ISO 4099:1978

Cheese — Determination of nitrate and nitrite contents — Method by cadmium reduction and photometry

Fromages — Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites — Méthode par réduction au cadmium et photométrie

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 31-Oct-1978
• Withdrawal Date: 31-Oct-1978
• ICS: 67.100.30 - Cheese
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 01-Sep-1984

Relations

• Revised: ISO 4099:1984 - Cheese — Determination of nitrate and nitrite contents — Method by cadmium reduction and photometry
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL STANDARD 4099
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANOARDIZATION*ME~YHAPOflHAfl OPrAHMBAUbIfl fl0 CTAHJiAPTH3AUMH«)RGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Cheese - Determination of nitrate and nitrite contents -
Method by cadmium reduction and photometry
Fromages - Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites - Méthode par réduction
au cadmium et photométrie
First edition - 1978-11-15
UDC 637.3 : 543.846 : 546.173/.175 Ref. No. IS0 4099-1978 (E)
Descriptors : dairy products, cheeses, chemical analysis, determination of content, nitrates, nitrites.
Price based on 6 pages

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FOR EWOR D
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation
of national standards institutes (IS0 member bodies). The work of developing
International Standards is carried out through IS0 technical committees. Every
member body interested in a subject for which a technical committee has been set
up has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated
to the member bodies for approval before their acceptance as International
Standards by the IS0 Council.
International Standard IS0 4099 was developed by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, and was circulated to the member bodies
in March 1977.
It has been approved by the member bodies of the following countries :
Australia
Ghana Poland
Austria Hungary Portugal
Belgium India Romania
Bulgaria Iran South Africa, Rep. of
Canada Ireland Spain
Czechoslovakia Israel Switzerland
Egypt, Arab Rep. of Korea, Rep. of Thailand
Ethiopia Mexico Turkey
France
Netherlands United Kingdom
Gei-many, F. R. New Zealand Yugoslavia
No member body expressed disapproval of the document.
NOTE - The method specified in this International Standard has been developed jointly with
the IDF (International Dairy Federation) and the AOAC (Association of Official Analytical
Chemists, U.S.A.). The text as approved by the above organizations will also be published by
FAO/WHO (Code of Principles concerning Milk and Milk Products and Associated Standards),
by the IDF and by the AOAC (Official Methods of Analysis).
O lnternational Organization for Standardization, 1978
Printed in Switzerland

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INTERNATIONAL STANDARD IS0 4099-1978 (E)
Cheese - Determination of nitrate and nitrite contents -
Method by cadmium reduction and photometry
1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION 5.1 Cadmium granules, diameter 0.3 to 0,8 mm.
This International Standard specifies a method by cadmium If cadmium granules are not available commercially, they
reduction and photometry for the determination of the may be prepared as follows :
nitrate and nitrite contents of cheese.
Place a suitable number of zinc rods in a beaker and cover
0 The method is suitable for hard, semi-hard and soft cheeses with a 40 g/I solution of cadmium sulphate. From time to
of various ages and for processed cheese. time, scrape the cadmium sponge from the rods over a
period of 24 h. Remove the zinc rods and decant the
liquid until only sufficient remains to cover the cadmium.
2 REFERENCE
Wash the sponge two or three times with distilled water.
Transfer the cadmium to a laboratory blender together
ISO/R 707, Milk and milk products - Sampling.
with 400 ml of 0,l N hydrochloric acid solution, and
blend for a few seconds to obtain granules of the required
size. Return the contents of the blender to the beaker and
3 DEFINITIONS
leave to stand for several hours, occasionally stirring to
nitrate and nitrite contents of cheese : The contents of
remove bubbles. Decant most of the liquid and immediately
substances determined by the procedure specified in this
copperize as described in 8.1 .I to 8.1.5.
International Standard and expressed respectively as
milligrams of nitrate ion (NO,-) and of nitrite ion (NO,-)
5.2 Copper(ll1 sulphate solution.
per kilogram (parts per million).
Dissolve 20 g of copper(1 I) sulphate pentahydrate
(CuS04.5H,0) in water and dilute to 1 O00 ml.
4 PRINCIPLE
Extraction of the cheese with warm water, precipitation
5.3 Buffer solution, pH 9,6 to 9,7.
of the fat and proteins, and filtration.
Dilute 50 ml of concentrated hydrochloric acid
Reduction to nitrite of the nitrate in a portion of the
[p20 1.19 g/ml; about 38 % (rn/rn) HCI] with 600 ml
0 filtrate by means of copperized cadmium.
of water. After mixing, add 100 ml of concentrated am-
Development of a red colour, in portions of both unreduced
monia solution [pz0 0,88 g/ml; about 35 % (rnlm) NH,].
filtrate and of the reduced solution, by addition of SUI-
Dilute to 1 O00 ml with water and mix.
phanilamide and N-I-naphthyl-ethylenediamine dihydro-
Adjust the pH to 9,6 to 9,7 if necessary.
chloride, and photometric measurement at a wavelength
of 538 nm.
5.4 Hydrochloric acid solution, about 2 N.
Calculation of the nitrite content of the sample and of the
total nitrite content after reduction of nitrate, by comparing
Dilute 160 ml of concentrated hydrochloric acid
a series of standard
the measured absorbances with those of
(pz0 1,19 g/ml) to 1 O00 ml with water.
sodium nitrite solutions; calculation of the nitrate content
from the difference between these two contents.
5.5 Hydrochloric acid solution, about 0,l N.
Dilute 50 ml of 2 N hydrochloric acid solution (5.4)
5 REAGENTS
to 1 O00 ml with water.
All reagents shall be of analytical quality. The water used
shall be distilled or deionized, free from nitrite and nitrate.
5.6 Solutions for precipitation of proteins and fat.
NOTE - In order to avoid possible inclusion of small gas bubbles
in the copperized cadmium column (6.10), the distilled or deionized
5.6.1 Zinc sulphate solution.
water used for the preparation of the column (8.1), for checking
the reducing capacity of the column (8.21, and for regeneration
Dissolve 53,5 g of zinc sulphate heptahydrate
of the column (8.3) should preferably be freshly boiled and after-
wards cooled to room temperature. (ZnS04.7H,0) in water and dilute to 100 mi.
1

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IS0 4099-1978
6 APPARATUS
5.6.2 Potassium hexacyanoferrate( I I) solution.
All glassware shall be thoroughly cleaned and rinsed with
Dissolve 17,2 g of potassium hexacyanoferrate( I I) trihydrate
distilled water to ensure that it is free from nitrate and
[K4Fe(CN),.3H20] in water and dilute to 100 ml.
nitrite.
6.1 Analytical balance.
5.7 EDTA solution.
Dissolve 33,5 g of disodium ethylenedinitrilotetraacetate
6.2 Appropriate grinding device.
(disodium ethylenediaminetetraacetate) dihydrate
(Na,C,oH,,N,08.2H20) in water and dilute to 1 O00 ml.
6.3 Suitable laboratory mixer/homogenizer with glass
containers of 250 or 400 ml capacity.
5.8 Solutions for colour development. 6.4 Conical flasks of 250 ml capacity.
5.8.1 Solution I. 6.5 Volumetric flasks of 100, 500 and 1 O00 ml capacity,
complying with IS0 1042, class B.
Dissolve, by heating on a water bath, 0.5 g of sulphanilamide
(NH,C,H,SO,NH,) in a mixture of 75ml of water and
6.6 Pipettes, to deliver 2 - 4 - 5 - 6 - 8 - 10 - 12 -
5 ml of concentrated hydrochloric acid (pz0 1,19 g/ml).
20 - 25 and 50 ml, complying with IS0 648, class A, or
Cool to room temperature and dilute to 100 ml with
ISO/R 835.
water. Filter if necessary.
NOTE - Where appropriate, burettes may be used instead of
pipettes.
5.8.2 Solution II.
6.7 Graduated cylinders of 5 - 10 - 25 - 100 - 250 -
Dilute 450 ml of concentrated hydrochloric acid
500 and 1 O00 ml capacity.
(pz0 1 ,I 9 g/ml) to 1 O00 ml with water.
6.8 Glass funnels, diameter about 7 cm, with short stem.
5.8.3 Solution 111.
6.9 Filter paper, medium grade, diameter about 15 cm,
Dissolve 0,l g of N-I-naphthyl-ethylenediamine dihydro- nitrate and nitrite free.
chloride (C, oH,NHCH2CH,NH,.2HCI) in water. Dilute
to 100 ml with water. Filter if necessary.
6.10 heduction column (for example, as shown in the
figure).
The solution may be stored for up to 1 week in a well-
stoppered brown bottle in a refrigerator.
6.1 1 Photoelectric colorimeter or spectrophotometer,
suitable for making readings at a wavelength of 538 nm
O
with cells of 1 to 2 cm optical path length.
5.9 Sodium nitrite, standard solution.
Dissolve in water 0,150 g of sodium nitrite (NaNO,),
7 SAMPLING
dried to constant mass at 110 to 120 OC, dilute to 1 O00 ml
with water in a one-mark volumetric flask and mix. 7.1 See ISO/R 707.
On the day of use, dilute 10 ml of this solution with 20 ml
7.2 Store the sample in such a way that deterioration
of the buffer solution (5.3) and dilute further to 1 O00 ml
and change in composition are prevented.
with water in a one-mark volumetric flask. Mix.
1 ml of this final dilution contains 1,00 pg of NO,-.
8 PROCEDURE
8.1 Preparation of the copperized cadmium column
5.10 Potassium nitrate, standard solution.
8.1.1 Transfer the cadmium granules (5.1) (approximately
Dissolve in water 1,468 g of potassium nitrate (KNO,),
40 to 60 g for each column) into a conical flask (6.4).
dried to constant mass at 110 to 120°C, and dilute to
1 O00 ml with water in a one-mark volumetric flask.
8.1.2 Add sufficient 2 N hydrochloric acid solution (5.4)
On the day of use, dilute 5 ml of this solution with 20 ml
to cover the cadmium. Swirl for a few minutes.
of the buffer solution (5.3) and dilute further to 1 O00 ml
with water in a one-mark volumetric flask. Mix.
8.1.3 Decant the solution and wash the cadmium in the
flask with water, until it is free from chloride.
1 ml of this final dilution contains 4,50 pg of NO,-
2

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IS0 4099-1978 (E)
8.2.5 If the nitrite concentration of the diluted eluate
8.1.4 Copperize the cadmium granules by adding
(8.2.4). as determined from the calibration curve (8.10),
copper(l1) sulphate solution (5.2) (about 2,5 ml per gram
is below 0,063 pg of NO,- per millilitre (i.e. 95 %of
of cadmium) and swir
...

NORME INTERNATIONALE 4099
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION*ME~YHAPOllHAR OPrAHMJAUHR no CTAHllAPTH3AUMH.ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
0 Fromages - Détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites - Méthode par réduction au cadmium et photométrie
Cheese - Determination of nitrate and nitrite contents - Method by cadmium reduction
and photometry
Première édition - 1978-11-15
LL
-
Réf. no : IS0 4099-1978 (F)
CDU 637.3 : 543.846 : 546.173/.175
Co
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7
Descripteurs : produit laitier, fromage, analyse chimique, dosage, nitrate. nitrite.
O)
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2
Prix basé sur 6 pages

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AVANT-PROPOS
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de I'ISO). L'élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I'ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
et non
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales
gouvernementales, en liaison avec I'ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont
soumis aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme
Normes internationales par le Conseil de I'ISO.
La Norme internationale IS04099 a été élaborée par le comité technique
et a été soumise aux comités membres
ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires,
en mars 1977.
Les comités membres des pays suivants l'ont approuvée :
Afrique du Sud, Rép. d' Éthiopie Pays-Bas
France Pologne
Allemagne, R. F.
Australie Ghana Portugal
Autriche Hongrie Roumanie
Belgique Inde Royaume-Uni
Bulgarie Iran Suisse
Canada Irlande Tchécoslovaquie
Israël Thaïlande
Corée, Rép. de
Egypte, Rép. arabe d' Mexique Turquie
Nouvelle-Zélande Yougoslavie
Espagne
l'a désapprouvée.
Aucun comité membre ne
NOTE - La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée conjoin-
tement avec la FIL (Fédération internationale de laiterie) et I'AOAC (Association des chimistes
analytiques officiels, U.S.A.). Le texte, approuvé par les organisations susmentionnées, sera
également publié par la FAO/OMS (Code de principes concernant le lait et les produits laitiers
et les normes connexes), par la FIL et par I'AOAC (Official Methods of Analysis).

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NORME INTERNATIONALE IS0 4099-1978 (F)/ERRATUM
Publié 1981-07-15
*
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. MEXaYHAPOAHAR OPrAHM3AUMR no CTAHflAPTM3AuMM. ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Fromages - Détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites - Méthode par réduction au cadmium et
p hotornétrie
ER RATU M
Page 4
Paragraphe 8.7.2
2e ligne : Remplacer «de la solution tampon (5.3))) par «d‘eau».
0
4e ligne : Remplacer «de solution tampon)) par «d’eau».
7e ligne : Remplacer «la solution tampon)) par (d’eau)).

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NORME INTERNATIONALE IS0 4099-1978 (F)
Fromages - Détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites - Méthode par réduction au cadmium et photométrie
. 1 OBJET ET DOMAINE D‘APPLICATION
utilisée doit être distillée ou exempte de nitrites
x
et de nitrates.
La présente Norme internationale spécifie une méthode
NOTE - Dans le but d’éviter l’inclusion de petites bulles de gaz
par réduction au cadmium et photométrie, pour la déter-
dans la colonne de cadmium cuivré (6.10). l’eau distillée ou dFsi
mination des teneurs en nitrates et en nitrites des fromages.
nisée, utilisée pour la préparation de la colonne (8.1 ), pour la vérifi-
cation du pouvoir réducteur de la colonne (8.2) et pour la régéné-
La méthode est applicable aux fromages à pâte ferme, demi-
ration de la colonne (8.3), doit être de préference récemment
ferme et à pâte molle, de divers âges, ainsi qu’aux fromages
bouillie puis refroidie a la température ambiante.
fondus.
5.1 Cadmium, sous forme de granul s, diamètre des
4
particules 0.3 à 0,8 mm.
2 RÉFÉRENCE
,-
~ I-
S‘il n’est pas possible de se procurer dans le commerce des
ISO/R 707, Lait et produits laitiers - Méthode d’échantil-
granulés de cadmium, ceux-ci peuvent être préparés de la
lonnage.
manière suivante .
1 o&~& (ûî $04. SN&)
3 DÉFINITION Placer, dans un bécher, un nombre convenable de baguettes
de zinc et les recouvrir avec une solution de sulfate de
(MAnitrates et nitrites des fromages : Teneurs en substances
cadmium& 40 g/I. Gratter de temps en temps le cadmium
L déterminées selon la méthode spécifiée dans la présente
spongieux dépose sur les baguettes et cela durant une
Norme internationale et exprimées respectivement en
période de 24 h. Retirer les baguettes de zinc et décanter
milligrammes d’ion nitrate (NO,-) et d‘ion nitrite (NO,-)
le liquide jusqu’a ce qu’il en reste seulement une quantité
par kilogramme (parties par million).
le cadmium. Laver deux ou trois
suffisante pour recouvrir
fois le cadmium spongieux avec de l‘eau. Transférer le
e
cadmium dans un broyeur de laboratoire avec 400ml defrr)l(
4 PRINCIPE
solution d’acide chlorhydriquex0,l fl et broyer durant
/
Extraction du fromage avec de l‘eau chaude, précipita- la dimen-
quelques secondes afin d’obtenir des granulk de
tion de la matière grasse et des protéines, et filtration. Sion requise. Replacer le contenu du broyeur dans le bécher
et l’y maintenir durant plusieurs heures en agitant de temps
Sur une portion du filtrat, réduction, à l’état de nitrites,
en temps pour chasser les bulles. Décanter la majeure
des nitrates extraits, au moyen de cadmium cuivré.
partie du liquide et procéder immédiatement au cuivrage
comme décrit de 8.1.1 à 8.1.5.
Développement d’une coloration rouge à partir de portions
de filtrat non réduit et à partir de portions de filtrat réduit,
5.2 Sulfate de cuivre(ll), solution.
par addition de sulfanilamide et de dichlorhydrate de
N-(naphtyl-1) éthylène diamine, puis mesurage photo-
Dissoudre 20 g de sulfate de cuivre( I I) pentahydraté
à une longueur d‘onde de 538 nm.
métrique
(CuSO,.SH,O) dans de l’eau et compléter à 1 O00 ml.
Calcul de la teneur en nitrites de l’échantillon et de la
5.3 Solution tamp0n.d p 9 a 9.7.
teneur totale en nitrites après réduction des nitrates, par
comparaison des absorbances mesurées avec celles d’une
Diluer 50 mI~~~k!?!lorhydrique concentre
série de solutions étalons de nitrite de sodium; calcul de
[P,~ 1,19 g/ml; environ 38 % (m/m) W] avec 600 ml
la teneur en nitrates à partir de la différence entre ces
d’eau. Après mélange, ajouter 100 ml de solution d‘hydro-
deux teneurs.
xyde d‘ammonium concentrée [p20 0,88
35 % (m/m)gNH,]. Compléter à 1 O00 ml
rcf
5 RÉACTIFS et homogénéiser.
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique. L’eau Ajuster le pH de 9,6 à 9.7 si nécessaire.
f

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IS0 4099-1978 (F)
1 O00 ml avec de l‘eau dans une fiole jaugée et homo-
5.4 Acide chlorhydrique, solution i’ environ 2 r’/’
géné i ser.
Diluer 160 ml d’acide chlorhydrique concentré
$,lW*r\ Mm
1 ml de cette- contient 1 ,O0 pg de NO,-.
(pz0 1 ,I9 g/ml) à 1 O00 ml avec de l‘eau.
-
I
5.5 Acide chlorhydrique, solution environ 0,l
riIi
if
4 )) Diluer 50 ml de la solution d’acide chlorhydrique 1 $ (5.4
à 1 O00 ml avec de l‘eau. blement séché de 110 à 120 “C jusqu‘à masse constante,
dans de l‘eau; compléter à 1 O00 ml avec de l’eau dans une
fiole jaugée et homogénéiser.
5.6 Solutions pour la précipitation des protéines et de la
matière grasse.
Le jour de l‘utilisation, diluer 5 mi de cette solution avec
20 ml de la solution tampon (5.3), compléter ensuite à
5.6.1 Sulfate de zinc, solution.
1000ml avec de l‘eau dans une fiole jaugée et homo-
généiser .
Dissoudre 53,5 g de sulfate de zinc heptahydraté
$&%a mn
(ZnS0,.7H20) dans de l’eau et compléter à 100 ml.
1 ml de cette- contient 4,50 pg de NO,-.
5.6.2 Hexacyanoferrate(1 I) de potassium, solution
O
Dissoudre 17,2 g d’hexacyanoferrate( I I) de potassium
6 APPAREILLAGE
trihydraté [ K4Fe(CN),.3H,0] dans de l’eau et compléter
à 100 ml.
Toute la verrerie doit être soigneusement lavée et rincée
avec de l’eau distillée pour être certain qu‘elle est exempte
5.7 EDTA, solution.
2.;- , .
Dissoudre 33,5 g d’dthylène diu
..
6.1 Balance analytique.
4awawt. tétraacéteati disodique dihydraté
(Na,CloH,,N20,.2HzO) dans de l’eau et compléter
6.2 Dispositif de broyage approprié.
à 1000ml.
6.3 Mixeur-homogénéiseur de laboratoire, avec récipients
5.8 Solutions pour le développement de la coloration
en verre de 250 ou 400 mi de capacité.
5.8.1 Solution I.
6.4 Fioles coniques, de 250 ml de capacité.
Dissoudre, en chauffant au bain d‘eau, 0,5 g de sulfanila-
mide (NH,C,H,SO,NH,) dans un mélange constitué par
6.5 Fioles jaugées à un trait, de 100 (- 500 et 1 O00 ml de
75 ml d‘eau et 5 ml d’acide chlorhydrique concentré
capacit , conformes I’ISO 1042, classe B.
(pz0 1,19 g/ml). Refroidir à la température ambiante
et compléter à 100 ml avec de l’eau. Filtrer si nécessaire.
6.6 PiDettes. d1 lsermettant tW* de Jr‘c:&t**nJ délivrer 2 - 4 - AL 5 - 6 - 8 - O
..
10 - 12 - 20 - 25 et
5.8.2 Solution II.
Diluer 450 ml d‘acide chlorhydrique concentré
NOTE - Le cGBchéant, des burettes peuvent être utilisées a la
(p20 1,19 g/mi) à 1 O00 ml avec de l’eau.
place des pipettes.
5.8.3 Solution 111.
6.7 Éprouvettes graduées, de 5 - 1 O - 25 - 1 O0 - 250 -
500 et 1 O00 ml de capacitu.
Dissoudre 0,l g de dichlorhydrate de N-(naphtyl-I) éthy-
lène diamine (CI ,H,NHCH2CH2NH2.2HCI) dans de
6.8 Entonnoirs en verre, d’environ 7 cm de diametre, a
l’eau. Compléter à 100 ml avec de l’eau. Filtrer si nécessaire.
tige courte.
La solution peut être conservée jusqu’à 1 semaine au réfri-
gérateur, dans un récipient en verre brun bien bouché.
6.9 Papier filtre, pour filtration moyenne, d’environ 15 cm
de diamètre, exempt de nitrates et de nitrites.
5.9 Nitrite de sodium solution étaton+rrrcd+mvT
@OH 4%- &A
6.10 Appareil pour la réduction des nitrates (par exemple
Dissoulre 0,150 g de nitritFe sodium (NaNO,), préalable-
celui qui est représenté par la figure).
ment séché de 110 à 120 OC jusqu’à masse constante, dans
à 1 O00 ml avec de l‘eau dans une fiole
de l’eau; compléter
6.1 1 Colorimètre photoélectrique, ou spectrophotomètre,
jaugée et homogénéiser.
permettant d’effectuer des mesurages à une longueur
Le jour de l’utilisation, diluer 10 ml de cette solution avec d’onde de 538 nm, avec cellules de 1 à 2 cm de parcours
20 ml de la solution tampon (5.3), compléter ensuite à optique.
2

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IS0 4099-1978 (F)
7 ÉCHANTILLONNAGE
8.2.1 Prélever, a la pipette, 20 ml de la solution étalon de
nitrate de potassium (5.10) et les introduire dans le réser-
7.1 Voir ISO/R 707.
voir situé à la partie supérieure de la colonne. Ajouter
immédiatement 5 ml de la solution tampon (5.3) au contenu
7.2 Conserver l'échantillon de manière qu'il ne se produise
du réservoir. Recueillir I'éluat dans une fiole jaugée de
aucune détérioration, ni aucune modification de sa compo-
100 ml. Le débit ne doit pas dépasser 6 ml/min.
sition.
8.2.2 Lorsque le réservoir est presque vide, laver les
parois avec environ 15 ml d'eau et, lorsque celle-ci s'est
écoulée, répéter le même traitement avec une autre portion
8 MODE OPÉRAT
...