ISO 20166-1:2018

Molecular in vitro diagnostic examinations — Specifications for pre-examination processes for formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue — Part 1: Isolated RNA

This document gives guidelines on the handling, documentation, storage and processing of formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue specimens intended for RNA examination during the pre-examination phase before a molecular assay is performed. This document is applicable to molecular in vitro diagnostic examinations including laboratory developed tests performed by medical laboratories and molecular pathology laboratories. It is also intended to be used by laboratory customers, in vitro diagnostics developers and manufacturers, biobanks, institutions and commercial organizations performing biomedical research, and regulatory authorities. NOTE International, national or regional regulations or requirements can also apply to specific topics covered in this document.

Analyses de diagnostic moléculaire in vitro — Spécifications relatives aux processus préanalytiques pour les tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) — Partie 1: ARN extrait

Le présent document fournit des lignes directrices concernant la manipulation, la documentation, le stockage et le traitement de prélèvements tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) destinés à l'analyse de l'ARN durant la phase préanalytique précédant la réalisation d'une analyse moléculaire. Le présent document s'applique aux analyses de diagnostic moléculaire in vitro, y compris les analyses développées en laboratoire réalisées par des laboratoires de biologie médicale et des laboratoires de pathologie moléculaire. Il est également destiné à être utilisé par des clients de laboratoires, des développeurs et fabricants de l'industrie du diagnostic in vitro, ainsi que par des biobanques, des institutions et des organismes commerciaux spécialisés en recherche biomédicale, de même que des autorités de réglementation. NOTE Des réglementations ou exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également s'appliquer à des sujets spécifiques traités dans le présent document.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 25-Nov-2018
• ICS: 11.100.10 - In vitro diagnostic test systems
• Technical Committee: ISO/TC 212 - Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems
• Drafting Committee: ISO/TC 212/WG 4 - Microbiology and molecular diagnostics
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Due Date: 12-Dec-2024
• Completion Date: 12-Dec-2024

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20166-1
First edition
2018-12
Molecular in vitro diagnostic
examinations — Specifications for pre-
examination processes for formalin-
fixed and paraffin-embedded (FFPE)
tissue —
Part 1:
Isolated RNA
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro — Spécifications relatives
aux processus préanalytiques pour les tissus fixés au formol et inclus
en paraffine (FFPE) —
Partie 1: ARN extrait
Reference number
©
ISO 2018
ISO 20166-1:2018(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2018
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: [phone]
Fax: [phone]
Email: [e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2018 – All rights reserved

ISO 20166-1:2018(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2  Normative references . 1
3  Terms and definitions . 1
4  General considerations . 5
5  Outside the laboratory . 6
5.1 Specimen collection . 6
5.1.1 General. 6
5.1.2 Information about the specimen donor/patient . 6
5.1.3 Information about the specimen . 6
5.1.4 Specimen processing . 6
5.2 Transport requirements . 7
6  Inside the laboratory . 7
6.1 Information about the reception of the specimen . 7
6.2 Formalin fixation of the specimen or sample(s) . 8
6.3 Evaluation of the pathology of the specimen and selection of the sample(s) . 9
6.4 Post-fixation of frozen samples .10
6.5 Decalcification .10
6.6 Processing and paraffin embedding .10
6.7 Storage requirements .10
6.8 Isolation of RNA .11
6.8.1 General.11
6.8.2 General information for RNA isolation procedures .11
6.8.3 Using commercial kits .12
6.8.4 Using the laboratories’ own protocols .12
6.9 Quantity and quality assessment of isolated RNA .13
6.10 Storage of isolated RNA .13
6.10.1 General.13
6.10.2 Using commercially available kits for RNA isolation .14
6.10.3 Using the laboratory's own protocols for RNA isolation .14
Annex A (informative) Quality control of RNA extracted from formalin-fixed and paraffin-
embedded tissue samples: implications for RT-qPCR based examinations .15
Bibliography .21
ISO 20166-1:2018(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
.org/iso/foreword .html.
The committee responsible for this document is ISO/TC 212, Clinical laboratory testing and in vitro
diagnostic test systems.
A list of all parts in the ISO 20166 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2018 – All rights reserved

ISO 20166-1:2018(E)
Introduction
Molecular in vitro diagnostics, including molecular pathology, has enabled significant progress in
medicine. Further progress is expected with new technologies analysing nucleic acids, proteins, and
metabolites in human tissues and body fluids. However, the profiles and/or integrity of these molecules
can change drastically during specimen collection, transport, storage and processing, thus making
the outcome from diagnostics or research unreliable or even impossible because the subsequent
examination assay will not determine the situation in the patient but an artificial profile generated
during the pre-examination process.
Therefore, a standardization of the entire process from specimen collection to the RNA examination is
needed. Studies have been undertaken to determine the important influencing factors. This document
draws upon such work to codify and standardize the steps for formalin-fixed and paraffin-embedded
(FFPE) tissue with regard to RNA examination in what is referred to as the pre-examination phase.
The formalin-fixation and the paraffin-embedding processes lead to modifications of the RNA
molecules, which can impact the validity and reliability of the examination test results.
RNA profiles in tissues can change drastically before, during and after collection and change differently
in different donors'/patients' tissues. Therefore, it is essential to take special measures to minimize the
described RNA profile changes and modifications within the tissue for subsequent examination.
In this document, the following verbal forms are used:
— "shall" indicates a requirement;
— "should" indicates a recommendation;
— "may" indicates a permission;
— "can" indicates a possibility or a capability.
INTERNATIONAL STANDARD  ISO 20166-1:2018(E)
Molecular in vitro diagnostic examinations —
Specifications for pre-examination processes for formalin-
fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue —
Part 1:
Isolated RNA
1 Scope
This document gives guidelines on the handling, documentation, storage and processing of formalin-
fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue specimens intended for RNA examination during the pre-
examination phase before a molecular assay is performed.
This document is applicable to molecular in vitro diagnostic examinations including laboratory
developed tests performed by medical laboratories and molecular pathology laboratories. It is also
intended to be used by laboratory customers, in vitro diagnostics developers and manufacturers,
biobanks, institutions and commercial organizations performing biomedical research, and regulatory
authorities.
NOTE International, national or regional regulations or requirements can also apply to specific topics
covered in this document.
2  Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 15189:2012, Medical laboratories — Requirements for quality and competence
ISO 15190, Medical laboratories — Requirements for safety
ISO/IEC 17020:2012, Conformity assessment — Requirements for the operation of various types of bodies
performing inspection
3  Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 15189 and the following apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
3.1
aliquot
portion of a larger amount of homogeneous material, assumed to be taken with negligible sampling error
Note 1 to entry: The term is usually applied to fluids. Tissues are heterogeneous and therefore cannot be
aliquoted.
Note 2 to entry: The definition is derived from References [28], [29] and [30].
ISO 20166-1:2018(E)
3.2
ambient temperature
unregulated temperature of the surrounding air
3.3
analyte
component represented in the name of a measurable quantity
[SOURCE: ISO 17511:2003, 3.2, modified — EXAMPLE has been removed.]
3.4
analytical test performance
accuracy, precision, and sensitivity of a test to measure the analyte (3.3) of interest
Note 1 to entry: Other test performance characteristics such as robustness, repeatability can apply as well.
3.5
cold ischemia
condition after removal of the tissue from the body until stabilization or fixation
3.6
cDNA
complementary DNA
single-stranded DNA that is complementary to a given RNA synthesized in the presence of reverse
transcriptase to serve as a template for synthesis of DNA copies
[SOURCE: ISO 17822-1:2014, 3.12]
3.7
diagnosis
identification of a health or disease s
...

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20166-1
First edition
2018-12
Molecular in vitro diagnostic
examinations — Specifications for pre-
examination processes for formalin-
fixed and paraffin-embedded (FFPE)
tissue —
Part 1:
Isolated RNA
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro — Spécifications relatives
aux processus préanalytiques pour les tissus fixés au formol et inclus
en paraffine (FFPE) —
Partie 1: ARN extrait
Reference number
©
ISO 2018
ISO 20166-1:2018(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2018
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
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CH-1214 Vernier, Geneva
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Email: [e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2018 – All rights reserved

ISO 20166-1:2018(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2  Normative references . 1
3  Terms and definitions . 1
4  General considerations . 5
5  Outside the laboratory . 6
5.1 Specimen collection . 6
5.1.1 General. 6
5.1.2 Information about the specimen donor/patient . 6
5.1.3 Information about the specimen . 6
5.1.4 Specimen processing . 6
5.2 Transport requirements . 7
6  Inside the laboratory . 7
6.1 Information about the reception of the specimen . 7
6.2 Formalin fixation of the specimen or sample(s) . 8
6.3 Evaluation of the pathology of the specimen and selection of the sample(s) . 9
6.4 Post-fixation of frozen samples .10
6.5 Decalcification .10
6.6 Processing and paraffin embedding .10
6.7 Storage requirements .10
6.8 Isolation of RNA .11
6.8.1 General.11
6.8.2 General information for RNA isolation procedures .11
6.8.3 Using commercial kits .12
6.8.4 Using the laboratories’ own protocols .12
6.9 Quantity and quality assessment of isolated RNA .13
6.10 Storage of isolated RNA .13
6.10.1 General.13
6.10.2 Using commercially available kits for RNA isolation .14
6.10.3 Using the laboratory's own protocols for RNA isolation .14
Annex A (informative) Quality control of RNA extracted from formalin-fixed and paraffin-
embedded tissue samples: implications for RT-qPCR based examinations .15
Bibliography .21
ISO 20166-1:2018(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
.org/iso/foreword .html.
The committee responsible for this document is ISO/TC 212, Clinical laboratory testing and in vitro
diagnostic test systems.
A list of all parts in the ISO 20166 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2018 – All rights reserved

ISO 20166-1:2018(E)
Introduction
Molecular in vitro diagnostics, including molecular pathology, has enabled significant progress in
medicine. Further progress is expected with new technologies analysing nucleic acids, proteins, and
metabolites in human tissues and body fluids. However, the profiles and/or integrity of these molecules
can change drastically during specimen collection, transport, storage and processing, thus making
the outcome from diagnostics or research unreliable or even impossible because the subsequent
examination assay will not determine the situation in the patient but an artificial profile generated
during the pre-examination process.
Therefore, a standardization of the entire process from specimen collection to the RNA examination is
needed. Studies have been undertaken to determine the important influencing factors. This document
draws upon such work to codify and standardize the steps for formalin-fixed and paraffin-embedded
(FFPE) tissue with regard to RNA examination in what is referred to as the pre-examination phase.
The formalin-fixation and the paraffin-embedding processes lead to modifications of the RNA
molecules, which can impact the validity and reliability of the examination test results.
RNA profiles in tissues can change drastically before, during and after collection and change differently
in different donors'/patients' tissues. Therefore, it is essential to take special measures to minimize the
described RNA profile changes and modifications within the tissue for subsequent examination.
In this document, the following verbal forms are used:
— "shall" indicates a requirement;
— "should" indicates a recommendation;
— "may" indicates a permission;
— "can" indicates a possibility or a capability.
INTERNATIONAL STANDARD  ISO 20166-1:2018(E)
Molecular in vitro diagnostic examinations —
Specifications for pre-examination processes for formalin-
fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue —
Part 1:
Isolated RNA
1 Scope
This document gives guidelines on the handling, documentation, storage and processing of formalin-
fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue specimens intended for RNA examination during the pre-
examination phase before a molecular assay is performed.
This document is applicable to molecular in vitro diagnostic examinations including laboratory
developed tests performed by medical laboratories and molecular pathology laboratories. It is also
intended to be used by laboratory customers, in vitro diagnostics developers and manufacturers,
biobanks, institutions and commercial organizations performing biomedical research, and regulatory
authorities.
NOTE International, national or regional regulations or requirements can also apply to specific topics
covered in this document.
2  Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 15189:2012, Medical laboratories — Requirements for quality and competence
ISO 15190, Medical laboratories — Requirements for safety
ISO/IEC 17020:2012, Conformity assessment — Requirements for the operation of various types of bodies
performing inspection
3  Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 15189 and the following apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
3.1
aliquot
portion of a larger amount of homogeneous material, assumed to be taken with negligible sampling error
Note 1 to entry: The term is usually applied to fluids. Tissues are heterogeneous and therefore cannot be
aliquoted.
Note 2 to entry: The definition is derived from References [28], [29] and [30].
ISO 20166-1:2018(E)
3.2
ambient temperature
unregulated temperature of the surrounding air
3.3
analyte
component represented in the name of a measurable quantity
[SOURCE: ISO 17511:2003, 3.2, modified — EXAMPLE has been removed.]
3.4
analytical test performance
accuracy, precision, and sensitivity of a test to measure the analyte (3.3) of interest
Note 1 to entry: Other test performance characteristics such as robustness, repeatability can apply as well.
3.5
cold ischemia
condition after removal of the tissue from the body until stabilization or fixation
3.6
cDNA
complementary DNA
single-stranded DNA that is complementary to a given RNA synthesized in the presence of reverse
transcriptase to serve as a template for synthesis of DNA copies
[SOURCE: ISO 17822-1:2014, 3.12]
3.7
diagnosis
identification of a health or disease s
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20166-1
Première édition
2018-12
Analyses de diagnostic moléculaire
in vitro — Spécifications relatives
aux processus préanalytiques pour
les tissus fixés au formol et inclus en
paraffine (FFPE) —
Partie 1:
ARN extrait
Molecular in vitro diagnostic examinations — Specifications for
pre-examination processes for formalin-fixed and paraffin-embedded
(FFPE) tissue —
Part 1: Isolated RNA
Numéro de référence
©
ISO 2018
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2018
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: [phone]
Fax: [phone]
E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2018 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Considérations générales . 5
5 Hors du laboratoire . 7
5.1 Recueil des prélèvements . 7
5.1.1 Généralités . 7
5.1.2 Informations relatives au donneur/patient . 7
5.1.3 Informations relatives au prélèvement . 7
5.1.4 Traitement du prélèvement . . 7
5.2 Exigences de transport . 8
6 Dans le laboratoire . 8
6.1 Informations relatives à la réception des prélèvements . 8
6.2 Fixation au formol du prélèvement ou de l’échantillon . 9
6.3 Évaluation de la pathologie du prélèvement et sélection du ou des échantillons .10
6.4 Post-fixation d’échantillons congelés .11
6.5 Décalcification .11
6.6 Traitement et inclusion en paraffine .11
6.7 Exigences relatives au stockage .12
6.8 Extraction de l’ARN .12
6.8.1 Généralités .12
6.8.2 Informations générales relatives aux protocoles d’extraction de l’ARN .12
6.8.3 Utilisation de kits commerciaux .13
6.8.4 Utilisation des protocoles propres aux laboratoires .13
6.9 Évaluation quantitative et qualitative de l’ARN extrait .14
6.10 Stockage de l’ARN extrait .15
6.10.1 Généralités .15
6.10.2 Utilisation de kits disponibles dans le commerce pour l’extraction d’ARN .15
6.10.3 Utilisation des protocoles propres au laboratoire pour l’extraction d’ARN .15
Annexe A (informative) Contrôle de la qualité de l’ARN extrait d’échantillons de tissus fixés
au formol et inclus en paraffine: conséquences pour les analyses basées sur la RT-qPCR .17
Bibliographie .23
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 212, Laboratoires d’analyses de
biologie médicale et systèmes de diagnostic in vitro.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20166 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
iv © ISO 2018 – Tous droits réservés

Introduction
Le diagnostic moléculaire in vitro, y compris la pathologie moléculaire, a permis de faire
considérablement progresser la médecine. D’autres avancées sont attendues avec les nouvelles
technologies d’analyse des acides nucléiques, des protéines et des métabolites dans les tissus
humains et les fluides corporels. Toutefois, les profils et/ou l’intégrité de ces molécules peuvent varier
considérablement au cours du prélèvement des échantillons primaires, du transport, du stockage et du
traitement, et engendrer ainsi un résultat de diagnostic ou de recherche peu fiable, voire impossible,
car l’analyse subséquente ne déterminera pas l’état du patient, mais un profil artificiel généré pendant
le processus préanalytique.
Par conséquent, une normalisation de l’ensemble du processus, allant du prélèvement des échantillons
primaires jusqu’à l’analyse de l’ARN, est nécessaire. Des études ont été réalisées afin de définir les
facteurs ayant un impact important. Le présent document se fonde sur ces travaux pour codifier et
normaliser les étapes des processus dits de la phase préanalytique pour tissus fixés au formol et inclus
en paraffine (FFPE) au regard de l’analyse de l’ARN.
Le processus de fixation au formol et d’inclusion en paraffine conduit à des modifications des molécules
d’ARN, ce qui peut avoir un impact sur la validité et la fiabilité des résultats des analyses.
Les profils d’ARN dans les tissus peuvent changer considérablement avant, pendant et après le
prélèvement et peuvent varier différemment parmi les différents donneurs/patients. Il est donc
essentiel de prendre des mesures particulières afin de réduire le plus possible, au sein des tissus, les
changements et modifications de profil d’ARN décrits, pour l’analyse ultérieure.
Dans le présent document, les formes verbales suivantes sont utilisées:
— «doit» indique une exigence;
— «il convient de/que» indique une recommandation;
— «peut/il est admis/permis» indique une autorisation;
— «peut/il est possible» indique une possibilité ou une capacité.
NORME INTERNATIONALE ISO 20166-1:2018(F)
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro —
Spécifications relatives aux processus préanalytiques pour
les tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) —
Partie 1:
ARN extrait
1 Domaine d’application
Le présent document fournit des lignes directrices concernant la manipulation, la documentation, le
stockage et le traitement de prélèvements tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) destinés
à l’analyse de l’ARN durant la phase préanalytique précédant la réalisation d’une analyse moléculaire.
Le présent document s’applique aux analyses de diagnostic moléculaire in vitro, y compris les analyses
développées en laboratoire réalisées par des laboratoires de biologie médicale et des laboratoires
de pathologie moléculaire. Il est également destiné à être utilisé par des clients de laboratoires, des
développeurs et fabricants de l’industrie du diagnostic in vitro, ainsi que par des biobanques, des
institutions et des organismes commerciaux spécialisés en recherche biomédicale, de même que des
autorités de réglementation.
NOTE Des réglementations ou exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également
s’appliquer à des sujets spécifiques traités dans le présent document.
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 15189:2012, Laboratoires de biologie médicale — Exigences concernant la qualité et la compétence
ISO 15190, Laboratoires de médecine — Exigences pour la sécurité
ISO/IEC 17020:2012, Évaluation de la conformité — Exigences pour le fonctionnement de différents types
d'organismes procédant à l'inspection
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions de l’ISO 15189, ainsi que les suivants,
s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/.
3.1
aliquote
partie d’une quantité plus importante d’un matériau homogène, prélevée avec une erreur
d’échan
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20166-1
Première édition
2018-12
Analyses de diagnostic moléculaire
in vitro — Spécifications relatives
aux processus préanalytiques pour
les tissus fixés au formol et inclus en
paraffine (FFPE) —
Partie 1:
ARN extrait
Molecular in vitro diagnostic examinations — Specifications for
pre-examination processes for formalin-fixed and paraffin-embedded
(FFPE) tissue —
Part 1: Isolated RNA
Numéro de référence
©
ISO 2018
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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Fax: [phone]
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Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2018 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Considérations générales . 5
5 Hors du laboratoire . 7
5.1 Recueil des prélèvements . 7
5.1.1 Généralités . 7
5.1.2 Informations relatives au donneur/patient . 7
5.1.3 Informations relatives au prélèvement . 7
5.1.4 Traitement du prélèvement . . 7
5.2 Exigences de transport . 8
6 Dans le laboratoire . 8
6.1 Informations relatives à la réception des prélèvements . 8
6.2 Fixation au formol du prélèvement ou de l’échantillon . 9
6.3 Évaluation de la pathologie du prélèvement et sélection du ou des échantillons .10
6.4 Post-fixation d’échantillons congelés .11
6.5 Décalcification .11
6.6 Traitement et inclusion en paraffine .11
6.7 Exigences relatives au stockage .12
6.8 Extraction de l’ARN .12
6.8.1 Généralités .12
6.8.2 Informations générales relatives aux protocoles d’extraction de l’ARN .12
6.8.3 Utilisation de kits commerciaux .13
6.8.4 Utilisation des protocoles propres aux laboratoires .13
6.9 Évaluation quantitative et qualitative de l’ARN extrait .14
6.10 Stockage de l’ARN extrait .15
6.10.1 Généralités .15
6.10.2 Utilisation de kits disponibles dans le commerce pour l’extraction d’ARN .15
6.10.3 Utilisation des protocoles propres au laboratoire pour l’extraction d’ARN .15
Annexe A (informative) Contrôle de la qualité de l’ARN extrait d’échantillons de tissus fixés
au formol et inclus en paraffine: conséquences pour les analyses basées sur la RT-qPCR .17
Bibliographie .23
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 212, Laboratoires d’analyses de
biologie médicale et systèmes de diagnostic in vitro.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 20166 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
iv © ISO 2018 – Tous droits réservés

Introduction
Le diagnostic moléculaire in vitro, y compris la pathologie moléculaire, a permis de faire
considérablement progresser la médecine. D’autres avancées sont attendues avec les nouvelles
technologies d’analyse des acides nucléiques, des protéines et des métabolites dans les tissus
humains et les fluides corporels. Toutefois, les profils et/ou l’intégrité de ces molécules peuvent varier
considérablement au cours du prélèvement des échantillons primaires, du transport, du stockage et du
traitement, et engendrer ainsi un résultat de diagnostic ou de recherche peu fiable, voire impossible,
car l’analyse subséquente ne déterminera pas l’état du patient, mais un profil artificiel généré pendant
le processus préanalytique.
Par conséquent, une normalisation de l’ensemble du processus, allant du prélèvement des échantillons
primaires jusqu’à l’analyse de l’ARN, est nécessaire. Des études ont été réalisées afin de définir les
facteurs ayant un impact important. Le présent document se fonde sur ces travaux pour codifier et
normaliser les étapes des processus dits de la phase préanalytique pour tissus fixés au formol et inclus
en paraffine (FFPE) au regard de l’analyse de l’ARN.
Le processus de fixation au formol et d’inclusion en paraffine conduit à des modifications des molécules
d’ARN, ce qui peut avoir un impact sur la validité et la fiabilité des résultats des analyses.
Les profils d’ARN dans les tissus peuvent changer considérablement avant, pendant et après le
prélèvement et peuvent varier différemment parmi les différents donneurs/patients. Il est donc
essentiel de prendre des mesures particulières afin de réduire le plus possible, au sein des tissus, les
changements et modifications de profil d’ARN décrits, pour l’analyse ultérieure.
Dans le présent document, les formes verbales suivantes sont utilisées:
— «doit» indique une exigence;
— «il convient de/que» indique une recommandation;
— «peut/il est admis/permis» indique une autorisation;
— «peut/il est possible» indique une possibilité ou une capacité.
NORME INTERNATIONALE ISO 20166-1:2018(F)
Analyses de diagnostic moléculaire in vitro —
Spécifications relatives aux processus préanalytiques pour
les tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) —
Partie 1:
ARN extrait
1 Domaine d’application
Le présent document fournit des lignes directrices concernant la manipulation, la documentation, le
stockage et le traitement de prélèvements tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) destinés
à l’analyse de l’ARN durant la phase préanalytique précédant la réalisation d’une analyse moléculaire.
Le présent document s’applique aux analyses de diagnostic moléculaire in vitro, y compris les analyses
développées en laboratoire réalisées par des laboratoires de biologie médicale et des laboratoires
de pathologie moléculaire. Il est également destiné à être utilisé par des clients de laboratoires, des
développeurs et fabricants de l’industrie du diagnostic in vitro, ainsi que par des biobanques, des
institutions et des organismes commerciaux spécialisés en recherche biomédicale, de même que des
autorités de réglementation.
NOTE Des réglementations ou exigences internationales, nationales ou régionales peuvent également
s’appliquer à des sujets spécifiques traités dans le présent document.
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 15189:2012, Laboratoires de biologie médicale — Exigences concernant la qualité et la compétence
ISO 15190, Laboratoires de médecine — Exigences pour la sécurité
ISO/IEC 17020:2012, Évaluation de la conformité — Exigences pour le fonctionnement de différents types
d'organismes procédant à l'inspection
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions de l’ISO 15189, ainsi que les suivants,
s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/.
3.1
aliquote
partie d’une quantité plus importante d’un matériau homogène, prélevée avec une erreur
d’échan
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