Water quality -- Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria

ISO 9308-1:2014 specifies a method for the enumeration of Escherichia coli (E. coli) and coliform bacteria. The method is based on membrane filtration, subsequent culture on a chromogenic coliform agar medium, and calculation of the number of target organisms in the sample. Due to the low selectivity of the differential agar medium, background growth can interfere with the reliable enumeration of E. coli and coliform bacteria, for example, in surface waters or shallow well waters. This method is not suitable for these types of water. ISO 9308-1:2014 is especially suitable for waters with low bacterial numbers that will cause less than 100 total colonies on chromogenic coliform agar (CCA). These may be drinking water, disinfected pool water, or finished water from drinking water treatment plants. Some strains of E. coli which are β-D-glucuronidase negative, such as Escherichia coli O157, will not be detected as E. coli. As they are β-D-galactosidase positive, they will appear as coliform bacteria on this chromogenic agar.

Qualité de l'eau -- Dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes

L'ISO 9308 :2014 spécifie une méthode de dénombrement des Escherichia coli (E. coli) et des bactéries coliformes. La méthode consiste en une filtration sur membrane, suivie d'une mise en culture dans une gélose chromogčne et d'un calcul du nombre des organismes cibles présents dans l'échantillon. La gélose de différenciation étant peu sélective, la flore bactérienne générale peut perturber la fiabilité du dénombrement des E. coli et des bactéries coliformes, par exemple, dans certaines eaux de surface ou certaines eaux de puits peu profonds. Cette méthode ne convient pas ŕ ces types d'eau. L'ISO 9308 :2014 est particuličrement adaptée aux eaux ŕ faible teneur en bactéries qui produiront moins de 100 colonies totales sur de la gélose chromogčne pour le dénombrement des bactéries coliformes. Ces eaux peuvent ętre l'eau potable, l'eau de piscine désinfectée ou l'eau propre sortant de stations de production d'eau potable. Certaines souches d'E. coli négatives ŕ la β-D-glucuronidase, telles qu'Escherichia coli O157, ne sont pas détectées en tant qu'E. coli. Comme elles sont positives ŕ la β-D-galactosidase, elles sont considérées comme des bactéries coliformes sur la gélose chromogčne pour bactéries coliformes (CCA).

General Information

Status
Published
Publication Date
15-Sep-2014
Current Stage
6060 - International Standard published
Start Date
25-Jul-2014
Completion Date
16-Sep-2014
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ISO 9308-1:2014 - Water quality -- Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria
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ISO 9308-1:2014 - Water quality -- Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria
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Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9308-1
Third edition
2014-09-15
Water quality — Enumeration
of Escherichia coli and coliform
bacteria —
Part 1:
Membrane filtration method for
waters with low bacterial background
flora
Qualité de l’eau — Dénombrement des Escherichia coli et des
bactéries coliformes —
Partie 1: Méthode par filtration sur membrane pour les eaux à faible
teneur en bactéries
Reference number
ISO 9308-1:2014(E)
ISO 2014
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-1:2014(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2014

All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form

or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior

written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of

the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2014 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-1:2014(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 2

5 Apparatus and glassware ............................................................................................................................................................................ 2

6 Culture media and reagents ...................................................................................................................................................................... 2

7 Sampling ........................................................................................................................................................................................................................ 3

8 Procedure..................................................................................................................................................................................................................... 3

8.1 Preparation of the sample ............................................................................................................................................................. 3

8.2 Filtration ....................................................................................................................................................................................................... 3

8.3 Incubation and differentiation .................................................................................................................................................. 3

9 Expression of results ........................................................................................................................................................................................ 4

10 Test report ................................................................................................................................................................................................................... 4

11 Quality assurance ................................................................................................................................................................................................ 4

11.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 4

11.2 Performance testing of Chromogenic Coliform Agar (CCA) ............................................................................. 4

11.3 Performance testing of oxidase test ...................................................................................................................................... 5

Annex A (informative) Further microbiological information on coliform bacteria ............................................6

Annex B (normative) Composition and preparation of culture media and reagents ........................................7

Annex C (informative) Performance characteristics ............................................................................................................................ 9

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................10

© ISO 2014 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9308-1:2014(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity

assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers

to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information

The committee responsible for this document is ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 4,

Microbiological methods.

This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 9308-1:2000), which has been technically

revised.
It also incorporates the Corrigendum ISO 9308-1:2000/Cor.1:2007.

ISO 9308 consists of the following parts, under the general title Water quality — Enumeration of

Escherichia coli and coliform bacteria:

— Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora

— Part 2: Most probable number method

— Part 3: Miniaturized method (Most Probable Number) for the detection and enumeration of E. coli in

surface and waste water
iv © ISO 2014 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 9308-1:2014(E)
Introduction

The presence and extent of faecal pollution is an important factor in assessing the quality of water and

the risk to human health from infection. Examination of water samples for the presence of Escherichia

coli (E. coli), which normally inhabits the bowel of man and other warm-blooded animals, provides an

indication of such pollution. Examination for coliform bacteria can be more difficult to interpret because

some coliform bacteria live in soil and surface fresh water and are not always intestinal. Therefore,

the presence of coliform bacteria, although not a proof of faecal contamination, may indicate failure in

treatment, storage, or distribution.
© ISO 2014 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 9308-1:2014(E)
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and
coliform bacteria —
Part 1:
Membrane filtration method for waters with low bacterial
background flora

WARNING — Persons using this document should be familiar with normal laboratory practice.

This document does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its

use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices and to

ensure compliance with any national regulatory conditions.

IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted in accordance with this document

be carried out by suitably qualified staff.
1 Scope

This part of ISO 9308 specifies a method for the enumeration of Escherichia coli (E. coli) and coliform

bacteria. The method is based on membrane filtration, subsequent culture on a chromogenic coliform

agar medium, and calculation of the number of target organisms in the sample. Due to the low selectivity

of the differential agar medium, background growth can interfere with the reliable enumeration of

E. coli and coliform bacteria, for example, in surface waters or shallow well waters. This method is not

suitable for these types of water.

This part of ISO 9308 is especially suitable for waters with low bacterial numbers that will cause less

than 100 total colonies on chromogenic coliform agar (CCA). These may be drinking water, disinfected

pool water, or finished water from drinking water treatment plants.

Some strains of E. coli which are β-D-glucuronidase negative, such as Escherichia coli O157, will not be

detected as E. coli. As they are β-D-galactosidase positive, they will appear as coliform bacteria on this

chromogenic agar.
2 Normative references

The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are

indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated

references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods

ISO 7704, Water quality — Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses

ISO 8199, Water quality — General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture

ISO 11133, Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and performance

testing of culture media
ISO 19458, Water quality — Sampling for microbiological analysis
3 Terms and definitions

For the purpose of this document, the definitions given in ISO/IEC Guide 2 and the following apply.

© ISO 2014 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 9308-1:2014(E)
3.1
coliform bacteria
members of the Enterobacteriaceae that express β-D-galactosidase
3.2
Escherichia coli
E. coli

member of the Enterobacteriaceae that expresses β-D-galactosidase and β-D-glucuronidase

4 Principle

Filtration of a test portion of the sample through a membrane filter, which retains the organisms, and

placement of the membrane filter on a chromogenic coliform agar plate.
Incubation of the membrane filter at (36 ± 2) °C for (21 ± 3) h.

Counting of β-D-galactosidase positive colonies (pink to red) as presumptive coliform bacteria that are

not E. coli. To avoid false-positive results, caused by oxidase positive bacteria, for example, Aeromonas

spp, the presumptive colonies shall be confirmed by a negative oxidase reaction.

Counting of β-D-galactosidase and β-D-glucuronidase positive colonies (dark-blue to violet) as E. coli.

Total coliform bacteria are the sum of oxidase negative colonies with pink to red colour and all dark-blue

to violet colonies.
5 Apparatus and glassware
The following are the usual microbiological laboratory equipment.

5.1 Apparatus, suitable for sterilization by steam (autoclave), according to the instructions given in

ISO 8199.
5.2 Incubator, thermostatically controlled at (36 ± 2) °C.
5.3 pH meter, with an accuracy of ±0,1 at 20 °C to 25 °C.
5.4 Equipment, for membrane filtration.

5.5 Membrane filters, composed of cellulose esters or other suitable material, usually about 47 mm or

50 mm in diameter, with filtration characteristics equivalent to a rated nominal pore diameter of 0,45 µm

and, preferentially, with grid lines.

The membrane filters shall be free from growth-inhibiting or growth-promoting properties and the

printing ink used for the grid shall not affect the growth of bacteria. If not obtained sterile, they shall

be sterilized according to the manufacturer’s instructions. Every batch of membrane filters shall be

tested for its suitability for the test according to ISO 7704 especially since the use of different brands of

membrane filters may result in different recovery and colour development.
5.6 Disinfected forceps, for handling of membrane filters.
6 Culture media and reagents

For the preparation of culture media and reagents, see ISO 8199 and ISO 11133. Use ingredients of

uniform quality and chemicals of analytical grade (see note); fo
...

DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 9308-1
ISO/TC 147/SC 4 Secretariat: DIN
Voting begins on Voting terminates on
2012-11-22 2013-04-22

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION • МЕЖДУНАРОДНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ • ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION

Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform
bacteria —
Part 1:
Membrane filtration method for waters with low bacterial
background flora

Qualité de l'eau — Dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes —

Partie 1: Méthode par filtration sur membrane dans des eaux contenant peu de flore bactérienne de fond

[Revision of first edition (ISO 9308-1:2000) and ISO 9308-1:2000/Cor.1:2007]
ICS 07.100.20
ISO/CEN PARALLEL PROCESSING

This draft has been developed within the International Organization for Standardization (ISO), and

processed under the ISO-lead mode of collaboration as defined in the Vienna Agreement.

This draft is hereby submitted to the ISO member bodies and to the CEN member bodies for a parallel

five-month enquiry.

Should this draft be accepted, a final draft, established on the basis of comments received, will be

submitted to a parallel two-month approval vote in ISO and formal vote in CEN.

To expedite distribution, this document is circulated as received from the committee

secretariat. ISO Central Secretariat work of editing and text composition will be undertaken at

publication stage.

Pour accélérer la distribution, le présent document est distribué tel qu'il est parvenu du

secrétariat du comité. Le travail de rédaction et de composition de texte sera effectué au

Secrétariat central de l'ISO au stade de publication.

THIS DOCUMENT IS A DRAFT CIRCULATED FOR COMMENT AND APPROVAL. IT IS THEREFORE SUBJECT TO CHANGE AND MAY NOT BE

REFERRED TO AS AN INTERNATIONAL STANDARD UNTIL PUBLISHED AS SUCH.

IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNOLOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES, DRAFT

INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STANDARDS TO

WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN NATIONAL REGULATIONS.

RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH

THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPORTING DOCUMENTATION.
© International Organization for Standardization, 2012
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/DIS 9308-1
Copyright notice

This ISO document is a Draft International Standard and is copyright-protected by ISO. Except as permitted

under the applicable laws of the user’s country, neither this ISO draft nor any extract from it may be

reproduced, stored in a retrieval system or transmitted in any form or by any means, electronic,

photocopying, recording or otherwise, without prior written permission being secured.

Requests for permission to reproduce should be addressed to either ISO at the address below or ISO’s

member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Reproduction may be subject to royalty payments or a licensing agreement.
Violators may be prosecuted.
ii © ISO 2012 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/DIS 9308-1
Contents Page

Foreword ............................................................................................................................................................ iv

Introduction ......................................................................................................................................................... v

1 Scope ...................................................................................................................................................... 1

2 Normative references ............................................................................................................................ 1

3 Terms and definitions ........................................................................................................................... 2

4 Principle.................................................................................................................................................. 2

5 Apparatus and glassware ..................................................................................................................... 2

6 Culture media and reagents ................................................................................................................. 3

7 Sampling................................................................................................................................................. 3

8 Procedure ............................................................................................................................................... 3

9 Expression of results ............................................................................................................................ 4

10 Test report .............................................................................................................................................. 4

11 Quality assurance .................................................................................................................................. 4

Annex A (informative) Further microbiological information on coliform bacteria ....................................... 6

Annex B (normative) Culture media and reagents .......................................................................................... 7

Bibliography ...................................................................................................................................................... 10

© ISO 2012 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/DIS 9308-1
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies

(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO

technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been

established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and

non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the

International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.

International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.

The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards

adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an

International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent

rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.

ISO 9308-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 4,

Microbiological methods.

This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 9308-1:2000), which has been technically

revised, and the Technical Corrigendum ISO 9308-1:2000/Cor.1:2007.

ISO 9308 consists of the following parts, under the general title Water quality — Enumeration of Escherichia

coli and coliform bacteria:

 Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora

 Part 2: Most probable number method

 Part 3: Miniaturized method (Most Probable Number) by inoculation in liquid medium

iv © ISO 2012 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/DIS 9308-1
Introduction

The presence and extent of faecal pollution is an important factor in assessing the quality of a body of water

and the risk to human health from infection. Examination of water samples for the presence of Escherichia coli

(E. coli), which normally inhabits the bowel of man and other warm-blooded animals, provides an indication of

such pollution. Examination for coliform bacteria can be more difficult to interpret because some coliform

bacteria live in soil and surface fresh water and are not always intestinal. Therefore, the presence of coliform

bacteria, although not a proof of faecal contamination, may indicate failure in treatment or distribution.

© ISO 2012 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 9308-1
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform
bacteria — Part 1: Membrane filtration method for waters with
low bacterial background flora

WARNING – Persons using this part of ISO 9308 should be familiar with normal laboratory practice.

This standard does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its use. It

is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices and to ensure

compliance with any national regulatory conditions.

IMPORTANT – It is absolutely essential that tests conducted in accordance with this part of ISO 9308 be

carried out by suitably qualified staff.
1 Scope

This part of ISO 9308 specifies a method for the enumeration of E. coli and coliform bacteria. The method is

based on membrane filtration, subsequent culture on a chromogenic agar medium and calculation of the

number of target organisms in the sample. Due to the low selectivity of the differential agar medium,

background growth can interfere with the reliable enumeration of coliform bacteria and E. coli, for example in

surface waters or shallow well waters. This method is not suitable for these types of water.

This part of ISO 9308 is especially suitable for waters with low bacterial numbers that will cause less than 80

total colonies on chromogenic coliform agar. These may be drinking water, disinfected pool water or finished

water from treatment plants.
2 Normative references

The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are

indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated references,

the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods

ISO 5667-1, Water quality — Sampling — Part 1: Guidance on the design of sampling programmes and

sampling techniques

ISO 5667-3, Water quality — Sampling — Part 3: Guidance on the preservation and handling of water

samples

ISO 7704, Water quality — Validation of membrane filters for microbiological analysis

ISO 8199, Water quality — General guide to the enumeration of micro-organisms by culture

ISO 11133, Microbiology of food, animal feeding stuffs, food production environment and water —

Preparation, production, storage and performance testing of culture media
ISO 19458, Water quality — Sampling for microbiological analysis
© ISO 2012 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO/DIS 9308-1
3 Terms and definitions

For the purpose of this document, the definitions given in ISO/IEC Guide 2 and the following apply.

3.1
coliform bacteria
members of the Enterobacteriaceae that express ß-galactosidase
3.2
Escherichia coli

member of the Enterobacteriaceae that expresses ß-galactosidase and ß-glucuronidase

4 Principle

Filtration of a test portion of the sample through a membrane composed of cellulose esters or equivalent,

which retains the organisms; placing of the membrane on a chromogenic agar plate.

Incubation of the membrane for (21 ± 3) h at (36 ± 2) °C.

Counting of ß-galactosidase positive colonies (salmon to red) as presumptive coliforms that are not E. coli. To

avoid false-positive results, caused by oxidase positive bacteria like Aeromonas spp, the presumptive colonies

shall be confirmed by a negative oxidase reaction.

Counting of ß-galactosidase and ß-glucuronidase positive colonies (dark-blue to violet) as E. coli.

Total coliforms are the sum of oxidase negative colonies with salmon to red colour and all dark-blue to violet

colonies.
5 Apparatus and glassware
Usual microbiological laboratory equipment, and in particular:
5.1 Apparatus for sterilization by steam (autoclave)

Apparatus and glassware not supplied sterile shall be sterilized according to the instructions given in

ISO 8199.
5.2 Incubator, thermostatically controlled at (36 ± 2) °C.
5.3 pH meter, with an accuracy of ± 0,1 at 20 °C to 25 °C.
5.4 Equipment for membrane filtration, as specified in ISO 8199.

5.5 Membrane filters, composed of cellulose esters, usually about 47 mm or 50 mm in diameter, with

filtration characteristics equivalent to a rated nominal pore diameter of 0,45 µm and, preferentially, with grids.

The filters shall be free from growth-inhibiting or growth-promoting properties and the printing ink used for the

grid shall not affect the growth of bacteria. If not obtained sterile, they shall be sterilized according to the

manufacturer's instructions. Every batch of membranes shall be tested for its suitability for the test according

to ISO 7704 especially since the use of different brands of filters may result in different recovery and colour

development.
5.6 Forceps with rounded tips for handling membran
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 9308-1
Troisième édition
2014-09-15
Qualité de l’eau — Dénombrement
des Escherichia coli et des bactéries
coliformes —
Partie 1:
Méthode par filtration sur membrane
pour les eaux à faible teneur en
bactéries
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform
bacteria —
Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial
background flora
Numéro de référence
ISO 9308-1:2014(F)
ISO 2014
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9308-1:2014(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2014

Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée

sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur

l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à

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Publié en Suisse
ii © ISO 2014 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9308-1:2014(F)
Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 2

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 2

5 Appareillage et verrerie ................................................................................................................................................................................ 2

6 Milieux de culture et réactifs ................................................................................................................................................................... 3

7 Échantillonnage ..................................................................................................................................................................................................... 3

8 Mode opératoire.................................................................................................................................................................................................... 3

8.1 Préparation de l’échantillon ........................................................................................................................................................ 3

8.2 Filtration ....................................................................................................................................................................................................... 3

8.3 Incubation et différenciation ...................................................................................................................................................... 3

9 Expression des résultats............................................................................................................................................................................... 4

10 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................................... 4

11 Assurance qualité ................................................................................................................................................................................................ 4

11.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 4

11.2 Essais de performance de la gélose chromogène pour bactéries coliformes (CCA) ................... 4

11.3 Essais de performance de l’essai de recherche de l’oxydase ........................................................................... 5

Annexe A (informative) Informations microbiologiques complémentaires sur les

bactéries coliformes ......................................................................................................................................................................................... 6

Annexe B (normative) Composition et préparation des milieux de culture et réactifs ...................................7

Annexe C (informative) Caractéristiques de performance ............................................................................................................ 9

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................10

© ISO 2014 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9308-1:2014(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.

L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne

la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents

critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.

iso.org/directives).

L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les

références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration

du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par

l’ISO (voir www.iso.org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de

la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant

les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos — Informations

supplémentaires.

Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 147, Qualité de l’eau, sous-comité

SC 4, Méthodes microbiologiques.

Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 9308-1:2000), qui a fait l’objet d’une

révision technique.
Elle comprend également le rectificatif ISO 9308-1:2000/Cor.1:2007.

L’ISO 9308 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Qualité de l’eau —

Dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes:

— Partie 1: Méthode par filtration sur membrane pour les eaux à faible teneur en bactéries

— Partie 2: Méthode du nombre le plus probable

— Partie 3: Méthode miniaturisée (nombre le plus probable) pour la recherche et le dénombrement des

E. coli dans les eaux de surface et les eaux résiduaires
iv © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 9308-1:2014(F)
Introduction

La présence et l’étendue de la pollution fécale est un facteur important dans l’évaluation de la qualité

de l’eau ainsi que du risque infectieux représenté pour la santé humaine. L’examen d’échantillons d’eau

pour y rechercher des Escherichia coli (E. coli), normalement présents dans les intestins de l’homme et

des animaux homéothermes, fournit une indication sur ce type de pollution. Les résultats de l’examen

des bactéries coliformes peuvent s’avérer plus difficiles à interpréter en raison du fait que certains

coliformes vivent également dans le sol et dans les eaux douces de surface, et ne sont donc pas toujours

d’origine intestinale. La présence de bactéries coliformes peut donc, bien que ce ne soit pas la preuve

d’une contamination d’origine fécale, indiquer une défaillance du traitement, du stockage ou de la

distribution de l’eau.
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NORME INTERNATIONALE ISO 9308-1:2014(F)
Qualité de l’eau — Dénombrement des Escherichia coli et
des bactéries coliformes —
Partie 1:
Méthode par filtration sur membrane pour les eaux à
faible teneur en bactéries

AVERTISSEMENT — Il convient que l’utilisateur du présent document connaisse bien les pratiques

courantes de laboratoire. Le présent document n’a pas pour but de traiter de tous les problèmes

de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l’utilisateur d’établir des

pratiques appropriées en matière d’hygiène et de sécurité et de s’assurer de la conformité à la

réglementation nationale en vigueur.

IMPORTANT — Il est indispensable que les essais menés selon le présent document soient

effectués par un personnel adéquatement qualifié.
1 Domaine d’application

La présente partie de l’ISO 9308 spécifie une méthode de dénombrement des Escherichia coli (E. coli) et des

bactéries coliformes. La méthode consiste en une filtration sur membrane, suivie d’une mise en culture

dans une gélose chromogène et d’un calcul du nombre des organismes cibles présents dans l’échantillon.

La gélose de différenciation étant peu sélective, la flore bactérienne générale peut perturber la fiabilité

du dénombrement des E. coli et des bactéries coliformes, par exemple, dans certaines eaux de surface ou

certaines eaux de puits peu profonds. Cette méthode ne convient pas à ces types d’eau.

La présente partie de l’ISO 9308 est particulièrement adaptée aux eaux à faible teneur en bactéries

qui produiront moins de 100 colonies totales sur de la gélose chromogène pour le dénombrement des

bactéries coliformes. Ces eaux peuvent être l’eau potable, l’eau de piscine désinfectée ou l’eau propre

sortant de stations de production d’eau potable.

Certaines souches d’E. coli négatives à la β-D-glucuronidase, telles qu’Escherichia coli O157, ne sont pas

détectées en tant qu’E. coli. Comme elles sont positives à la β-D-galactosidase, elles sont considérées

comme des bactéries coliformes sur la gélose chromogène pour bactéries coliformes (CCA).

2 Références normatives

Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à

l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les

références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels

amendements).

ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d’essai

ISO 7704, Qualité de l’eau — Évaluation des membranes filtrantes utilisées pour des analyses microbiologiques

ISO 8199, Qualité de l’eau — Lignes directrices générales pour le dénombrement des micro-organismes sur

milieu de culture

ISO 11133, Microbiologie des aliments et de l’eau — Préparation, production, stockage et essais de

performance des milieux de culture
ISO 19458, Qualité de l’eau — Échantillonnage pour analyse microbiologique
© ISO 2014 – Tous droits réservés 1
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ISO 9308-1:2014(F)
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les définitions suivantes et celles données dans l’ISO/IEC Guide 2

s’appliquent.
3.1
bactéries coliformes
membres de la famille des Entérobactéries qui expriment la β-D-galactosidase
3.2
Escherichia coli
E. coli

membre de la famille des Entérobactéries qui exprime la β-D-galactosidase et la β-D-glucuronidase

4 Principe

Filtration d’une prise d’essai de l’échantillon sur une membrane filtrante, qui retient les organismes, et

placement de la membrane filtrante dans une boîte de gélose chromogène coliforme.

Incubation de la membrane filtrante à (36 ± 2) °C pendant (21 ± 3) h.

Comptage des colonies positives pour la β-D-galactosidase (couleur rose à rouge) en tant que bactéries

coliformes présomptives qui ne sont pas des E. coli. Pour éviter les résultats faux-positifs, provoqués par

les bactéries positives à l’oxydase, par exemple Aeromonas spp, les colonies présomptives doivent être

confirmées par une réaction négative à l’oxydase.

Comptage des colonies positives pour la β-D-galactosidase et la β-D-glucuronidase (couleur bleu foncé à

violet) en tant qu’E. coli.

Les bactéries coliformes totales sont la somme des colonies négatives à l’oxydase de couleur rose à rouge

et de toutes les colonies de couleur bleu foncé à violet.
5 Appareillage et verrerie
Matériel de laboratoire de microbiologie habituel, et en particulier:

5.1 Appareil adapté pour la stérilisation à la vapeur (autoclave), conformément aux instructions

de l’ISO 8199.
5.2 Incubateur, contrôlé par thermostat à (36 ± 2) °C.
5.3 pH-mètre, avec une exactitude de ± 0,1 unité entre 20 °C et 25 °C.
5.4 Appareil de filtration sur membrane.

5.5 Membranes filtrantes, composées d’esters de cellulose ou d’autres matériaux appropriés,

généralement d’environ 47 mm ou 50 mm de diamètre, présentant des caractéristiques de filtration

équivalentes à une porosité nominale de 0,45 µm, munies, de préférence, avec un quadrillage.

Les membranes filtres doivent être exemptes de propriétés susceptibles d’inhiber ou au contraire de

favoriser la croissance bactérienne, et l’encre avec laquelle la grille est imprimée ne doit pas affecter la

flore bactérienne. Si elles ne sont pas livrées stériles, elles doivent être stérilisées conformément aux

instructions du fabricant. Chaque lot de membranes filtrantes doit être soumis à essai conformément à

l’ISO 7704 quant à son aptitude à l’essai, étant donné que l’utilisation de différentes marques de membranes

filtrantes peut entraîner des différences de récupération et de développement de la coloration.

5.6 Pinces désinfectées, pour la manipulation des membranes filtrantes.
2 © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 9308-1:2014(F)
6 Milieux de culture et réactifs

Pour la préparation des milieux de culture et des réactifs, voir l’ISO 8199 et l’ISO 11133. Utiliser des

ingrédients de qualité homogène et des produits chimiques de qualité analytique reconnue (voir la

Note); suivre les instructions données dans l’Annexe B. Il est également possible d’utiliser des milieux

et réactifs disponibles dans le commerce, respectant les compositions données dans l’Anne

...

PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 9308-1
ISO/TC 147/SC 4 Secrétariat: DIN
Début de vote Vote clos le
2012-11-22 2013-04-22

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION  МЕЖДУНАРОДНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ  ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION

Qualité de l'eau — Dénombrement des Escherichia coli et des
bactéries coliformes —
Partie 1:
Méthode par filtration sur membrane dans des eaux contenant
peu de flore bactérienne de fond
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria —

Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora

[Révision de la première édition (ISO 9308-1:2000) et de l'ISO 9308-1:2000/Cor.1:2007]

ICS 07.100.20
TRAITEMENT PARALLÈLE ISO/CEN

Le présent projet a été élaboré dans le cadre de l'Organisation internationale de normalisation (ISO) et

soumis selon le mode de collaboration sous la direction de l'ISO, tel que défini dans l'Accord de

Vienne.

Le projet est par conséquent soumis en parallèle aux comités membres de l'ISO et aux comités

membres du CEN pour enquête de cinq mois.

En cas d'acceptation de ce projet, un projet final, établi sur la base des observations reçues, sera

soumis en parallèle à un vote d'approbation de deux mois au sein de l'ISO et à un vote formel au sein

du CEN.

Pour accélérer la distribution, le présent document est distribué tel qu'il est parvenu du

secrétariat du comité. Le travail de rédaction et de composition de texte sera effectué au

Secrétariat central de l'ISO au stade de publication.

To expedite distribution, this document is circulated as received from the committee

secretariat. ISO Central Secretariat work of editing and text composition will be undertaken at

publication stage.

CE DOCUMENT EST UN PROJET DIFFUSÉ POUR OBSERVATIONS ET APPROBATION. IL EST DONC SUSCEPTIBLE DE MODIFICATION ET NE

PEUT ETRE CITE COMME NORME INTERNATIONALE AVANT SA PUBLICATION EN TANT QUE TELLE.

OUTRE LE FAIT D'ETRE EXAMINES POUR ETABLIR S'ILS SONT ACCEPTABLES A DES FINS INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET

COMMERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ETRE

CONSIDERES DU POINT DE VUE DE LEUR POSSIBILITE DE DEVENIR DES NORMES POUVANT SERVIR DE REFERENCE DANS LA

REGLEMENTATION NATIONALE.

LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSERVATIONS, NOTIFICATION DES DROITS DE PRO-

PRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE.

© Organisation Internationale de Normalisation, 2012
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ISO/DIS 9308-1
Notice de droit d'auteur

Ce document de l'ISO est un projet de Norme internationale qui est protégé par les droits d'auteur de l'ISO.

Sauf autorisé par les lois en matière de droits d'auteur du pays utilisateur, aucune partie de ce projet ISO ne

peut être reproduite, enregistrée dans un système d'extraction ou transmise sous quelque forme que ce soit

et par aucun procédé électronique ou mécanique, y compris la photocopie, les enregistrements ou autres,

sans autorisation écrite préalable.

Les demandes d'autorisation de reproduction doivent être envoyées à l'ISO à l'adresse ci-après ou au

comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56  CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
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Web www.iso.org
Toute reproduction est soumise au paiement de droits ou à un contrat de licence.
Les contrevenants pourront être poursuivis.
ii © ISO 2012 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 9308-1
Sommaire Page

Avant-propos ..................................................................................................................................................... iv

Introduction ......................................................................................................................................................... v

1 Domaine d’application .......................................................................................................................... 1

2 Références normatives ......................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ............................................................................................................................ 2

4 Principe .................................................................................................................................................. 2

5 Appareillage et verrerie ......................................................................................................................... 2

6 Milieux de culture et réactifs ................................................................................................................ 3

7 Échantillonnage ..................................................................................................................................... 3

8 Mode opératoire ..................................................................................................................................... 3

9 Expression des résultats ...................................................................................................................... 4

10 Rapport d’essai ...................................................................................................................................... 4

11 Assurance qualité .................................................................................................................................. 5

Annexe A (informative) Informations microbiologiques complémentaires sur les bactéries

coliformes .............................................................................................................................................. 6

Annexe B (normative) Milieux de culture et réactifs ....................................................................................... 7

Annexe C (informative) Caractéristiques de performance ............................................................................. 9

Bibliographie ..................................................................................................................................................... 10

© ISO 2012 – Tous droits réservés iii
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ISO/DIS 9308-1
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de

normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée

aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du

comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non

gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec

la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.

Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,

Partie 2.

La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes

internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur

publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres

votants.

L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne

pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.

L'ISO 9308-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l'eau, sous-comité SC 4,

Méthodes microbiologiques.

Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 9308-1:2000), qui a fait l'objet d'une

révision technique, ainsi que le corrigendum technique ISO 9308-1:2000/Cor.1:2007.

L'ISO 9308 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Qualité de l'eau —

Dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes :

⎯ Partie 1 : Méthode par filtration sur membrane pour les eaux à faible teneur en bactéries

⎯ Partie 2 : Méthode du nombre le plus probable

⎯ Partie 3 : Méthode miniaturisée (nombre le plus probable) pour ensemencement en milieu liquide

iv © ISO 2012 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 9308-1
Introduction

La présence et l'étendue de la pollution fécale est un facteur important dans l'évaluation de la qualité d'une

masse d'eau ainsi que du risque infectieux représenté pour la santé humaine. L'examen d'échantillons d'eau

pour y rechercher des Escherichia coli (E. coli), normalement présents dans les intestins de l'homme et des

animaux homéothermes, fournit une indication sur ce type de pollution. Les résultats de l'examen des

bactéries coliformes peuvent s'avérer plus difficiles à interpréter en raison du fait que certaines bactéries

coliformes vivent également dans le sol et dans les eaux douces de surface, et ne sont donc pas toujours

d'origine intestinale. La présence de bactéries coliformes peut donc, bien que ce ne soit pas la preuve d’une

contamination d'origine fécale, indiquer une défaillance du traitement ou de la distribution de l'eau.

© ISO 2012 – Tous droits réservés v
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PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 9308-1
Qualité de l'eau — Dénombrement des Escherichia coli et des
bactéries coliformes — Partie 1: Méthode par filtration sur
membrane pour les eaux à faible teneur en bactéries

AVERTISSEMENT — Il convient que l'utilisateur de la présente partie de l'ISO 9308 connaisse bien les

pratiques courantes de laboratoire. La présente norme n’a pas pour but de traiter de tous les

problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l’utilisateur de la

présente norme d’établir des pratiques appropriées en matière d’hygiène et de sécurité et de s’assurer

de la conformité à la réglementation nationale en vigueur.

IMPORTANT — Il est indispensable que les essais menés selon la présente partie de l'ISO 9308 soient

effectués par un personnel adéquatement qualifié.
1 Domaine d’application

La présente partie de l’ISO 9308 spécifie une méthode de dénombrement des Escherichia coli et des

bactéries coliformes. La méthode consiste en une filtration sur membrane, suivie d'une mise en culture dans

une gélose chromogène et d'un calcul du nombre des organismes cibles présents dans l'échantillon. La

gélose de différenciation étant peu sélective, la flore bactérienne générale peut perturber la fiabilité du

dénombrement des bactéries coliformes et des E. coli, par exemple, dans certaines eaux de surface ou

certaines eaux de puits peu profonds. Cette méthode ne convient pas à ces types d’eau.

La présente partie de l’ISO 9308 est particulièrement adaptée aux eaux à faible teneur en bactéries qui

produiront moins de 80 colonies totales sur le milieu chromogène pour le dénombrement des bactéries

coliformes. Ces eaux peuvent être l’eau potable, l’eau de piscine désinfectée ou l’eau propre sortant des

usines de traitement.
2 Références normatives

Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à

l’application du présent document. Pour les références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les

références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les éventuels

amendements).

ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d’essai

ISO 5667-1, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 1 : Lignes directrices pour la conception des

programmes et des techniques d’échantillonnage

ISO 5667-3, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 3 : Lignes directrices pour la conservation et la

manipulation des échantillons d'eau

ISO 7704, Qualité de l'eau — Validation des membranes filtrantes pour l’analyse microbiologique

ISO 8199, Qualité de l'eau — Lignes directrices générales pour le dénombrement des micro-organismes sur

milieu de culture
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ISO/DIS 9308-1

ISO 11133, Microbiologie des aliments et de l’eau — Préparation, production, stockage et essais de

performance des milieux de culture
ISO 19458, Qualité de l’eau — Échantillonnage pour analyse microbiologique
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les définitions suivantes et celles données dans l’ISO/CEI Guide 2

s’appliquent.
3.1
bactéries coliformes
membres de la famille des Entérobactéries qui expriment la ß-galactosidase
3.2
Escherichia coli

membre de la famille des Entérobactéries qui exprime la ß-galactosidase et la ß-glucuronidase

4 Principe

Filtration d’une prise d’essai de l’échantillon sur une membrane constituée d’esters de cellulose ou

équivalents, qui retient les organismes ; placement de la membrane dans une boîte de gélose chromogène.

Incubation de la membrane pendant (21 ± 3) h à (36 ± 2) °C.

Comptage des colonies positives pour la ß-galactosidase (couleur saumon à rouge) en tant que bactéries

coliformes présomptives qui ne sont pas des E. coli. Pour éviter les résultats faux-positifs, provoqués par les

bactéries positives à l’oxydase, telles qu’Aeromonas spp, les colonies présomptives doivent être confirmées

par une réaction négative à l’oxydase.

Comptage des colonies positives pour la ß-galactosidase et la ß-glucuronidase (couleur bleu foncé à violet)

en tant qu’E. coli.

Les bactéries coliformes totales sont la somme des colonies négatives à l’oxydase de couleur saumon à

rouge et de toutes les colonies de couleur bleu foncé à violet.
5 Appareillage et verrerie
Matériel de laboratoire de microbiologie habituel, et en particulier :
5.1 Appareil de stérilisation à la vapeur (autoclave).

Tout appareil ou toute verrerie fourni(e) non stérile doit être stérilisé(e) conformément aux instructions de

l'ISO 8199.
5.2 Incubateur, contrôlé par thermostat à (36 ± 2) °C.
5.3 pH-mètre, avec une exactitude de ± 0,1 unité de 20 °C à 25 °C.
5.4 Appareil de filtration sur membrane, comme spécifié dans l'ISO 8199.
2 © ISO 2012 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 9308-1

5.5 Membranes filtrantes, composées d'esters de cellulose, généralement d'environ 47 mm ou 50 mm de

diamètre, présentant des caractéristiques de filtration équivalentes à une porosité nominale de 0,45 µm,

munies, de préférence, d’une grille-repère.

Les filtres doivent être exempts de propriétés susceptibles d'inhiber ou au contraire de favoriser la croissance

bactérienne, et l'encre avec laquelle la grille est imprimée ne doit pas affecter la flore bactérienne. Si elles ne

sont pas livrées stériles, elles doivent être stérilisées conformément aux instructions du fabricant. Chaque lot

de membranes doit être soumis à essai conformément à l’ISO 7704 quant à son aptitude à l’essai, étant

donné que l’utilisation de différentes marques de filtre peut entraîner des différences de récupération et de

développement de la coloration.
5.6 Pinces à bouts arrondis pour la manipulation des membranes.
6 Milieux de cultu
...

Questions, Comments and Discussion

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