Milk, milk products, infant formula and adult nutritionals -- Determination of fatty acids composition -- Capillary gas chromatographic method

ISO 16958:2015 specifies a method for the quantification of individual and/or all fatty acids in the profile of milk, milk products, infant formula and adult nutritional formula, containing milk fat and/or vegetable oils, supplemented or not supplemented with oils rich in long chain polyunsaturated fatty acids (LC-PUFA). This also includes groups of fatty acids often labelled [i.e. trans fatty acids (TFA), saturated fatty acids (SFA), monounsaturated fatty acids (MUFA), polyunsaturated fatty acids (PUFA), omega-3, omega-6 and omega-9 fatty acids] and/or individual fatty acids [i.e. linoleic acid (LA), α-linolenic acid (ALA), arachidonic acid (ARA), eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA)]. The determination is performed by direct transesterification in food matrices, without prior fat extraction, and consequently it is applicable to liquid samples or reconstituted powder samples with water having total fat ≥ 1,5 % m/m. The fat extracted from products containing less than 1,5 % m/m fat can be analysed with the same method after a preliminary fat extraction using methods referenced in Clause 2. Dairy products, like soft or hard cheeses with acidity level ≤ 1 mmol/100 g of fat, can be analysed after a preliminary fat extraction using methods referenced in Clause 2. For products supplemented or enriched with PUFA with fish oil or algae origins, the evaporation of solvents should be performed at the lowest possible temperature (e.g. max. 40 °C) to recover these sensitive fatty acids.

Lait, produits laitiers, formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes -- Détermination de la composition en acides gras -- Méthode de chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire

ISO 16958:2015 spécifie une méthode de quantification des acides gras individuels et/ou de tous les acides gras dans le profil du lait, des produits laitiers, des formules infantiles et des préparations nutritionnelles pour adultes contenant de la matičre grasse de lait et/ou des huiles végétales, supplémentées ou non supplémentées avec des huiles riches en acides gras polyinsaturés ŕ chaîne longue (AGPI-CL). Cela inclut également les groupes d'acides gras souvent déclarés [c'est-ŕ-dire, les acides gras trans (AGT), les acides gras saturés (AGS), les acides gras monoinsaturés (AGMI), les acides gras polyinsaturés (AGPI), les acides gras oméga-3, oméga-6 et oméga-9] et/ou les acides gras individuels [c'est-ŕ-dire l'acide linoléique (AL), l'acide α-linolénique (AAL), l'acide arachidonique (ARA), l'acide éicosapentaénoďque (AEP), l'acide docosahexaénoďque (ADH)]. La détermination est effectuée par transestérification directe dans les matrices d'aliments, sans extraction préalable de la matičre grasse. Elle s'applique donc aux échantillons liquides ou aux échantillons pulvérulents reconstitués avec de l'eau et ayant une teneur totale en matičre grasse supérieure ou égale ŕ 1,5 % (m/m). La matičre grasse extraite de produits contenant moins de 1,5 % (m/m) de matičre grasse peut ętre analysée avec la męme méthode aprčs une extraction préalable de la matičre grasse en utilisant les méthodes référencées dans l'Article 2 Les produits laitiers tels que les fromages ŕ pâte molle ou ŕ pâte dure ayant un niveau d'acidité inférieur ou égal ŕ 1 mmol/100 g de matičre grasse peuvent ętre analysés aprčs une extraction préalable de la matičre grasse en utilisant les méthodes référencées dans l'Article 2. Pour les produits supplémentés ou enrichis en AGPI extrait d'huile de poisson ou d'algues, il convient que l'évaporation de solvants soit effectuée ŕ la plus faible température possible (par exemple, 40 °C maximum) pour récupérer ces acides gras sensibles.

General Information

Status
Published
Publication Date
08-Nov-2015
Current Stage
9092 - International Standard to be revised
Start Date
20-Apr-2021
Ref Project

Buy Standard

Standard
ISO 16958:2015 - Milk, milk products, infant formula and adult nutritionals -- Determination of fatty acids composition -- Capillary gas chromatographic method
English language
45 pages
sale 15% off
Preview
sale 15% off
Preview
Standard
ISO 16958:2015 - Lait, produits laitiers, formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes -- Détermination de la composition en acides gras -- Méthode de chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire
French language
45 pages
sale 15% off
Preview
sale 15% off
Preview

Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 16958
IDF
231
First edition
2015-11-01
Milk, milk products, infant
formula and adult nutritionals —
Determination of fatty acids
composition — Capillary gas
chromatographic method
Lait, produits laitiers, formules infantiles et produits nutritionnels
pour adultes — Détermination de la composition en acides gras —
Méthode de chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire
Reference numbers
ISO 16958:2015(E)
IDF 231:2015(E)
ISO and IDF 2015
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 16958:2015(E)
IDF 231:2015(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO and IDF 2015, Published in Switzerland

All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form

or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior

written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of

the requester.
ISO copyright office International Dairy Federation

Ch. de Blandonnet 8 • CP 401 Silver Building • Bd Auguste Reyers 70/B • B-1030 Brussels

CH-1214 Vernier, Geneva, Switzerland
Tel. +41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 325 67 40
Fax +41 22 749 09 47 Fax + 32 2 325 67 41
copyright@iso.org info@fil-idf.org
www.iso.org www.fil-idf.org
ii © ISO and IDF 2015 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 16958:2015(E)
IDF 231:2015(E)
Contents Page

Forewords .....................................................................................................................................................................................................................................iv

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 2

5 Reagents ........................................................................................................................................................................................................................ 2

6 Apparatus ..................................................................................................................................................................................................................... 6

7 Sampling ........................................................................................................................................................................................................................ 8

8 Preparation of test sample ......................................................................................................................................................................... 9

8.1 Liquid and powder milk and infant formula with a fat content ≥ 1,5 % m/m ................................. 9

8.2 Liquid and powder milk and infant formula with a fat content < 1,5 % m/m ................................. 9

8.3 Cheese ............................................................................................................................................................................................................. 9

9 Procedure..................................................................................................................................................................................................................... 9

9.1 Test portion ................................................................................................................................................................................................ 9

9.2 Quantitative determination ......................................................................................................................................................10

9.2.1 Determination of response factors................................................................................................................10

9.2.2 Determination of the test portion ..................................................................................................................10

9.2.3 Fatty acid identification ..........................................................................................................................................10

10 Calculation and expression of results ..........................................................................................................................................12

10.1 Calculation ...............................................................................................................................................................................................12

10.1.1 Calculation of response factor ...........................................................................................................................12

10.1.2 Fatty acids on the product ....................................................................................................................................12

10.1.3 Fatty acids on the total fat .....................................................................................................................................13

10.1.4 Sum of class or group of fatty acids in 100 g product ...................................................................13

10.1.5 Sum of class or group of fatty acids in 100 g fat ................................................................................13

10.1.6 Performance of the transesterification......................................................................................................13

10.2 Expression of results .......................................................................................................................................................................14

11 Precision ....................................................................................................................................................................................................................14

11.1 Interlaboratory test..........................................................................................................................................................................14

11.2 Repeatability ..........................................................................................................................................................................................14

11.3 Reproducibility ....................................................................................................................................................................................15

11.4 Limit of detection ...............................................................................................................................................................................15

11.5 Limit of quantitation .......................................................................................................................................................................15

12 Test report ................................................................................................................................................................................................................15

Annex A (normative) Groups or classes of fatty acids and individual fatty acids ...............................................16

Annex B (informative) Examples of the gas–liquid chromatographic analysis .....................................................20

Annex C (informative) Results of an interlaboratory trial ..........................................................................................................30

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................45

© ISO and IDF 2015 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 16958:2015(E)
IDF 231:2015(E)
Forewords

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national

standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally

carried out through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which

a technical committee has been established has the right to be represented on that committee.

International organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part

in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all

matters of electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity

assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical

Barriers to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information

The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and

milk products and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC INTERNATIONAL.

It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC INTERNATIONAL. The method

described in this International Standard is equivalent to the AOAC Official Method 2012.13:

Determination of labeled fatty acids content in milk products and infant formula.

iv © ISO and IDF 2015 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 16958:2015(E)
IDF 231:2015(E)

IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit private sector organization representing the

interests of various stakeholders in dairying at the global level. IDF members are organized in National

Committees, which are national associations composed of representatives of dairy-related national

interest groups including dairy farmers, dairy processing industry, dairy suppliers, academics and

governments/food control authorities.

ISO and IDF collaborate closely on all matters of standardization relating to methods of analysis

and sampling for milk and milk products. Since 2001, ISO and IDF jointly publish their International

Standards using the logos and reference numbers of both organizations.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

ISO 16958 | IDF 231 was prepared by the IDF Standing Committee on Analytical Methods for Composition

and the ISO Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee 5 on Milk and milk products

(ISO/TC 34/SC 5), in collaboration with AOAC INTERNATIONAL. It is being published jointly by ISO and

IDF, and separately by AOAC INTERNATIONAL. The method described in this International Standard

is equivalent to the AOAC Official Method 2012.13: Determination of labeled fatty acids content in milk

products and infant formula

All work was carried out by the ISO-IDF Project Group C11 of the Standing Committee on Analytical

Methods for Composition under the aegis of its project leader, Mr Pierre-Alain Golay (CH).

© ISO and IDF 2015 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 16958:2015(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 231:2015(E)
Milk, milk products, infant formula and adult
nutritionals — Determination of fatty acids composition —
Capillary gas chromatographic method
1 Scope

This International Standard specifies a method for the quantification of individual and/or all fatty acids

in the profile of milk, milk products, infant formula and adult nutritional formula, containing milk fat

and/or vegetable oils, supplemented or not supplemented with oils rich in long chain polyunsaturated

fatty acids (LC-PUFA). This also includes groups of fatty acids often labelled [i.e. trans fatty acids (TFA),

saturated fatty acids (SFA), monounsaturated fatty acids (MUFA), polyunsaturated fatty acids (PUFA),

omega-3, omega-6 and omega-9 fatty acids] and/or individual fatty acids [i.e. linoleic acid (LA), α-linolenic

acid (ALA), arachidonic acid (ARA), eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA)].

The determination is performed by direct transesterification in food matrices, without prior fat

extraction, and consequently it is applicable to liquid samples or reconstituted powder samples with

water having total fat ≥ 1,5 % m/m.

The fat extracted from products containing less than 1,5 % m/m fat can be analysed with the same

method after a preliminary fat extraction using methods referenced in Clause 2. Dairy products, like

soft or hard cheeses with acidity level ≤ 1 mmol/100 g of fat, can be analysed after a preliminary fat

extraction using methods referenced in Clause 2. For products supplemented or enriched with PUFA

with fish oil or algae origins, the evaporation of solvents should be performed at the lowest possible

temperature (e.g. max. 40 °C) to recover these sensitive fatty acids.
2 Normative references

The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are

indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated

references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 1042, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks

ISO 1735 | IDF 5, Cheese and processed cheese products — Determination of fat content — Gravimetric

method (Reference method)

ISO 1740 | IDF 6, Milk fat products and butter — Determination of fat acidity (Reference method)

ISO 14156 | IDF 172, Milk and milk products — Extraction methods for lipids and liposoluble compounds

3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
fatty acids content

mass fraction of individual or groups of substances determined by the procedure specified in this

International Standard
Note 1 to entry: See Table A.1.

Note 2 to entry: The fatty acid content is expressed as a mass fraction in grams (or in milligrams) of the fatty

acids per 100 g of product (see Table A.1). Fatty acid results can be converted into other results expression

formats (see 10.2).
© ISO and IDF 2015 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 16958:2015(E)
IDF 231:2015(E)
4 Principle

Addition of the internal standard solution to the sample, preparation of fatty acid methyl esters (FAMEs)

by direct transesterification with methanolic sodium methoxide for liquid samples; dissolution (i.e.

reconstitution) in water for powder sample and direct transesterification with methanolic sodium

methoxide. The same transesterification procedure is applied to fat extracted from various foods (e.g.

low fat products, cheeses).

Separation of FAMEs using capillary gas-liquid chromatography. Identification of FAMEs by comparison

with the retention time of pure standards and quantification as fatty acids by reference to an internal

standard (C11:0 FAME) and instrument response factors. Verification of the transesterification

performance using a second internal standard (C13:0 TAG).
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified.
5.1 n-Hexane, [CH (CH ) CH ], chromatography grade.
3 2 4 3
5.2 Methanol, [CH OH], chromatography grade.
5.3 Water, HPLC grade or equivalent purity quality.

5.4 Sodium methoxide solution, [CH ONa], dissolved in methanol 30 % m/v, or 25 % m/v, depending

on local availability.

5.5 Transesterification solution, (sodium methoxide solution 5 % m/v in methanol).

Into a 300 ml volumetric flask, pipette 50 ml (or 60 ml) of sodium methoxide solution 30 % m/v (or

25 % m/v) and mix gently with 250 ml of methanol using a magnetic stirrer. Remove the magnetic

stirrer, then cool to room temperature and make up to the mark with methanol.

Stored in the dark at 4 °C, this solution is stable for one week. Allow the solution to come to room

temperature before use. This solution volume is sufficient to analyse approximately 40 samples. In case

of a smaller number of analyses, the reagent volume can be adapted accordingly.

Perform the transesterification reaction at ambient temperature (between 20 °C and 25 °C).

NOTE Value indicated in brackets () corresponds to sodium methoxide solution with 25 % m/v concentration

5.6 di-Sodium hydrogen citrate sesquihydrate, [HOC(COOH)(CH COONa) .1,5 H O].
2 2 2
5.7 Sodium chloride, [NaCl].

5.8 Neutralization solution, (di-sodium hydrogen citrate sesquihydrate 10 % m/v, sodium chloride

15 % m/v in water).

Weigh 50,0 g of di-sodium hydrogen citrate sesquihydrate and 75,0 g of sodium chloride in a 500 ml

volumetric flask. Dissolve in 450 ml of water using a magnetic stirrer. Remove the magnetic stirrer,

then make up to the mark with water.

Stored in the dark at 4 °C, this solution is stable for one month. Presence of salt crystals may appear in

the solution during storage, but disappear after shaking.

Allow the solution to come to room temperature before use. This solution volume is sufficient to analyse

approximately 40 samples or more. In case of a smaller number of analyses (or single analysis), the

mass and volume of solution can be adapted accordingly.
2 © ISO and IDF 2015 – All rights reserved
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 16958:2015(E)
IDF 231:2015(E)
5.9 Tert-butyl methyl ether (MTBE), chromatography grade.
5.10 Methyl undecanoate (C11:0 FAME), of purity ≥ 99 % mass fraction.
5.11 Tritridecanoin (C13:0 TAG), of purity ≥ 99 % mass fraction.
5.12 C11:0 FAME/C13:0 TAG standard solution.

Into a 250 ml volumetric flask, weigh to the nearest 0,1 mg about 500 mg of tritridecanoin and 500 mg

of methyl undecanoate. Dissolve and make up to the mark with MTBE.

Stored in the dark at 4 °C, this solution is stable for one week. Allow the solution to come to room

temperature before use.

This solution volume is sufficient to analyse approximately 40 samples or more. In case of a smaller

number of analyses, standard mass and volume of solvent can be adapted accordingly.

5.13 Octadecenoic acid methyl esters, cis and trans isomers mixture of C18:1 with trans-4 to trans-16

octadecenoic (all isomers) and principal cis isomers. Concentration 2,5 mg/ml in methylene chloride.

NOTE This standard is commercially available from Supelco Inc, brand of Sigma-Aldrich (Cat. 40495-U) .

5.14 Linoleic acid methyl esters, cis and trans isomers mixture of C18:2 with trans-9,trans-12-

octadecadienoic acid (approximately 50 %), cis-9,trans-12-octadecadienoic acid (approximately

20 %), trans-9,cis-12-octadecadienoic acid (approximately 20 %) and cis-9,cis-12-octadecadienoic acid

(approximately 10 %). Concentration 10 mg/ml in methylene chloride.

NOTE This standard is commercially available from Supelco Inc, brand of Sigma-Aldrich (Cat. 47791) .

5.15 Linolenic acid methyl esters, cis and trans isomers mixture of C18:3 with

— cis-9,cis-12,cis-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 3 % m/m),

— cis-9,cis-12,trans-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 7 % m/m),

— cis-9,trans-12,cis-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 7 % m/m),

— cis-9,trans-12,trans-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 15 % m/m),

— trans-9,cis-12,cis-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 7 % m/m),

— trans-9,cis-12,trans-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 15 % m/m),

— trans-9,trans-12,cis-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 15 % m/m), and

— trans-9,trans-12,trans-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 30 % m/m).

Concentration 10 mg/ml in methylene chloride.

NOTE This standard is commercially available from Supelco Inc, brand of Sigma Aldrich (Cat. 47792) . This

standard contains all trans isomers of C18:3 (eight in total) but their abundance and ratio are different to those

observed in refined/deodorized oils and fats.

5.16 Methyl octadecadienoate conjugated acids, mixture of C18:2 cis-9,trans-11 and cis-10,trans-12-

octadecadienoate conjugated acids, of purity ≥ 99 % mass fraction.

1) Supelco Inc., brand of Sigma Aldrich, is an example of suitable product available commercially. This information

is given for the convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by either ISO or IDF

of the product named. Equivalent products may be used if they can be shown to lead to the same results.

© ISO and IDF 2015 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 16958:2015(E)
IDF 231:2015(E)

NOTE This standard is commercially available from Supelco Inc, brand of Sigma Aldrich (Cat. 05507) . This

standard contains the two principal CLA isomers, but isomer ratio may vary from lot to lot.

5.17 Qualitative cis and trans isomers standard mixture solution

For the retention time (RT) identification of cis and trans isomers (i.e. C18:1, C18:2, C18:3 and CLA),

prepare a qualitative standard solution with the standards listed in 5.13 to 5.16. All standards that are

commercially available could be used. Into a 50 ml volumetric flask, add each standard isomer solution

in equal proportion. Dissolve and make up to the mark with hexane. Dilute in accordance with the type

of injector used.
5.18 FAME standards calibration solution
5.18.1 Preparation with individual FAME standards
5.18.1.1 Individual FAME standards
Purchase individual FAME standards as follows (purity ≥ 99 %):

Butyric acid methyl ester (C4:0), caproic acid methyl ester (C6:0), caprylic acid methyl ester (C8:0),

capric acid methyl ester (C10:0), undecanoic acid methyl ester (C11:0), lauric acid methyl ester (C12:0),

tridecanoic acid methyl ester (C13:0), myristic acid methyl ester (C14:0), myristoleic acid methyl ester

(C14:1 cis-9 or n-5), pentadecanoic acid methyl ester (C15:0), cis-10-pentadecenoic acid methyl ester

(C15:1 cis-10 n-5), palmitic acid methyl ester (C16:0), palmitoleic acid methyl ester (C16:1 cis-9 or n-7),

heptadecanoic acid methyl ester (C17:0), cis-10-heptadecenoic acid methyl ester (C17:1 cis-10 or n-7),

stearic acid methyl ester (C18:0), elaidic acid methyl ester (C18:1 trans-9 or n-9), oleic acid methyl ester

(C18:1 cis-9 or n-9), linolelaidic acid methyl ester (C18:2 all trans-9,12 or n-6), linoleic acid methyl ester

(C18:2 all cis-9,12 or n-6), arachidic acid methyl ester (C20:0), gamma-linoleic acid methyl ester (C18:3

all cis-6,9,12 or n-6), cis-11-eicosenoic acid methyl ester (C20:1 cis-11 or n-9), linolenic acid methyl

ester (C18:3 all cis-9,12,15 or n-3), heneicosanoic acid methyl ester (C21:0), cis-11,14-eicosadienoic acid

methyl ester (C20:2 all cis-11,14 or n-6), behenic acid methyl ester (C22:0), cis-8,11,14-eicosatrienoic

acid methyl ester (C20:3 all cis-8,11,14 or n-6 cis), erucic acid methyl ester (C22:1 cis-13 or n-9), cis-

11,14,17-eicosatrienoic acid methyl ester (C20:3 all cis-11,14,17 or n-3), arachidonic acid methyl ester

(C20:4 all cis-5,8,11,14 or n-6), cis-13,16-docosadienoic acid methyl ester (C22:2 all cis-13,16 or n-6),

lignoceric acid methyl ester (C24:0), cis-5,8,11,14,17- eicosapentaenoic acid methyl ester (C20:5 all cis-

5,8,11,14,17 or n-3), nervonic acid methyl ester (C24:1 cis-15 or n-9), cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic

acid methyl ester (C22:6 all cis-4,7,10,13,16,19 or n-3).

NOTE Purchasing of individual FAME standards is more expensive than a single FAME standard mixture. In

addition, weighing each FAME standard individually could give imprecision and requires high precision of weighing.

5.18.1.2 Stock solution 1 – Saturated

Into a 100 ml volumetric flask, accurately weigh to the nearest 0,1 mg about 25 mg of Lignoceric acid

methyl ester (C24:0), 25 mg of behenic acid methyl ester (C22:0), 25 mg of heneicosanoic acid methyl

ester (C21:0), 25 mg of arachidic acid methyl ester (C20:0), 25 mg of sacid methyl ester (C18:0),

25 mg of heptadecanoic acid methyl ester (C17:0), 50 mg of palmitic acid methyl ester (C16:0), 25 mg

of pentadecanoic acid methyl ester (C15:0), 25 mg of myristic acid methyl ester (C14:0), 25 mg of

tridecanoic acid methyl ester (C13:0), 25 mg of lauric acid methyl ester (C12:0), 25 mg of undecanoic

acid methyl ester (C11:0), 25 mg of capric acid methyl ester (C10:0), 25 mg of caprylic acid methyl ester

(C8:0), 25 mg of caproic acid methyl ester (C6:0) and 25 mg butyric acid methyl ester (C4:0). Make up to

the mark with n-hexane.

Palmitic acid is weighed in double amount. Short chain fatty acid methyl esters (i.e. C4:0, C6:0 and C8:0)

are volatile and shall be weighed at the end of the procedure.
4 © ISO and IDF 2015 – All rights reserved
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 16958:2015(E)
IDF 231:2015(E)
5.18.1.3 Stock solution 2 – Monounsaturated

Into a 100 ml volumetric flask, accurately weigh to the nearest 0,1 mg about 25 mg of nervonic acid

methyl ester (C24:1 cis-15 or n-9), 25 mg of erucic acid methyl ester (C22:1 cis-13 or n-9), 25 mg of cis-

11-eicosenoic acid methyl ester (C20:1 cis-11 or n-9), 25 mg of oleic acid methyl ester (C18:1 cis-9 or

n-9), 25 mg of elaidic acid methyl ester (C18:1 trans-9 or n-9 trans), 25 mg of cis-10-heptadecenoic acid

methyl ester (C17:1 cis-10 or n-7), 25 mg of palmitoleic acid methyl ester (C16:1 cis-9 or n-7), 25 mg of

cis-10-pentadecenoic acid methyl ester (C15:1 cis-10 or n-5) and 25 mg of myristoleic acid methyl ester

(C14:1 cis-9 or n-5). Make up to the mark with n-hexane.
5.18.1.4 Stock solution 3 – Polyunsaturated

Into a 100 ml volumetric flask, accurately weigh to the nearest 0,1 mg about 25 mg of Linolelaidic acid

methyl ester (C18:2 all trans-9,12 or n-6 trans), 25 mg of linoleic acid methyl ester (C18:2 all cis-9,12

or n-6), 25 mg of gamma-linoleic acid methyl ester (C18:3 all cis-9,12 or n-6), 25 mg of linolenic acid

methyl ester (C18:3 all cis-12,15 or n-3), 25 mg of cis-11,14-eicosadienoic acid methyl ester (C20:2 all cis-

11,14 or n-6), 25 mg of cis-8,11,14-eicosatrienoic acid methyl ester (C20:3 all cis-8,11,14 or n-6), 25 mg

of cis-11,14,17-eicosatrienoic acid methyl ester (C20:3 all cis-11,14,17 or n-3), 25 mg of arachidonic acid

methyl ester (C20:4 all cis-5,8,11,14 or n-6), 25 mg of cis-13,16-docosadienoic acid methyl ester (C22:2

cis-13,16 or n-6), 25 mg of cis-5,8,11,14,17- eicosapentaenoic acid methyl ester (C20:5 all cis-5,8,11,14,17

or n-3) and 25 mg of cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid methyl ester (C22:6 cis-4,7,10,13,16,19 or

n-3). Make up to the mark with n-hexane.
5.18.1.5 Preparation of FAME standards calibration solution

Into a 100 ml volumetric flask, pipette 25,0 ml of the calibration standard stock solution 1 (5.18.1.2),

25,0 ml of the calibration standard stock solution 2 (5.18.1.3) and 25,0 ml of the calibration standard

stock solution 3 (5.18.1.4). Then make up to the mark with n-hexane. Dilute in accordance with the type

of injector used.

Stored in the dark at −20 °C, this solution is stable for about six months. To prevent contamination of the

standard solution, distribute the solution into different vials (ready to inject) and store them at −20 °C

before use. Use each vial once, then discard it.
5.18.2 Preparation from a quantitative FAME standard mixture
5.18.2.1 Quantitative FAME standard mixture

Purchase a quantitative FAME standard mixture: Nu-Check-Prep, Cat. Number GLC- Nestle-36 .

The FAME calibration standard mixture is carefully prepared by mass by the supplier. The mass

percentage of each component is indicated in the accompanying certificate. Each ampoule contains

approximately 100 mg of the FAME calibration standard mix. All individual FAME standards are

distributed in equal proportions in the standard mixture, except for palmitic acid methyl ester (C16:0)

which is a
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 16958
FIL
231
Première édition
2015-11-01
Lait, produits laitiers, formules
infantiles et produits nutritionnels
pour adultes — Détermination de
la composition en acides gras —
Méthode de chromatographie en
phase gazeuse sur colonne capillaire
Milk, milk products, infant formula and adult nutritionals —
Determination of fatty acids composition — Capillary gas
chromatographic method
Numéros de référence
ISO 16958:2015(F)
FIL 231:2015(F)
ISO et FIL 2015
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 16958:2015(F)
FIL 231:2015(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO et FIL 2015, Publié en Suisse

Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée

sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur

l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à

l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office International Dairy Federation

Ch. de Blandonnet 8 • CP 401 Silver Building • Bd Auguste Reyers 70/B • B-1030 Brussels

CH-1214 Vernier, Geneva, Switzerland
Tel. +41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 325 67 40
Fax +41 22 749 09 47 Fax + 32 2 325 67 41
copyright@iso.org info@fil-idf.org
www.iso.org www.fil-idf.org
ii © ISO et FIL 2015 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 16958:2015(F)
FIL 231:2015(F)
Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 1

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 2

5 Réactifs ........................................................................................................................................................................................................................... 2

6 Appareillage .............................................................................................................................................................................................................. 6

7 Échantillonnage ..................................................................................................................................................................................................... 9

8 Préparation de l’échantillon pour essai ....................................................................................................................................... 9

8.1 Lait liquide, lait en poudre et formule infantile ayant une teneur en matière grasse

≥ 1,5 % m/m ............................................................................................................................................................................................. 9

8.2 Lait liquide, lait en poudre et formule infantile ayant une teneur en matière grasse

< 1,5 % m/m ............................................................................................................................................................................................. 9

8.3 Fromage ........................................................................................................................................................................................................ 9

9 Mode opératoire.................................................................................................................................................................................................10

9.1 Prise d’essai ............................................................................................................................................................................................10

9.2 Détermination quantitative ......................................................................................................................................................11

9.2.1 Détermination des facteurs de réponse ....................................................................................................11

9.2.2 Détermination de la prise d’essai ...................................................................................................................11

9.2.3 Identification des acides gras ............................................................................................................................11

10 Calcul et expression des résultats ...................................................................................................................................................13

10.1 Calcul ............................................................................................................................................................................................................13

10.1.1 Calcul du facteur de réponse ..............................................................................................................................13

10.1.2 Acides gras dans le produit ..................................................................................................................................13

10.1.3 Acides gras dans la matière grasse totale ................................................................................................14

10.1.4 Somme de la classe ou du groupe d’acides gras dans 100 g de produit .................. ......14

10.1.5 Somme de la classe ou du groupe d’acides gras dans 100 g de matière grasse .....14

10.1.6 Performance de la transestérification .......................................................................................................14

10.2 Expression des résultats ..............................................................................................................................................................15

11 Fidélité .........................................................................................................................................................................................................................15

11.1 Essai interlaboratoires ..................................................................................................................................................................15

11.2 Répétabilité .............................................................................................................................................................................................16

11.3 Reproductibilité ..................................................................................................................................................................................16

11.4 Limite de détection ...........................................................................................................................................................................16

11.5 Limite de quantification ...............................................................................................................................................................16

12 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................................16

Annexe A (normative) Groupes ou classes d’acides gras et acides gras individuels .......................................17

Annexe B (informative) Exemples d’analyse par chromatographie gaz-liquide ..................................................21

Annexe C (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires.............................................................................................31

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................53

© ISO et FIL 2015 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 16958:2015(F)
FIL 231:2015(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.

L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents

critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.

iso.org/directives).

L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer

un engagement.

Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à

l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes

de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos —

Informations supplémentaires.

Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-

comité SC 5, Lait et produits laitiers et la Fédération Internationale du lait (FIL), en collaboration avec

l’AOAC INTERNATIONAL. Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément, par l’AOAC

INTERNATIONAL. La méthode décrite dans la présente Norme internationale est l’équivalent de la

méthode officielle de l’AOAC 2012.13: Détermination de la teneur en acides gras déclarés dans les produits

laitiers et les formules infantiles.
iv © ISO et FIL 2015 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 16958:2015(F)
FIL 231:2015(F)

La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation privée à but non lucratif qui représente

les intérêts des divers acteurs de la filière laitière au niveau international. Les membres de la FIL sont

organisés en comités nationaux, qui sont des associations nationales composées de représentants de

groupes d’intérêt nationaux dans le secteur des produits laitiers, incluant des producteurs laitiers, des

acteurs de l’industrie de transformation des produits laitiers, des fournisseurs de produits laitiers, des

universitaires et des représentants des gouvernements/autorités chargées du contrôle des aliments.

L’ISO et la FIL collaborent étroitement sur toutes les activités de normalisation concernant les méthodes

d’analyse et d’échantillonnage du lait et des produits laitiers. Depuis 2001, l’ISO et la FIL publient

conjointement leurs Normes internationales en utilisant les logos et les numéros de référence des deux

organisations.

L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer

un engagement.

L’ISO 16958|FIL 231 a été élaborée par le comité permanent de la FIL chargé des Méthodes d’analyse pour

la composition et par le comité technique de l’ISO, l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5,

Lait et produits laitiers (ISO/TC 34/SC 5), en collaboration avec l’AOAC INTERNATIONAL. Elle est publiée

conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément, par l’AOAC INTERNATIONAL. La méthode décrite

dans la présente Norme internationale est l’équivalent de la méthode officielle de l’AOAC 2012.13:

Détermination de la teneur en acides gras déclarés dans les produits laitiers et les formules infantiles.

L’ensemble des travaux a été confié à l’équipe d’action mixte ISO/FIL C11 du comité permanent chargé des

Méthodes d’analyse pour la composition, sous la conduite de son chef de projet, M. Pierre-Alain Golay (CH).

© ISO et FIL 2015 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 16958:2015(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 231:2015(F)
Lait, produits laitiers, formules infantiles et produits
nutritionnels pour adultes — Détermination
de la composition en acides gras — Méthode de
chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire
1 Domaine d’application

La présente Norme internationale spécifie une méthode de quantification des acides gras individuels

et/ou de tous les acides gras dans le profil du lait, des produits laitiers, des formules infantiles et

des préparations nutritionnelles pour adultes contenant de la matière grasse de lait et/ou des huiles

végétales, supplémentées ou non supplémentées avec des huiles riches en acides gras polyinsaturés à

chaîne longue (AGPI-CL). Cela inclut également les groupes d’acides gras souvent déclarés [c’est-à-dire,

les acides gras trans (AGT), les acides gras saturés (AGS), les acides gras monoinsaturés (AGMI), les

acides gras polyinsaturés (AGPI), les acides gras oméga-3, oméga-6 et oméga-9] et/ou les acides gras

individuels [c’est-à-dire l’acide linoléique (AL), l’acide α-linolénique (AAL), l’acide arachidonique (ARA),

l’acide éicosapentaénoïque (AEP), l’acide docosahexaénoïque (ADH)].

La détermination est effectuée par transestérification directe dans les matrices d’aliments, sans

extraction préalable de la matière grasse. Elle s’applique donc aux échantillons liquides ou aux

échantillons pulvérulents reconstitués avec de l’eau et ayant une teneur totale en matière grasse

supérieure ou égale à 1,5 % (m/m).

La matière grasse extraite de produits contenant moins de 1,5 % (m/m) de matière grasse peut être

analysée avec la même méthode après une extraction préalable de la matière grasse en utilisant les

méthodes référencées dans l’Article 2 Les produits laitiers tels que les fromages à pâte molle ou à

pâte dure ayant un niveau d’acidité inférieur ou égal à 1 mmol/100 g de matière grasse peuvent être

analysés après une extraction préalable de la matière grasse en utilisant les méthodes référencées dans

l’Article 2. Pour les produits supplémentés ou enrichis en AGPI extrait d’huile de poisson ou d’algues, il

convient que l’évaporation de solvants soit effectuée à la plus faible température possible (par exemple,

40 °C maximum) pour récupérer ces acides gras sensibles.
2 Références normatives

Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à

l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les

références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels

amendements).
ISO 1042, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait

ISO 1735|FIL 5, Fromages et fromages fondus — Détermination de la teneur en matière grasse — Méthode

gravimétrique (Méthode de référence)

ISO 1740|FIL 6, Produits à matière grasse laitière et beurre — Détermination de l’acidité de la matière

grasse (Méthode de référence)

ISO 14156|FIL 172, Lait et produits laitiers — Méthodes d’extraction des lipides et des composés liposolubles

3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

© ISO et FIL 2015 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 16958:2015(F)
FIL 231:2015(F)
3.1
teneur en acides gras

fraction massique d’une ou plusieurs substances déterminée par le mode opératoire spécifié dans la

présente Norme internationale
Note 1 à l’article: Voir le Tableau A.1.

Note 2 à l’article: La teneur en acides gras est exprimée sous forme de fraction massique en grammes (ou en

milligrammes) des acides gras pour 100 g de produit (voir le Tableau A.1). Les résultats des acides gras peuvent

être convertis dans d’autres formats d’expression des résultats (voir 10.2).
4 Principe

Ajout de la solution étalon interne à l’échantillon, préparation des esters méthyliques d’acides

gras (EMAG) par transestérification directe avec du méthoxyde de sodium méthanolique pour

les échantillons liquides; dissolution (c’est-à-dire, reconstitution) dans l’eau pour les échantillons

pulvérulents et transestérification directe avec du méthoxyde de sodium méthanolique. Le même mode

opératoire de transestérification est utilisé pour la matière grasse extraite de divers aliments (par

exemple, produits pauvres en matière grasse, fromages).

Séparation des EMAG par chromatographie gaz-liquide sur colonne capillaire. Identification des EMAG

par comparaison avec le temps de rétention des étalons purs et quantification en tant qu’acides gras en

référence à un étalon interne (EMAG C11:0) et aux facteurs de réponse de l’instrument. Vérification de

la performance de transestérification à l’aide d’un deuxième étalon interne (TAG C13:0).

5 Réactifs

Sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.

5.1 n-Hexane, [CH (CH ) CH ], qualité pour chromatographie.
3 2 4 3
5.2 Méthanol, [CH OH], qualité pour chromatographie.
5.3 Eau, qualité pour CLHP ou de pureté équivalente.

5.4 Solution de méthoxyde de sodium [CH ONa], dissoute dans du méthanol à 30 % m/v ou

25 % m/v, selon la disponibilité locale.

5.5 Solution de transestérification (solution de méthoxyde de sodium à 5 % dans du méthanol).

Dans une fiole jaugée de 300 ml, introduire à la pipette 50 ml (ou 60 ml) de solution de méthoxyde

de sodium à 30 % m/v (ou 25 % m/v) et mélanger doucement avec 250 ml de méthanol en utilisant

un agitateur magnétique. Retirer l’agitateur magnétique puis refroidir à température ambiante et

compléter jusqu’au trait avec du méthanol.

Cette solution est stable pendant une semaine si elle est conservée à l’abri de la lumière et à 4 °C. Laisser la

solution s’équilibrer à température ambiante avant utilisation. Ce volume de solution permet d’analyser

environ 40 échantillons. S’il y a moins d’analyses, le volume de réactif peut être adapté en conséquence.

Effectuer la réaction de transestérification à température ambiante (entre 20 °C et 25 °C).

NOTE La valeur indiquée entre parenthèses () correspond à la solution de méthoxyde de sodium à 25 % m/v.

5.6 Hydrogénocitrate de disodium sesquihydraté, [HOC(COOH)(CH COONa) .1,5 H O].
2 2 2
5.7 Chlorure de sodium, [NaCl].
2 © ISO et FIL 2015 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 16958:2015(F)
FIL 231:2015(F)

5.8 Solution de neutralisation (hydrogénocitrate de disodium sesquihydraté à 10 %, chlorure de

sodium à 15 % m/v dans l’eau).

Peser 50,0 g d’hydrogénocitrate de disodium sesquihydraté et 75,0 g de chlorure de sodium dans une

fiole jaugée de 500 ml. Dissoudre dans 450 ml d’eau en utilisant un agitateur magnétique. Retirer

l’agitateur magnétique puis compléter jusqu’au trait avec de l’eau.

Cette solution est stable pendant un mois si elle est conservée à l’abri de la lumière et à 4 °C. Des

cristaux de sel peuvent apparaître dans la solution pendant la période de stockage, mais ils

disparaissent après agitation.

Laisser la solution s’équilibrer à température ambiante avant utilisation. Ce volume de solution permet

d’analyser environ 40 échantillons ou plus. S’il y a moins d’analyses (ou une seule analyse), la masse et

le volume de solution peuvent être adaptés en conséquence.
5.9 Éther méthylique de tert-butyle (MTBE), qualité pour chromatographie.
5.10 Undécanoate de méthyle (EMAG C11:0), de pureté ≥ 99%, en fraction massique.
5.11 Tritridécanoïne (TAG C13:0), de pureté ≥ 99 %, en fraction massique.
5.12 Solution étalon d’EMAG C11:0/TAG C13:0

Dans une fiole jaugée de 250 ml, peser, à 0,1 mg près, environ 500 mg de tritridécanoïne et 500 mg

d’undécanoate de méthyle. Dissoudre et compléter au volume avec du MTBE.

Cette solution est stable pendant une semaine si elle est conservée à l’abri de la lumière et à 4 °C. Laisser

la solution s’équilibrer à température ambiante avant utilisation.

Ce volume de solution permet d’analyser environ 40 échantillons ou plus. S’il y a moins d’analyses, la

masse et le volume de solvant peuvent être adaptés en conséquence.

5.13 Esters méthyliques d’acide octadécènoïque, mélange d’isomères cis et trans de C18:1 avec des

isomères trans-4 à trans-16 d’acide octadécènoïque (tous les isomères) et des isomères cis principaux.

Concentration de 2,5 mg/ml dans du chlorure de méthylène.

NOTE Cet étalon est disponible dans le commerce auprès de Supelco Inc, une marque de Sigma-Aldrich

(réf. 40495-U) .

5.14 Esters méthyliques d’acide linoléique, mélange d’isomères cis et trans de C18:2 avec de l’acide

trans-9,trans-12-octadécadiénoïque (~ 50 %), de l’acide cis-9,trans-12-octadécadiénoïque (~ 20 %), de

l’acide trans-9,cis-12-octadécadiénoïque (~ 20 %) et de l’acide cis-9,cis-12-octadécadiénoïque (~ 10 %).

Concentration de 10 mg/ml dans du chlorure de méthylène.

NOTE Cet étalon est disponible dans le commerce exclusivement auprès de Supelco Inc, une marque de

Sigma-Aldrich (réf. 47791) .

5.15 Esters méthyliques d’acide linolénique, mélange d’isomères cis et trans de C18:3 avec

— de l’ester méthylique d’acide cis-9,cis-12,cis-15-octadécatriénoïque (~ 3 % m/m),

— de l’ester méthylique d’acide cis-9,cis-12,trans-15-octadécatriénoïque (~ 7 % m/m),

— de l’ester méthylique d’acide cis-9,trans-12,cis-15-octadécatriénoïque (~ 7 % m/m),

1) Supelco Inc., une marque de Sigma Aldrich, est un exemple de produit approprié disponible dans le commerce.

Cette information est donnée par souci de commodité à l’intention des utilisateurs de la présente Norme

internationale et ne saurait constituer un engagement de l’ISO ou de la FIL à l’égard de ce produit.

© ISO et FIL 2015 – Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 16958:2015(F)
FIL 231:2015(F)

— de l’ester méthylique d’acide cis-9,trans-12,trans-15-octadécatriénoïque (~ 15 % m/m),

— de l’ester méthylique d’acide trans-9,cis-12,cis-15-octadécatriénoïque (~ 7 % m/m),

— de l’ester méthylique d’acide trans-9,cis-12,trans-15-octadécatriénoïque (~ 15 % m/m),

— de l’ester méthylique d’acide trans-9,trans-12,cis-15-octadécatriénoïque (~ 15 % m/m) et

— de l’ester méthylique d’acide trans-9,trans-12,trans-15-octadécatriénoïque (~ 30 % m/m).

Concentration de 10 mg/ml dans du chlorure de méthylène.

NOTE Cet étalon est disponible dans le commerce auprès de Supelco Inc, une marque de Sigma-Aldrich (réf.

47792) . Cet étalon contient tous les isomères trans de C18:3 (huit au total) mais leur abondance et leur rapport

sont différents de ceux observés dans les huiles et les matières grasses raffinées/désodorisées.

5.16 Acides conjugués d’octadécadiénoate de méthyle, mélange d’acides conjugués de C18:2 cis-

9,trans-11 et de cis-10,trans-12-octadécadiénoate), de pureté ≥ 99 %, en fraction massique.

NOTE Cet étalon est disponible dans le commerce auprès de Supelco Inc, une marque de Sigma-Aldrich (réf.

05507) . Cet étalon contient les deux principaux isomères d’ALC, mais le rapport des isomères peut varier d’un

lot à l’autre.
5.17 Solution qualitative de mélange étalon d’isomères cis et trans

Pour l’identification du temps de rétention (RT) des isomères cis et trans (c’est-à-dire, C18:1, C18:2,

C18:3 et ALC), préparer une solution étalon qualitative avec les étalons indiqués de 5.13 à 5.16. Tous

les étalons disponibles dans le commerce peuvent être utilisés. Dans une fiole jaugée de 50 ml, ajouter

chaque solution étalon d’isomères en proportions égales. Dissoudre et compléter jusqu’au trait avec de

l’hexane. Diluer en fonction du type d’injecteur utilisé.
5.18 Solution d’étalons d’EMAG pour étalonnage
5.18.1 Préparation avec des étalons EMAG individuels
5.18.1.1 Étalons EMAG individuels
Acheter les étalons EMAG individuels suivants (pureté ≥ 99 %):

Ester méthylique d’acide butyrique (C4:0), ester méthylique d’acide caproïque (C6:0), ester méthylique

d’acide caprylique (C8:0), ester méthylique d’acide caprique (C10:0), ester méthylique d’acide

undécanoïque (C11:0), ester méthylique d’acide laurique (C12:0), ester méthylique d’acide tridécanoïque

(C13:0), ester méthylique d’acide myristique (C14:0), ester méthylique d’acide myristoléique (C14:1

cis-9 ou n-5), ester méthylique d’acide pentadécanoïque (C15:0), ester méthylique d’acide cis-10-

pentadécènoïque (C15:1 cis-10 n-5), ester méthylique d’acide palmitique (C16:0), ester méthylique

d’acide palmitoléique (C16:1 cis-9 ou n-7), ester méthylique d’acide heptadécanoïque (C17:0), ester

méthylique d’acide cis-10-heptadécènoïque (C17:1 cis-10 ou n-7), ester méthylique d’acide stéarique

(C18:0), ester méthylique d’acide élaïdique (C18:1 trans-9 ou n-9), ester méthylique d’acide oléique

(C18:1 cis-9 ou n-9), ester méthylique d’acide linolélaïdique (C18:2 tout trans-9,12 ou n-6), ester

méthylique d’acide linoléique (C18:2 tout cis-9,12 ou n-6), ester méthylique d’acide arachidique (C20:0),

ester méthylique d’acide gamma-linoléique (C18:3 tout cis-6,9,12 ou n-6), ester méthylique d’acide cis-11-

éicosénoïque (C20:1 cis-11 ou n-9 ), ester méthylique d’acide linolénique (C18:3 tout cis-9,12,15 ou n-3),

ester méthylique d’acide hénéicosanoïque (C21:0), ester méthylique d’acide cis-11,14-éicosadiénoïque

(C20:2 tout cis-11,14 ou n-6), ester méthylique d’acide béhénique (C22:0), ester méthylique d’acide cis-

8,11,14-éicosatriénoïque (C20:3 tout cis-8,11,14 ou n-6 cis), ester méthylique d’acide érucique (C22:1

cis-13 ou n-9), ester méthylique d’acide cis-11,14,17-éicosatriénoïque (C20:3 tout cis-11,14,17 ou n-3),

ester méthylique d’acide arachidonique (C20:4 tout cis-5,8,11,14 ou n-6), ester méthylique d’acide cis-

13,16-docosadiénoïque (C22:2 tout cis-13,16 ou n-6), ester méthylique d’acide lignocérique (C24:0),

ester méthylique d’acide cis-5,8,11,14,17-éicosapentaénoïque (C20:5 tout cis-5,8,11,14,17 ou n-3), ester

4 © ISO et FIL 2015 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 16958:2015(F)
FIL 231:2015(F)

méthylique d’acide nervonique (C24:1 cis-15 ou n-9), ester méthylique d’acide cis-4,7,10,13,16,19-

docosahexaénoïque (C22:6 tout cis-4,7,10,13,16,19 ou n-3).

NOTE Il revient plus cher d’acheter des étalons EMAG individuels qu’un seul mélange étalon d’EMAG. De

plus, le fait de peser chaque étalon EMAG individuellement peut engendrer des imprécisions et nécessite une

haute précision de pesée.
5.18.1.2 Solution mère 1 — Saturée

Dans une fiole jaugée de 100 ml, peser à 0,1 mg près, environ 25 mg d’ester méthylique d’acide

lignocérique (C24:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide béhénique (C22:0), 25 mg d’ester méthylique

d’acide hénéicosanoïque (C21:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide arachidique (C20:0), 25 mg d’ester

méthylique d’acide stéarique (C18:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide heptadécanoïque (C17:0), 50 mg

d’ester méthylique d’acide palmitique (C16:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide pentadécanoïque

(C15:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide myristique (C14:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide

tridécanoïque (C13:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide laurique (C12:0), 25 mg d’ester méthylique

d’acide undécanoïque (C11:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide caprique (C10:0), 25 mg d’ester

méthylique d’acide caprylique (C8:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide caproïque (C6:0) et 25 mg d’ester

méthylique d’acide butyrique (C4:0). Compléter jusqu’au trait avec du n-he
...

Questions, Comments and Discussion

Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.