ISO 4333:2022
(Main)Textiles — Determination of reduction activity of specific proteins derived from pollen, mite and other sources on textile products
Textiles — Determination of reduction activity of specific proteins derived from pollen, mite and other sources on textile products
This document specifies a test method for the determination of reduction activity of textile products against specific proteins which shows antigen-antibody reaction. This document only specifies the reduction activity against those proteins on the surface of textile products. It does not specify a testing method to evaluate the allergenic reaction against human beings. Specific proteins which show antigen-antibody reaction are proteins derived from pollen, mite and other sources. Other specific proteins can be used after appropriate validation described in this document. Enzyme-linked immunosorbent assay is used to quantify the amount of those proteins in this document. This document is applicable to textile products include woven, knitted and nonwoven fabrics, fibres, yarns, braids, etc.
Textiles — Détermination de l’activité de réduction des protéines spécifiques provenant du pollen, des acariens et d’autres sources sur les produits textiles
Le présent document spécifie une méthode d’essai visant à déterminer l’activité de réduction des produits textiles vis-à-vis de protéines spécifiques qui présentent une réaction antigène-anticorps. Le présent document ne spécifie que l’activité de réduction basée sur ces protéines à la surface des produits textiles. Il ne s’agit pas d’une méthode d’essai visant à évaluer la réaction allergène des êtres humains. Les protéines spécifiques qui présentent une réaction antigène-anticorps sont celles issues du pollen, des acariens et d’autres sources. D’autres protéines spécifiques peuvent être utilisées après une validation appropriée décrite dans le présent document. Le dosage d’immunoadsorption par enzyme liée est utilisé pour quantifier ces protéines dans le présent document. Le présent document est applicable aux tissus, aux tricots, aux fibres, aux fils, aux tresses, aux matériaux non tissés, etc.
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 4333
First edition
2022-07
Textiles — Determination of reduction
activity of specific proteins derived
from pollen, mite and other sources
on textile products
Textiles — Détermination de l’activité de réduction des protéines
spécifiques provenant du pollen, des acariens et d’autres sources sur
les produits textiles
Reference number
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ISO 4333:2022(E)
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CH-1214 Vernier, Geneva
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Published in Switzerland
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ISO 4333:2022(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Specific proteins . 2
6 Apparatus . 2
7 Reagents and media .3
8 Preparation . 4
8.1 Preparation of test specific protein suspension . 4
8.2 Preparation of test specimens . 4
8.3 Control test . 5
8.3.1 General . 5
8.3.2 Procedure of verification of the sensitivity of ELISA . 5
8.3.3 Requirement for verification of the sensitivity of ELISA . . 5
9 Preparation of the specific protein calibration curve . 6
10 Test procedure .6
10.1 Preparation of test specimen . . 6
10.2 Deposit of specific protein to the test specimens . 6
10.3 Contacting time . 6
10.4 Recovery of specific protein from the test specimens . 6
11 Determination of the specific protein concentration . 7
12 Calculation of the specific protein concentration and reduction rate .7
13 Repeatability and reproducibility .7
14 Test report . 7
Annex A (informative) Specific protein derived from pollen and mite . 9
Annex B (informative) ELISA assay reagents, reagents and buffer solutions .10
Annex C (informative) Enzyme-linked immunosorbent assay — Sandwich ELISA test
procedure .12
Annex D (informative) Specific protein calibration curve .13
Annex E (informative) Recovery rate .14
Annex F (informative) Interlaboratory test result .15
Annex G (informative) Repeatability and reproducibility .18
Bibliography .20
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ISO 4333:2022(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 38, Textiles.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
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ISO 4333:2022(E)
Introduction
Specialty textile products which can have the positive effect on human comfortable and hygienic life,
such as antibacterial, antifungal, antiviral treated textiles, have been introduced in the market and are
expanding year by year in various applications.
Now, contamination on textile products with specific proteins which show antigen-antibody reaction
also can have the negative effect on human comfortable and hygienic life. There are high performance
textile products which can reduce the amount of those specific proteins on textile products.
Because those products are relatively new and include the technical aspects of textile and biological
technology, the testing methods have been developed by the individual procedures to evaluate the
product performance. That has resulted in inexistence of a unified test method, hindering for both
consumers and producers a true explanation or understanding of those functional products.
The demand to establish an international standard has been growing in the consumers, retailers,
producers, etc. as stakeholders in the market.
This document provides a quantitative test method by using enzyme-linked immunosorbent assay to
assess the reduction activity of the specific proteins on textile products by taking proteins derived
from pollen and mite-faeces or carcass as an example.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 4333:2022(E)
Textiles — Determination of reduction activity of specific
proteins derived from pollen, mite and other sources on
textile products
WARNING — This document calls for use of the antigen-antibody reactive derived-protein
or substances/procedures that can be injurious to the health/environment if appropriate
conditions are not observed. It refers only to technical suitability and does not absolve the user
from legal obligations relating to health and safety/environment at any stage.
1 Scope
This document specifies a test method for the determination of reduction activity of textile products
against specific proteins which shows antigen-antibody reaction. This document only specifies the
reduction activity against those proteins on the surface of textile products. It does not specify a testing
method to evaluate the allergenic reaction against human beings.
Specific proteins which show antigen-antibody reaction are proteins derived from pollen, mite and
other sources. Other specific proteins can be used after appropriate validation described in this
document.
Enzyme-linked immunosorbent assay is used to quantify the amount of those proteins in this document.
This document is applicable to textile products include woven, knitted and nonwoven fabrics, fibres,
yarns, braids, etc.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
antigen
substance that is recognized as foreign by the immune system and elicits an immune response through
stimulating antibody production
[SOURCE: ISO 16577:2016, 3.12]
1
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ISO 4333:2022(E)
3.2
antibody
protein (immunoglobulin) produced and secreted by B lymphocytes in response to a molecule
recognised as foreign (antigen) and which is capable of binding to that specific antigen
Note 1 to entry: Immunoglobulin is the common synonym for antibody.
[SOURCE: ISO 16577:2016, 3.10]
3.3
specific protein
proteins which act as antigen and are derived from pollen, mite and other sources
3.4
reduction activity of specific protein
reduction rate of specific protein (3.3) concentration
3.5
specific protein reduction agents
inorganic or organic chemicals able to reduce the specific protein concentration
3.6
untreated fabric
fabric of the testing sample without treatment by antigen reduction agent
3.7
negative control
blank test to confirm the effect of an empty plastic bag
3.8
control test
test to confirm that the extract chemicals from test sample do not affect to the sensitivity of ELISA
measurement
3.9
enzyme-linked immunosorbent assay
ELISA
method that used antibodies (3.2) or antigens (3.1) covalently bound to enzyme
4 Principle
The suspension of specific protein from pollen, mite and others are deposited onto a test specimen.
After specified contact time, the remaining antigen-antibody reactive specific proteins from pollen,
mite and others is measured by using the ELISA method, and the reduction activity is calculated by the
comparison between the concentration of the test specimen and the negative control.
5 Specific proteins
Examples of specific proteins derived from pollen and mite are shown in Annex A. Other specific
proteins from other species can be used after appropriate validations. If the other species are used, the
name of the species and the specific reason for their use shall be described in the test report.
6 Apparatus
6.1 Measuring flask, with capacity of 1 l.
6.2 Balance, with the available range of 0,001 g to 100 g with accuracy of 1,0 %.
2
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ISO 4333:2022(E)
6.3 Micropipette, having the most suitable volume for each use, with a tip made of glass or plastic,
and with an accuracy of 0,5 % or less.
6.4 Freezer, capable of operating at a temperature of (-20 ± 2) °C.
6.5 Refrigerator, capable of operating at a temperature between 2 °C and 8 °C.
6.6 pH meter, with a glass electrode, with a resolution of at least ±0,01 pH unit
NOTE The pH meter are described in ISO 3071.
6.7 Biological safety cabinet, class II.
6.8 Incubator, capable of maintaining at a temperature of (25 ± 1) °C and (37 ± 1) °C.
6.9 Microplate reader, capable of measuring at a 450 nm to 620 nm in wavelength.
6.10 Polyethylene bag with zipper, with (60 ± 2) mm × (85 ± 2) mm.
6.11 Culture container, made of glass bottle
6.12 Specific protein antibody coated plate, having 96 wells coated with specific protein antibody
on bottom of wells.
6.13 Gel filtration columns.
7 Reagents and media
All reagents shall have the quality suitable for biological needs. Some of the media are available in the
market.
7.1 Water, which shall be analytical-grade water for microbiological media preparation, which is ion-
exchanged and/or freshly distilled and/or ultra–filtered and/or filtered with reverse osmosis (RO) or
ISO 3696 grade 3.
7.2 Phosphate buffered saline PBS (-)
7.2.1 Prepare a measuring flask of 1 l, and put the following chemicals into a flask (6.1):
— sodium chloride (NaCl), 8 g;
— potassium chloride (KCl), 0,2 g;
— disodium hydrogen phosphate 12H O (Na HPO , 12H O), 2,9 g;
2 2 4 2
— potassium dihydrogen phosphate (KH PO ), 0,2 g.
2 4
7.2.2 Add water (7.1) and make up a whole amount to 1 000 ml. Dissolve well.
7.2.3 Transfer the solution (7.2.2) to a culture container (6.11).
3
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ISO 4333:2022(E)
7.3 Suspension solution of specific protein
7.3.1 Put the polysorbate 20 (7.7), 0,5 g, in the phosphate buffered saline PBS (-) prepared at 7.2,
approximately 700 ml to 800 ml and dissolve well.
7.3.2 Add the solution (7.2) by making up whole amount to 1 000 ml and mixed well.
7.3.3 Then, transfer the solution (7.3.2) to a culture container (6.11).
7.4 ELISA assay reagents, reagents and buffer solutions
ELISA assay reagents, reagents and buffer solutions can be obtained from commercial suppliers which
shall be prepared for use in accordance with the manufacturer’s instructions.
Examples of ELISA assay reagents, reagents and buffer solutions are shown in Annex B.
7.5 Sodium hydroxide solution.
7.6 Hydrochloric acid solution.
7.7 Polysorbate 20.
8 Preparation
8.1 Preparation of test specific protein suspension
Adjust the concentration of specific protein extract to 10 ng/ml to 20 ng/ml by using suspension
solution of specific protein (7.3).
The default concentration of specific protein extract shall be to 10 ng/ml to 20 ng/ml, however, the
concentration of specific protein extract can be allowed to increase up to 100 ng/ml according to the
experience of the laboratories.
Specific protein extracts are available in the market. The storage of the specific protein extracts shall
be in the freezer (6.4) with the temperature below -20 °C and all operation to handle specific protein
extracts shall be done in the biological safety cabinet (6.7).
8.2 Preparation of test specimens
8.2.1 Prepare the test specimens of specific protein reduction test sample as specified in Table 1.
Table 1 — Dimension or mass of specimen
a
Kind of sample Mass Specimen
0,40 g or more (50 ± 2) mm × (50 ± 2) mm
Fabrics (woven, knitted, nonwoven)
less than 0,40 g 0,40 g ± 0,05 g
Yarns, braid, fibres, wadding and
0,40 g ± 0,05 g
feather
a
Mass of the fabric specimen with a dimension of (50 ± 2) mm × (50 ± 2) mm.
8.2.2 Prepare six (6) test specimens of the specific protein reduction test sample.
Three (3) specific protein reduction test specimens are used for the control test.
The remaining 3 specific protein reduction test specimens are used for the main test of this document.
4
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ISO 4333:2022(E)
If untreated fabrics are used for the main test instead of negative control, prepare 6 test specimens
of the untreated fabric. Three untreated fabric test specimens are used for the control test and the
remaining 3 untreated fabric test specimens used for the main test.
8.3 Control test
8.3.1 General
The p
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 4333
Première édition
2022-07
Textiles — Détermination de l’activité
de réduction des protéines spécifiques
provenant du pollen, des acariens
et d’autres sources sur les produits
textiles
Textiles — Determination of reduction activity of specific proteins
derived from pollen, mite and other sources on textile products
Numéro de référence
ISO 4333:2022(F)
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Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
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CH-1214 Vernier, Genève
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Publié en Suisse
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ISO 4333:2022(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 2
5 Protéines spécifiques . 2
6 Appareillage . 2
7 Réactifs et milieux de culture .3
8 Préparation . 4
8.1 Préparation de la suspension de protéines spécifiques pour essai . 4
8.2 Préparation des éprouvettes . 4
8.3 Essai témoin . 5
8.3.1 Généralités . 5
8.3.2 Mode opératoire de vérification de la sensibilité de l’essai ELISA . 5
8.3.3 Exigence de vérification de la sensibilité de l’essai ELISA . 5
9 Préparation de la courbe étalon de protéine spécifique . 6
10 Mode opératoire d’essai .6
10.1 Préparation des éprouvettes . 6
10.2 Dépôt de la protéine spécifique sur les éprouvettes . 6
10.3 Durée de contact . 7
10.4 Récupération des protéines spécifiques des éprouvettes. 7
11 Détermination de la concentration en protéines spécifiques . 7
12 Calcul de la concentration en protéines spécifiques et du taux de réduction .7
13 Répétabilité et reproductibilité . .7
14 Rapport d’essai . 8
Annexe A (informative) Protéine spécifique issue du pollen et des acariens.9
Annexe B (informative) Réactifs pour essai ELISA, réactifs et solutions tampons .10
Annexe C (informative) Dosage d’immunoadsorption par enzyme liée — Mode opératoire
d’essai ELISA en sandwich .12
Annexe D (informative) Courbe étalon de protéine spécifique .13
Annexe E (informative) Taux de récupération .14
Annexe F (informative) Résultat d’essai interlaboratoires .15
Annexe G (informative) Répétabilité et reproductibilité .18
Bibliographie .20
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ISO 4333:2022(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l'ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 38, Textiles.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv
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ISO 4333:2022(F)
Introduction
Des produits textiles spéciaux qui peuvent avoir un effet positif sur le confort et l’hygiène de vie
humaine, tels que les textiles avec traitement antibactérien, antifongique ou antiviral, ont été introduits
sur le marché et se développent d’année en année dans diverses applications.
Néanmoins, la contamination des produits textiles par certaines protéines spécifiques qui présentent
une réaction antigène-anticorps peut également avoir un effet négatif sur le confort et l’hygiène de vie.
Il existe des produits textiles à haute performance qui peuvent réduire la quantité de ces protéines
spécifiques sur lesdits produits.
Ces produits sont relativement nouveaux et bénéficient des avancées techniques réalisées dans
le domaine des technologies textiles et biologiques; en outre, les fabricants ont individuellement
développé des méthodes d’essai afin d’évaluer les performances des produits. Cependant, aucune
méthode d’essai unifiée n’a été élaborée et les consommateurs et les fabricants ne disposent à ce jour
d’aucune information claire sur ces produits fonctionnels.
Dans ce contexte, la nécessité d’élaborer une Norme internationale s’impose aux consommateurs,
distributeurs, fabricants ou autres intervenants en tant que parties prenantes de ce marché.
Le présent document fournit une méthode d’essai quantitative en utilisant le dosage d’immunoadsorption
par enzyme liée ELISA (acronyme issu de l’anglais Enzymed-Linked Immunosorbent Assay) pour évaluer
l’activité de réduction des protéines spécifiques sur les produits textiles en prenant, par exemple,
des protéines provenant du pollen, des fèces d’acariens ou des carcasses.
v
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NORME INTERNATIONALE ISO 4333:2022(F)
Textiles — Détermination de l’activité de réduction des
protéines spécifiques provenant du pollen, des acariens et
d’autres sources sur les produits textiles
AVERTISSEMENT — Le présent document nécessite l’utilisation de protéines ou substances
issues d’une réaction antigène-anticorps/modes opératoires qui peuvent être préjudiciables à la
santé et à l’environnement si les conditions appropriées ne sont pas respectées. Il fait uniquement
référence à l’aptitude technique et ne dispense aucunement l’utilisateur de satisfaire, à tout
moment, aux obligations légales en matière de santé, de sécurité et d’environnement.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode d’essai visant à déterminer l’activité de réduction des
produits textiles vis-à-vis de protéines spécifiques qui présentent une réaction antigène-anticorps.
Le présent document ne spécifie que l’activité de réduction basée sur ces protéines à la surface des
produits textiles. Il ne s’agit pas d’une méthode d’essai visant à évaluer la réaction allergène des êtres
humains.
Les protéines spécifiques qui présentent une réaction antigène-anticorps sont celles issues du pollen,
des acariens et d’autres sources. D’autres protéines spécifiques peuvent être utilisées après une
validation appropriée décrite dans le présent document.
Le dosage d’immunoadsorption par enzyme liée est utilisé pour quantifier ces protéines dans le présent
document.
Le présent document est applicable aux tissus, aux tricots, aux fibres, aux fils, aux tresses, aux matériaux
non tissés, etc.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/ .
3.1
antigène
substance qui est reconnue comme étrangère par le système immunitaire et qui déclenche une réponse
immunitaire en stimulant la production d’anticorps
[SOURCE: ISO 16577:2016, 3.12]
1
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ISO 4333:2022(F)
3.2
anticorps
protéine (immunoglobuline) produite et sécrétée par les lymphocytes B en réponse à une molécule
reconnue comme étrangère (antigène), et qui est capable de se lier à cet antigène spécifique
Note 1 à l'article: Immunoglobuline est le synonyme courant d’anticorps.
[SOURCE: ISO 16577:2016, 3.10]
3.3
protéine spécifique
protéine qui agit en tant qu’antigène et qui est dérivée du pollen, des acariens et d’autres sources
3.4
activité de réduction des protéines spécifiques
taux de réduction de la concentration en une protéine spécifique (3.3)
3.5
agents de réduction des protéines spécifiques
produits chimiques inorganiques ou organiques capables de réduire la concentration en protéines
spécifiques
3.6
étoffe non traitée
étoffe de l’échantillon d’essai sans traitement par agent de réduction de l’antigène
3.7
témoin négatif
essai à blanc visant à confirmer l’effet d’un sac en plastique vide
3.8
essai témoin
essai visant à confirmer que les produits chimiques extraits à partir de l’échantillon d’essai n’ont aucune
influence sur la sensibilité du mesurage ELISA
3.9
dosage d’immunoadsorption par enzyme liée
ELISA
méthode utilisant des anticorps (3.2) ou des antigènes (3.1) liés de manière covalente avec une enzyme
4 Principe
La suspension de protéines spécifiques obtenue à partir de pollen, d’acariens et d’autres sources
est déposée sur une éprouvette. Après une durée de contact spécifique, les protéines spécifiques
restantes du pollen, des acariens et d’autres sources, à l’issue d’une réaction antigènes-anticorps,
sont mesurées à l’aide de la méthode ELISA et l’activité de réduction est calculée par comparaison entre
la concentration dans l’éprouvette et le témoin négatif.
5 Protéines spécifiques
Des exemples de protéines spécifiques dérivées des pollens et des acariens sont présentés à l’Annexe A.
D’autres protéines spécifiques provenant d’autres espèces peuvent être utilisées après des validations
appropriées. Si d’autres espèces sont utilisées, le nom de l’espèce et la raison spécifique de son utilisation
doivent être décrits dans le rapport d’essai.
6 Appareillage
6.1 Fiole jaugée d’une capacité de 1 l.
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ISO 4333:2022(F)
6.2 Balance offrant une plage de mesure de 0,001 g à 100 g avec une précision de 1,0 %.
6.3 Micropipette de volume parfaitement adapté à chaque utilisation, à extrémité en verre ou
en plastique, avec une précision inférieure ou égale à 0,5 %.
6.4 Congélateur capable de fonctionner à une température de (−20 ± 2) °C.
6.5 Réfrigérateur capable de fonctionner à une température comprise entre 2 °C et 8 °C.
6.6 pH-mètre équipé d’une électrode en verre, avec une résolution d’au moins ± 0,01 unité de pH.
NOTE Les pH-mètres sont décrits dans l’ISO 3071.
6.7 Poste de sécurité biologique de classe II.
6.8 Incubateur capable de maintenir une température de (25 ± 1) °C et (37 ± 1) °C.
6.9 Lecteur de microplaque capable de mesurer une longueur d’onde comprise entre 450 nm
et 620 nm.
6.10 Sac en polyéthylène avec fermeture à glissière de (60 ± 2) mm × (85 ± 2) mm.
6.11 Boîte de culture cellulaire fabriquée à partir d’une bouteille en verre
6.12 Plaque enduite d’anticorps de protéine spécifique disposant de 96 puits dont le fond
est recouvert d’anticorps de protéine spécifique.
6.13 Colonnes de filtration sur gel.
7 Réactifs et milieux de culture
Tous les réactifs doivent être d’une qualité adaptée aux besoins biologiques. Certains milieux de culture
sont disponibles dans le commerce.
7.1 Eau qui doit être de qualité analytique pour la préparation de milieux de culture microbiologiques,
qui est fraîchement distillée ou traitée par échange d’ions, par ultrafiltration ou par osmose inverse
ou toute combinaison de ces méthodes, ou de grade 3 selon l’ISO 3696.
7.2 Solution saline tamponnée au phosphate (PBS) (-).
7.2.1 Préparer une fiole jaugée de 1 l puis y ajouter les produits chimiques suivants (6.1):
— chlorure de sodium (NaCl), 8 g;
— chlorure de potassium (KCl), 0,2 g;
— hydrogénophosphate disodique 12H O (Na HPO , 12H O), 2,9 g;
2 2 4 2
— dihydrogénophosphate de potassium (KH PO ), 0,2 g.
2 4
7.2.2 Ajouter de l’eau (7.1) pour remplir jusqu’à 1 000 ml. Bien dissoudre.
7.2.3 Transférer la solution (7.2.2) dans une boîte de culture cellulaire (6.11).
3
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7.3 Solution de suspension de protéine spécifique
7.3.1 Ajouter 0,5 g de polysorbate 20 (7.7) dans la solution saline tamponnée au phosphate (PBS) (-)
préparée en 7.2, environ 700 ml à 800 ml et bien faire dissoudre.
7.3.2 Ajouter la solution (7.2) pour compléter le volume total à 1 000 ml et bien mélanger.
7.3.3 Transférer ensuite la solution (7.3.2) dans une boîte de culture cellulaire (6.11).
7.4 Réactifs pour essai ELISA, réactifs et solutions tampons
Les réactifs pour essai ELISA, les réactifs et les solutions tampons peuvent être obtenus auprès
de fournisseurs commerciaux qui doivent être préparés en vue d’une utilisation conformément aux
instructions du fabricant.
Des exemples de réactifs pour essai ELISA, de réactifs et de solutions tampons sont disponible dans
l’Annexe B.
7.5 Solution d’hydroxyde de sodium.
7.6 Solution d’acide chlorhydrique.
7.7 Polysorbate 20.
8 Préparation
8.1 Préparation de la suspension de protéines spécifiques pour essai
Ajuster la concentration de l’extrait de protéine spécifique à une valeur comprise entre 10 ng/ml
et 20 ng/ml en utilisant une solution de suspension de protéine spécifique (7.3).
La concentration par défaut de l’extrait de protéine spécifique doit être de 10 ng/ml à 20 ng/ml,
cependant, la concentration de l’extrait de protéine spécifique peut augmenter jusqu’à 100 ng/ml selon
l’expérience des laboratoires.
Des extraits de protéines spécifiques sont disponibles sur le marché. Les extraits de protéine spécifique
doivent être stockés dans un congélateur (6.4) à une température inférieure à −20 °C et toutes les
opérations de manipulation des extraits de protéine spécifique doivent être effectuées à l’intérieur
du poste de sécurité biologique (6.7).
8.2 Préparation des éprouvettes
8.2.1 Préparer les éprouvettes de l'échantillon d'essai de réduction protéique spécifique
conformément au Tableau 1.
Tableau 1 — Dimension ou masse d’éprouvette
a
Type d’échantillon Masse Éprouvette
0,40 g ou plus (50 ± 2) mm × (50 ± 2) mm
Étoffes (tissu, tricot, non-tissé)
moins de 0,40 g 0,40 g ± 0,05 g
Fils, tresses, fibres, ouate et plumes 0,40 g ± 0,05 g
a
Masse de l’éprouvette d’étoffe avec une dimension de (50 ± 2) mm × (50 ± 2) mm.
4
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8.2.2 Obtenir six (6) éprouvettes de l’échantillon d’essai de réduction des protéines spécifiques.
Trois (3) éprouvettes de réduction des protéines spécifiques sont utilisées pour l’essai témoin.
Les 3 éprouvettes restantes de réduction des protéines spécifiques sont utilisées pour l’essai principal
du présent document.
Si des étoffes non traitées sont utilisées pour l’essai principal au lieu du témoin négatif,
obtenir 6 spécimens de l’étoffe non traitée. Trois (3) spécimens d’étoffes non traitées sont utilisés
pour l’essai témoin et les 3 autres spécimens d’étoffes non traitées sont utilisés pour l’essai principal.
8.3 Essai témoin
8.3.1 Généralités
L’objectif de l’essai témoin est de confirmer que les produits chimiques de l’éprouvette ne réduisent pas
la sensibilité de l’essai ELISA. En cas d’utilisation d’un kit commercial, se reporter à la fiche technique.
8.3.2 Mode opératoire de vérification de la sensibilité de l’essai ELISA
8.3.2.1 Mettre 3 éprouvettes de réduction des protéines spécifiques dans chaque sac avec fermeture
à glissière (6.10) et ajouter 1 ml de solution de suspension de protéine spécifique (7.3).
8.3.2.2 Plier l’éprouvette en quatre ou plus dans le sac et la presser immédiatement dans le sac
tel quel.
8.3.2.3 Recueillir la solution dans le sac, prélever 0,1 ml de la solution à l’aide d’une micropipette (6.3).
Introduire la solution dans les 2 puits de la plaque d’enduction d’anticorps de protéine spécifique (6.12).
En outre, prélever 0,1 ml de la solution de suspension de protéine spécifique (7.3) à l’aide d’une
micropipette (6.3) en tant que témoin négatif et l’introduire dans les 2 puits de la plaque (6.12).
8.3.2.4 Maintenir à 25 °C dans un incubateur (6.8) pendant (30 ± 5) min. Ensuite, retirer la solution
du puits et laver le puits trois fois avec 300 μl de solution de suspension de protéine spécifique (7.3).
8.3.2.5 Déterminer la concentration de la suspension de protéines spécifiques de l’essai par la
méthode d’essai ELISA en utilisant la plaque (voir 8.3.2.4) décrite à l’Annexe C.
8.3.3 Exigence de vérification de la sensibilité de l’essai ELISA
Calculer les concentrations en protéines spécifiques pour le témoin négatif et l’éprouvette. Obtenir
les valeurs en utilisant la Formule (1). Les exigences relatives à la vérification de la sensibilité de
l’essai ELISA doivent satisfaire à la Formule (1).
| (S - S ) /S × 100 |< 20 % (1)
n t n
où
S est la moyenne de la concentration en protéines spécifiques (ng/ml) obtenue à partir de 3 témoins
n
négatifs;
S est la moyenne de la concentration en protéines spécifiques (ng/ml) obtenue à partir des
t
3 éprouvettes de réduction des protéines spécifiques.
5
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Si des étoffes non traitées sont utilisées pour l’essai principal au lieu du témoin négatif, les exigences
relatives à la vérification de la sensibilité de l’essai ELISA doivent également satisfaire à la Formule (2).
| (S - S )/S × 100 |< 20 % (2)
n u n
où S est la moyenne de la concentration en protéines spécifiques (ng/ml) obtenue à partir
u
des 3 éprouvettes d’étoffe non traitée.
Si la valeur ci-dessus est ≥ 20 %, il est nécessaire d’éliminer avec précaution le facteur négatif
par rapport à la sensibilité de l’essai ELISA dans la solution (voir 8.3.2.2) en sélectionnant la méthode
suivante en fonction du facteur.
a) Mesurer le pH de la solution à l’aide d’un pH-mètre (6.6). Le pH de la solution (voir 8.3.2.2) doit être
ajusté à un pH de (7,0 ± 0,2) en ajoutant de la solution d’hydroxyde de sodium ou la solution d’acide
chlorhydrique.
b) La solution (voir 8.3.2.2) doit être filtrée à l’aide des colonnes de filtration sur gel (6.13).
Si la solution (voir 8.3.2.2) est modifiée, la même condition doit être appliquée à la solution obtenue
en 10.4.
9 Préparation de la courbe étalon de protéine spécifique
Le mode opératoire de préparation de la courbe étalon de la protéine spécifique est le suivant. La courbe
doit être obtenue avant l’essai à chaque temps d’essai.
Préparer la courbe étalon de protéine spécifique en utilisant 7 points. La plage de concentration doit
être proche de la concentration limite de détection à 20 ng/ml.
a) Diluer l’extrait de protéine spécifique avec la solution de suspension (7.3) pour préparer des
dilutions par un facteur 2 ayant une concentration précise.
b) Mesurer l’absorbance à l’aide d’un lecteur de microplaque (6.9) à 450 nm de chaque série de dilution
des protéines spécifiques par essai ELISA.
Un exemple de courbe étalon de protéines spécifiques est présenté à l’Annexe D.
Une autre courbe étalon de protéines spécifiques peut être utilisée après validation appropriée.
En cas d’utilisation d’un kit commercial, se reporter à la fiche technique.
10 Mode opératoire d’essai
10.1 Préparation des éprouvettes
Toutes les éprouvettes sont préparées dans des sacs munis d’une fermeture à glissière (6.10).
10.2 Dépôt de la protéine spécifique sur les éprouvettes
Déposer exactement 1,0 ml de la suspension protéique spécifique préparée en 8.1 sur l’échantillon,
en un point du centre de l’échantillon, dans des sacs avec fermeture à glissière et dans les 3 sacs
avec fermeture à glissière pour le témoin négatif en utilisant une micropipette (6.3). Fermer ensuite
tous les sacs.
Le volume de dépôt par défaut sur l’éprouvette doit être de 1 ml, cependant, s’il est difficile de récupérer
la suspension après avoir déposé la solution sur l’éprouvette, le volume de dépôt peut être augmenté
jusqu’à 5 ml.
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10.3 Durée de contact
Placer les sacs avec fermeture à glissière de 10.2 dans l’incubateur (6.8) et les y conserver pendant une
durée de contact spécifiée de 2 heures à une température de 25 °C.
La durée de contact peut être modifiée à la convenance de la partie intéressée, mais sans
excéder 24 heures.
10.4 Récupération des protéines spécifiques des éprouvettes
Après avoir été mis en contact pendant 2 h en 10.3, plier les éprouvettes en quatre plis ou plus dans le
sac et les extraire du sac pour récupérer les protéines spécifiques.
11 Détermination de la concentration en protéines spécifiques
Déterminer la concentration en protéines spécifiques de la suspension protéique spécifique récupérée
en 10.4 par l’essai ELISA conformément à l’Annexe C.
En cas d’utilisation d’un kit commercial, se reporter à la fiche technique.
12 Calcul de la concentration en protéines spécifiques et du taux de réduction
12.1 Calculer la concentration en protéines spécifiques, exprimée en ng/ml à partir de l’équation de la
courbe étalon.
12.2 Calculer le taux de réduction des protéines spécifiques en comparant la prise d’essai de réduction
des protéines spécifiques et le témoin négatif à l’aide de la Formule (3):
P = (R -R )/R × 100 (3)
n t n
où
P est le taux de réduction de la concentration en protéines spécifiques en %;
R est la moyenne de la concentration en protéines spécifiques (ng/ml) récupérée sur trois sacs
n
pour le témoin négatif après 2 h;
R est la moyenne de la concentration en protéines spécifiques (ng/ml) récupérée sur trois prises
t
d’essai de réduction des protéines spécifiques après 2 h.
Si des étoffes non traitées sont disponibles et que la partie concernée le demande, l’effet des agents de
réduction de protéines spécifiques est calculé par la Formule (4).
P = (R – R ) / R × 100 (4)
u t u
où
R est la moyenne de la concentration en protéines spécifiques (ng/ml) récupérée sur trois prises
u
d’essai non traitées de réduction des protéines spécifiques après 2 h.
13 Répétabilité et reproductibilité
L’essai interlaboratoires a été réalisé avec la participation de 5 laboratoires et les résultats sont
présentés à l’Annexe F. La répétabilité et la reproductibilité ont été calculées sur la base de l’Annexe F
et les résultats sont présentés à l’Annexe G.
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14 Rapport d’essai
Le rapport d’essai doit comporter les informations suivantes:
a) une référence au présent document, c’est-à-dire l’ISO 4333:2022;
b) l’identification de l
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.