytogenes sont aussi
à effectuer (voir l’ISO 6579).
5.3.2 Solution de citrate de sodium (pour fromage et poudre de lait Hatmaker)
5.3.2.1 Composition
Citrate trisodique dihydraté (Na C H O ,2H O) 20,0 g
3 6 5 7 2
Eau 1 000 ml
5.3.2.2 Préparation
Dissoudre le sel dans l'eau en chauffant sur une plaque chauffante (6.13) à une température comprise entre
45 °Cet50 °C. Ajuster le pH avec la solution appropriée (5.1), de sorte qu'aprèsstérilisation il soit de 7,5� 0,2 à
25 °C.
5.3.3 Solution d'hydrogénophosphate dipotassique (pour fromage, poudre de lait Hatmaker, lait fermenté,
caséinates, poudre de lactosérum acide et crème acide)
5.3.3.1 Composition
Hydrogénophosphate dipotassique (K HPO ) 20,0 g
2 4
Eau 1 000 ml
5.3.3.2 Préparation
Dissoudre le sel dans l'eau en chauffant sur une plaque chauffante (6.13) à une température comprise entre 45 °C
et 50 °C. Pour la dilution primaire de la poudre de lactosérum acide, ajuster le pH avec la solution appropriée (5.1),
de sorte qu'aprèsstérilisation il soit de 8,4� 0,2 à 25 °C. Pour le fromage, la poudre de lait Hatmaker, les laits
fermentés, les caséinates et la crème acide, ajuster le pH avec la solution appropriée (5.1), de sorte qu’après
stérilisation il soit de 7,5� 0,2 à 25 °C.
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5.3.4 Solution d'hydrogénophosphate dipotassique, avec agent antimoussant (pour caséines acides,
caséines lactiques et caséines-présure)
5.3.4.1 Composition
Hydrogéno-orthophosphate dipotassique (K HPO ) 20,0 g
2 4
Eau 1 000 ml
5.3.4.2 Composition de la solution concentréed’agent antimoussant
Polyéthylèneglycol 2000 (BDH) 1 g
Eau 1 000 ml
5.3.4.3 Préparation
Dissoudre le sel dans de l'eau en chauffant à une température comprise entre 45 °Cet 50 °C. Ajouter 1 ml de la
solution concentrée d'agent antimoussant à 1 litre de la solution de K HPO . Ajuster le pH avec la solution
2 4
appropriée (5.1), de sorte que, aussi bien pour la dilution primaire de caséine acide que pour celle de caséine
lactique, le pH soit de 8,4� 0,2 à 25 °C aprèsstérilisation et que, pour la caséine-présure,lepH soit de7,5� 0,2 à
25 °C aprèsstérilisation.
5.3.5 Solution de tripolyphosphate (autre solution utilisée pour les caséines-présures posant des problèmes de
solubilisation)
5.3.5.1 Composition
Tripolyphosphate de sodium (Na O P ) 20,0 g
3 10 3
Eau 1 000 ml
5.3.5.2 Préparation
Dissoudre le sel dans 1 000 ml d’eau en chauffant légèrement sur une plaque chauffante (6.13), si nécessaire.
Répartir la solution de tripolyphosphate dans les flacons à raison de 90 ml et les stériliser dans l’autoclave (6.1)
régléà 121 °C pendant 20 min. Le milieu peut être conservéà une température comprise entre 0 °Cet +5 °C
pendant 1 mois au maximum.
5.3.6 Diluant à usage général avec����-amylase (pour les aliments pour nourrissons à hautes teneurs en amidon)
1) 2)
Ajouter 12,5 mg d’�-amylase (EC 3.2.1.1) ayant une activité spécifique d'environ 400 unitésde surface par
milligramme à 225 ml de diluant à usage général (5.2). Ce diluant est utilisé pour 25 g de l’échantillon pour essai.
Utiliser des quantités analogues de réactifs po
...