ISO 12228-2:2014
(Main)Determination of individual and total sterols contents — Gas chromatographic method — Part 2: Olive oils and olive pomace oils
Determination of individual and total sterols contents — Gas chromatographic method — Part 2: Olive oils and olive pomace oils
ISO 12228-2:2014 specifies a procedure for the gas chromatographic determination of the contents and composition of sterols and triterpene dialcohols in olive and olive pomace oils. For the determination of the contents and composition of sterols in all other animal and vegetable fats and oils, ISO 12228‑1 is to be used.
Détermination de la teneur en stérols individuels et totaux — Méthode par chromatographie en phase gazeuse — Partie 2: Huile d'olive et huile de grignons d'olive
L'ISO 12228-2:2014 spécifie un mode opératoire de détermination de la teneur et de la composition des stérols et des dialcools triterpéniques contenus dans l'huile d'olive et l'huile de grignons d'olive par chromatographie en phase gazeuse. Pour déterminer la teneur et la composition des stérols dans tout autre corps gras d'origine animale ou végétale, l'ISO 12228-1 doit être utilisée.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 12228-2
First edition
2014-10-01
Determination of individual
and total sterols contents — Gas
chromatographic method —
Part 2:
Olive oils and olive pomace oils
Détermination de la teneur en stérols individuels et totaux —
Méthode par chromatographie en phase gazeuse —
Partie 2: Huile d’olive et huile de grignons d’olive
Reference number
©
ISO 2014
© ISO 2014
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior
written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2014 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 3
7 Sample . 4
7.1 Sampling . 4
7.2 Preparation of the test sample . 4
8 Procedure. 4
8.1 Test portion . 4
8.2 Preparation of unsaponifiable matter. 4
8.3 Separation of the sterol and triterpene dialcohols (erythrodiol, uvaol) fractions by TLC . 5
8.4 Preparation of the trimethylsilyl ethers . 6
8.5 Gas chromatographic analysis . 6
9 Expression of results . 7
9.1 Quantitative evaluation . 7
9.2 Determination of the total sterol content . 8
9.3 Composition of sterols . 8
9.4 Composition of triterpene dialcohols . 8
10 Precision . 9
10.1 Interlaboratory test. 9
10.2 Repeatability limit, r . 9
10.3 Reproducibility limit, R . 9
11 Test report . 9
Annex A (informative) Figures .10
Annex B (informative) Interlaborative trial .13
Bibliography .16
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any
patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on
the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers
to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information
The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
This first edition of ISO 12228-2 cancels and replaces ISO 12228:1999, which has been technically
revised.
ISO 12228 consists of the following parts, under the general title Determination of individual and total
sterols contents — Gas chromatographic method:
— Part 1: Animal and vegetable fats and oils
— Part 2: Olive oils and olive pomace oils
iv © ISO 2014 – All rights reserved
INTERNATIONAL STANDARD ISO 12228-2:2014(E)
Determination of individual and total sterols contents —
Gas chromatographic method —
Part 2:
Olive oils and olive pomace oils
1 Scope
This part of ISO 12228 specifies a procedure for the gas chromatographic determination of the contents
and composition of sterols and triterpene dialcohols in olive and olive pomace oils. For the determination
of the contents and composition of sterols in all other animal and vegetable fats and oils, ISO 12228-1 is
to be used.
NOTE This part of ISO 12228 is technically identical to IOC Standard COI/T.20/Doc. No. 30 (November 2011).
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated
references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
composition of sterols
composition of individual sterols in the sample, beginning with cholesterol and ending with ∆7-avenasterol
(see Table 1) under the conditions specified in this part of ISO 12228
Note 1 to entry: The composition is expressed as a percentage of all peak areas, normalized to 100 %.
3.2
total sterol content
mass fraction of the sum of all individual sterols, as determined in accordance with the method specified
in this part of ISO 12228, beginning with cholesterol and ending with ∆7-avenasterol (see Table 1),
divided by the mass of the test portion
Note 1 to entry: The content is expressed in milligrams per kilogram.
3.3
composition of triterpene dialcohols
composition of erythrodiol and uvaol in the sample under the conditions specified in this part of
ISO 12228
Note 1 to entry: The composition is expressed as a percentage of all peak areas, beginning with cholesterol and
ending with uvaol (see Table 1) under the conditions specified in this part of ISO 12228, normalized to 100 %.
4 Principle
A test portion is saponified by boiling under reflux with an ethanolic potassium hydroxide solution. The
unsaponifiable matter is extracted with diethyl ether. The sterol and triterpene dialcohol fractions are
separated from the unsaponifiable matter by thin-layer chromatography on a basic silica gel plate. The
qualitative and quantitative compositions of the sterol and triterpene dialcohol fractions are determined
by gas chromatography of the trimethylsilyl ethers using cholestanol as internal standard.
5 Reagents
WARNING — Attention is drawn to the regulations which specify the handling of hazardous
substances. Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise stated, and water complying with
[1]
grade 3 of ISO 3696.
5.1 Potassium hydroxide, minimum mass fraction w = 85 g/100 g.
5.2 Potassium hydroxide, ethanolic solution, amount concentration, c, approximately 2 mol/l.
While cooling, dissolve 130 g of potassium hydroxide (5.1) in 200 ml of distilled water and then make up
to 1 l with ethanol (5.9). Keep the solution in well-stoppered dark glass bottles and store for a maximum
of 2 d.
5.3 Potassium hydroxide, ethanolic solution, amount concentration, c, approximately 0,2 mol/l.
Dissolve 13 g of potassium hydroxide (5.1) in 20 ml of distilled water and make up to 1 l with ethanol
(5.9).
5.4 Diethyl ether, for chromatography.
WARNING — Diethyl ether is highly flammable and can form explosive peroxides. Explosive
limits in air are 1,7 % to 48 % (volume fraction). Take special precautions when using it.
5.5 Anhydrous sodium sulfate.
5.6 Silica gel thin-layer chromatography (TLC) plates, commercially available, dimensions
20 cm × 20 cm, thickness of layer 0,25 mm, without fluorescence indicator.
5.7 Acetone, for chromatography.
5.8 n-Hexane, for chromatography.
5.9 Ethanol 96 %, minimum volume fraction φ = 95 %.
5.10 Ethyl acetate.
5.11 Reference solution for thin-layer chromatography, cholesterol or mixture of phytosterols, and
erythrodiol solution in ethyl acetate (5.10), mass concentration, ρ = 5 %.
5.12 2,7-dichlorofluorescein, ethanolic solution, mass concentration, ρ = 0,2 %.
Make slightly basic by adding a few drops of 2 mol/l alcoholic potassium hydroxide solution (5.2). Store
for a maximum of 1 year.
2 © ISO 2014 – All rights reserved
5.13 α-cholestanol internal standard solution, mass concentration, ρ = 0,2 g/100 ml, in ethyl acetate
(5.10).
5.14 Phenolphthalein solution, mass concentration, ρ = 10 g/l, in ethanol (5.9).
5.15 Carrier gas for gas chromatography, helium or preferably hydrogen.
5.16 Auxiliary gases for gas chromatography, hydrogen, helium, nitrogen, and air.
5.17 Developing solvent, mixture of n-hexane and diethyl ether, volume concentrations are: σ(n-
hexane) = 65 ml/100 ml, σ(diethyl ether) = 35 ml/100 ml.
5.18 Hexamethyldisilazane.
5.19 Trimethylchlorosilane.
5.20 Silylation reagent, mixture of pyridine, hexamethyld
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 12228-2
Première édition
2014-10-01
Détermination de la teneur en stérols
individuels et totaux — Méthode par
chromatographie en phase gazeuse —
Partie 2:
Huile d’olive et huile de grignons
d’olive
Determination of individual and total sterols contents — Gas
chromatographic method —
Part 2: Olive oils and olive pomace oils
Numéro de référence
©
ISO 2014
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2014
Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée
sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2014 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 3
7 Échantillon . 4
7.1 Échantillonnage . 4
7.2 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
8 Mode opératoire. 5
8.1 Prise d’essai . 5
8.2 Préparation de l’insaponifiable. 5
8.3 Séparation de la fraction stérolique et des dialcools triterpéniques (érythrodiol, uvaol)
par CCM . 6
8.4 Préparation des triméthylsilyléthers . 6
8.5 Analyse par chromatographie en phase gazeuse . 7
9 Expression des résultats. 8
9.1 Évaluation quantitative . 8
9.2 Détermination de la teneur en stérols totaux . 9
9.3 Composition des stérols . 9
9.4 Composition des dialcools triterpéniques . 9
10 Fidélité .10
10.1 Essai interlaboratoires .10
10.2 Limite de répétabilité, r .10
10.3 Limite de reproductibilité, R .10
11 Rapport d’essai .10
Annexe A (informative) Figures .11
Annexe B (informative) Essai interlaboratoires .14
Bibliographie .18
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de
la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant
les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos — Informations
supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
Cette première édition de l’ISO 12228-2 annule et remplace l’ISO 12228:1999, qui a fait l’objet d’une
révision technique.
L’ISO 12228 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Détermination de la teneur
en stérols individuels et totaux — Méthode par chromatographie en phase gazeuse:
— Partie 1: Corps gras d’origines animale et végétale
— Partie 2: Huile d’olive et huile de grignons d’olive
iv © ISO 2014 – Tous droits réservés
NORME INTERNATIONALE ISO 12228-2:2014(F)
Détermination de la teneur en stérols individuels et
totaux — Méthode par chromatographie en phase
gazeuse —
Partie 2:
Huile d’olive et huile de grignons d’olive
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 12228 spécifie un mode opératoire de détermination de la teneur et de la
composition des stérols et des dialcools triterpéniques contenus dans l’huile d’olive et l’huile de grignons
d’olive par chromatographie en phase gazeuse. Pour déterminer la teneur et la composition des stérols
dans tout autre corps gras d’origine animale ou végétale, l’ISO 12228-1 doit être utilisée.
NOTE La présente partie de l’ISO 12228 est techniquement identique à la norme du Conseil Oléicole
International COI/T.20/Doc. n° 30 (novembre 2011).
2 Références normatives
Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à
l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 661, Corps gras d’origines animale et végétale — Préparation de l’échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
composition des stérols
composition des stérols individuels contenus dans l’échantillon, en commençant par le cholestérol et en
terminant par le ∆7-avénastérol (voir Tableau 1) dans les conditions spécifiées par la présente partie de
l’ISO 12228
Note 1 à l’article: La composition est exprimée en pourcentage de la somme de toutes les aires de pic, ramenée à
100 %.
3.2
teneur en stérols totaux
fraction massique de la somme de tous les stérols individuels, déterminée selon la méthode spécifiée
dans la présente partie de l’ISO 12228, en commençant par le cholestérol et en terminant par le
∆7-avénastérol (voir Tableau 1), divisée par la masse de la prise d’essai
Note 1 à l’article: La teneur est exprimée en milligrammes par kilogramme.
3.3
composition des dialcools triterpéniques
composition de l’érythrodiol et de l’uvaol dans l’échantillon dans les conditions spécifiées par la présente
partie de l’ISO 12228
Note 1 à l’article: La composition est exprimée en pourcentage de la somme des aires de pic, en commençant par
le cholestérol et en terminant par l’uvaol (voir Tableau 1) dans les conditions spécifiées par la présente partie de
l’ISO 12228, ramenée à 100 %.
4 Principe
Saponification d’une prise d’essai par une solution éthanolique d’hydroxyde de potassium à ébullition
sous reflux. Extraction de l’insaponifiable par l’éther diéthylique. Séparation des fractions contenant
les stérols et les dialcools triterpéniques de l’insaponifiable par chromatographie sur couche mince
(CCM) sur plaque de gel de silice basique. Détermination de la composition qualitative et quantitative
des fractions contenant les stérols et les dialcools triterpéniques par chromatographie en phase gazeuse
des triméthylsilyléthers en utilisant du cholestanol comme étalon interne.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — L’attention des lecteurs est attirée sur les règles qui spécifient la manipulation
des substances dangereuses. Les mesures de sécurité sur les plans technique, organisationnel et
personnel doivent être suivies.
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau
[1]
de qualité 3 conformément à l’ISO 3696.
5.1 Hydroxyde de potassium, avec une fraction massique d’au moins w = 85 g/100 g.
5.2 Hydroxyde de potassium, solution éthanolique, avec une concentration, c, d’environ 2 mol/l.
Dissoudre 130 g d’hydroxyde de potassium (5.1), en refroidissant, dans 200 ml d’eau distillée et compléter
à 1 l avec de l’éthanol (5.9). Conserver la solution dans des flacons en verre opaque bien bouchés pendant
2 jours au maximum.
5.3 Hydroxyde de potassium, solution éthanolique, avec une concentration, c, d’environ 0,2 mol/l.
Dissoudre 13 g d’hydroxyde de potassium (5.1) dans 20 ml d’eau distillée et compléter à 1 l avec de
l’éthanol (5.9).
5.4 Éther diéthylique, pour chromatographie.
AVERTISSEMENT — L’éther diéthylique est hautement inflammable et peut engendrer la formation
de peroxydes explosifs. Les limites d’explosion dans l’air sont comprises entre 1,7 % et 48 %
(v/v). Des précautions particulières doivent être prises lors de l’utilisation de cette substance.
5.5 Sulfate de sodium anhydre.
5.6 Plaques de gel de silice pour chromatographie sur couche mince (CCM), disponibles dans le
commerce, de 20 cm × 2
...
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 12228-2
Первое издание
2014-10-01
Определение содержания и состава
стеринов. Метод газовой
хроматографии.
Часть 2.
Оливковое масло и жмыховое
оливковое масло
Determination of individual and total sterols contents — Gas
chromatographic method —
Part 2. Olive oils and olive pomace oils
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
©
ISO 2014
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO 2014
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO по соответствующему адресу, указанному ниже, или комитета-члена ISO в стране
заявителя.
ISO copyright office
Case postale 56 CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2014 – Все права сохраняются
Содержание Страница
Предисловие . iv
1 Область применения . 1
2 Нормативные ссылки . 1
3 Термины и определения . 1
4 Принцип . 2
5 Реактивы . 2
6 Аппаратура. 3
7 Проба . 4
7.1 Отбор проб . 4
7.2 Приготовление пробы для испытания . 4
8 Методика . 4
8.1 Проба для анализа . 4
8.2 Получение неомыляемого вещества . 5
8.3 Разделение фракций стеринов и двухатомных тритерпеновых спиртов
(эритродиола, уваола) тонкослойной хроматографией (TLC) . 5
8.4 Приготовление триметилсилиловых эфиров . 6
8.5 Газохроматографический анализ . 6
9 Выражение результатов . 8
9.1 Количественная оценка . 8
9.2 Определение общего содержания стеринов . 8
9.3 Состав стеринов . 8
9.4 Состав двухатомных тритерпеновых спиртов . 9
10 Прецизионность . 9
10.1 Межлабораторное испытание . 9
10.2 Предел повторяемости, r . 9
10.3 Предел воспроизводимости, R . 9
11 Протокол испытаний . 9
Приложение A (информативное) Рисунки . 10
Приложение B (информативное) Межлабораторное испытание . 13
Библиография . 16
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) всемирная федерация национальных органов
по стандартизации (комитеты-члены ISO). Работа по подготовке международных стандартов обычно
ведется через технические комитеты ISO. Каждый комитет-член ISO, проявляющий интерес к
тематике, по которой учрежден технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные организации, государственные и негосударственные, имеющие связи с ISO,
также принимают участие в работе. ISO тесно сотрудничает с Международной электротехнической
комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.
Процедуры, используемые для разработки данного документа, и процедуры, предусмотренные для его
дальнейшего ведения, описаны в Части 1 Директив ISO/IEC. В частности, следует отметить различные
критерии утверждения, требуемые для различных типов документов ISO. Проект данного документа
был разработан в соответствии с редакционными правилами в Части 2 Директив ISO/IEC
(см. www.iso.org/directives).
Необходимо обратить внимание на возможность того, что ряд элементов данного документа могут
быть предметом патентных прав. Международная организация ISO не должна нести ответственность
за идентификацию таких прав, частично или полностью. Сведения о патентных правах,
идентифицированных при разработке документа, будут указаны во Введении и/или в перечне
полученных ISO объявлений о патентном праве (см. www.iso.org/patents).
Любое торговое название, использованное в данном документе, является информацией,
предоставляемой для удобства пользователей, а не свидетельством в пользу того или иного товара
или той или иной компании.
Для пояснения значений конкретных терминов и выражений ISO, относящихся к оценке соответствия, а
также информация о соблюдении Международной организацией ISO принципов ВТО по техническим
барьерам в торговле (TВT), см. следующий унифицированный локатор ресурса (URL): Foreword —
Supplementary information.
Технический комитет, несущий ответственность за данный документ, ISO/TC 34, Пищевые продукты,
Подкомитет SC 11, Животные и растительные жиры и масла.
Настоящее первое издание ISO 12228-2 отменяет и заменяет ISO 12228:1999, которое подверглось
техническому пересмотру.
ISO 12228 состоит из следующих частей под общим названием Определение содержания и состава
стеринов. Метод газовой хроматографии:
— Часть 1. Животные и растительные жиры и масла
— Часть 2. Оливковое масло и жмыховое оливковое масло
iv © ISO 2014 – Все права сохраняются
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 12228-2:2014(R)
Определение содержания и состава стеринов.
Метод газовой хроматографии.
Часть 2.
Оливковое масло и жмыховое оливковое масло
1 Область применения
Настоящая часть ISO 12228 устанавливает методику газохроматографического определения
содержания и состава стеринов и двухатомных тритерпеновых спиртов в оливковом масле и
жмыховом оливковом масле. Для определения содержания и состава стеринов во всех других
животных и растительных жирах и маслах должна использоваться методика, указанная в ISO 12228-1.
ПРИМЕЧАНИЕ Эта часть ISO 12228 технически идентична стандарту Международного Совета по оливкам
COI/T.20/Doc. №.30 (ноябрь 2011).
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы, частично или полностью, являются обязательными
при применении данного документа. Для датированных ссылок применяется только цитированное
издание документа. Для недатированных ссылок необходимо использовать самое последнее издание
нормативного ссылочного документа (включая любые изменения).
ISO 661, Жиры и масла животные и растительные. Приготовление пробы для испытания
3 Термины и определения
Применительно к настоящему документу используются следующие термины и определения.
3.1
состав стеринов
composition of sterols
состав отдельных стеринов в пробе, начиная с холестерина и заканчивая ∆7-авенастерином
(см. Таблицу 1) в условиях, установленных в настоящей части ISO 12228
ПРИМЕЧАНИЕ 1 к статье: Состав выражают в процентах от площадей всех пиков, нормализованных к 100 %.
3.2
общее содержание стеринов
total sterol content
массовая доля суммы всех отдельных стеринов, определенных в соответствии с методом,
установленным в настоящей части ISO 12228, начиная с холестерина и заканчивая ∆7-авенастерином
(см. Таблицу 1), деленная на массу пробы для анализа
ПРИМЕЧАНИЕ 1 к статье: Содержание выражают в миллиграммах на килограмм.
3.3
состав двухатомных тритерпеновых спиртов
composition of triterpene dialcohols
состав эритродиола и уваола в пробе в условиях, установленных в настоящей части ISO 12228
ПРИМЕЧАНИЕ 1 к статье: Состав выражают в процентах от площадей всех пиков, начиная с холестерина и
заканчивая уваолом (см. Таблицу 1) в условиях, установленных в настоящей части ISO 12228, нормализованных
100 %.
4 Принцип
Омыляют пробу для анализа при кипячении с обратным холодильником в этанольном растворе
гидроксида калия. Эстрагируют неомыляемое вещество диэтиловым эфиром. Разделяют фракции
стеринов и двухатомных тритерпеновых спиртов из неомыляемого вещества с помощью тонкослойной
хроматографии на пластинках с щелочным силикагелем. Определяют качественный и количественный
состав фракций стеринов и двухатомных тритерпеновых спиртов с помощью газовой хроматографии
триметилсилиловых эфиров, используя холестанол в качестве внутреннего стандарта.
5 Реактивы
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Необходимо принимать во внимание инструкции, которые
устанавливают правила обращения с опасными веществами. Необходимо соблюдать
технические, организационные и персональные меры безопасности.
Используют только реактивы признанной аналитической чистоты, если не оговорено иначе, и воду,
[1]
соответствующую классу чистоты 3 согласно ISO 3696 .
5.1 Гидроксид калия, минимальная массовая доля w = 85 г/100 г.
5.2 Гидроксид калия, этанольный раствор, концентрация, c, приблизительно 2 моль/л.
Растворяют при охлаждении 130 г гидроксида калия (5.1) в 200 мл дистиллированной воды, а затем
разбавляют до 1 л этанолом (5.9). Хранят раствор в хорошо укупоренной бутылке из темного стекла в
течение максимум 2 дней.
5.3 Гидроксид калия, этанольный раствор, концентрация, c, приблизительно 0,2 моль/л.
Растворяют 13 г гидроксида калия (5.1) в 20 мл дистиллированной воды и разбавляют до 1 л этанолом
(5.9).
5.4 Диэтиловый эфир, для хроматографии.
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ — Диэтиловый эфир легко воспламеняется и может образовывать
взрывчатые пероксиды. Пределы взрываемости на воздухе от 1,7 % до 48 % (объемная доля).
Необходимо соблюдать меры предосторожности при его использовании.
5.5 Безводный сульфат натрия.
5.6 Пластинки с силикагелем для тонкослойной хроматографии (TLC), имеющиеся в продаже,
размеры 20 см 20 см, толщина слоя 0,25 мм, без флуоресцентного индикатора.
5.7 Ацетон, для хроматографии.
5.8 н-Гексан, для хроматографии.
5.9 Этанол 96 %, минимальная объемная доля φ = 95 %.
5.10 Этилацетат.
5.11 Стандартный раствор для тонкослойной хроматографии, холестерин или смесь
фитостеринов и раствор эритродиола в этилацетате (5.10), массовая концентрация, = 5 %.
5.12 2,7-дихлорфлуоресцеин, этанольный раствор, массовая концентрация, = 0,2 %.
Слегка подщелачивают раствор, добавляя несколько капель этанольного раствора гидроксида калия
концентрацией 2 моль/л (5.2). Хранят максимум в течение 1 года.
2 © ISO 2014 – Все права сохраняются
5.13 Раствор α-холестанола в качестве внутреннего стандарта, массовая концентрация,
= 0,2 г/100 мл, в этилацетате (5.10).
5.14 Раствор фенолфталеина, массовая концентрация, = 10 г/л, в этаноле (5.9).
5.15 Газ-носитель для газовой хроматографии, гелий или, предпочтительно, водород.
5.16 Вспомогательные газы для газовой хроматографии, водород, гелий азот и воздух.
5.17 Проявляющий растворитель, смесь н-гексана и диэтилового эфира, объемные концентрации:
(н-гексан) = 65 мл/100 мл, (диэтиловый эфир) = 35 мл/100 мл.
5.18 Гексаметилдисилазан.
5.19 Триметихлорсилан.
5.20 Реактив для силилирования, смесь пиридина, гексаметилдисилазана и триметихлорсилана.
Объемные концентрации: (пиридин) = 9 мл/13 мл, (гексаметилдисилазан) = 3 мл/13 мл,
(триметихлорсилан) = 1 мл/13 мл. Готовят свежеприготовленную смесь ежедневно.
ПРИМЕЧАНИЕ Могут использоваться другие реактивы для силилирования, например, смесь
N,O-бис-триметилсилилтрифторацетамида (BSTFA) с триметилхлорсиланом (TMCS), (BSTFA) = 99 мл/100 мл
и (TMCS) = 1 мл/100мл.
6 Аппаратура
Обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее.
6.1 Круглодонные колбы, вместимостью 250 мл, с пришлифованным горлом.
6.2 Обратный холодильник, со стеклянным шлифом, пригнанным к колбе (6.1).
6.3 Делительная воронка, вместимостью 500 мл.
6.4 Проявительная камера, изготовленная из стекла, с пришлифованной стеклянной крышкой,
пригодная для проявления пластинок размерами 20 см 20 см.
6.5 Ультрафиолетовая лампа, длина волны 366 нм или 254 нм.
6.6. Микрошприц, для подачи 100 мкл, 500 мкл и 1000 мкл.
6.7 Цилиндрическая фильтровальная воронка, с фильтром из спеченного стекла (G3, пористость
от 15 мкм до 40 мкм), диаметр приблизительно 2 см, глубина 5 см, пригодная для
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.