ISO 8655-8:2022
(Main)Piston-operated volumetric apparatus — Part 8: Photometric reference measurement procedure for the determination of volume
Piston-operated volumetric apparatus — Part 8: Photometric reference measurement procedure for the determination of volume
This document specifies the photometric reference measurement procedure for the determination of volume of piston-operated volumetric apparatus (POVA). The procedure is applicable to complete systems comprising the basic apparatus with a maximum nominal volume of 5 000 µl and all parts selected for use with the apparatus, disposable or reusable, involved in the measurement by delivery (Ex).
Appareils volumétriques à piston — Partie 8: Mode opératoire de mesure photométrique de référence pour la détermination de volumes
Le présent document spécifie un mode opératoire de mesure photométrique de référence pour la détermination du volume des appareils volumétriques à piston (AVAP). Le mode opératoire est applicable à des systèmes complets comprenant l’appareil de base présentant un volume nominal maximal de 5 000 µl et toutes les parties sélectionnées pour être utilisées avec l’appareil, à usage unique ou réutilisables, utilisés dans la mesure de la distribution (Ex).
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 8655-8
First edition
2022-04
Piston-operated volumetric
apparatus —
Part 8:
Photometric reference measurement
procedure for the determination of
volume
Appareils volumétriques à piston —
Partie 8: Mode opératoire de mesure photométrique de référence
pour la détermination de volumes
Reference number
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ISO 8655-8:2022(E)
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Published in Switzerland
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ISO 8655-8:2022(E)
Contents Page
Foreword .v
Introduction . vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 General requirements . 2
5 Test equipment .2
5.1 General . 2
5.2 Spectrophotometer . 2
5.3 Cuvette and mixer . . 2
5.4 Measuring devices . 3
5.5 Equipment used for solution preparation . 3
5.6 Balances . 3
5.7 Density meter . 4
5.8 pH meter . 4
6 Reagents . 4
6.1 General requirements . 4
6.2 Water . 4
6.3 Buffer solution . 4
6.4 Copper(II) chloride solution . 4
6.5 Ponceau S solutions . 4
6.6 Calibrator solutions . 5
6.7 Stability of solutions . 6
6.7.1 General . 6
6.7.2 Preservatives . 6
6.7.3 Light sensitivity . 6
6.7.4 Storage temperature . 6
7 Test conditions .6
7.1 General . 6
7.2 Test room . 6
7.3 Evaporation . 7
8 Procedure .7
8.1 General . 7
8.1.1 Summary . 7
8.1.2 Test conditions . 7
8.1.3 Test volume . 7
8.1.4 Number of measurements per volume to be tested . 8
8.2 System calibration . 8
8.2.1 General . 8
8.2.2 System calibration procedure . 8
8.2.3 Previous calibration . 8
8.3 Photometric procedure . 8
8.3.1 Preparation of cuvettes . 8
8.3.2 Zero of the spectrophotometer . 9
8.3.3 Starting absorbances . 9
8.3.4 Dispensing of test liquids . . . 9
8.3.5 Absorbance of the chromophore mixture. 9
8.3.6 Calculation of the delivered test volume . 9
8.4 Preparation . 9
8.5 Single-channel air displacement pipettes (in accordance with ISO 8655-2) . 10
8.5.1 General . 10
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ISO 8655-8:2022(E)
8.5.2 Test cycle . 10
8.6 Multi-channel pipettes (in accordance with ISO 8655-2) . 11
8.7 Positive displacement pipettes (in accordance with ISO 8655-2) . 11
8.8 Burettes (in accordance with ISO 8655-3) . 11
8.9 Dispensers (in accordance with ISO 8655-5) .12
8.10 Syringes (in accordance with ISO 8655-9) .12
8.10.1 General .12
8.10.2 Test cycle . 12
9 Evaluation .13
9.1 Calculation of volume . 13
9.1.1 Calibration constant . 13
9.1.2 Volume of test liquid .13
9.1.3 Temperature correction . 14
9.1.4 Mean volume . 14
9.2 Systematic error of measurement . 14
9.3 Random error of measurement . 15
9.4 Uncertainty of measurement .15
10 Reporting of results .15
Annex A (normative) Calculation of volumes from balance readings .17
Bibliography .18
iv
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ISO 8655-8:2022(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 48, Laboratory equipment, in collaboration
with the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee CEN/TC 332, Laboratory
equipment, in accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna
Agreement).
A list of all parts in the ISO 8655 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
v
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ISO 8655-8:2022(E)
Introduction
The ISO 8655 series addresses the needs of:
— manufacturers, as a basis for quality control including, where appropriate, the issuance of
manufacturer’s declarations;
— calibration laboratories, test houses, users of the equipment and other bodies as a basis for
independent calibration, testing, verification, and routine tests.
The tests specified in the ISO 8655 series are intended to be carried out by trained personnel.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 8655-8:2022(E)
Piston-operated volumetric apparatus —
Part 8:
Photometric reference measurement procedure for the
determination of volume
1 Scope
This document specifies the photometric reference measurement procedure for the determination
of volume of piston-operated volumetric apparatus (POVA). The procedure is applicable to complete
systems comprising the basic apparatus with a maximum nominal volume of 5 000 µl and all parts
selected for use with the apparatus, disposable or reusable, involved in the measurement by delivery
(Ex).
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 1042, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks
ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
ISO 8655-1:2022, Piston-operated volumetric apparatus — Part 1: Terminology, general requirements and
user recommendations
ISO 8655-2, Piston-operated volumetric apparatus — Part 2: Pipettes
ISO 8655-3, Piston-operated volumetric apparatus — Part 3: Burettes
ISO 8655-5, Piston-operated volumetric apparatus — Part 5: Dispensers
ISO 8655-9, Piston-operated volumetric apparatus — Part 9: Manually operated precision laboratory
syringes
ISO/IEC Guide 2, Standardization and related activities — General vocabulary
ISO/IEC Guide 99:2007, International vocabulary of metrology — Basic and general concepts and
associated terms (VIM)
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in in ISO 8655-1, ISO/IEC Guide 2,
and ISO/IEC Guide 99 apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
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ISO 8655-8:2022(E)
4 General requirements
When performing calibrations according to the reference measurement procedure described in
this document, all provisions and requirements of this document shall be followed or exceeded (e.g.,
performing 30 instead of 10 replicates per volume). If one or more of those requirements is not followed,
conformity to this document shall not be claimed.
5 Test equipment
5.1 General
Measurement equipment for spectrophotometry, weighing, temperature, density, pH, humidity, and
barometric pressure shall be traceable to the international system of units (SI) and shall meet the
uncertainty requirements of this document.
NOTE An example of the calculation of the expanded uncertainty of the photometric reference procedure is
[1]
given in ISO/TR 16153 .
5.2 Spectrophotometer
The visible range spectrophotometer shall meet the performance requirements specified in Table 1 at
520 nm and 730 nm.
Table 1 — Performance requirements of the spectrophotometric system
Parameter Requirement
a
Photometric repeatability at A = 0,0 AU 0,000 05 AU
a
Photometric repeatability at A = 0,5 AU 0,000 05 AU
a
Photometric repeatability at A = 1,0 AU 0,000 10 AU
a
Photometric repeatability at A = 1,5 AU 0,000 15 AU
b
Centre wavelength reproducibility 0,025 nm
b
Bandwidth reproducibility 0,050 nm
c
Reproducibility of cuvette attenuance 0,000 10 AU
d
ND glass calibration standards
Uncertainty at A = 0,5 AU 0,001 5 AU
Uncertainty at A = 1,0 AU 0,002 5 AU
Uncertainty at A = 1,5 AU 0,003 0 AU
a
Repeatability to be measured as standard deviation using the same reading procedures, settings and conditions as
are used during the photometric volume determination. Adjusting integration time (sample averaging time), bandpass (slit
width), and the number of replicate readings are acceptable means of improving the spectrophotometer’s repeatability.
b
Wavelength and bandwidth reproducibility applies to instruments where wavelength and bandwidth are adjustable. It
does not apply to fixed-wavelength interference filter instruments.
c
Cuvette attenuance reproducibility applies to the spectrophotometer and cuvette tested together. An example is given
[1]
in ISO/TR 16153 .
d
Applicable when use of ND glass standard is specified by the manufacturer.
5.3 Cuvette and mixer
The cuvette shall be made of a material with at least 99 % internal optical transmittance at 520 nm and
730 nm. The cuvette shall have an optical path length of 20 mm ± 2 mm. If multiple cuvettes are used,
each cuvette shall have a path length within ± 0,2 mm of the chosen nominal.
A mixing mechanism shall be fitted to the cuvette holder of the spectrophotometer, such that the
cuvette’s contents can be mixed while the cuvette remains seated in the spectrophotometer. Mixing
2
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shall ensure that the liquid contents are mixed to within 0,010 % of complete mixing. Mixing speed
shall be sufficient to wash down dye solution deposited on the cuvette side wall.
Mixing mechanisms, such as orbital mixing, a glass-covered magnetic stir bar or a PTFE-covered
(polytetrafluoroethylene, PTFE) magnetic stir bar may be used and shall be verified to meet this
requirement.
NOTE Complete mixing is achieved when re-mixing and re-measuring the absorbance produces a systematic
change no larger than the required value.
5.4 Measuring devices
The minimum requirements for each relevant measuring device are specified in Table 2.
Table 2 — Minimum requirements for measuring devices
Device Resolution Expanded uncertainty of meas-
urement (k = 2)
Thermometer for liquids 0,01 °C 0,2 °C
Thermometer for room air 0,1 °C 0,3 °C
Hygrometer 1 % relative humidity 5 % relative humidity
Barometer 0,1 kPa 1 kPa
Timing device 1 s not applicable
NOTE Acceptable means of measuring the temperature of a solution in a cuvette include a thermistor bead
probe immersed in the solution within the cuvette; a suitable contact thermometer on the outside of the cuvette;
or a suitable infrared thermometer.
5.5 Equipment used for solution preparation
Solutions shall be prepared by gravimetric or volumetric means.
The liquid components of solutions may be weighed using balances, which shall meet the requirements
of Table 3.
For volumetric preparations, class A glassware meeting the maximum permissible errors for narrow
neck flasks of ISO 1042 shall be used.
5.6 Balances
Balances used for accurate weighing of dry reagents, preparation of calibrator solutions, and filling of
cuvettes shall meet the requirements specified in Table 3.
Table 3 — Minimum requirements for balances
Minimum mass to be Resolution Repeatability Expanded uncertainty in
a
weighed use (k = 2)
(d) (s)
g mg mg mg
1,0 0,01 0,02 0,04
10 0,1 0,2 0,4
100 1 2 4
1 000 10 20 40
a
Uncertainty in use is determined according to Reference [2] at the minimum mass listed in the table.
Weighing results for liquids shall be corrected for density, temperature and air buoyancy when
determining volume, see Annex A.
3
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5.7 Density meter
Densities of the chromophore solutions shall be measured for each lot of solutions using a temperature-
controlled density meter with an uncertainty of 0,000 05 g/ml (k = 2) or better.
5.8 pH meter
The pH meter is used for the preparation of the solutions in 6.3, 6.4, 6.5, and 6.6. It shall be calibrated
with reference buffer solutions over a range from pH 4 to pH 7 including pH 6,00 according to
manufacturer’s instructions. A reference material having a certified value in the range of pH 6,00 ± 0,05
and an uncertainty (k = 2) of 0,02 pH units, or better is required for comparison.
6 Reagents
6.1 General requirements
All components used in the preparation of reagent solutions shall be of at least 99 % analytical purity
unless otherwise stated.
NaOH (CAS No. 1310-73-2) and HCl (CAS No. 7647-01-0) solutions may be used for adjustment of pH.
The measured pH value of the reagent solutions in 6.3, 6.4, 6.5 and 6.6 shall be compared to the pH 6
certified reference material in 5.8.
6.2 Water
Water (CAS No. 7732-18-5) used for preparing chromophore solutions shall comply with Grade 1 in
accordance with ISO 3696:1987.
6.3 Buffer solution
Dissolve 4,08 g of potassium hydrogen phthalate (CAS No. 877-24-7) and 3,81 g of tetrasodium
ethylenediaminetetraacetic acid dihydrate (EDTA, CAS No. 10378-23-1) per litre of water, adjust to pH
6,0 ± 0,1, and filter through a 0,2 µm filter.
6.4 Copper(II) chloride solution
Dissolve 1,12 g/l of copper(II) chloride dihydrate (CuCl ·2H O) (CAS No. 10125-13-0) in the phthalate/
2 2
EDTA buffer and adjust to pH 6,0 ± 0,1. Filter the resulting solution through a 0,2 µm filter.
6.5 Ponceau S solutions
Dissolve Ponceau S (CAS No. 6226-79-5) in water, adjust to pH 6,0 ± 0,1, and then filter the dye solution
through a 0,2 µm filter. Table 4 indicates the amount of Ponceau S dye (which can contain up to 15 %
water) per litre of solution. These Ponceau S solutions are used for the preparation of calibrator
solutions (see 6.6) and as test liquids.
NOTE 1 Ponceau S solutions prepared according to Table 4 are suitable to measure test volumes from 0,1 µl to
5 000 µl in cuvettes as specified in 5.3.
NOTE 2 When prepared as described in this subclause, the solutions will fulfil the density and viscosity
requirements listed in Table 4.
4
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Table 4 — Ponceau S solutions
a
Ponceau S Test volume V Ponceau S dye Relative density Viscosity at
S
solution 20 °C
No. µl g/1 000 ml (vs. H O) mPa · s
2
1 200 ≤ V ≤ 5 000 0,024 1,000 to 1,004 0,9 to 1,1
S
2 50 ≤ V < 200 0,052 1,000 to 1,004 0,9 to 1,1
S
3 10 ≤ V < 50 0,165 1,000 to 1,004 0,9 to 1,1
S
4 2 ≤ V < 10 0,745 1,000 to 1,004 0,9 to 1,1
S
5 0,5 ≤ V < 2 3,72 1,000 to 1,004 0,9 to 1,1
S
6 0,1 ≤ V < 0,5 14,9 1,000 to 1,016 0,9 to 1,1
S
a
Amounts listed in this table are target values. Actual amounts may vary up to ± 5 % from the target value, provided the
same batch of solutions is used for the preparation of calibrator solutions (6.6) and as test liquids (8.3).
6.6 Calibrator solutions
Prepare a calibrator solution for each selected volume V to be tested. Mix a measured volume of
S
Ponceau S solution (see Table 4) with a measured volume of copper(II) chloride solution. Determine the
volumes of each solution as follows:
Ponceau S solution: use a 10-fold amount of the desired test volume V (for n = 10 replicates) and
S
multiply it by the preparation factor given in Table 5.
Copper(II) solution: multiply the volume V of copper(II) chloride solution in the cuvette by the
C0
preparation factor given in Table 5.
NOTE V is defined in 8.3.1.
C0
Table 5 — Examples for calibrator solutions
Test volume Ponceau S solu- Preparation Ponceau S solution to CuCl solution to
2
a
tion No. factor measure measure
V
S
V V
PS C
µl ml ml
0,1 6 1 000 1 5 000
0,2 6 1 000 2 5 000
0,5 5 1 000 5 5 000
1 5 1 000 10 5 000
2 4 400 8 2 000
5 4 200 10 1 000
10 3 100 10 500
20 3 100 20 500
50 2 100 50 500
100 2 20 20 100
200 1 20 40 100
500 1 20 100 100
a
Examples in this table are based on V = 5 ml.
C0
Calculate the dilution ratio R according to Formula (1):
V
PS
R= (1)
VV+
PS C
5
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ISO 8655-8:2022(E)
where
R is the dilution ratio;
V is the actual measured volume of Ponceau S so
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 8655-8
Première édition
2022-04
Appareils volumétriques à piston —
Partie 8:
Mode opératoire de mesure
photométrique de référence pour la
détermination de volumes
Piston-operated volumetric apparatus —
Part 8: Photometric reference measurement procedure for the
determination of volume
Numéro de référence
ISO 8655-8:2022(F)
© ISO 2022
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ISO 8655-8:2022(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2022
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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
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CH-1214 Vernier, Genève
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Web: www.iso.org
Publié en Suisse
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ISO 8655-8:2022(F)
Sommaire Page
Avant-propos .v
Introduction . vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions . 1
4 Exigences générales . .2
5 Équipement d’essai . 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Spectrophotomètre . 2
5.3 Cuve et agitateur . 2
5.4 Dispositifs de mesure . 3
5.5 Équipement utilisé pour la préparation des solutions . 3
5.6 Balances . 3
5.7 Densimètre . . 4
5.8 pH-mètre . 4
6 Réactifs . 4
6.1 Exigences générales . 4
6.2 Eau . 4
6.3 Solution tampon . 4
6.4 Solution de chlorure de cuivre (II) . 4
6.5 Solutions de Ponceau S . 5
6.6 Solutions d’étalonnage . 5
6.7 Stabilité des solutions . 6
6.7.1 Généralités . 6
6.7.2 Conservateurs . 6
6.7.3 Photosensibilité . 6
6.7.4 Température de stockage . 6
7 Conditions d’essai . 7
7.1 Généralités . 7
7.2 Laboratoire d’essai . 7
7.3 Évaporation . 7
8 Mode opératoire . 8
8.1 Généralités . 8
8.1.1 Résumé . 8
8.1.2 Conditions d’essai . 8
8.1.3 Volume d’essai . 8
8.1.4 Nombre de mesurages par volume à soumettre à essai . 8
8.2 Étalonnage du système . 8
8.2.1 Généralités . 8
8.2.2 Mode opératoire d’étalonnage du système . 8
8.2.3 Étalonnage précédent . 9
8.3 Mode opératoire photométrique . 9
8.3.1 Préparation des cuves . 9
8.3.2 Zéro du spectrophotomètre . 9
8.3.3 Absorbances de départ . 9
8.3.4 Distribution du liquide d’essai . 9
8.3.5 Absorbance du mélange de chromophore . 10
8.3.6 Calcul du volume d’essai distribué . 10
8.4 Préparation . 10
8.5 Pipettes monocanal à déplacement d’air (conformément à l’ISO 8655-2) . 10
8.5.1 Généralités . 10
iii
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ISO 8655-8:2022(F)
8.5.2 Cycle d’essai . 10
8.6 Pipettes multicanaux (conformément à l’ISO 8655-2) .12
8.7 Pipettes à déplacement positif (conformément à l’ISO 8655-2) . .12
8.8 Burettes (conformément à l’ISO 8655-3) .12
8.9 Distributeurs (conformément à l’ISO 8655-5) .12
8.10 Seringues (conformément à l’ISO 8655-9) . 13
8.10.1 Généralités .13
8.10.2 Cycle d’essai . 13
9 Évaluation .14
9.1 Calcul du volume . 14
9.1.1 Constante d’étalonnage . 14
9.1.2 Volume du liquide d’essai . 14
9.1.3 Correction de la température . 15
9.1.4 Volume moyen . 15
9.2 Erreur systématique de mesure . 15
9.3 Erreur de mesurage aléatoire . 16
9.4 Incertitude de mesure . 16
10 Consignation des résultats .16
Annexe A (normative) Calcul de volumes à partir des relevés de la balance .18
Bibliographie .20
iv
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ISO 8655-8:2022(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www.iso.org/iso/fr/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 48, Équipement de laboratoire, en
collaboration avec le comité technique CEN/TC 332, Équipement de laboratoire, du Comité européen de
normalisation (CEN) conformément à l’accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de
Vienne).
Une liste de toutes les parties de la série ISO 8655 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
v
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ISO 8655-8:2022(F)
Introduction
La série de normes ISO 8655 répond aux besoins des personnes suivantes:
— fabricants, en servant de base pour le contrôle de la qualité y compris, le cas échéant, la publication
des déclarations du fabricant;
— laboratoires d’étalonnage, laboratoires d’essai, utilisateurs de l’équipement et autres organismes,
en servant de base pour les étalonnages indépendants, les essais, les vérifications et les essais
de routine.
Les essais spécifiés dans la série de normes ISO 8655 sont destinés à être réalisés par du personnel
qualifié.
vi
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NORME INTERNATIONALE ISO 8655-8:2022(F)
Appareils volumétriques à piston —
Partie 8:
Mode opératoire de mesure photométrique de référence
pour la détermination de volumes
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie un mode opératoire de mesure photométrique de référence pour
la détermination du volume des appareils volumétriques à piston (AVAP). Le mode opératoire est
applicable à des systèmes complets comprenant l’appareil de base présentant un volume nominal
maximal de 5 000 µl et toutes les parties sélectionnées pour être utilisées avec l’appareil, à usage
unique ou réutilisables, utilisés dans la mesure de la distribution (Ex).
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 1042, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai
ISO 8655-1:2022, Appareils volumétriques à piston — Partie 1: Définitions, exigences générales et
recommandations pour l’utilisateur
ISO 8655-2, Appareils volumétriques à piston — Partie 2: Pipettes
ISO 8655-3, Appareils volumétriques à piston — Partie 3: Burettes
ISO 8655-5, Appareils volumétriques à piston — Partie 5: Distributeurs
ISO 8655-9, Appareils volumétriques à piston — Partie 9: Seringues de laboratoire haute précision pour
utilisation manuelle
Guide ISO/IEC 2, Normalisation et activités connexes — Vocabulaire général
Guide ISO/IEC 99:2007, Vocabulaire international de métrologie — Concepts fondamentaux et généraux
et termes associés (VIM)
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions donnés dans l’ISO 8655-1, le
Guide ISO/IEC 2 et le Guide ISO/IEC 99 s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/ .
1
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ISO 8655-8:2022(F)
4 Exigences générales
Lors de la réalisation d’étalonnages conformément au mode opératoire de mesure de référence décrit
dans le présent document, toutes les dispositions et exigences du présent document doivent être
respectées, voire dépassées (30 réplicats par volume au lieu des 10 imposés, par exemple). Si une
ou plusieurs de ces exigences ne sont pas respectées, la conformité au présent document ne doit pas
être revendiquée.
5 Équipement d’essai
5.1 Généralités
L’équipement de mesure pour la spectrophotométrie, le pesage, la température, la masse volumique,
le pH, l’humidité et la pression barométrique doit être traçable par rapport au système international
d’unités (SI) et doit satisfaire aux exigences d’incertitude du présent document.
NOTE Un exemple de calcul de l’incertitude élargie d’une méthode photométrique de référence est donné
[1]
dans l’ISO/TR 16153 .
5.2 Spectrophotomètre
Le spectrophotomètre visible doit répondre aux exigences de performances conformément au Tableau 1
à 520 nm et 730 nm.
Tableau 1 — Exigences de performance du système spectrophotométrique
Paramètre Exigence
a
Répétabilité photométrique à A = 0,0 AU 0,000 05 AU
a
Répétabilité photométrique à A = 0,5 AU 0,000 05 AU
a
Répétabilité photométrique à A = 1,0 AU 0,000 10 AU
a
Répétabilité photométrique à A = 1,5 AU 0,000 15 AU
b
Reproductibilité de la longueur d’onde centrale 0,025 nm
b
Reproductibilité de la bande passante 0,050 nm
c
Reproductibilité de l’atténuation de la cuve 0,000 10 AU
d
Étalons en verre à densité neutre
Incertitude à A = 0,5 AU 0,001 5 AU
Incertitude à A = 1,0 AU 0,002 5 AU
Incertitude à A = 1,5 AU 0,003 0 AU
a
La répétabilité doit être mesurée comme un écart-type en utilisant les mêmes modes opératoires de lecture, paramètres
et conditions que ceux utilisés lors de la détermination photométrique du volume. L’ajustement du temps d’intégration
(temps de moyen de l’échantillon), du passage de bande (largeur de fente) et du nombre de relevés répétés est un moyen
acceptable d’améliorer la répétabilité du spectrophotomètre.
b
La répétabilité de la longueur d’onde et de la bande passante s’applique aux instruments dont la longueur d’onde et la
bande passante sont réglables. Elle ne s’applique pas aux instruments à filtre d’interférence à longueur d’onde fixe.
c
La reproductibilité de l’atténuation de la cuve s’applique au spectrophotomètre et à la cuve soumis ensemble à essai.
[1]
Un exemple est donné dans l’ISO/TR 16153 .
d
Applicable lorsque l’utilisation d’étalons en verre à densité neutre est spécifiée par le fabricant.
5.3 Cuve et agitateur
La cuve doit être constituée d’un matériau dont la transmittance optique interne est d’au moins 99 %
à 520 nm et 730 nm. La longueur du trajet optique de la cuve doit être de 20 mm ± 2 mm. En cas
2
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ISO 8655-8:2022(F)
d’utilisation de plusieurs cuves, chacune doit avoir une longueur de trajet de ± 0,2 mm par rapport à la
valeur nominale choisie.
Un mécanisme d’agitation doit être installé sur le support de cuve du spectrophotomètre, de sorte que
le contenu de la cuve puisse être agité pendant que la cuve reste dans le spectrophotomètre. L’agitation
doit permettre au contenu liquide d’être mélangé à 0,010 % maximum de l’agitation complète. La vitesse
d’agitation doit être suffisante pour laver la solution de colorant déposée sur la paroi latérale de la cuve.
Des mécanismes d’agitation, tels que l’agitation circulaire, une barre d’agitation aimantée recouverte
de verre ou une barre d’agitation aimantée recouverte de PTFE (polytétrafluoroéthylène) peuvent être
utilisés et leur conformité à cette exigence doit être vérifiée.
NOTE Une agitation complète est obtenue lorsqu’une nouvelle agitation et une nouvelle mesure de
l’absorbance produisent une variation systématique ne dépassant pas la valeur requise.
5.4 Dispositifs de mesure
Les exigences minimales pour chaque dispositif de mesure pertinent sont spécifiées dans le Tableau 2.
Tableau 2 — Exigences minimales en matière de dispositifs de mesure
Dispositif Résolution Incertitude de mesure élargie
(k = 2)
Thermomètre pour liquides 0,01 °C 0,2 °C
Thermomètre pour air ambiant 0,1 °C 0,3 °C
Hygromètre 1 % d’humidité relative 5 % d’humidité relative
Baromètre 0,1 kPa 1 kPa
Chronomètre 1 s non applicable
NOTE Les moyens tolérés de mesurer la température d’une solution dans une cuve incluent une sonde de
thermistance à billes immergée dans la solution contenue dans la cuve, un thermomètre de contact approprié
à l’extérieur de la cuve ou un thermomètre infrarouge adapté.
5.5 Équipement utilisé pour la préparation des solutions
Les solutions doivent être préparées par des moyens gravimétriques ou volumétriques.
Les composants liquides des solutions peuvent être pesés à l’aide de balances, qui doivent satisfaire aux
exigences du Tableau 3.
Pour les préparations volumétriques, de la verrerie de classe A respectant les erreurs maximales
tolérées pour les fioles à col étroit de l’ISO 1042 doit être utilisée.
5.6 Balances
Les balances utilisées pour le pesage précis des réactifs secs, la préparation des solutions d’étalonnage
et le remplissage des cuves doivent satisfaire aux exigences spécifiées dans le Tableau 3.
Tableau 3 — Exigences minimales pour les balances
Masse minimale à peser Résolution Répétabilité Incertitude élargie lors
a
de l’utilisation (k = 2)
(d) (s)
g mg mg mg
1,0 0,01 0,02 0,04
10 0,1 0,2 0,4
a
L’incertitude lors de l’utilisation est déterminée conformément à la Référence [2] à la masse minimale indiquée dans le
tableau.
3
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ISO 8655-8:2022(F)
Tableau 3 (suite)
Masse minimale à peser Résolution Répétabilité Incertitude élargie lors
a
de l’utilisation (k = 2)
(d) (s)
100 1 2 4
1 000 10 20 40
a
L’incertitude lors de l’utilisation est déterminée conformément à la Référence [2] à la masse minimale indiquée dans le
tableau.
Les résultats de pesage des liquides doivent être corrigés en fonction de la masse volumique, de la
température et de la poussée d’Archimède lors de la détermination du volume, voir l’Annexe A.
5.7 Densimètre
Les masses volumiques des solutions de chromophore doivent être mesurées pour chaque lot de
solutions à l’aide d’un densimètre à température contrôlée avec une incertitude de 0,000 05 g/ml (k = 2)
ou mieux.
5.8 pH-mètre
Le pH-mètre est utilisé pour la préparation des solutions en 6.3, 6.4, 6.5 et 6.6. Il doit être étalonné
avec des solutions tampons de référence sur une plage allant de pH 4 à pH 7, y compris pH 6,00,
conformément aux instructions du fabricant. Un matériau de référence ayant une valeur certifiée dans
la plage de pH 6,00 ± 0,05 et une incertitude (k = 2) de 0,02 unité de pH, ou mieux sont requis pour la
comparaison.
6 Réactifs
6.1 Exigences générales
Sauf indication contraire, tous les composants utilisés dans la préparation des solutions réactives
doivent présenter une pureté analytique de 99 %.
Des solutions de NaOH (nº CAS 1310-73-2) et de HCl (nº CAS 7647-01-0) peuvent être utilisées pour
ajuster le pH. La valeur de pH mesurée des solutions réactives en 6.3, 6.4, 6.5 et 6.6 doit être comparée
au matériau de référence certifié d’un pH 6 en 5.8.
6.2 Eau
L’eau (nº CAS 7732-18-5) utilisée pour la préparation de solutions de chromophore doit être conforme
à la Classe 1 conformément à l’ISO 3696:1987.
6.3 Solution tampon
Dissoudre 4,08 g d’hydrogénophtalate de potassium (nº CAS 877-24-7) et 3,81 g d’acide tétrasodique
éthylènediaminetétraacétique dihydraté (EDTA, nº CAS 10378-23-1) par litre d’eau, ajuster afin
d’obtenir un pH 6,0 ± 0,1 et filtrer à l’aide d’un filtre de 0,2 µm.
6.4 Solution de chlorure de cuivre (II)
Dissoudre 1,12 g/l de chlorure de cuivre (II) dihydraté (CuCl 2H O) (nº CAS 10125-13-0) dans le
2 2
tampon phtalate/EDTA et ajuster à pH 6,0 ± 0,1. Passer la solution à travers un filtre de 0,2 µm.
4
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ISO 8655-8:2022(F)
6.5 Solutions de Ponceau S
Dissoudre le Ponceau S (nº CAS 6226-79-5) dans de l’eau, ajuster le pH jusqu’à une valeur de 6,0 ± 0,1, puis
filtrer la solution de colorant à l’aide d’un filtre de 0,2 µm. Le Tableau 4 indique la quantité de colorant
Ponceau S (qui peut contenir jusqu’à 15 % d’eau) par litre de solution. Ces solutions de Ponceau S sont
utilisées dans la préparation des solutions d’étalonnage (voir 6.6) et comme liquides d’essai.
NOTE 1 Les solutions de Ponceau S préparées conformément au Tableau 4 sont adaptées pour mesurer des
volumes d’essai de 0,1 µl à 5 000 µl dans des cuves comme spécifié en 5.3.
NOTE 2 Lorsqu’elles sont préparées comme décrit dans ce paragraphe, les solutions satisfont aux exigences
en matière de masse volumique et de viscosité indiquées dans l
...
FINAL
INTERNATIONAL ISO/FDIS
DRAFT
STANDARD 8655-8
ISO/TC 48
Piston-operated volumetric
Secretariat: DIN
apparatus —
Voting begins on:
2021-11-17
Part 8:
Voting terminates on:
Photometric reference measurement
2022-01-12
procedure for the determination of
volume
Appareils volumétriques à piston —
Partie 8: Méthode photométrique de mesurage de référence pour la
détermination du volume
ISO/CEN PARALLEL PROCESSING
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO
SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION
OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPOR TING
DOCUMENTATION.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
Reference number
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNO-
ISO/FDIS 8655-8:2021(E)
LOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON
OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE
LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STAN-
DARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
NATIONAL REGULATIONS. © ISO 2021
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ISO/FDIS 8655-8:2021(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2021
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
or ISO’s member body in the country of the requester.
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CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
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Website: www.iso.org
Published in Switzerland
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ISO/FDIS 8655-8:2021(E)
Contents Page
Foreword .v
Introduction . vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 General requirements . 2
5 Test equipment .2
5.1 General . 2
5.2 Spectrophotometer . 2
5.3 Cuvette and mixer . . 2
5.4 Measuring devices . 3
5.5 Equipment used for solution preparation . 3
5.6 Balances . 3
5.7 Density meter . 4
5.8 pH meter . 4
6 Reagents . 4
6.1 General requirements . 4
6.2 Water . 4
6.3 Buffer solution . 4
6.4 Copper(II) chloride solution . 4
6.5 Ponceau S solutions . 4
6.6 Calibrator solutions . 5
6.7 Stability of solutions . 6
6.7.1 General . 6
6.7.2 Preservatives . 6
6.7.3 Light sensitivity . 6
6.7.4 Storage temperature . 6
7 Test conditions .6
7.1 General . 6
7.2 Test room . 6
7.3 Evaporation . 7
8 Procedure .7
8.1 General . 7
8.1.1 Summary . 7
8.1.2 Test conditions . 7
8.1.3 Test volume . 7
8.1.4 Number of measurements per volume to be tested . 8
8.2 System calibration . 8
8.2.1 General . 8
8.2.2 System calibration procedure . 8
8.2.3 Previous calibration . 8
8.3 Photometric procedure . 8
8.3.1 Preparation of cuvettes . 8
8.3.2 Zero of the spectrophotometer . 9
8.3.3 Starting absorbances . 9
8.3.4 Dispensing of samples . 9
8.3.5 Absorbance of the chromophore mixture. 9
8.3.6 Calculation of the delivered test volume . 9
8.4 Preparation . 9
8.5 Single-channel air displacement pipettes (in accordance with ISO 8655-2) . 10
8.5.1 General . 10
iii
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ISO/FDIS 8655-8:2021(E)
8.5.2 Test cycle . 10
8.6 Multi-channel pipettes (in accordance with ISO 8655-2) . 11
8.7 Positive displacement pipettes (in accordance with ISO 8655-2) . 11
8.8 Burettes (in accordance with ISO 8655-3) . 11
8.9 Dispensers (in accordance with ISO 8655-5) .12
8.10 Syringes (in accordance with ISO 8655-9) .12
8.10.1 General .12
8.10.2 Test cycle .12
9 Evaluation .13
9.1 Calculation of volume . 13
9.1.1 Calibration constant .13
9.1.2 Volume of test liquid .13
9.1.3 Temperature correction . 14
9.1.4 Mean volume . 14
9.2 Systematic error of measurement . 14
9.3 Random error of measurement . 15
9.4 Uncertainty of measurement .15
10 Reporting of results .15
Annex A (normative) Calculation of volumes from balance readings .17
Bibliography .18
iv
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ISO/FDIS 8655-8:2021(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 48, Laboratory equipment, in collaboration
with the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee CEN/TC 332, Laboratory
equipment, in accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna
Agreement).
A list of all parts in the ISO 8655 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
v
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ISO/FDIS 8655-8:2021(E)
Introduction
The ISO 8655 series addresses the needs of:
— manufacturers, as a basis for quality control including, where appropriate, the issuance of
manufacturer’s declarations;
— calibration laboratories, test houses, users of the equipment and other bodies as a basis for
independent calibration, testing, verification, and routine tests.
The tests specified in the ISO 8655 series are intended to be carried out by trained personnel.
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FINAL DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/FDIS 8655-8:2021(E)
Piston-operated volumetric apparatus —
Part 8:
Photometric reference measurement procedure for the
determination of volume
1 Scope
This document specifies the photometric reference measurement procedure for the determination
of volume of piston-operated volumetric apparatus (POVA). The procedure is applicable to complete
systems comprising the basic apparatus with a maximum nominal volume of 5 000 µl and all parts
selected for use with the apparatus, disposable or reusable, involved in the measurement by delivery
(Ex).
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 1042, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks
ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
1)
ISO 8655-1:— , Piston-operated volumetric apparatus — Part 1: Terminology, general requirements and
user recommendations
ISO 8655-2, Piston-operated volumetric apparatus — Part 2: Pipettes
ISO 8655-3, Piston-operated volumetric apparatus — Part 3: Burettes
ISO 8655-5, Piston-operated volumetric apparatus — Part 5: Dispensers
ISO 8655-9, Piston-operated volumetric apparatus — Part 9: Manually operated precision laboratory
syringes
ISO/IEC Guide 2, Standardization and related activities — General vocabulary
ISO/IEC Guide 99:2007, International vocabulary of metrology — Basic and general concepts and
associated terms (VIM)
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in in ISO 8655-1, ISO/IEC Guide 2,
and ISO/IEC Guide 99 apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
1) Under preparation. Stage at the time of publication: ISO/FDIS 8655-1.
1
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ISO/FDIS 8655-8:2021(E)
4 General requirements
When performing calibrations according to the reference measurement procedure described in
this document, all provisions and requirements of this document shall be followed or exceeded (e.g.,
performing 30 instead of 10 replicates per volume). If one or more of those requirements is not followed,
conformity to this document shall not be claimed.
5 Test equipment
5.1 General
Measurement equipment for spectrophotometry, weighing, temperature, density, pH, humidity, and
barometric pressure shall be traceable to the international system of units (SI) and shall meet the
uncertainty requirements of this document.
NOTE An example of the calculation of the expanded uncertainty of the photometric reference procedure is
[1]
given in ISO/TR 16153 .
5.2 Spectrophotometer
The visible range spectrophotometer shall meet the performance requirements specified in Table 1 at
520 nm and 730 nm.
Table 1 — Performance requirements of the spectrophotometric system
Parameter Requirement
a
Photometric repeatability at A = 0,0 AU 0,000 05 AU
a
Photometric repeatability at A = 0,5 AU 0,000 05 AU
a
Photometric repeatability at A = 1,0 AU 0,000 10 AU
a
Photometric repeatability at A = 1,5 AU 0,000 15 AU
b
Centre wavelength reproducibility 0,025 nm
b
Bandwidth reproducibility 0,050 nm
c
Reproducibility of cuvette attenuance 0,000 10 AU
d
ND glass calibration standards
Uncertainty at A = 0,5 AU 0,001 5 AU
Uncertainty at A = 1,0 AU 0,002 5 AU
Uncertainty at A = 1,5 AU 0,003 0 AU
a
Repeatability to be measured as standard deviation using the same reading procedures, settings and conditions as
are used during the photometric volume determination. Adjusting integration time (sample averaging time), bandpass (slit
width), and the number of replicate readings are acceptable means of improving the spectrophotometer’s repeatability.
b
Wavelength and bandwidth reproducibility applies to instruments where wavelength and bandwidth are adjustable. It
does not apply to fixed-wavelength interference filter instruments.
c
Cuvette attenuance reproducibility applies to the spectrophotometer and cuvette tested together. An example is given
[1]
in ISO/TR 16153 .
d
Applicable when use of ND glass standard is specified by the manufacturer.
5.3 Cuvette and mixer
The cuvette shall be made of a material with at least 99 % internal optical transmittance at 520 nm and
730 nm. The cuvette shall have an optical path length of 20 mm ± 2 mm. If multiple cuvettes are used,
each cuvette shall have a path length within ± 0,2 mm of the chosen nominal.
A mixing mechanism shall be fitted to the cuvette holder of the spectrophotometer, such that the
cuvette’s contents can be mixed while the cuvette remains seated in the spectrophotometer. Mixing
2
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ISO/FDIS 8655-8:2021(E)
shall ensure that the liquid contents are mixed to within 0,010 % of complete mixing. Mixing speed
shall be sufficient to wash down dye solution deposited on the cuvette side wall.
Mixing mechanisms, such as orbital mixing, a glass-covered magnetic stir bar or a PTFE-covered
(Polytetrafluoroethylene, PTFE) magnetic stir bar may be used and shall be verified to meet this
requirement.
NOTE Complete mixing is achieved when re-mixing and re-measuring the absorbance produces a systematic
change no larger than the required value.
5.4 Measuring devices
The minimum requirements for each relevant measuring device are specified in Table 2.
Table 2 — Minimum requirements for measuring devices
Device Resolution Expanded uncertainty of meas-
urement (k = 2)
Thermometer for liquids 0,01 °C 0,2 °C
Thermometer for room air 0,1 °C 0,3 °C
Hygrometer 1 % relative humidity 5 % relative humidity
Barometer 0,1 kPa 1 kPa
Timing device 1 s not applicable
NOTE Acceptable means of measuring the temperature of a solution in a cuvette include a thermistor bead
probe immersed in the solution within the cuvette; a suitable contact thermometer on the outside of the cuvette;
or a suitable infrared thermometer.
5.5 Equipment used for solution preparation
Solutions shall be prepared by gravimetric or volumetric means.
The liquid components of solutions may be weighed using balances, which shall meet the requirements
of Table 3.
For volumetric preparations, class A glassware meeting the maximum permissible errors for narrow
neck flasks of ISO 1042 shall be used.
5.6 Balances
Balances used for accurate weighing of dry reagents, preparation of calibrator solutions, and filling of
cuvettes shall meet the requirements specified in Table 3.
Table 3 — Minimum requirements for balances
Minimum mass to be Resolution Repeatability Expanded uncertainty in
a
weighed use (k = 2)
(d) (s)
g mg mg mg
1,0 0,01 0,02 0,04
10 0,1 0,2 0,4
100 1 2 4
1 000 10 20 40
a
Uncertainty in use is determined according to Reference [2] at the minimum mass listed in the table.
Weighing results for liquids shall be corrected for density, temperature and air buoyancy when
determining volume, see Annex A.
3
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5.7 Density meter
Densities of the chromophore solutions shall be measured for each lot of solutions using a temperature-
controlled density meter with an uncertainty of 0,000 05 g/ml (k = 2) or better.
5.8 pH meter
The pH meter is used for the preparation of the solutions in 6.3, 6.4, 6.5, and 6.6. It shall be calibrated
with reference buffer solutions over a range from pH 4 to pH 7 including pH 6,00 according to
manufacturer’s instructions. A reference material having a certified value in the range of pH 6,00 ± 0,05
and an uncertainty (k = 2) of 0,02 pH units, or better is required for comparison.
6 Reagents
6.1 General requirements
All components used in the preparation of reagent solutions shall be of at least 99 % analytical purity
unless otherwise stated.
NaOH (CAS No. 1310-73-2) and HCl (CAS No. 7647-01-0) solutions may be used for adjustment of pH.
The measured pH value of the reagent solutions in 6.3, 6.4, 6.5 and 6.6 shall be compared to the pH 6,00
certified reference material in 5.8.
6.2 Water
Water (CAS No. 7732-18-5) used for preparing chromophore solutions shall comply with Grade 1 in
accordance with ISO 3696:1987.
6.3 Buffer solution
Dissolve 4,08 g of potassium hydrogen phthalate (CAS No. 877-24-7) and 3,81 g of tetrasodium
ethylenediaminetetraacetic acid dihydrate (EDTA, CAS No. 10378-23-1) per litre of water, adjust to pH
6,0 ± 0,1, and filter through a 0,2 µm filter.
6.4 Copper(II) chloride solution
Dissolve 1,12 g/l of copper(II) chloride dihydrate (CuCl ·2H O) (CAS No. 10125-13-0) in the phthalate/
2 2
EDTA buffer and adjust to pH 6,0 ± 0,1. Filter the resulting solution through a 0,2 µm filter.
6.5 Ponceau S solutions
Dissolve Ponceau S (CAS No. 6226-79-5) in water, adjust to pH 6,0 ± 0,1, and then filter the dye solution
through a 0,2 µm filter. Table 4 indicates the amount of Ponceau S dye (which can contain up to 15 %
water) per litre of solution. These Ponceau S solutions are used for the preparation of calibrator
solutions (see 6.6) and as test liquids.
NOTE 1 Ponceau S solutions prepared according to Table 4 are suitable to measure test volumes from 0,1 µl to
5 000 µl in cuvettes as specified in 5.3.
NOTE 2 When prepared as described in this subclause, the solutions will fulfil the density and viscosity
requirements listed in Table 4.
4
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Table 4 — Ponceau S solutions
a
Ponceau S Test volume V Ponceau S dye Relative density Viscosity at
S
solution 20 °C
No. µl g/1 000 ml (vs. H O) mPa · s
2
1 200 ≤ V ≤ 5 000 0,024 1,000 to 1,004 0,9 to 1,1
S
2 50 ≤ V < 200 0,052 1,000 to 1,004 0,9 to 1,1
S
3 10 ≤ V < 50 0,165 1,000 to 1,004 0,9 to 1,1
S
4 2 ≤ V < 10 0,745 1,000 to 1,004 0,9 to 1,1
S
5 0,5 ≤ V < 2 3,72 1,000 to 1,004 0,9 to 1,1
S
6 0,1 ≤ V < 0,5 14,9 1,000 to 1,016 0,9 to 1,1
S
a
Amounts listed in this table are target values. Actual amounts may vary up to ± 5 % from the target value, provided the
same batch of solutions is used for the preparation of calibrator solutions (6.6) and as test liquids (8.3).
6.6 Calibrator solutions
Prepare a calibrator solution for each selected volume V to be tested. Mix a measured volume of
S
Ponceau S solution (see Table 4) with a measured volume of copper(II) chloride solution. Determine the
volumes of each solution as follows:
Ponceau S solution: use a 10-fold amount of the desired test volume V (for n = 10 replicates) and
S
multiply it by the preparation factor given in Table 5.
Copper(II) solution: multiply the volume V of copper(II) chloride solution in the cuvette by the
C0
preparation factor given in Table 5.
NOTE V is de
...
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