ISO 9233-2:2007

Cheese, cheese rind and processed cheese — Determination of natamycin content — Part 2: High-performance liquid chromatographic method for cheese, cheese rind and processed cheese

ISO 9233-2|IDF 140-2:2007 specifies a method for the determination of natamycin mass fraction in cheese, cheese rind and processed cheese of above 0,5 mg/kg and of the surface-area-related natamycin mass in cheese rind of above 0,03 mg/dm2.

Fromage, croûte de fromage et fromages fondus — Détermination de la teneur en natamycine — Partie 2: Méthode par chromatographie liquide à haute performance pour fromage, croûte de fromage et fromages fondus

L'ISO 9233-2|FIL 140-2:2007 spécifie une méthode de détermination de la teneur en natamycine présente dans le fromage, la croûte de fromage et les fromages fondus supérieure à 0,5 mg/kg et de la masse, exprimée par rapport à la surface, de natamycine de la croûte de fromage supérieure à 0,03 mg/dm2.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 09-Dec-2007
• Withdrawal Date: 09-Dec-2007
• ICS: 67.100.30 - Cheese
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 06-Mar-2018

Relations

• Revised: ISO 9233-2:2018 - Cheese, cheese rind and processed cheese — Determination of natamycin content — Part 2: High-performance liquid chromatographic method for cheese, cheese rind and processed cheese
• Effective Date: 30-Sep-2017
• Amended By: ISO 9233-2:2007/Amd 1:2012 - Cheese, cheese rind and processed cheese — Determination of natamycin content — Part 2: High-performance liquid chromatographic method for cheese, cheese rind and processed cheese — Amendment 1
• Effective Date: 04-Sep-2021
• Revises: ISO 9233:1991 - Cheese and cheese rind — Determination of natamycin content — Method by molecular absorption spectrometry and by high-performance liquid chromatography
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 9233-2
IDF
140-2
Первое издание
2007-12-15

Сыры, сырные корки и плавленые
сыры. Определение содержания
натамицина.
Часть 2. Метод высокоэффективной
жидкостной хроматографии для
сыров, сырных корок и плавленых
сыров
Cheese, cheese rind and processed cheese — Determination of
natamycin content —
Part 2:
High-performance liquid chromatographic method for cheese, cheese
rind and processed cheese



Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочные номера
ISO 9233-2:2007(R)
IDF 140-2:2007(R)
©
ISO and IDF 2007

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9233-2:2007(R)
IDF 140-2:2007(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на установку интегрированных шрифтов в компьютере, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe — торговый знак Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все меры
предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами – членами ISO. В
редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просим информировать Центральный секретариат
по адресу, приведенному ниже.


ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ


© ISO и IDF 2007
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO по адресу ниже или членов ISO в стране регистрации пребывания.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Опубликовано в Швейцарии

ii © ISO и IDF 2007 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9233-2:2007(R)
IDF 140-2:2007(R)
Содержание Страница
Предисловие .iv
Предисловие .v
1 Область применения .1
2 Термины и определения .1
3 Принцип.1
4 Реактивы .2
5 Аппаратура.2
6 Отбор проб.3
7 Приготовление пробы для испытания.3
7.1 Сырная корка .3
7.2 Внутренняя часть сыра и плавленый сыр.4
8 Методика .4
8.1 Проба для анализа .4
8.2 Приготовление испытуемого раствора .4
8.3 Определение.5
9 Расчет и выражение результатов .6
9.1 Расчет массовой доли натамицина .6
9.2 Расчет массы натамицина на единицу площади поверхности .7
9.3 Поправка, вводимая в результат .7
9.4 Выражение результатов .7
10 Прецизионность.8
10.1 Межлабораторные испытания.8
10.2 Повторяемость .8
10.3 Воспроизводимость .8
11 Протокол испытания.8
Приложение A (информативное) Примеры.9
Приложение B (информативное) Результаты межлабораторного испытания .11
Библиография.12

© ISO и IDF 2007 – Все права сохраняются iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9233-2:2007(R)
IDF 140-2:2007(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией
национальных организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных
стандартов обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член ISO,
заинтересованный в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть
представленным в этом комитете. Международные организации, правительственные и
неправительственные, имеющие связи с ISO, также принимают участие в работах. ISO
непосредственно сотрудничает с Международной электротехнической комиссией (IEC) по всем
вопросам электротехнической стандартизации.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, приведенными в
Директивах ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, одобренные техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам
на голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего документа могут быть объектом патентных
прав. ISO не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных
прав.
ISO 9233-2|IDF 140-2 подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты,
Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты, и Международной федерацией молочной
промышленности (IDF). Этот стандарт должен быть опубликован совместно ISO и IDF.
Настоящее первое издание ISO 9233-2|IDF 140-2 вместе с ISO 9233-1|IDF 140-1 отменяет и заменяет
первое издание ISO 9233:1991, которое было подвергнуто техническому пересмотру.
ISO 9233|IDF 140 cостоит из следующих частей под общим заголовком Сыры, сырные корки и
плавленые сыры. Определение содержания натамицина:
 Часть 1. Спектрометрический метод молекулярной абсорбции для сырных корок
 Часть 2. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для сыров, сырных корок и
плавленых сыров
iv © ISO и IDF 2007 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 9233-2:2007(R)
IDF 140-2:2007(R)
Предисловие
Международная федерация молочной промышленности (IDF) является всемирной федерацией
предприятий молочной отрасли, каждый член которой представлен в ней своим национальным
комитетом. Каждый национальный комитет имеет право быть представленным в Постоянных
комитетах IDF, осуществляющих техническую работу. IDF сотрудничает с ISO по вопросам разработки
стандартных методов анализа и отбора проб молока и молочных продуктов.
Проекты международных стандартов, принятые Рабочими группами и Постоянными комитетами,
рассылаются национальным комитетам для голосования. Их опубликование в качестве
международных стандартов требует одобрения не менее 50 % национальных комитетов IDF,
принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего документа могут быть объектом патентных
прав. IDF не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных
прав.
ISO 9233-2|IDF 140-2 подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты,
Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты, и Международной федерацией молочной
промышленности (IDF). Этот стандарт должен быть опубликован совместно ISO и IDF.
Вся работа была проведена под руководством совместной ISO-IDF Рабочей группы по Отдельным
пищевым добавкам и витаминам, Постоянного комитета по Аналитическим методам определения
содержания добавок и загрязняющих примесей под руководством руководителя проекта м-ра М. Карла
(Германия).
Настоящее первое издание ISO 9233-2|IDF 140-2 вместе с ISO 9233-1|IDF 140-1 отменяет и заменяет
первое издание IDF 140А:1992, которое было подвергнуто техническому пересмотру.
ISO 9233|IDF 140 cостоит из следующих частей под общим заголовком Сыры, сырные корки и
плавленые сыры. Определение содержания натамицина:
 Часть 1. Спектрометрический метод молекулярной абсорбции для сырных корок
 Часть 2. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для сыров, сырных корок и
плавленых сыров

© ISO и IDF 2007 – Все права сохраняются v

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 9233-2:2007(R)
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ
IDF 140-2:2007(R))

Сыры, сырные корки и плавленые сыры. Определение
содержания натамицина.
Часть 2.
Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии
для сыров, сырных корок и плавленых сыров
1 Область применения
Настоящая часть ISO 9233|IDF 140 устанавливает метод определения массовой доли натамицина
свыше 0,5 мг/кг в сырах, сырных корках и плавленых сырах и массы натамицина на единицу площади
2
поверхности свыше 0,03 мг/дм в сырных корках.
2 Термины и определения
Применительно к настоящему документу применяются следующие термины и определения.
2.1
содержание натамицина
natamycin content
массовая доля веществ, определенных в соответствии с методикой, установленной в данной части
ISO 9233|IDF 140
ПРИМЕЧАНИЕ Содержание натамицина выражают в миллиграммах на килограмм.
2.2
масса натамицина на единицу площади поверхности в сырной корке
surface-area-related natamycin mass in cheese rind
масса на единицу площади поверхности веществ, определенных в соответствии с методикой,
установленной в данной части ISO 9233|IDF 140
ПРИМЕЧАНИЕ Массу натамицина на единицу площади поверхности выражают в миллиграммах натамицина
на квадратный дециметр сырной корки.
2.3
сырная корка
cheese rind
наружный слой сыра толщиной 5 мм, за исключением слоя покрытия, если оно присутствует
3 Принцип
Экстрагируют метанолом известное количество пробы. Разбавляют экстракт водой с последующим
охлаждением до температуры от −15 °C до −20 °C для осаждения большей части жира, а затем
фильтруют. Определяют в фильтрате (при необходимости после концентрирования) содержание
натамицина или массу натамицина на единицу площади поверхности с помощью высокоэффективной
жидкостной хроматографии (HPLC).
© ISO и IDF 2007 – Все права сохраняются 1

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 9233-2:2007(R)
IDF 140-2:2007(R)
4 Реактивы
Используют только реактивы признанного аналитического качества, если не оговорено иначе, а также
только дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
4.1 Метанол (CH OH).
3
4.2 Метанол, водный раствор.
Смешивают 2 объема метанола (4.1) и 1 объем воды.
4.3 Стандартные растворы натамицина.
4.3.1 Стандартный основной раствор натамицина, концентрацией 500 мг/л.
Непосредственно перед использованием растворяют в метаноле (4.1) количество препарата с
известным содержанием натамицина, соответствующее 50 мг чистого натамицина (C H NO ), в
33 47 13
мерной колбе с одной меткой вместимостью 100 мл (5.1). Доводят до метки водой и перемешивают.
4.3.2 Стандартный рабочий раствор натамицина, концентрацией 5 мг/л.
Отбирают пипеткой 5,0 мл стандартного основного раствора натамицина (4.3.1) в мерную колбу с
одной меткой вместимостью 50 мл (5.1). Разбавляют до метки водным раствором метанола (4.2) и
перемешивают.
Отбирают пипеткой 5,0 мл разбавленного таким образом раствора в другую мерную колбу с одной
меткой вместимостью 50 мл (5.1). Разбавляют до метки водным раствором метанола (4.2) и
перемешивают. Концентрация этого стандартного рабочего раствора натамицина составляет 5 мкг/мл.
Эта концентрация должна быть близкой к концентрации испытуемого раствора, измеренной в 8.3.3.
При необходимости регулируют концентрацию этого стандартного рабочего раствора путем отбора
пипеткой и разбавления другого количества основного раствора.
4.4 Уксусная кислота (CH CO H), ледяная.
3 2
5 Аппаратура
Обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее.
5.1 Мерные колбы с одной меткой, вместимостью 50 мл и 100 мл.
5.2 Ломтерезка или аналогичное устройство, способное нарезать ломтики сыра толщиной 5 мм и
шириной примерно 30 мм (пример показан на Рисунке A.1).
5.3 Ломтерезка для тонкой нарезки, способная нарезать тонкие ломтики сыра максимальной
толщиной 1 мм (пример показан на Рисунке A.2).
5.4 Измельчитель или смеситель.
5.5 Острый нож, способный разрезать ломтики сыра на небольшие кусочки.
5.6 Магнитная мешалка или аппарат для встряхивания.
5.7 Конические колбы, вместимостью 100 мл и 200 мл, изготовленные из цветного стекла и
снабженные притертыми стеклянными пробками.
5.8 Шприцы, одноразовые, вместимостью 10 мл.
2 © ISO и IDF 2007 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 9233-2:2007(R)
IDF 140-2:2007(R)
5.9 Мембранные микрофильтры, с размером пор от 0,20 мкм до 0,45 мкм, стойкие к воздействию
спиртовых растворов.
5.10 Складчатые бумажные фильтры, быстрофильтрующие, диаметром 150 мм [например, S и S,
1)
No. 595 1/2 ].
5.11 Воронка, диаметром приблизительно 70 мм.
5.12 Морозильная камера, способная замораживать при температуре от −15 °C до −20 °C.
5.13 Экстракционные гильзы, для концентрирования, при необходимости, отфильтрованного
1) 1)
экстракта [например, Sep-pack C18 или Waters No. 51910 ].
5.14 Жидкостной хроматограф, с УФ-детектором, способный проводить измерения при длине волны
303 нм и оборудованный регистрирующим устройством и/или интегратором.
5.15 Аналитическая колонка, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6
...

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9233-2
IDF
140-2
First edition
2007-12-15

Cheese, cheese rind and processed
cheese — Determination of natamycin
content —
Part 2:
High-performance liquid
chromatographic method for cheese,
cheese rind and processed cheese
Fromage, croûte de fromage et fromages fondus — Détermination de la
teneur en natamycine —
Partie 2: Méthode par chromatographie liquide à haute performance
pour fromage, croûte de fromage et fromages fondus




Reference numbers
ISO 9233-2:2007(E)
IDF 140-2:2007(E)
©
ISO and IDF 2007

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9233-2:2007(E)
IDF 140-2:2007(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. Neither the ISO Central
Secretariat nor the IDF accepts any liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies
and IDF national committees. In the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the ISO Central Secretariat at the
address given below.


COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT


©  ISO and IDF 2007
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO or IDF at the respective
address below.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Published in Switzerland

ii © ISO and IDF 2007 – All rights reserved

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9233-2:2007(E)
IDF 140-2:2007(E)
Contents Page
Foreword. iv
Foreword. v
1 Scope . 1
2 Terms and definitions. 1
3 Principle. 1
4 Reagents. 2
5 Apparatus . 2
6 Sampling. 3
7 Preparation of test sample. 3
7.1 Cheese rind . 3
7.2 Cheese interior and processed cheese. 4
8 Procedure . 4
8.1 Test portion . 4
8.2 Preparation of test solution . 4
8.3 Determination. 5
9 Calculation and expression of results. 6
9.1 Calculation of natamycin mass fraction. 6
9.2 Calculation of surface-area-related natamycin mass . 7
9.3 Correction of results. 7
9.4 Expression of results . 7
10 Precision. 7
10.1 Interlaboratory tests . 7
10.2 Repeatability. 7
10.3 Reproducibility. 7
11 Test report . 8
Annex A (informative) Examples . 9
Annex B (informative) Results of interlaboratory trial. 11
Bibliography . 12

© ISO and IDF 2007 – All rights reserved iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9233-2:2007(E)
IDF 140-2:2007(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 9233-2|IDF 140-2 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products and the International Dairy Federation (IDF) and is being published jointly by ISO and
IDF.
This first edition of ISO 9233-2|IDF 140-2, together with ISO 9233-1|IDF 140-1, cancels and replaces the first
edition of ISO 9233:1991, which has been technically revised.
ISO 9233|IDF 140 consists of the following parts, under the general title Cheese, cheese rind and processed
cheese — Determination of natamycin content:
⎯ Part 1: Molecular absorption spectrometric method for cheese rind
⎯ Part 2: High-performance liquid chromatographic method for cheese, cheese rind and processed cheese


iv © ISO and IDF 2007 – All rights reserved

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 9233-2:2007(E)
IDF 140-2:2007(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National
Committee in every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF
Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in the development of
standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50% of
IDF National Committees casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 9233-2|IDF 140-2 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical Committee
ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products and is being published jointly by IDF
and ISO.
All work was carried out by the Joint ISO-IDF Action Team on Selected food additives and vitamins of the
Standing Committee on Analytical methods for additives and contaminants under the aegis of its project
leader, Mr. M. Carl (DE).
This first edition of ISO 9233-2|IDF 140-2, together with ISO 9233-1|IDF 140-1, cancels and replaces the first
edition of IDF 140A:1992, which has been technically revised.
ISO 9233|IDF 140 consists of the following parts, under the general title Cheese, cheese rind and processed
cheese — Determination of natamycin content:
⎯ Part 1: Molecular absorption spectrometric method for cheese rind
⎯ Part 2: High-performance liquid chromatographic method for cheese, cheese rind and processed cheese


© ISO and IDF 2007 – All rights reserved v

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 9233-2:2007(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 140-2:2007(E)

Cheese, cheese rind and processed cheese — Determination
of natamycin content —
Part 2:
High-performance liquid chromatographic method for cheese,
cheese rind and processed cheese
1 Scope
This part of ISO 9233|IDF 140 specifies a method for the determination of natamycin mass fraction in cheese,
cheese rind and processed cheese of above 0,5 mg/kg and of the surface-area-related natamycin mass in
2
cheese rind of above 0,03 mg/dm .
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
natamycin content
mass fraction of substances determined by the procedure specified in this part of ISO 9233|IDF 140
NOTE The natamycin content is expressed in milligrams per kilogram.
2.2
surface-area-related natamycin mass in cheese rind
surface-area-related mass of substances determined by the procedure specified in this part of
ISO 9233|IDF 140
NOTE The surface-area-related natamycin mass is expressed in milligrams of natamycin per square decimetre of
cheese rind.
2.3
cheese rind
outer layer of the cheese of thickness 5 mm, excluding the coating layer, if present.
3 Principle
A known quantity of sample is extracted with methanol. The extract is diluted with water followed by cooling to
between −15 °C and −20 °C to precipitate most of the fat, followed by filtration. The natamycin content or
surface-area-related natamycin mass is determined in the filtrate (after concentration, if necessary) by high-
performance liquid chromatography (HPLC).
© ISO and IDF 2007 – All rights reserved 1

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 9233-2:2007(E)
IDF 140-2:2007(E)
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and only distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
4.1 Methanol (CH OH).
3
4.2 Methanol, aqueous solution.
Mix 2 volumes of methanol (4.1) with 1 volume of water.
4.3 Natamycin standard solutions.
4.3.1 Natamycin standard stock solution, of concentration 500 mg/l.
Immediately before use, dissolve in methanol (4.1) a quantity of a natamycin preparation of known natamycin
content, corresponding to 50 mg of pure natamycin (C H NO ), in a 100 ml one-mark volumetric flask (5.1).
33 47 13
Make up to the mark with water and mix.
4.3.2 Natamycin standard working solution, of concentration 5 mg/l.
Pipette 5,0 ml of the natamycin standard stock solution (4.3.1) in a 50 ml one-mark volumetric flask (5.1).
Dilute to the mark with aqueous methanol (4.2) and mix.
Pipette 5,0 ml of the thus diluted solution into another 50 ml one-mark volumetric flask (5.1). Dilute to the mark
with aqueous methanol (4.2) and mix. The concentration of this natamycin standard working solution is
5 µg/ml.
This concentration shall be close to that of the test solution measured in 8.3.3. Adjust the standard working
dilution by pipetting and diluting another quantity, if required.
4.4 Acetic acid (CH CO H), glacial.
3 2
5 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
5.1 One-mark volumetric flasks, of capacities 50 ml and 100 ml.
5.2 Slicer or similar apparatus, capable of cutting cheese portions of thickness 5 mm and of width about
30 mm (Figure A.1 shows an example).
5.3 Fine slicer, capable of cutting thin cheese slices of maximum thickness 1 mm (Figure A.2 shows an
example).
5.4 Grinder or blender.
5.5 Sharp knife, capable of cutting cheese slices into small pieces.
5.6 Magnetic stirrer or shaking machine.
5.7 Conical flasks, of capacities 100 ml and 200 ml, made of coloured glass and fitted with ground-glass
stoppers.
5.8 Syringes, disposable, of capacity 10 ml.
2 © ISO and IDF 2007 – All rights reserved

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 9233-2:2007(E)
IDF 140-2:2007(E)
5.9 Membrane microfilters, of pore size 0,20 µm and 0,45 µm, resistant to attack by alcoholic solutions.
1)
5.10 Folded paper filters, fast speed, of diameter 150 mm. [e.g. S and S, No. 595 1/2 ].
5.11 Funnel, of diameter approximately 70 mm.
5.12 Freezer, capable of freezing at a temperature of between −15 °C and −20 °C.
1)
5.13 Extraction cartridges, to concentrate the filtered extract, if necessary [e.g. Sep-pack C18 or Waters
1)
No. 51910 ].
5.14 Liquid chromatograph, with UV detector, capable of measuring at 303 nm and equipped with a
recorder and/or integrator.
5.15 Analytical column, of
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 9233-2
FIL
140-2
Première édition
2007-12-15

Fromage, croûte de fromage et fromages
fondus — Détermination de la teneur
en natamycine —
Partie 2:
Méthode par chromatographie liquide
à haute performance pour fromage,
croûte de fromage et fromages fondus
Cheese, cheese rind and processed cheese — Determination of
natamycin content —
Part 2: High-performance liquid chromatography method for cheese,
cheese rind and processed cheese




Numéros de référence
ISO 9233-2:2007(F)
FIL 140-2:2007(F)
©
ISO et FIL 2007

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9233-2:2007(F)
FIL 140-2:2007(F)
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO et la FIL
déclinent toute responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO et les comités nationaux de la FIL. Dans le cas peu probable où
surviendrait un problème d'utilisation, veuillez en informer le Secrétariat central de l'ISO à l'adresse donnée ci-dessous.


DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT


©  ISO et FIL 2007
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
soit de l'ISO soit de la FIL, à l'une ou l'autre des adresses ci-après.
ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Bruxelles
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Publié en Suisse

ii © ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 9233-2:2007(F)
FIL 140-2:2007(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Avant-propos. v
1 Domaine d'application. 1
2 Termes et définitions. 1
3 Principe. 1
4 Réactifs et substances de référence . 2
5 Appareillage . 2
6 Échantillonnage . 3
7 Préparation de l’échantillon pour essai. 3
7.1 Croûte de fromage. 3
7.2 Intérieur du fromage et fromage fondu . 4
8 Mode opératoire . 4
8.1 Prise d’essai . 4
8.2 Préparation de la solution d’essai . 4
8.3 Détermination. 5
9 Calcul et expression des résultats. 7
9.1 Calcul de la fraction massique de la natamycine. 7
9.2 Calcul de la masse, exprimée par rapport à la surface, de natamycine . 7
9.3 Correction des résultats . 7
9.4 Expression des résultats . 8
10 Fidélité . 8
10.1 Essais interlaboratoires . 8
10.2 Répétabilité. 8
10.3 Reproductibilité. 8
11 Rapport d'essai . 8
Annexe A (informative) Exemples . 9
Annexe B (informative) Résultats des essais interlaboratoires . 11
Bibliographie . 12

© ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9233-2:2007(F)
FIL 140-2:2007(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 9233-2|FIL 140-2 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL) et est publiée conjointement par
l’ISO et la FIL.
Cette première édition de l’ISO 9233-2|FIL 140-2, ainsi que l'ISO 9233-1|FIL 140-1, annulent et remplacent la
première édition de l’ISO 9233:1991, qui a fait l'objet d'une révision technique.
L'ISO 9233|FIL 140 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Fromage, croûte de
fromage et fromages fondus — Détermination de la teneur en natamycine:
⎯ Partie 1: Méthode par spectrométrie d'absorption moléculaire pour croûte de fromage
⎯ Partie 2: Méthode par chromatographie liquide à haute performance pour fromage, croûte de fromage et
fromages fondus
iv © ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 9233-2:2007(F)
FIL 140-2:2007(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l'ISO pour
l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et d'échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 9233-2|FIL 140-2 a été élaborée par la Fédération internationale de laiterie (FIL) et le comité technique
ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et est publiée conjointement par
la FIL et l’ISO.
L'ensemble des travaux a été confié à l'Équipe d'Action mixte ISO-FIL, Additifs et vitamines sélectionnés, du
Comité permanent chargé des Méthodes analytiques pour additifs et contaminants, sous la conduite de son
chef de projet, Monsieur M. Carl (DE).
Cette première édition de l’ISO 9233-2|FIL 140-2, ainsi que l'ISO 9233-1|FIL 140-1, annulent et remplacent la
première édition de la FIL 140A:1992, qui a fait l'objet d'une révision technique.
L'ISO 9233|FIL 140 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Fromage, croûte de
fromage et fromages fondus — Détermination de la teneur en natamycine:
⎯ Partie 1: Méthode par spectrométrie d'absorption moléculaire pour croûte de fromage
⎯ Partie 2: Méthode par chromatographie liquide à haute performance pour fromage, croûte de fromage et
fromages fondus

© ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés v

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 9233-2:2007(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 140-2:2007(F)

Fromage, croûte de fromage et fromages fondus —
Détermination de la teneur en natamycine —
Partie 2:
Méthode par chromatographie liquide à haute performance
pour fromage, croûte de fromage et fromages fondus
1 Domaine d'application
La présente partie de l’ISO 9233|FIL 140 spécifie une méthode de détermination de la teneur en natamycine
présente dans le fromage, la croûte de fromage et les fromages fondus supérieure à 0,5 mg/kg et de la masse,
2
exprimée par rapport à la surface, de natamycine de la croûte de fromage supérieure à 0,03 mg/dm .
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
2.1
teneur en natamycine
fraction massique de substances déterminée par le mode opératoire spécifié dans la présente partie de
l’ISO 9233|FIL 140
NOTE La teneur en natamycine est exprimée en milligrammes par kilogramme.
2.2
masse, exprimée par rapport à la surface, de natamycine de la croûte de fromage
masse, exprimée par rapport à la surface, de substances déterminée par le mode opératoire spécifié dans la
présente partie de l’ISO 9233|FIL 140
NOTE La masse, exprimé par rapport à la surface, de natamycine est exprimée en milligrammes de natamycine par
décimètre carré de croûte de fromage.
2.3
croûte de fromage
couche extérieure du fromage, d’une épaisseur de 5 mm, à l’exclusion de l’enrobage, si ce dernier est présent
3 Principe
Une quantité connue d’échantillon est extraite à l’aide de méthanol. L’extrait est dilué avec de l’eau, suivie
d’un refroidissement entre −15 °C et −20 °C pour précipiter la majeure partie de la matière grasse, puis
filtration. La teneur en natamycine ou la masse, exprimée par rapport à la surface, de natamycine est
déterminée dans le filtrat (après concentration, si nécessaire) par chromatographie liquide à haute
performance (CLHP).
© ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés 1

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 9233-2:2007(F)
FIL 140-2:2007(F)
4 Réactifs et substances de référence
Sauf indications contraires, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue, et de l'eau distillée
ou déminéralisée ou de l'eau de pureté équivalente.
4.1 Méthanol (CH OH).
3
4.2 Méthanol, solution aqueuse.
Mélanger 2 volumes de méthanol (4.1) avec 1 volume d’eau.
4.3 Solutions étalons de natamycine.
4.3.1 Solution étalon mère de natamycine, ayant une concentration de 500 mg/l.
Immédiatement avant l'emploi, dissoudre dans une fiole jaugée à un trait de capacité 100 ml (5.1) une
quantité d’une préparation à teneur connue en natamycine, correspondant à 50 mg de natamycine pure
(C H NO ) dans du méthanol (4.1). Compléter au trait repère avec de l’eau et mélanger.
33 47 13
4.3.2 Solution étalon de travail de natamycine, ayant une concentration de 5 mg/l.
Introduire au moyen d’une pipette dans une fiole jaugée à un trait de capacité 50 ml (5.1) 5,0 ml de la solution
étalon mère de natamycine (4.3.1). Diluer au trait avec la solution aqueuse de méthanol (4.2), puis mélanger.
Introduire au moyen d’une pipette dans une autre fiole jaugée à un trait de capacité 50 ml (5.1) 5,0 ml de la
solution ainsi diluée. Diluer au trait avec la solution aqueuse de méthanol (4.2), puis mélanger. 1 ml de cette
solution étalon de travail contient 5 µg de natamycine.
Il est nécessaire que la concentration de la solution étalon de travail de natamycine soit proche de celle de la
solution d’essai mesurée en 8.3.3. Ajuster la dilution étalon de travail en pipettant et diluant une autre quantité,
si nécessaire.
4.4 Acide acétique (CH CO H), glacial.
3 2
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Fioles jaugées à un trait, d’une capacité de 50 ml et 100 ml.
5.2 Appareil à trancher ou appareil similaire, capable de découper des portions de fromage de 5 mm
d’épaisseur et d’environ 30 mm de large (voir l'exemple donné à la Figure A.1).
5.3 Appareil à trancher fin, capable de découper de fines tranches de fromage d’une épaisseur maximale
de 1 mm (voir l'exemple donné à la Figure A.2).
5.4 Broyeur ou mélangeur.
5.5 Couteau aiguisé, capable de découper des tranches de fromage en petits morceaux.
5.6 Agitateur magnétique ou appareil à secouer.
5.7 Fioles coniques, d’une capacité de 100 ml et 200 ml, en verre teinté et munies de bouchons en verre
rodé.
5.8 Seringues, jetables, de capacité 10 ml.
2 © ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 9233-2:2007(F)
FIL 140-2:2007(F)
5.9 Microfiltres à membrane, de 0,20 µm et 0,45 µm de grosseur de pore, résistants à l’attaque par des
solutions alcooliques.
1)
5.10 Papiers-filtres plissés, à filtration rapide, de 150 mm de diamètre [par exemple S et S, No. 595 1/2 ].
5.11 Entonnoir, d’environ 70 mm de diamètre.
5.12 Congélateur, capable de maintenir une température comprise entre −15 °C et −20 °C.
1)
5.13 Cartouches d’extraction, pour concentrer l’extrait filtré, si nécessaire [par exemple Sep-pack C18 ou
1)
Waters No. 51910 ].
5.14 Chromatographe liquide, équipé d’un détecteur UV, capable d’effectuer des mesures à 303 nm et
muni d’un enregistreur et/ou d’un intégrateur.
5.15 Colonne analytique, de 150 mm de long et 4,6 mm de diamètre intérieur, type C8, dimension des
1)
particules 5 µm [par exemple Lichrosorb RP8 ].
5.16 Colonne de garde, de 100 mm de long et 2,1 mm de diamètre intérieur, type C8, dimension des
1)
particules 30 µm à 40 µm [par exemple Perisorb RP8 ].
5.17 Récipient, d’une capacité appropriée.
6 Échantillonnage
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon
...