SIST ISO 16000-21:2015
Indoor air - Part 21: Detection and enumeration of moulds - Sampling from materials
Indoor air - Part 21: Detection and enumeration of moulds - Sampling from materials
This part of ISO 16000 specifies requirements for sampling of moulds from building materials. Following
the instructions given, samples are obtained for microscopy or for subsequent detection of moulds by
cultivation according to ISO 16000-17.
Air intérieur - Partie 21: Détection et dénombrement des moisissures - Échantillonnage à partir de matériaux
L'ISO 16000-21:2014 sp�cifie les exigences d'�chantillonnage de moisissures � partir de mat�riaux de construction. En suivant les instructions donn�es, des �chantillons sont pr�lev�s pour microscopie ou pour d�tection ult�rieure des moisissures par culture, conform�ment � l'ISO 16000‑17.
Notranji zrak - 21. del: Ugotavljanje prisotnosti in števila gliv/plesni - Vzorčenje iz materialov
Ta del standarda ISO 16000 določa zahteve za vzorčenje gliv/plesni v gradbenih materialih. Z upoštevanjem danih navodil se pridobijo vzorci za mikroskopijo ali nadaljnje ugotavljanje prisotnosti gliv/plesni s kultivacijo v skladu s standardom ISO 16000-17.
General Information
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 16000-21
First edition
2013-12-15
Indoor air —
Part 21:
Detection and enumeration of moulds
— Sampling from materials
Air intérieur —
Partie 21: Détection et dénombrement des moisissures —
Échantillonnage à partir de matériaux
Reference number
ISO 16000-21:2013(E)
©
ISO 2013
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ISO 16000-21:2013(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2013
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior
written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2013 – All rights reserved
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ISO 16000-21:2013(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle of method . 2
5 Apparatus and materials. 2
5.1 Equipment for sampling . 2
5.2 Equipment for preparing the agar plates . 3
5.3 Equipment for processing the bulk samples . 3
6 Culture media and reagents . 3
6.1 General . 3
6.2 Dichlorane 18 % glycerol agar (DG-18). 3
6.3 Malt extract agar . 4
6.4 Potato dextrose agar . 4
6.5 Dilution buffer . 5
6.6 Staining solution . 5
7 Measurement procedure . 6
7.1 Sampling from surfaces . 6
7.2 Bulk sampling . 7
7.3 Transport and storage . 7
7.4 Direct microscopy . 7
7.5 Suspension of material and swab samples . 7
8 Quality assurance . 8
9 Sampling protocol . 8
10 Performance characteristics . 8
Annex A (informative) Sample exchange for method validation . 9
Bibliography .11
© ISO 2013 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 16000-21:2013(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers
to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information
The committee responsible for this document is ISO/TC 146, Air quality, Subcommittee SC 6, Indoor air.
ISO 16000 consists of the following parts, under the general title Indoor air:
— Part 1: General aspects of sampling strategy
— Part 2: Sampling strategy for formaldehyde
— Part 3: Determination of formaldehyde and other carbonyl compounds in indoor air and test chamber
air — Active sampling method
— Part 4: Determination of formaldehyde — Diffusive sampling method
— Part 5: Sampling strategy for volatile organic compounds (VOCs)
— Part 6: Determination of volatile organic compounds in indoor and test chamber air by active sampling
®
on Tenax TA sorbent, thermal desorption and gas chromatography using MS or MS-FID
— Part 7: Sampling strategy for determination of airborne asbestos fibre concentrations
— Part 8: Determination of local mean ages of air in buildings for characterizing ventilation conditions
— Part 9: Determination of the emission of volatile organic compounds from building products and
furnishing — Emission test chamber method
— Part 10: Determination of the emission of volatile organic compounds from building products and
furnishing — Emission test cell method
— Part 11: Determination of the emission of volatile organic compounds from building products and
furnishing — Sampling, storage of samples and preparation of test specimens
— Part 12: Sampling strategy for polychlorinated biphenyls (PCBs), polychlorinated dibenzo-p-dioxins
(PCDDs), polychlorinated dibenzofurans (PCDFs) and polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs)
iv © ISO 2013 – All rights reserved
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ISO 16000-21:2013(E)
— Part 13: Determination of total (gas and particle-phase) polychlorinated dioxin-like biphenyls (PCBs) and
polychlorinated dibenzo-p-dioxins/dibenzofurans (PCDDs/PCDFs) — Collection on sorbent-backed filters
— Part 14: Determination of total (gas and particle-phase) polychlorinated dioxin-like biphenyls (PCBs)
and polychlorinated dibenzo-p-dioxins/dibenzofurans (PCDDs/PCDFs) — Extraction, clean-up and
analysis by high-resolution gas chromatography and mass spectrometry
— Part 15: Sampling strategy for nitrogen dioxide (NO )
2
— Part 16: Detection and enumeration of moulds — Sampling by filtration
— Part 17: Detection and enumeration of moulds — Culture-based method
— Part 18: Detection and enumeration of moulds — Sampling by impaction
— Part 19: Sampling strategy for moulds
— Part 20: Detection and enumeration of moulds — Determination of total spore count
— Part 21: Detection and enumeration of moulds — Sampling from materials
— Part 23: Performance test for evaluating the reduction of formaldehyde concentrations by sorptive
building materials
— Part 24: Performance test for evaluating the reduction of volatile organic compound (except
formaldehyde) concentrations by sorptive building materials
— Part 25: Determination of the emission of semi-volatile organic compounds by building products —
Micro-chamber method
— Part 26: Sampling strategy for carbon dioxide (CO )
2
— Part 27: Determination of settled fibrous dust on surfaces by SEM (scanning electron microscopy)
(direct method)
— Part 28: Determination of odour emissions from building products using test chambers
— Part 29: Test methods for VOC detectors
— Part 30: Sensory testing of indoor air
— Part 31: Measurement of flame retardants and plasticizers based on organophosphorus compounds —
Phosphoric acid ester
— Part 32: Investigation of buildings for pollutants and other injurious factors — Inspections
The following parts are under preparation:
— Part 33: Determination of phthalates with gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS)
— Part 34: Strategies for the measurement of airborne particles (PM 2,5 fraction)
— Part 35: Measurement of polybrominated diphenylether, hexabromocyclododecane and
hexabromobenzene
A test method for the reduction rate of airborne bacteria by air purifiers using a test chamber will form
a future part 36.
© ISO 2013 – All rights reserved v
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ISO 16000-21:2013(E)
Introduction
Mould is a common name for filamentous fungi from different taxonomic groups (ascomycetes,
zygomycetes, and their anamorphic states formerly known as deuteromycetes or fungi imperfecti).
They form a mycelium and spores by which they become visible macroscopically. Most spores are in the
size range of 2 µm to 10 µm, some up to 30 µm, and only few up to 100 µm. Spores of some mould genera
are small and become airborne very easily (e.g. Aspergillus, Penicillium) while others are bigger and/or
embedded in a slime matrix (e.g. Stachybotrys, Fusarium) and less mobile.
Mould spores are widely distributed in the outdoor environment and, therefore, occur in varying
concentrations also indoors. Growth of moulds in indoor environments, however, should be considered
as a hygienic problem because epidemiological studies have revealed that dampness and/or mould
growth in homes and health problems affecting the occupants are closely related.
Harmonized methods for sampling, detection, and enumeration of moulds including standards for
sampling strategies are important for comparative assessment of mould problems indoors. Before doing
any measurements, a plan for the measurement strategy should be made.
This part of ISO 16000 describes methods for sampling of moulds from building materials.
This part of ISO 16000 is based on parts of VDI 4300 Part 10.
vi © ISO 2013 – All rights reserved
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 16000-21:2013(E)
Indoor air —
Part 21:
Detection and enumeration of moulds — Sampling from
materials
1 Scope
This part of ISO 16000 specifies requirements for sampling of moulds from building materials. Following
the instructions given, samples are obtained for microscopy or for subsequent detection of moulds by
cultivation according to ISO 16000-17.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated
references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 16000-17, Indoor air — Part 17: Detection and enumeration of moulds — Culture-based method
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
colony forming unit
cfu
unit by which the culturable number of microorganisms is expressed
[SOURCE: EN 13098:2000]
Note 1 to entry: One colony can originate from one single microorganism, from aggregates of many microorganisms
as well as from one or many microorganisms attached to a particle.
Note 2 to entry: The number of colonies can depend on the cultivation conditions.
3.2
cultivation
growing of microorganisms on culture media
[SOURCE: ISO 16000-16:2008, 3.6]
3.3
filamentous fungus
fungus growing in the form of filaments of cells known as hyphae
Note 1 to entry: The term filamentous fungi differentiates fungi with hyphal growth from yeasts.
[SOURCE: ISO 16000-16:2008, 3.3]
© ISO 2013 – All rights reserved 1
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ISO 16000-21:2013(E)
3.4
microorganism
any microbial entity, cellular or non-cellular, capable of replication or of transferring of genetic material,
or entities that have lost these properties
[SOURCE: EN 13098:2000]
3.5
mould
filamentous fungi from several taxonomic groups, namely ascomycetes, zygomycetes, and
their anamorphic states formerly known as deuteromycetes or fungi imperfecti
Note 1 to entry: Moulds form different type of spores depending on the taxonomic group they belong to, namely
conidiospores (conidia), sporangiospores, or ascospores.
3.6
mycelium
branched hyphae network
[SOURCE: ISO/TS 10832:2009, 3.5]
4 Principle of method
Mould-infested materials are examined either by surface sampling (see 7.1) or bulk sampling (see 7.2),
i.e. examination of the complete material or defined deeper material layers. The methods used depend
on the investigation objective as described in ISO 16000-19. Surfaces are sampled using the contact
plate (see 7.1.2), tape-lift (see 7.1.3), or swab method (see 7.1.4). After sampling, the mould spores can
be analysed by direct microscopy (see 7.4) or processed and cultured using the suspension method (see
7.5). The cultivation procedure is described in ISO 16000-17.
5 Apparatus and materials
Usual microbiological laboratory equipment, and in particular:
5.1 Equipment for sampling
5.1.1 Agar plates or flexible plastic stripes, containing DG-18 agar and malt extract or potato dextrose
agar (see Clause 6) with the culture medium slightly projecting over the edge.
5.1.2 Cotton swabs, sterile, to take swab samples.
5.1.3 Containers to protect the agar plates and material samples during transport, e.g. plastic bags.
5.1.4 Disinfectant, e.g. iso-propanol or ethanol (70 % volume fraction) to disinfect sampling tools.
5.1.5 Drill, disinfected, with a diameter of at least 3 cm, preferably 5 cm, to take defined cores from
the material.
5.1.6 Insulated/refrigerated container, for transport of agar plates and material samples below 25 °C.
5.1.7 Sampling tools, sterile, to take bulk samples of materials in different depths, e.g. spatula, spoons,
knives, drilling equipment.
2 © ISO 2013 – All rights reserved
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ISO 16000-21:2013(E)
5.2 Equipment for preparing the agar plates
5.2.1 Autoclave, at (121 ± 3) °C and (115 ± 3) °C.
5.2.2 Petri dishes, vented, sterile, diameter approximately 9 cm.
5.2.3 pH meter, with an accuracy of ±0,1.
5.3 Equipment for processing the bulk samples
5.3.1 Aluminium container, to weigh material samples.
5.3.2 Analytical balance, with an accuracy of ±0,01 g.
5.3.3 Glass flask, baffled flask, sterile, 250 ml.
5.3.4 Shaking dish, horizontal, 200 rpm.
5.3.5 Test tube shaker, e.g. Vortex shaker.
6 Culture media and reagents
6.1 General
All reagents and chemicals shall be of recognized quality “for microbiology” or better. Water used shall
be distilled or of equivalent quality.
Use of commercially available, dehydrated substrates is encouraged, provided they comply with the
descriptions given. These dehydrated substrates shall be prepared according to the instructions from
the manufacturer. For surface sampling, agar plates or flexible plastic stripes containing agar medium
are also co
...
SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 16000-21:2015
01-april-2015
1RWUDQML]UDNGHO 8JRWDYOMDQMHSULVRWQRVWLLQãWHYLODJOLYSOHVQL9]RUþHQMHL]
PDWHULDORY
Indoor air - Part 21: Detection and enumeration of moulds - Sampling from materials
Air intérieur - Partie 21: Détection et dénombrement des moisissures - Échantillonnage à
partir de matériaux
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 16000-21:2013
ICS:
13.040.20 Kakovost okoljskega zraka Ambient atmospheres
SIST ISO 16000-21:2015 en,fr
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
---------------------- Page: 1 ----------------------
SIST ISO 16000-21:2015
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INTERNATIONAL ISO
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Indoor air —
Part 21:
Detection and enumeration of moulds
— Sampling from materials
Air intérieur —
Partie 21: Détection et dénombrement des moisissures —
Échantillonnage à partir de matériaux
Reference number
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or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior
written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
the requester.
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SIST ISO 16000-21:2015
ISO 16000-21:2013(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle of method . 2
5 Apparatus and materials. 2
5.1 Equipment for sampling . 2
5.2 Equipment for preparing the agar plates . 3
5.3 Equipment for processing the bulk samples . 3
6 Culture media and reagents . 3
6.1 General . 3
6.2 Dichlorane 18 % glycerol agar (DG-18). 3
6.3 Malt extract agar . 4
6.4 Potato dextrose agar . 4
6.5 Dilution buffer . 5
6.6 Staining solution . 5
7 Measurement procedure . 6
7.1 Sampling from surfaces . 6
7.2 Bulk sampling . 7
7.3 Transport and storage . 7
7.4 Direct microscopy . 7
7.5 Suspension of material and swab samples . 7
8 Quality assurance . 8
9 Sampling protocol . 8
10 Performance characteristics . 8
Annex A (informative) Sample exchange for method validation . 9
Bibliography .11
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ISO 16000-21:2013(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers
to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information
The committee responsible for this document is ISO/TC 146, Air quality, Subcommittee SC 6, Indoor air.
ISO 16000 consists of the following parts, under the general title Indoor air:
— Part 1: General aspects of sampling strategy
— Part 2: Sampling strategy for formaldehyde
— Part 3: Determination of formaldehyde and other carbonyl compounds in indoor air and test chamber
air — Active sampling method
— Part 4: Determination of formaldehyde — Diffusive sampling method
— Part 5: Sampling strategy for volatile organic compounds (VOCs)
— Part 6: Determination of volatile organic compounds in indoor and test chamber air by active sampling
®
on Tenax TA sorbent, thermal desorption and gas chromatography using MS or MS-FID
— Part 7: Sampling strategy for determination of airborne asbestos fibre concentrations
— Part 8: Determination of local mean ages of air in buildings for characterizing ventilation conditions
— Part 9: Determination of the emission of volatile organic compounds from building products and
furnishing — Emission test chamber method
— Part 10: Determination of the emission of volatile organic compounds from building products and
furnishing — Emission test cell method
— Part 11: Determination of the emission of volatile organic compounds from building products and
furnishing — Sampling, storage of samples and preparation of test specimens
— Part 12: Sampling strategy for polychlorinated biphenyls (PCBs), polychlorinated dibenzo-p-dioxins
(PCDDs), polychlorinated dibenzofurans (PCDFs) and polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs)
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ISO 16000-21:2013(E)
— Part 13: Determination of total (gas and particle-phase) polychlorinated dioxin-like biphenyls (PCBs) and
polychlorinated dibenzo-p-dioxins/dibenzofurans (PCDDs/PCDFs) — Collection on sorbent-backed filters
— Part 14: Determination of total (gas and particle-phase) polychlorinated dioxin-like biphenyls (PCBs)
and polychlorinated dibenzo-p-dioxins/dibenzofurans (PCDDs/PCDFs) — Extraction, clean-up and
analysis by high-resolution gas chromatography and mass spectrometry
— Part 15: Sampling strategy for nitrogen dioxide (NO )
2
— Part 16: Detection and enumeration of moulds — Sampling by filtration
— Part 17: Detection and enumeration of moulds — Culture-based method
— Part 18: Detection and enumeration of moulds — Sampling by impaction
— Part 19: Sampling strategy for moulds
— Part 20: Detection and enumeration of moulds — Determination of total spore count
— Part 21: Detection and enumeration of moulds — Sampling from materials
— Part 23: Performance test for evaluating the reduction of formaldehyde concentrations by sorptive
building materials
— Part 24: Performance test for evaluating the reduction of volatile organic compound (except
formaldehyde) concentrations by sorptive building materials
— Part 25: Determination of the emission of semi-volatile organic compounds by building products —
Micro-chamber method
— Part 26: Sampling strategy for carbon dioxide (CO )
2
— Part 27: Determination of settled fibrous dust on surfaces by SEM (scanning electron microscopy)
(direct method)
— Part 28: Determination of odour emissions from building products using test chambers
— Part 29: Test methods for VOC detectors
— Part 30: Sensory testing of indoor air
— Part 31: Measurement of flame retardants and plasticizers based on organophosphorus compounds —
Phosphoric acid ester
— Part 32: Investigation of buildings for pollutants and other injurious factors — Inspections
The following parts are under preparation:
— Part 33: Determination of phthalates with gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS)
— Part 34: Strategies for the measurement of airborne particles (PM 2,5 fraction)
— Part 35: Measurement of polybrominated diphenylether, hexabromocyclododecane and
hexabromobenzene
A test method for the reduction rate of airborne bacteria by air purifiers using a test chamber will form
a future part 36.
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ISO 16000-21:2013(E)
Introduction
Mould is a common name for filamentous fungi from different taxonomic groups (ascomycetes,
zygomycetes, and their anamorphic states formerly known as deuteromycetes or fungi imperfecti).
They form a mycelium and spores by which they become visible macroscopically. Most spores are in the
size range of 2 µm to 10 µm, some up to 30 µm, and only few up to 100 µm. Spores of some mould genera
are small and become airborne very easily (e.g. Aspergillus, Penicillium) while others are bigger and/or
embedded in a slime matrix (e.g. Stachybotrys, Fusarium) and less mobile.
Mould spores are widely distributed in the outdoor environment and, therefore, occur in varying
concentrations also indoors. Growth of moulds in indoor environments, however, should be considered
as a hygienic problem because epidemiological studies have revealed that dampness and/or mould
growth in homes and health problems affecting the occupants are closely related.
Harmonized methods for sampling, detection, and enumeration of moulds including standards for
sampling strategies are important for comparative assessment of mould problems indoors. Before doing
any measurements, a plan for the measurement strategy should be made.
This part of ISO 16000 describes methods for sampling of moulds from building materials.
This part of ISO 16000 is based on parts of VDI 4300 Part 10.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 16000-21:2013(E)
Indoor air —
Part 21:
Detection and enumeration of moulds — Sampling from
materials
1 Scope
This part of ISO 16000 specifies requirements for sampling of moulds from building materials. Following
the instructions given, samples are obtained for microscopy or for subsequent detection of moulds by
cultivation according to ISO 16000-17.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated
references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 16000-17, Indoor air — Part 17: Detection and enumeration of moulds — Culture-based method
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
colony forming unit
cfu
unit by which the culturable number of microorganisms is expressed
[SOURCE: EN 13098:2000]
Note 1 to entry: One colony can originate from one single microorganism, from aggregates of many microorganisms
as well as from one or many microorganisms attached to a particle.
Note 2 to entry: The number of colonies can depend on the cultivation conditions.
3.2
cultivation
growing of microorganisms on culture media
[SOURCE: ISO 16000-16:2008, 3.6]
3.3
filamentous fungus
fungus growing in the form of filaments of cells known as hyphae
Note 1 to entry: The term filamentous fungi differentiates fungi with hyphal growth from yeasts.
[SOURCE: ISO 16000-16:2008, 3.3]
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SIST ISO 16000-21:2015
ISO 16000-21:2013(E)
3.4
microorganism
any microbial entity, cellular or non-cellular, capable of replication or of transferring of genetic material,
or entities that have lost these properties
[SOURCE: EN 13098:2000]
3.5
mould
filamentous fungi from several taxonomic groups, namely ascomycetes, zygomycetes, and
their anamorphic states formerly known as deuteromycetes or fungi imperfecti
Note 1 to entry: Moulds form different type of spores depending on the taxonomic group they belong to, namely
conidiospores (conidia), sporangiospores, or ascospores.
3.6
mycelium
branched hyphae network
[SOURCE: ISO/TS 10832:2009, 3.5]
4 Principle of method
Mould-infested materials are examined either by surface sampling (see 7.1) or bulk sampling (see 7.2),
i.e. examination of the complete material or defined deeper material layers. The methods used depend
on the investigation objective as described in ISO 16000-19. Surfaces are sampled using the contact
plate (see 7.1.2), tape-lift (see 7.1.3), or swab method (see 7.1.4). After sampling, the mould spores can
be analysed by direct microscopy (see 7.4) or processed and cultured using the suspension method (see
7.5). The cultivation procedure is described in ISO 16000-17.
5 Apparatus and materials
Usual microbiological laboratory equipment, and in particular:
5.1 Equipment for sampling
5.1.1 Agar plates or flexible plastic stripes, containing DG-18 agar and malt extract or potato dextrose
agar (see Clause 6) with the culture medium slightly projecting over the edge.
5.1.2 Cotton swabs, sterile, to take swab samples.
5.1.3 Containers to protect the agar plates and material samples during transport, e.g. plastic bags.
5.1.4 Disinfectant, e.g. iso-propanol or ethanol (70 % volume fraction) to disinfect sampling tools.
5.1.5 Drill, disinfected, with a diameter of at least 3 cm, preferably 5 cm, to take defined cores from
the material.
5.1.6 Insulated/refrigerated container, for transport of agar plates and material samples below 25 °C.
5.1.7 Sampling tools, sterile, to take bulk samples of materials in different depths, e.g. spatula, spoons,
knives, drilling equipment.
2 © ISO 2013 – All rights reserved
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SIST ISO 16000-21:2015
ISO 16000-21:2013(E)
5.2 Equipment for preparing the agar plates
5.2.1 Autoclave, at (121 ± 3) °C and (115 ± 3) °C.
5.2.2 Petri dishes, vented, sterile, diameter approximately 9 cm.
5.2.3 pH meter, with an accuracy of ±0,1.
5.3 Equipment for processing the bulk samples
5.3.1 Aluminium container, to weigh material samples.
5.3.2 Analytical balance, with an accuracy of ±0,01 g.
5.3.3 Glass flask, baffled flask, sterile, 250 ml.
5.3.4 Shaking dish, horizontal, 200 rpm.
5.3.5 Test tube shaker, e.g. Vortex shaker.
6 Culture media and reagents
6.1 General
A
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 16000-21
Première édition
2013-12-15
Air intérieur —
Partie 21:
Détection et dénombrement des
moisissures — Échantillonnage à
partir de matériaux
Indoor air —
Part 21: Detection and enumeration of moulds — Sampling from
materials
Numéro de référence
ISO 16000-21:2013(F)
©
ISO 2013
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ISO 16000-21:2013(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
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E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2013 – Tous droits réservés
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ISO 16000-21:2013(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe de la méthode . 2
5 Appareillage et matériel . 2
5.1 Équipement de prélèvement . 2
5.2 Équipement de préparation des boîtes de gélose . 3
5.3 Équipement de traitement des échantillons globaux . 3
6 Milieux de culture et réactifs . 3
6.1 Généralités . 3
6.2 Gélose dichloran-glycérol 18 % (gélose DG-18) . 3
6.3 Gélose à l’extrait de malt . 4
6.4 Gélose dextrosée à la pomme de terre . 5
6.5 Tampon de dilution . 5
6.6 Solution de coloration . 6
7 Mode opératoire de mesure . 6
7.1 Échantillonnage de surface . 6
7.2 Échantillonnage global . 7
7.3 Transport et stockage. 7
7.4 Microscopie directe . 7
7.5 Suspension des échantillons de matériaux et des écouvillons . 8
8 Assurance qualité . 8
9 Rapport d’échantillonnage . 8
10 Caractéristiques de performance . 9
Annexe A (informative) Essais interlaboratoires pour validation de la méthode .10
Bibliographie .12
© ISO 2013 – Tous droits réservés iii
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ISO 16000-21:2013(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/CEI, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/CEI, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/patents).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de
la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant
les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Foreword - Supplementary information
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 146, Qualité de l’air, sous-comité
SC 6, Air intérieur.
L’ISO 16000 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Air intérieur:
— Partie 1: Aspects généraux de la stratégie d’échantillonnage
— Partie 2: Stratégie d’échantillonnage du formaldéhyde
— Partie 3: Dosage du formaldéhyde et d’autres composés carbonylés dans l’air intérieur et dans l’air des
chambres d’essai — Méthode par échantillonnage actif
— Partie 4: Dosage du formaldéhyde — Méthode par échantillonnage diffusif
— Partie 5: Stratégie d’échantillonnage pour les composés organiques volatils (COV)
— Partie 6: Dosage des composés organiques volatils dans l’air intérieur des locaux et chambres d’essai
par échantillonnage actif sur le sorbant Tenax TA, désorption thermique et chromatographie en phase
gazeuse utilisant MS ou MS-FID
— Partie 7: Stratégie d’échantillonnage pour la détermination des concentrations en fibres d’amiante en
suspension dans l’air
— Partie 8: Détermination des âges moyens locaux de l’air dans des bâtiments pour caractériser les
conditions de ventilation
— Partie 9: Dosage de l’émission de composés organiques volatils de produits de construction et d’objets
d’équipement — Méthode de la chambre d’essai d’émission
— Partie 10: Dosage de l’émission de composés organiques volatils de produits de construction et d’objets
d’équipement — Méthode de la cellule d’essai d’émission
iv © ISO 2013 – Tous droits réservés
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ISO 16000-21:2013(F)
— Partie 11: Dosage de l’émission de composés organiques volatils de produits de construction et d’objets
d’équipement — Échantillonnage, conservation des échantillons et préparation d’échantillons pour essai
— Partie 12: Stratégie d’échantillonnage des polychlorobiphényles (PCB), des polychlorodibenzo-p-dioxines
(PCDD), des polychlorodibenzofuranes (PCDF) et des hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP)
— Partie 13: Dosage des polychlorobiphényles (PCB) de type dioxine et des polychlorodibenzo-p-dioxines
(PCDD)/polychlorodibenzofuranes (PCDF) totaux (en phase gazeuse et en phase particulaire) — Collecte
sur des filtres adsorbants
— Partie 14: Dosage des polychlorobiphényles (PCB) de type dioxine et des polychlorodibenzo-p-dioxines
(PCDD)/polychloro-dibenzofuranes (PCDF) totaux (en phase gazeuse et en phase particulaire) —
Extraction, purification et analyse par chromatographie en phase gazeuse haute résolution et
spectrométrie de masse
— Partie 15: Stratégie d’échantillonnage du dioxyde d’azote (NO )
2
— Partie 16: Détection et dénombrement des moisissures — Échantillonnage par filtration
— Partie 17: Détection et dénombrement des moisissures — Méthode par culture
— Partie 18: Détection et dénombrement des moisissures — Échantillonnage par impaction
— Partie 19: Stratégie d’échantillonnage des moisissures
— Partie 20: Détection et dénombrement des moisissures — Détermination du nombre total de spores
— Partie 21: Détection et dénombrement des moisissures — Échantillonnage à partir de matériaux
— Partie 23: Essai de performance pour l’évaluation de la réduction des concentrations en formaldéhyde
par des matériaux de construction sorptifs
— Partie 24: Essai de performance pour l’évaluation de la réduction des concentrations en composés
organiques volatils (sauf formaldéhyde) par des matériaux de construction sorptifs
— Partie 25: Dosage de l’émission de composés organiques semi-volatils de produits de construction —
Méthode de la micro-chambre
— Partie 26: Stratégie d’échantillonnage du dioxyde de carbone (CO )
2
— Partie 27: Détermination de la poussière fibreuse déposée sur les surfaces par microscopie électronique
à balayage (MEB) (méthode directe)
— Partie 28: Détermination des émissions d’odeurs des produits de construction au moyen de chambres d’essai
— Partie 29: Méthodes d’essai pour détecteurs de composés organiques volatils (COV)
— Partie 30: Essai sensoriel de l’air intérieur
— Partie 31: Mesurage des ignifugeants basés sur des composés organophosphorés — Ester d’acide phosphorique
— Partie 32: Investigation de polluants et autres facteurs nocifs dans les constructions — Inspections
Les parties suivantes sont en cours d’élaboration:
— Partie 33: Détermination des phtalates par chromatographie en phase gazeuse/spectrométrie de
masse (CG/SM)
— Partie 34: Stratégies pour le mesurage des particules en suspension (fraction PM 2,5)
— Partie 35: Mesurage des diphényléther polybromé, hexabromocyclododécane et hexabromobenzène
La méthode d’essai pour le taux de réduction des bactéries en suspension par des purificateurs d’air en
utilisant une chambre d’essai fera l’objet d’une future Partie 36.
© ISO 2013 – Tous droits réservés v
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ISO 16000-21:2013(F)
Introduction
Le terme «moisissure» est le nom commun des champignons filamenteux appartenant à différents groupes
taxonomiques (Ascomycètes, Zygomycètes et leurs états anamorphiques antérieurement connus sous la
dénomination de Deutéromycètes ou champignons imparfaits). Ils forment un mycélium et des spores
qui les rendent visibles à l’œil nu. La plupart des spores mesurent de 2 µm à 10 µm, certaines atteignant
30 µm et, dans de rares cas, mesurent jusqu’à 100 µm. Les spores de certains genres de moisissure sont
de petite taille et sont facilement mises en suspension dans l’air (par exemple Aspergillus, Penicillium)
tandis que d’autres sont plus grandes et/ou intégrées à un amas muqueux (par exemple Stachybotrys,
Fusarium), ce qui les rend moins mobiles.
Les spores de moisissures sont largement distribuées dans l’environnement extérieur et sont donc
également retrouvées dans l’air intérieur en concentration variable. Il convient toutefois de considérer la
croissance des moisissures dans les environnements intérieurs comme un problème d’hygiène. En effet,
des études épidémiologiques ont montré que l’humidité et/ou la croissance fongique dans les logements
sont étroitement liées à des problèmes de santé affectant les occupants.
L’harmonisation des méthodes d’échantillonnage, de détection et de dénombrement des moisissures,
y compris les normes relatives à la stratégie d’échantillonnage, est essentielle pour l’évaluation
comparative des problèmes liés aux moisissures à l’intérieur des bâtiments. Avant de procéder à toute
mesure, il convient d’élaborer une stratégie d’échantillonnage.
La présente partie de l’ISO 16000 décrit des méthodes d’échantillonnage de moisissures à partir de
matériaux de construction.
La présente partie de l’ISO 16000 repose sur certains passages du VDI 4300 Partie 10.
vi © ISO 2013 – Tous droits réservés
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NORME INTERNATIONALE ISO 16000-21:2013(F)
Air intérieur —
Partie 21:
Détection et dénombrement des moisissures —
Échantillonnage à partir de matériaux
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 16000 spécifie les exigences d’échantillonnage de moisissures à partir de
matériaux de construction. En suivant les instructions données, des échantillons sont prélevés pour
microscopie ou pour détection ultérieure des moisissures par culture, conformément à l’ISO 16000-17.
2 Références normatives
Les documents suivants, en totalité ou en partie, sont référencés de manière normative dans le présent
document et sont indispensables pour son application. Pour les références datées, seule l’édition citée
s’applique. Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y
compris les éventuels amendements).
ISO 16000-17, Air intérieur — Partie 17: Détection et dénombrement des moisissures — Méthode par culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
unité formant colonie
ufc
unité dans laquelle est exprimé le nombre de micro-organismes cultivables
[SOURCE: EN 13098:2000]
Note 1 à l’article: Une colonie peut provenir d’un seul micro-organisme, d’agrégat de plusieurs micro-organismes
ainsi que d’un ou plusieurs micro-organismes liés à une particule.
Note 2 à l’article: Le nombre de colonies peut varier selon les conditions de culture.
3.2
culture
croissance de micro-organismes sur des milieux de culture
[SOURCE: ISO 16000-16:2008, 3.6]
3.3
champignon filamenteux
champignon poussant sous la forme de filaments de cellules appelés hyphes
Note 1 à l’article: Le terme «champignon filamenteux» distingue les champignons à hyphes des levures.
[SOURCE: ISO 16000-16:2008, 3.3]
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ISO 16000-21:2013(F)
3.4
micro-organisme
entité microbienne, cellulaire ou non cellulaire, capable de se reproduire ou de transférer du matériel
génétique, ou entité ayant perdu ces propriétés
[SOURCE: EN 13098:2000]
3.5
moisissure
champignon filamenteux appartenant à différents groupes taxonomiques, à savoir
ascomycètes, zygomycètes et leurs états anamorphiques antérieurement connus sous la dénomination
de deutéromycètes ou champignons imparfaits
Note 1 à l’article: Les moisissures forment différents types de spores selon le groupe taxonomique auquel elles
appartiennent, à savoir des conidiospores (conidies), des sporangiospores ou des ascospores.
3.6
mycélium
réseau ramifié formé d’hyphes
[SOURCE: ISO/TS 10832:2009, 3.5]
4 Principe de la méthode
Les matériaux contaminés par des moisissures sont examinés soit par échantillonnage de surface
(voir 7.1) soit par échantillonnage global (voir 7.2), c’est-à-dire par examen de l’ensemble du matériau
ou de couches plus profondes définies. Les méthodes utilisées dépendent de l’objectif de l’étude tel que
décrit dans l’ISO 16000-19. Les surfaces sont échantillonnées au moyen d’une boîte de contact (voir 7.1.2),
au moyen d’un ruban adhésif (voir 7.1.3) ou par écouvillonnage (voir 7.1.4). Après échantillonnage, les
spores de moisissures peuvent être analysées par microscopie directe (voir 7.4) ou traitées et cultivées
en utilisant la méthode par suspension (voir 7.5). Le mode opératoire de culture est décrit dans
l’ISO 16000-17.
5 Appareillage et matériel
Matériel courant de laboratoire de microbiologie, et en particulier:
5.1 Équipement de prélèvement
5.1.1 Boîtes de gélose ou lames souples en plastique, contenant de la gélose DG-18 et de la gélose
à l’extrait de malt ou de la gélose dextrosée à la pomme de terre (voir Article 6) avec le milieu de culture
légèrement en saillie sur le bord.
5.1.2 Écouvillons, stériles, pour prélever des échantillons par écouvillonnage.
5.1.3 Récipients, pour protéger les boîtes de gélose et les échantillons de matériaux pendant le
transport, par exemple des sacs en plastique.
5.1.4 Désinfectant, par exemple isopropanol ou éthanol (70 % en fraction volumique) pour désinfecter
les outils de prélèvement.
5.1.5 Foret, désinfecté, d’un diamètre d’au moins 3 cm, de préférence de 5 cm pour extraire des carottes
définies du matériau.
5.1.6 Récipient isotherme/réfrigéré, pour transporter les boîtes de gélose et les échantillons de
matériaux à une température inférieure à 25 °C.
2 © ISO 2013 – Tous droits réservés
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ISO 16000-21:2013(F)
5.1.7 Outils de prélèvement, stériles, pour prélever des échantillons globaux de matériaux à différentes
profondeurs, par exemple spatules, cuillères, lames, matériel de perçage.
5.2 Équipement de préparation des boîtes de gélose
5.2.1 Autoclave, à (121 ± 3) °C et (115 ± 3) °C.
5.2.2 Boîtes de Petri, ventilées, stériles, ayant un diamètre d’environ 9 cm.
5.2.3 pH-mètre, d’une exactitude de ±0,1.
5.3 Équipement de traitement des échantillons globaux
5.3.1 Récipient en aluminium, pour peser des échantillons de matériaux.
5.3.2 Balance analytique, d’une exactitude de ±0,01 g.
5.3.3 Flacon en verre, flacon à chicane, stérile, 250 ml.
5.3.4 Plateau d’agitation, horizontal, de 200 r/min.
5.3.5 Agitateur pour tubes à essai, par exemple agitateur Vortex.
6 Milieux de culture et réactifs
6.1 Généralités
Tous les réactifs et produits chimiques doivent être au moins de qualité «microbiologique» reconnue.
L’eau utilisée doit être distillée ou de qualité équivalente.
L’utilisation de substrats déshydratés disponibles dans le commerce est recommandée, à condition
qu’ils soient conformes aux descriptions fournies. Ces substrats déshydratés doivent être préparés
conformément aux instructions du fabricant. Pour l’échantillonnage de surface, des boîtes de gélose ou
des bandes souples en plastique contenant un milieu gélosé sont également disponibles dans le commerce.
6.2 Gélose dichloran-glycérol 18 % (gélose DG-18)
Les composants sont listés dans le Tableau 1.
Tableau 1 — Composition de la gélose dichloran-glycérol 18 % (gélose DG-18)
Composant Quantité
c
Peptone 5,0 g
Glucose 10,0 g
Dihydrogénophosphate de potassium (KH PO ) 1,0 g
2 4
Sulfate de magnésium heptahydraté (MgSO , 7 H O) 0,5 g
4 2
a
Concentration finale dans le milieu: 0,002 g/l.
b
Fraction massique de 18 % d’environ 1 220 g de masse finale = environ 220 g.
c Différentes peptones sont utilisées par dive
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.