ISO 7937:1997
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for enumeration of Clostridium perfringens — Colony-count technique
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for enumeration of Clostridium perfringens — Colony-count technique
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement de Clostridium perfringens — Technique par comptage des colonies
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Relations
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INTERNATIONAL Is0
7937
STANDARD
Second edition
1997-04- 15
Microbiology of food and animal feeding
stuffs - Horizontal method for enumeration
of Clostridium perfringens - Colony-count
technique
- Mkthode horizontale pour le dhnombrement
Microbiologic des aliments
de Clostridium perfringens - Technique par comptage des colonies
Reference number
IS0 7937: 1997(E)
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IS0 7937: 1997(E)
Forword
IS0 (the international Organization for Standardization) is a worldwide federation of national
standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International Standards is normally
carried out through IS0 technical committees. Each member body interested in a subject for which a
technical committee has been established has the right to be represented on that committee.
International organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in
the work. IS0 collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all
matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member
bodies for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the
member bodies casting a vote.
Comr
International Standard IS0 7937 was prepared by Technical nittee lSO/TC 34, Agricukml food
products, Subcommittee SC 9, Microbiology.
This second edition cancels and replaces the first edition (I SO 7937:1985), which has been
technically revised.
0 IS0 1997
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
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Internet central @ iso.ch
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Printed in Switzerland
ii
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IS0 7937: 1997(E)
Introduction
Because of the large variety of food and feed products, this horizontal method may not be
appropriate in every detail for certain products for which it may be necessary to use different
methods. Nevertheless, in all cases, every attempt should be made to apply this horizontal method
as far as possible and deviations from this should only be made if absolutely necessary for
technical reasons.
When this International Standard is next reviewed, account will be taken of all information then
available regarding the extent to which this horizontal method has been followed and the reasons
for deviations from it in the case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate, and for certain groups of products
International Standards and/or national standards may already exist that do not comply with this
horizontal method. It is hoped that when such standards are reviewed they will be changed to
comply with this International Standard so that eventually the only remaining departures from this
horizontal method will be those necessary for well-established technical reasons.
. . .
Ill
---------------------- Page: 3 ----------------------
This page intentionally left blank
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IS0 7937: 1997(E)
INTERNATIONAL STANDARD @ IS0
Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal
method for enumeration of Clostridium perfringens -
Colony-count technique
1 Scope
This International Standard describes a horizontal method for the enumeration of viable
Clostridium perfringens in products intended for human consumption or the feeding of animals.
2 Normative references
The following standards contain provisions which, through reference in this text, constitute
provisions of this International Standard. At the time of the publication, the editions indicated were
valid. All standards are subject to revision, and parties to agreements based on this International
Standard are encouraged to investigate the possibility of applying the most recent editions of the
standards indicated below. Members of IEC and IS0 maintain registers of currently valid
International Standards.
IS0 6887: 1983, Microbiology - General guidance for the preparation of dilutions for microbiological
examination.
IS0 7218: 1996, Microbiology of food and animal feeding stuffs - General rules for microbiological
examinations.
3 Definitions
For the purposes of this International Standard, the following definitions apply.
3.1 CIostridium perfringens: Bacteria that form characteristic colonies (surrounded by a black
halo) in the specified selective medium and which give positive confirmatory reactions when the
test is carried out by the method specified in this International Standard.
NOTE - For practical reasons, this definition of Clostridium perfringens does not exclusively describe strains
of C. pekingens. In particular, the confirmatory tests are inadequate to distinguish between C. pekingens
and other closely related but less commonly encountered Clostridium species such as C. paraperfringens
and C. absonum.
3.2 enumeration of C. perfringens: Determination of the number of viable and confirmed
Clostridium perfringens bacteria per millilitre or per gram of sample when the test is carried out by
the method specified in this International Standard.
4 Principle
4.1 Inoculation of Petri dishes with a specified quantity of the test sample if the initial product is
liquid, or a specified quantity of the initial suspension in the case of other products.
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@ IS0
IS0 7937: 1997(E)
Inoculation, under the same conditions, using decimal dilutions of the test sample or of the initial
suspension.
Mixing with a selective medium (poured-plate technique) and adding an overlay of the same
medium.
4.2 Anaerobic incubation of the plates at 35 “C or 37 “C for 20 h. The temperature shall be
agreed between the parties concerned and recorded in the test report.
4.3 Enumeration of the characteristic colonies.
4.4 Confirmation of the number of characteristic colonies and calculation of the number of
C. perfringens per millilitre or per gram of sample.
5 Diluent, culture media and reagents
5.1 General
See IS0 7218.
5.2 Diluent
See IS0 6887 and any specific standard dealing with the product to be examined.
5.3 Egg-yolk-free tryptose-sulfite-cycloserine agar (SC) 1)
5.3.1 Base
5.3.1 .l Composition
Tryptose a)
1590 g
Soytone b)
590 g
Yeast extract
590 g
Disodium disulfite (Na2S205)1 anhydrous
LO g
Ammonium iron(lll) citrate b)
LO g
Agar 9,0 g to 18,0 g c)
Water 1 000 ml
a) The names tryptose and soytone are used at present only by certain
producers of media. Any other pancreatic casein or soybean digest giving
comparable results may be used.
b) This reagent should contain at least 15 % (m/m) of iron.
c, Depending on the gel strength of the agar.
I) This was originally designated EY-free TSC (Hauschild and Hilsheimer, Appl. Microbio/., 27, 1974,
pp. 78-82).
2
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@ IS0 IS0 7937: 1997(E)
5.3.1.2 Preparation
Dissolve the components in the water by boiling.
Adjust the pH so that after sterilization it will be 7,6 A 0,2 at 25 “C.
Dispense the base into flasks or bottles of appropriate capacity.
Sterilize for 15 min at 121 “C.
5.3.2 D-Cycloserine solution
5.3.2.1 Composition
D-Cycloserine a)
w g
Water 100 ml
1 a) Use white crystalline powder only.
5.3.2.2 Preparation
Dissolve the D-cycloserine in the water and sterilize the solution by filtration.
Store in a refrigerator at + 3 “C k 2 “C.
Discard unused solution 4 weeks after preparation.
5.3.3 Complete medium
00 ml of sterile molten
Immediately before use in the pour-plate method (see 9.2) add, to each 1
base (5.3.1) cooled to 47 “C * 2 “C, 1 ml of D-cycloserine solution (5.3.2).
5.4 Fluid thioglycollate medium
5.4.1 Composition
Enzymatic digest of casein
150 g
L-Cysteine 095 g
D-Glucose 53 g
Yeast extract 50 g
Sodium chloride 23 g
Sodium thioglycollate (mercaptoacetate)
03 g
0,5 g to 2,0 g a)
Agar
0,001 g
Resazurin
1 000 ml
Water
a) Depending on the gel strength of the agar.
3
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@ IS0
IS0 7937: 1997(E)
5.4.2 Preparation
Dissolve the components in the water by boiling.
Adjust the pH so that after sterilization it is 7,l +- 0,2 at 25 “C.
-
Dispense 10 ml portions into tubes and sterilize at 121 “C for 15 min.
Before use, this medium shall be de-aerated.
5.5 Lactose sulfite medium (LS)
5.5.1 Base medium
5.5.1 .l Composition
Enzymatic digest of casein 590 g
Yeast extract 23 g
Sodium chloride 23 g
Lactose
log
L-Cysteine hydrochloride 03 g
1 000 ml
Water
5.5.1.2 Preparation
Dissolve the components in the water by boiling (if necessary).
Adjust the pH so that after sterilization it is 7,l + 0,2 at 25 “C.
-
Dispense 8 ml portions into test tubes or bottles with inverted Durham tubes (6.7) and sterilize at
121 “C for 15 min.
The medium may be stored at + 3 “C * 2 “C for up to 4 weeks.
5.5.2 Disodium disulfite, anhydrous solution
5.5.2.1 Composition
Disodium disulfite (Na2S20s), anhydrous
12 g
100 ml
Water
5.5.2.2 Preparation
Dissolve the disodium disulfite in the water and sterilize the solution by filtration.
Use the solution within a day.
4
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0 IS0 IS0 7937:1997(E)
5.5.3 Ammonium iron(lll) citrate solution
5.5.3.1 Composition
Ammonium iron(lll) citrate
19
100 ml
Water
5.5.3.2 Preparation
Dissolve the ammonium iron(lll) citrate in the water and sterilize the solution by filtration.
Use the solution within a day.
5.5.4 Complete medium
If the medium is not used on the day of the preparation, just prior to completion, de-aer
...
NORME ISO
INTERNATIONALE
7937
Deuxième édition
1997-04- 15
Microbiologie des aliments - Méthode
horizontale pour le dénombrement
de Clostridium perfringens - Technique
par comptage des colonies
Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for
enumeration of Clostridium perfringens - Colony-Count technique
Numéro de référence
ISO 7937: 1997(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 7937: 1997(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale 7937 a été élaborée par le comité technique ISOTTC 34, Produits agricoles alimentaires,
sous-comité SC 9, Microbiologie.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 7937:1985), dont elle constitue une révision
technique.
0 ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
l CH-121 1 Genève 20 l Suisse
Case postale 56
Internet central @ iso.ch
c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
x.400
Imprimé en Suisse
ii
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0 ISO
ISO 7937: 1997(F)
Introduction
En raison de la grande diversité des produits alimentaires, il est possible que cette méthode horizontale ne
convienne pas exactement, dans tous ses détails, pour certains produits pour lesquels il peut être nécessaire
d’employer des méthodes différentes ou spécifiques à ces produits. Néanmoins, tous les efforts devront être faits
pour appliquer cette méthode horizontale chaque fois qu’il sera possible et l’on n’aura recours à des dérogations
que si cela est absolument nécessaire pour des raisons techniques justifiées.
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il sera tenu compte de tous les renseignements
disponibles à ce moment-là, à savoir dans quelle mesure cette méthode horizontale aura été suivie et les raisons
pour lesquelles il aura été nécessaire d’y déroger dans le cas de produits particuliers.
L’harmonisation des méthodes d’essai ne peut être réalisée de façon immédiate et, pour certains groupes de
produits, des Normes internationales et/ou des normes nationales qui ne concordent pas avec cette méthode
horizontale, existent peut-être déjà. Lorsque de telles normes viendront en révision, il serait souhaitable de les
aligner sur la présente Norme internationale, si bien que, finalement, les seules divergences restantes seront celles
qui sont nécessaires pour des raisons techniques bien établies.
---------------------- Page: 3 ----------------------
Page blanche
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 7937: 1997(F)
NORME INTERNATIONALE o ISO
Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour
le dénombrement de Clostridium perfringens - Technique
/
par comptage des colonies
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale prescrit une méthode horizontale pour le dénombrement de Clostridium
perfringens revivifiables dans les produits destinés à la consommation humaine ou à l’alimentation animale.
2 Références normatives
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Au moment de la publication, les éditions indiquées
étaient en vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes des normes
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes internationales en vigueur
a un moment donné.
ISO 6887: 1983, Microbiologie - Directives générales pour la préparation des dilutions en vue de l’examen
microbiologique.
Règles générales pour les examens microbiologiques.
ISO 7218:1996, Microbiologie des aliments -
3 Définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les définitions suivantes s’appliquent.
Clostridium perfringens:
31
Bactéries qui forment des colonies caractéristiques (entourées d’un halo noir) dans le milieu sélectif spécifié et qui
donnent des réactions de confirmation positives lorsque l’essai est effectué conformément à la méthode prescrite
dans la présente Norme internationale.
NOTE - Pour des raisons pratiques, cette définition de Clos~~kGum perfringens ne décrit pas exclusivement les souches de
C. perfringens. En particulier, les essais de confirmation sont inadéquats pour distinguer C. perfringens des autres espèces de
Clostridium proches, mais moins communément rencontrées, telles que C. Paraperfrngens et C. absonum.
3.2 dénombrement de C. perfringens:
Détermination du nombre de bactéries Clostridium petiringens revivifiables et confirmées par millilitre ou par
gramme d’échantillon lorsque l’essai est effectué conformément à la méthode prescrite dans la présente Norme
internationale.
1
---------------------- Page: 5 ----------------------
0 ISO
ISO 7937: 1997(F)
4 Principe
4.1 Ensemencement des boîtes de Petri avec une quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le produit à
examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de la suspension mère dans le cas d’autres produits.
Dans les mêmes conditions, ensemencement des dilutions décimales obtenues à partir de l’échantillon pour essai
ou de la suspension mère dans le cas d’autres produits
Mélange avec un milieu sélectif (technique d’ensemencement dans la masse) et addition d’une couche du même
milieu par le dessus.
4.2 Incubation en anaérobiose des boîtes à 35 “C ou 37 “C pendant 20 h. La température doit faire l’objet d’un
accord entre les parties concernées et doit être indiquée dans le rapport d’essai.
4.3 Dénombrement des colonies caractéristiques.
4.4 Confirmation du nombre de colonies caractéristiques et calcul du nombre de C. perfringens par millilitre ou par
gramme d’échantillon.
5 Diluant, milieux de culture et réactifs
5.1 Généralités
Voir I’ISO 7218.
5.2 Diluant
Voir I’ISO 6887 et toute norme spécifique traitant du produit à examiner.
5.3 Gélose tryptose-sulfite à la cyclosérine (SC) exempte de jaune d’oeuf l)
53.1 Milieu de base
5.3.1 .l Composition
Ttyptose a)
1590 g
Sojatone a)
50 g
Extrait de levure
590 g
Bisulfite disodique (Na,S,O,), anhydre
190 g
Citrate de fer( Ill) ammoniacal b,
190 g
Agar-agar 9,0gà18,0gC)
Eau 1000 ml
a) Les dénominations “tryptose” et “sojatone” ne sont utilisées actuellement que par
certains fabricants de milieux. Tout autre digestat pancréatique de caséine ou de soja
fournissant des résultats comparables peut être utilisé.
b) II convient que ce réactif contienne au moins 15 % (m/m) de fer.
c) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
1) SC était désigné à l’origine comme TSC exempt d’EY (HAUSCHILD et HILSHEIMER. Appl. Mcrobiol., 27, 1974,
pp. 78-82.
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0 ISO
ISO 7937: 1997(F)
5.3.1.2 Préparation
Dissoudre les composants dans l’eau, en portant à ébullition.
Ajuster le pH de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,6 + 0,2 à 25 “C.
Répartir le milieu de base dans des flacons ou des fioles de capacité appropriée.
Stériliser pendant 15 min à 121 OC.
5.3.2 Solution de D-cyclosérine
5.3.2.1 Composition
D-cyclosérine a)
490 g
100 ml
Eau
a) Utiliser uniquement de la poudre blanche cristalline.
5.3.2.2 Préparation
Dissoudre la D-cyclosérine dans l’eau et stériliser la solution par filtration.
Conserver au réfrigérateur à + 3 “C + 2 OC.
Ne pas utiliser la solution plus de quatre semaines après sa préparation.
5.3.3 Milieu complet
Immédiatement avant de commencer la méthode d’ensemencement dans la masse (voir 9.2), ajouter 1 ml de la
solution de D-cyclosérine (5.3.2) pour chaque 100 ml de milieu de base stérile (5.3.1) fondu et refroidi à
47 “C k 2 “C.
5.4 Milieu thioglycolate liquide
5.4.1 Composition
Digestat enzymatique de caséine
15,o g
L-cystéine
03 g
D-glucose
53 g
Extrait de levure
590 g
Chlorure de sodium
23 g
Thioglycolate de sodium (mercaptoacétate)
095 g
Agar-agar 0,5 g à 2,0 g a)
Résazurine 0,001 g
Eau 1 000 ml
a) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
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0 ISO
ISO 7937: 1997(F)
5.4.2 Préparation
Dissoudre les composants dans l’eau en portant à ébullition.
Ajuster le pH de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,l k 0,2 à 25 “C.
Répartir le milieu dans des tubes par quantités de 10 ml et stériliser à 121 “C pendant 15 min.
Au moment de l’emploi, ce milieu doit être désaéré.
5.5 Milieu lactose sulfite (LS)
5.5.1 Milieu de base
5.5.1 .I Composition
Digestat enzymatique de caséine 590 g
Extrait de levure 23 g
Chlorure de sodium 23 g
Lactose
WI
Hydrochlorure de L-cystéine
093 g
1 000 ml
Eau
5.5.1.2 Préparation
Dissoudre les composants dans l’eau, en portant à ébullition si nécessaire.
Ajuster le pH de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,l + 0,2 à 25 OC.
Répartir le milieu par quantités de 8 ml dans des tubes à essai ou des flacons d’essai contenant des cloches de
Durham inversées (6.7) et stériliser à 121 “C pendant 15 min.
Le milieu peut être conservé au plus quatre semaines à + 3 “C t 2 OC.
5.5.2 Solution de bisulfite disodique anhydre
5.5.2.1 Composition
Bisulfite disodique (Na,S,O,) anhydre
192 g
100 ml
Eau
5.5.2.2 Préparation
Dissoudre le bisulfite disodique dans l’eau et stériliser la solution par filtration.
Utiliser la solution dans la journée.
4
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0 ISO
ISO 7937: 1997(F)
5.5.3 Solution de citrate de fer(lll) ammoniacal
5.5.3.1 Composition
Citrate de fer(lll) ammoniacal
Ig
100 ml
Eau
5.5.3.2 Prép
...
NORME ISO
INTERNATIONALE
7937
Deuxième édition
1997-04- 15
Microbiologie des aliments - Méthode
horizontale pour le dénombrement
de Clostridium perfringens - Technique
par comptage des colonies
Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for
enumeration of Clostridium perfringens - Colony-Count technique
Numéro de référence
ISO 7937: 1997(F)
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ISO 7937: 1997(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale 7937 a été élaborée par le comité technique ISOTTC 34, Produits agricoles alimentaires,
sous-comité SC 9, Microbiologie.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 7937:1985), dont elle constitue une révision
technique.
0 ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
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Case postale 56
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Imprimé en Suisse
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ISO 7937: 1997(F)
Introduction
En raison de la grande diversité des produits alimentaires, il est possible que cette méthode horizontale ne
convienne pas exactement, dans tous ses détails, pour certains produits pour lesquels il peut être nécessaire
d’employer des méthodes différentes ou spécifiques à ces produits. Néanmoins, tous les efforts devront être faits
pour appliquer cette méthode horizontale chaque fois qu’il sera possible et l’on n’aura recours à des dérogations
que si cela est absolument nécessaire pour des raisons techniques justifiées.
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il sera tenu compte de tous les renseignements
disponibles à ce moment-là, à savoir dans quelle mesure cette méthode horizontale aura été suivie et les raisons
pour lesquelles il aura été nécessaire d’y déroger dans le cas de produits particuliers.
L’harmonisation des méthodes d’essai ne peut être réalisée de façon immédiate et, pour certains groupes de
produits, des Normes internationales et/ou des normes nationales qui ne concordent pas avec cette méthode
horizontale, existent peut-être déjà. Lorsque de telles normes viendront en révision, il serait souhaitable de les
aligner sur la présente Norme internationale, si bien que, finalement, les seules divergences restantes seront celles
qui sont nécessaires pour des raisons techniques bien établies.
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NORME INTERNATIONALE o ISO
Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour
le dénombrement de Clostridium perfringens - Technique
/
par comptage des colonies
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale prescrit une méthode horizontale pour le dénombrement de Clostridium
perfringens revivifiables dans les produits destinés à la consommation humaine ou à l’alimentation animale.
2 Références normatives
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Au moment de la publication, les éditions indiquées
étaient en vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes des normes
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes internationales en vigueur
a un moment donné.
ISO 6887: 1983, Microbiologie - Directives générales pour la préparation des dilutions en vue de l’examen
microbiologique.
Règles générales pour les examens microbiologiques.
ISO 7218:1996, Microbiologie des aliments -
3 Définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les définitions suivantes s’appliquent.
Clostridium perfringens:
31
Bactéries qui forment des colonies caractéristiques (entourées d’un halo noir) dans le milieu sélectif spécifié et qui
donnent des réactions de confirmation positives lorsque l’essai est effectué conformément à la méthode prescrite
dans la présente Norme internationale.
NOTE - Pour des raisons pratiques, cette définition de Clos~~kGum perfringens ne décrit pas exclusivement les souches de
C. perfringens. En particulier, les essais de confirmation sont inadéquats pour distinguer C. perfringens des autres espèces de
Clostridium proches, mais moins communément rencontrées, telles que C. Paraperfrngens et C. absonum.
3.2 dénombrement de C. perfringens:
Détermination du nombre de bactéries Clostridium petiringens revivifiables et confirmées par millilitre ou par
gramme d’échantillon lorsque l’essai est effectué conformément à la méthode prescrite dans la présente Norme
internationale.
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0 ISO
ISO 7937: 1997(F)
4 Principe
4.1 Ensemencement des boîtes de Petri avec une quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le produit à
examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de la suspension mère dans le cas d’autres produits.
Dans les mêmes conditions, ensemencement des dilutions décimales obtenues à partir de l’échantillon pour essai
ou de la suspension mère dans le cas d’autres produits
Mélange avec un milieu sélectif (technique d’ensemencement dans la masse) et addition d’une couche du même
milieu par le dessus.
4.2 Incubation en anaérobiose des boîtes à 35 “C ou 37 “C pendant 20 h. La température doit faire l’objet d’un
accord entre les parties concernées et doit être indiquée dans le rapport d’essai.
4.3 Dénombrement des colonies caractéristiques.
4.4 Confirmation du nombre de colonies caractéristiques et calcul du nombre de C. perfringens par millilitre ou par
gramme d’échantillon.
5 Diluant, milieux de culture et réactifs
5.1 Généralités
Voir I’ISO 7218.
5.2 Diluant
Voir I’ISO 6887 et toute norme spécifique traitant du produit à examiner.
5.3 Gélose tryptose-sulfite à la cyclosérine (SC) exempte de jaune d’oeuf l)
53.1 Milieu de base
5.3.1 .l Composition
Ttyptose a)
1590 g
Sojatone a)
50 g
Extrait de levure
590 g
Bisulfite disodique (Na,S,O,), anhydre
190 g
Citrate de fer( Ill) ammoniacal b,
190 g
Agar-agar 9,0gà18,0gC)
Eau 1000 ml
a) Les dénominations “tryptose” et “sojatone” ne sont utilisées actuellement que par
certains fabricants de milieux. Tout autre digestat pancréatique de caséine ou de soja
fournissant des résultats comparables peut être utilisé.
b) II convient que ce réactif contienne au moins 15 % (m/m) de fer.
c) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
1) SC était désigné à l’origine comme TSC exempt d’EY (HAUSCHILD et HILSHEIMER. Appl. Mcrobiol., 27, 1974,
pp. 78-82.
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0 ISO
ISO 7937: 1997(F)
5.3.1.2 Préparation
Dissoudre les composants dans l’eau, en portant à ébullition.
Ajuster le pH de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,6 + 0,2 à 25 “C.
Répartir le milieu de base dans des flacons ou des fioles de capacité appropriée.
Stériliser pendant 15 min à 121 OC.
5.3.2 Solution de D-cyclosérine
5.3.2.1 Composition
D-cyclosérine a)
490 g
100 ml
Eau
a) Utiliser uniquement de la poudre blanche cristalline.
5.3.2.2 Préparation
Dissoudre la D-cyclosérine dans l’eau et stériliser la solution par filtration.
Conserver au réfrigérateur à + 3 “C + 2 OC.
Ne pas utiliser la solution plus de quatre semaines après sa préparation.
5.3.3 Milieu complet
Immédiatement avant de commencer la méthode d’ensemencement dans la masse (voir 9.2), ajouter 1 ml de la
solution de D-cyclosérine (5.3.2) pour chaque 100 ml de milieu de base stérile (5.3.1) fondu et refroidi à
47 “C k 2 “C.
5.4 Milieu thioglycolate liquide
5.4.1 Composition
Digestat enzymatique de caséine
15,o g
L-cystéine
03 g
D-glucose
53 g
Extrait de levure
590 g
Chlorure de sodium
23 g
Thioglycolate de sodium (mercaptoacétate)
095 g
Agar-agar 0,5 g à 2,0 g a)
Résazurine 0,001 g
Eau 1 000 ml
a) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
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0 ISO
ISO 7937: 1997(F)
5.4.2 Préparation
Dissoudre les composants dans l’eau en portant à ébullition.
Ajuster le pH de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,l k 0,2 à 25 “C.
Répartir le milieu dans des tubes par quantités de 10 ml et stériliser à 121 “C pendant 15 min.
Au moment de l’emploi, ce milieu doit être désaéré.
5.5 Milieu lactose sulfite (LS)
5.5.1 Milieu de base
5.5.1 .I Composition
Digestat enzymatique de caséine 590 g
Extrait de levure 23 g
Chlorure de sodium 23 g
Lactose
WI
Hydrochlorure de L-cystéine
093 g
1 000 ml
Eau
5.5.1.2 Préparation
Dissoudre les composants dans l’eau, en portant à ébullition si nécessaire.
Ajuster le pH de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,l + 0,2 à 25 OC.
Répartir le milieu par quantités de 8 ml dans des tubes à essai ou des flacons d’essai contenant des cloches de
Durham inversées (6.7) et stériliser à 121 “C pendant 15 min.
Le milieu peut être conservé au plus quatre semaines à + 3 “C t 2 OC.
5.5.2 Solution de bisulfite disodique anhydre
5.5.2.1 Composition
Bisulfite disodique (Na,S,O,) anhydre
192 g
100 ml
Eau
5.5.2.2 Préparation
Dissoudre le bisulfite disodique dans l’eau et stériliser la solution par filtration.
Utiliser la solution dans la journée.
4
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0 ISO
ISO 7937: 1997(F)
5.5.3 Solution de citrate de fer(lll) ammoniacal
5.5.3.1 Composition
Citrate de fer(lll) ammoniacal
Ig
100 ml
Eau
5.5.3.2 Prép
...
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