EN 16939:2017
(Main)Animal feeding stuffs: Methods of sampling and analysis - Detection of tylosin, spiramycin and virginiamycin - Thin Layer Chromatography and bioautography
Animal feeding stuffs: Methods of sampling and analysis - Detection of tylosin, spiramycin and virginiamycin - Thin Layer Chromatography and bioautography
The method makes it possible to detect and identify spiramycin, tylosin and virginiamycin in animal feeding stuffs (feed raw materials of mainly plant origin and compound feeds) excluding mineral feeds and premixtures. The limit of detection is about 2 mg/kg for spiramycin, 1 mg/kg for tylosin and 1 mg/kg for virginiamycin. In some milk replacers, it can be slightly higher than 1 mg/kg for virginiamycin.
Reported limits of detection are probably little overestimated but were fully validated during the collaborative study (see Annex B). In each laboratory, each day of analysis, spiked blank samples at 1 mg/kg for spiramycin and virginiamycin and at 0,5 mg/kg for tylosin are analysed for checking lower detection limits (see 9.2 and 9.3). These lower limits of detection are achievable, but should be established with an in-house validation first.
Some other antibiotics can interfere in the detection of these 3 specific macrolide antibiotics. The known interferences are specified in Annex A of the method.
That method should be used as a qualitative screening and/or a post-screening method (after microbiological plate test, for example). The follow-up of the antibiotics presence may be done by other analytical technics (LC and/or LC-MS technics) ([4], [10]). For confirmatory purposes, LCMS is required.
Futtermittel - Probenahme- und Untersuchungsverfahren - Nachweis von Tylosin, Spiramycin und Virginiamycin - Dünnschichtchromatographie und Bioautographie
Das Verfahren ermöglicht es, Spiramycin, Tylosin und Virginiamycin in Futtermitteln (Futtermittel-Ausgangserzeugnisse hauptsächlich pflanzlichen Ursprungs und Mischfuttermittel) nachzuweisen und zu identifizieren, davon ausgeschlossen sind Mineralfuttermittel und Vormischungen. Die Nachweisgrenze (en: limit of detection, LOD) beträgt 2 mg/kg bei Spiramycin, 1 mg/kg bei Tylosin und 1 mg/kg bei Virginiamycin. In einigen Milchaustausch-Futtermitteln kann die Nachweisgrenze bei Virginiamycin leicht über 1 mg/kg liegen.
Die berichteten Nachweisgrenzen werden wahrscheinlich ein wenig überschätzt, sie wurden aber während des Ringversuchs vollständig validiert (siehe Anhang B). In jedem Laboratorium, an jedem Tag der Untersuchung werden aufgestockte Blindwertproben mit 1 mg/kg bei Spiramycin und Virginiamycin sowie mit 0,5 mg/kg bei Tylosin zur Prüfung der unteren Nachweisgrenzen (siehe 9.2 und 9.3) untersucht. Diese unteren Nachweisgrenzen sind erreichbar, sie sollten jedoch zuerst mit einer internen Validierung bestimmt werden.
Einige andere Antibiotika können den Nachweis dieser drei spezifischen Makrolid-Antibiotika stören. Die bekannten Störungen (Interferenzen) sind in Anhang A des Verfahrens angegeben.
Das Verfahren sollte als ein qualitatives Screeningverfahren und/oder Post-Screeningverfahren (beispiels-weise nach dem mikrobiologischen Plattentest) angewendet werden. Die Nachuntersuchung hinsichtlich des Vorhandenseins der Antibiotika kann durch andere Untersuchungstechniken (LC- und/oder LC MS Ver¬fahren) [4] [10] erfolgen. Für Bestätigungszwecke ist die Flüssigchromatographie mit Massenspektrometrie (en: liquid chromatography/massspectrometry, LC-MS) erforderlich.
Aliments pour animaux : Méthodes d’échantillonnage et d’analyse - Détection de tylosine, spiramycine et virginiamycine - Chromatographie sur couche mince et bioautographie
La méthode permet de détecter et d’identifier la présence de spiramycine, de tylosine et de virginiamycine dans les aliments pour animaux (matières premières destinées aux aliments pour animaux, d’origine végétale principalement, et aliments composés pour animaux), à l’exclusion des aliments minéraux et des prémélanges. La limite de détection est d’environ 2 mg/kg pour la spiramycine, 1 mg/kg pour la tylosine et 1 mg/kg pour la virginiamycine. Dans certains aliments d’allaitement, elle peut être légèrement supérieure à 1 mg/kg pour la virginiamycine.
Les limites de détection publiées sont probablement légèrement surévaluées, mais ont été entièrement validées au cours de l’étude collaborative (voir Annexe B). Dans chaque laboratoire, chaque jour d’analyse, des échantillons témoins dopés de 1 mg/kg pour la spiramycine et la virginiamycine et de 0,5 mg/kg pour la tylosine sont analysés pour vérifier les limites de détection inférieures (voir 9.2 et 9.3). Ces limites de détection inférieures peuvent être atteintes, mais il convient de les établir préalablement par une validation interne.
D’autres antibiotiques sont susceptibles d’interférer dans la détection de ces 3 antibiotiques macrolides spécifiques. Les interférences connues sont spécifiées dans l’Annexe A de la méthode.
Il convient d’utiliser la présente méthode comme une méthode de dépistage qualitatif et/ou postérieurement à une autre méthode de dépistage (après un essai sur plaque microbiologique/boites de Pétri, par exemple). Le suivi de la présence d’antibiotiques peut être assuré par d’autres techniques d’analyse (techniques SM et/ou CL-SM) ([4], [10]). La technique CL-SM est exigée à des fins de confirmation.
Krma: metode vzorčenja in analize - Določevanje tilozina, spiromicina in virginiamicina - Tenkoplastna kromatografija in bioavtografija
Metoda omogoča zaznavanje in prepoznavanje spiramicina, tilozina in virginiamicina v krmi (surovinah krme večinoma rastlinskega izvora in krmnih mešanicah), razen mineralnih krmah in premiksih. Meja zaznavanja je približno 2 mg/kg za spiramicin, 1 mg/kg za tilozin in 1 mg/kg za virginiamicin. Pri nekaterih mlečnih nadomestkih je lahko meja zaznavanja za virginiamicin rahlo višja od 1 mg/kg.
OPOMBA Navedene meje zaznavanja so morda nekoliko precenjene, vendar so bile med medlaboratorijsko študijo v celoti potrjene (glej dodatek B). V vseh laboratorijih so vsak dan med potekom analize analizirani slepi vzorci z vrhom pri 1 mg/kg za spiramicin in virginiamicin ter 0,5 mg/kg za tilozin za namene preverjanja spodnjih meja zaznavanja (glej točki 9.2 in 9.3). Te spodnje meje zaznavanja je mogoče doseči, vendar jih je treba najprej določiti z internim preskusom.
Nekateri drugi antibiotiki lahko vplivajo na zaznavanje teh 3 specifičnih makrolidnih antibiotikov. Znani vplivi so navedeni v dodatku A metode.
Metodo je treba uporabiti kot kvalitativno presejalno metodo in/ali popresejalno metodo (po mikrobiološkem preskusu s ploščicami na primer). Poznejše spremljanje prisotnosti antibiotikov se lahko opravi z drugimi analitičnimi tehnikami (tehnika LC in/ali LC-MS) [4] [9]. Za namen potrditve se zahteva tehnika LCMS.
General Information
Standards Content (Sample)
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.Futtermittel - Probenahme- und Untersuchungsverfahren - Nachweis von Tylosin, Spiramycin und Virginiamycin - Dünnschichtchromatographie und BioautographieAliments pour animaux : Méthodes d’échantillonnage et d’analyse - Détection de tylosine, spiramycine et virginiamycine - Chromatographie sur couche mince et bioautographieAnimal feeding stuffs: Methods of sampling and analysis - Detection of tylosin, spiramycin and virginiamycin - Thin Layer Chromatography and bioautography65.120KrmilaAnimal feeding stuffsICS:Ta slovenski standard je istoveten z:EN 16939:2017SIST EN 16939:2017en,fr,de01-oktober-2017SIST EN 16939:2017SLOVENSKI
STANDARD
EUROPEAN STANDARD NORME EUROPÉENNE EUROPÄISCHE NORM
EN 16939
August
t r s y ICS
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Animal feeding stuffsã Methods of sampling and analysis æ Detection of tylosiná spiramycin and virginiamycin æ Thin Layer Chromatography and bioautography Aliments pour animaux ã Méthodes d 5échantillonnage et d 5analyse æ Détection de tylosineá spiramycine et virginiamycine æ Chromatographie sur couche mince et bioautographie
Futtermittel æ Probenahmeæ und Untersuchungsverfahren æ Nachweis von Tylosiná Spiramycin und Virginiamycin æ Dünnschichtchromatographie und Bioautographie This European Standard was approved by CEN on
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egulations which stipulate the conditions for giving this European Standard the status of a national standard without any alterationä Upætoædate lists and bibliographical references concerning such national standards may be obtained on application to the CENæCENELEC Management Centre or to any CEN memberä
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s x { u {ã t r s y ESIST EN 16939:2017
Substances giving inhibition zones . 16 Annex B (informative)
Results of the interlaboratory study . 18 B.1 General . 18 B.2 Materials . 18 B.3 Statistics . 19 B.4 Result and interpretation . 20 Annex C (informative)
Preparation of bacterial suspensions . 24 C.1 General . 24 C.2 Classical/old fashion preparation . 24 C.2.1 Maintenance of stock culture . 24 SIST EN 16939:2017
Figure 1 — TLC plate with 2 inhibition zones 3.3 sensitivity of a method SE ability of the method to classify a positive sample as positive 3.4 specificity of a method SP ability
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