ISO 7402:1985
(Main)Microbiology — General guidance for the enumeration of enterobacteriaceae without resuscitation — MPN technique and colony count technique
Microbiology — General guidance for the enumeration of enterobacteriaceae without resuscitation — MPN technique and colony count technique
Microbiologie — Directives générales pour le dénombrement sans revivification des Enterobacteriaceae — Technique NPP et méthode par comptage des colonies
General Information
Relations
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Standards Content (Sample)
International Standard @ 7402
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION*ME)KAYHAPOAHAR OPrAHM3AUMR no CTAHAAPTM3AUMM*ORGANISATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Microbiology - General guidance for the enumeration
a
of Enterobacteriaceae without resuscitation -
MPN technique and colony count technique
Microbiologie - Directives générales pour le dénombrement sans revivification des Enterobacteriaceae - Technique NPP et
méthode par comptage des colonies
First edition - 1985-10-15
w UDC 579.67.087.23: 579.842.1/.2 Ref. No. IS0 7402-1985 (E)
-
% Descriptors : microbiological analysis, detection, micro-organisms, enterobacteriaceae, test results, test equipment, bacteria count methods.
v
s Price based on 8 pages
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Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 7402 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products.
Users should note that all International Standards undergo revision from time to time
and that any reference made herein to any other International Standard implies its
latest edition, unless otherwise stated,
O International Organization for Standardization, 1985 0
Printed in Switzerland
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INTERNATIONAL STANDARD IS0 7402-1985 (E)
Microbiology - General guidance for the enumeration
of Enterobacteriaceae without resuscitation -
MPN technique and colony count technique
e
1 Scope and field of application
O Introduction
This International Standard gives general guidance for the enu-
This International Standard is intended to provide general
meration of Enterobacteriaceae present in products intended
guidance for the examination of products not dealt with by
for human consumption or feeding of animals
existing International Standards and for the reference of bodies
preparing microbiological methods of test for application to
-
by calculation of the most probable number (MPN)
food products or to animal feeding stuffs. In view of the large
after incubation at 35 OC or 37 OC in liquid medium
variety of products within this field of application, these
-
guidelines may not be appropriate for some products in every by counting colonies in a solid medium after incubation
detail, and for some other products it may be necessary to use at 35 OC or 37 OC.
different methods. Nevertheless, it is hoped that, in all cases,
every attempt will be made to apply these guidelines as far as For low numbers, the MPN method is preferable, otherwise the
0
colony count method is preferred.
possible and that deviations from them will only be made if
absolutely necessary for technical reasons.
This International Standard does not include resuscitation pro-
cedures and the results should not, therefore, be related to
When this International Standard is next reviewed, account will
criteria or specifications based on the assumption that resusci-
be taken of all information then available regarding the extent
tation has been carried out.
to which the guidelines have been followed and the reasons
which necessitated deviation from them in the case of par-
A limitation on the applicability of this International Standard is
ticular products.
imposed by the susceptibility of the methods to a large degree
of variability. The methods should be used and the results inter-
The harmonization of test methods cannot be immediate, and
preted in the light of the information given in 10.3.
for certain groups of products, International Standards and/or
national standards that do not comply with the guidelines may
already exist. In cases where International Standards already
2 Reference
exist for the product to be tested, they should be followed, but
it is hoped that, when they are reviewed, they will be aligned
IS0 6887, Microbiology - General guidance for the prep-
with this International Standard so that, eventually, the only
aration of dilutions for microbiological examination.
remaining departures from these guidelines will be those
necessary for well established technical reasons.
3 Definitions
For any particular product, the method to be used will be
For the purpose of this International Standard, the following
specified in the International Standard dealing with that
definitions apply.
product.
1
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IS0 7402-1985 (E)
From the number of confirmed typical colonies per plate, calcu-
3.1 Enterobacteriaceae : Micro-organisms which ferment
lation of the number of Enterobacteriaceae per millilitre or per
glucose and show a negative oxidase reaction when the test is
carried out according to the method specified. gram of the test sample.
3.2 count of Enterobacteriaceae : The number of Entero-
5 Diluent, culture media and reagent
bacteriaceae found per millilitre or per gram of the test sample
when the test is carried out according to the method specified.
5.1 Basic materials
In order to improve the reproducibility of the results, it is
4 Principle recommended that, for the preparation of the diluent and
culture media, dehydrated basic components or complete
dehydrated media be used. Similarly, commercially prepared
4.1 Preparation of dilutions
reagents may be used. The manufacturer's instructions shall be
rigorously followed.
Preparation of decimal dilutions from the test sample.
Chemical products shall be of recognized analytical quality.
4.2 Enumeration of Enterobacteriaceae
The water used shall be distilled or deionized water, and shall
be free from substances that might inhibit the growth of
4.2.1 Most probable number (MPN) technique
Enterobacteriaceae under the test conditions.
NOTE - This technique is recommended when the number sought is
If the diluent and media are not used immediately, they shall,
expected to be in the range 1 to 100 per millilitre or per gram of the test
unless otherwise stated, be kept in the dark at a temperature
sample.
between O and 5 OC, for no longer than 1 month, in conditions
that prevent any change in their composition.
Inoculation of three tubes of double-strength medium with a
specified quantity of test sample if the product is liquid, or with
in the case of other
a specified quantity of the initial suspension
5.2 Diluent
products.
See IS0 6887 and any specific standard dealing with the
Inoculation of three tubes of single-strength medium with a
product to be examined.
specified quantity of the test sample if the product is liquid, or
with a specified quantity of the initial suspension in the case of
5.3 Culture media
other products. Then, under the same conditions, inoculation
of three tubes of single-strength medium with the first decimal
dilution of the test sample or of the initial suspension. 5.3.1 Buffered brilliant green bile glucose broth (E.E.
broth)
Incubation of the tubes at 35 OC or 37 OC') for 24 h.
Composition a)
b)
Dou ble-strength Single-strength
From the number of confirmed positive tubes, calculation of
medium medium
the most probable number of Enterobacteriaceae per millilitre
Peptone
or per gram of the test sample using the MPN table (see an- 20,o 9 10,o 9
Glucose
nex A). 10,o g 50 g
Disodium hydrogenortho-
phosphate (Na2HPOS 129 g
6,45 g
4.2.2 Colony count technique
Potassium dihydrogenortho-
(K H2P04) 4,O g
phosphate 2,o 9
NOTE - This technique is recommended when the number sought is
Ox bile, dehydrated 00 9
20,o 9
expected to be greater than 100 per millilitre or per gram of the test
Brilliant green 0,030 g 0,015 g
sample.
Water 1 O00 ml 1000 ml
Inoculation of two plates of violet red bile glucose agar (poured
plate technique) with a specified quantity of the test sample if Preparation
the initial product is liquid, or with a specified quantity of the
initial suspension in the case of other products. Covering with
Dissolve the components or the complete dehydrated
an overlayer of the same medium. medium in the water by boiling. Do not heat the medium for
longer than 30 min. Cool the medium rapidly.
Inoculation of other pairs of plates under the same conditions,
using decimal dilutions of the test sample or of the initial Adjust the pH so that after boiling it is 7,2 at 25 OC.
suspension.
Transfer 10 ml portions to sterile tubes or bottles (6.5).
Incubation of the plates at 35 OC or 37 OC for 24 h.
The temperature should be agreed between the parties concerned and recorded in the test report.
1)
2
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IS0 7402-1985 (E)
Preparation
Do not sterilize the medium.
Dissolve the components or the complete dehydrated
The medium may be stored for up to 1 week at O to 5 OC.
medium in the water by boiling.
Adjust the pH so that after sterilization it is 7,O at 25 OC.
5.3.2 Violet red bile glucose agar
Transfer the culture medium in quantities of 15 ml to tubes
Composition
or bottles (6.5).
Peptone
f 1 OC.
Sterilize the medium for 15 min at 121
Yeast extract
Bile salts
Leave the tubes or bottles in a vertical position.
Glucose
Sodium chloride
The medium may be stored for up to 1 week at O to 5 OC.
Neutral red
Crystal violet Just before use, heat in boiling water or flowing steam for
Agar 15 min, then cool rapidly to the incubation temperature.
Water
5.3.4 Nutrient agar
Preparation
Cornposition
Dissolve the components or the complete dehydrated
medium in the water by boiling.
Beef extract
3,O g
Peptone
5,O g
Adjust the pH so that after boiling it is 7,4 at 25 OC.
8to 18 gl)
Agar
Water 1 O00 ml
Transfer the culture medium to sterile tubes, flasks or
bottles (6.5) of capacity not more than 500 ml.
Preparation
Do not sterilize the medium.
Dissolve the components or the complete dehydrated
medium in the water by boiling.
Prepare this medium just before use (see 9.2.2 and 9.3.1).
Adjust the pH so that after sterilization it is 7,O at 25 OC.
Preparation of agar plates (required only for MPN technique,
Transfer the culture medium to tubes, bottles or flasks (6.5)
see 9.2.2)
of capacity not more than 500 ml.
Transfer immediately approximately 15 ml of the culture
Sterilize the medium for 15 min at 121 + 1 OC.
medium, cooled to approximately 45 OC, to Petri dishes
(6.71, and allow to solidify.
Preparation of agar plates (see 9.4.1)
Just before use, dry the plates, preferably with the lids off
Transfer portions of about 15 rnl of the culture medium,
and the agar surface downwards, in the oven (6.31, main-
melted and cooled to approximately 45 OC, to Petri dishes
tained at 50 OC, for 30 min.
(6.7) and allow to solidify.
If prepared in advance, the undried plates shall not be kept
Just before use, dry the plates, preferably with the lids off
for longer than 4 h at room temperature or 1 day at O to
and the agar surface downwards, in the oven (6.31, main-
5 oc.
tained at 50 OC, for 30 min.
If prepared in advance, the undried plates shall not be kept
5.3.3 Glucose agar
for longer than 4 h at room temperature or 1 day at O to
5 OC.
Composition
5.4 Oxidase reagent
Tryptone 10,o g
Yeast extract 1,5 g
Glucose Composition
10,o 9
Sodium chloride
5,O g
N, N, N’, N-tetrarnethyl-p-phenylene-
Bromocresol purple 0,015 g
Agar 8 to 18 g’) diamine dihydrochloride 1,o g
Water 100 ml
1 O00 ml
Water
1 i According to the manufacturer’s instructions.
3
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IS0 7402-1985 (E)
7 Sampling
Preparation
Carry out sampling in accordance with the specific standard
Dissolve the reagent in the cold water.
appropriate to the product concerned. If no such specific stan-
dard exists, it is recommended that agreement be reached on
Prepare the reagent just before use.
this subject by the parties concerned.
6 Apparatus and glassware
NOTE - Disposable apparatus is an acceptable alternative to reusable
8 Preparation of the test sample
glassware if it has suitable specifications.
See the specific standard appropriate to the product con-
Usual microbiological laboratory equipment and in particular :
cerned. If no such specific standard exists, it is recommended
that agreement be reached on this subject by the parties
concerned.
Apparatus for dry sterilization (oven) or wet ‘
6.1
sterilization (autoclave)
Apparatus that will come into contact with the diluent, culture
media, or the sample, except for apparatus that is supplied
9 Procedure
sterile (in particular plastics apparatus), shall be sterilized by
one of the following methods :
9.1 Test portion, initial suspension and dilutions
by being kept at 170 to 175 OC for not less than 1 h in an
a)
See IS0 6887 and any specifi
...
Norme internationale @I 7402
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONOMEXAYHAPOflHAR OPrAHM3AUHR II0 CTAHllAPTH3AUMHWRGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
e Microbiologie - Directives générales pour le
dénombrement sans revivification des
Enterobacteriaceae - Technique NPP et méthode par
comptage des colonies
Microbiology - General guidance for the enumeration of Enterobacteriaceae without resuscitation - MPN technique and colony
count technique
Première édition - 1985-10-15
G: CDU 579.67.087.23 : 579.842.1/.2 Réf. no : IS0 7402-1985 (FI
1
ln
Descripteurs : analyse microbiologique, détection, micro-organisme, enterobacteriaceae, résultats d'essai, matériel d'essai, comptage de
!5
bactéries.
t-4
2
Prix basé sur 8 pages
E
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de I'ISO). L'élaboration
I'ISO. Chaque
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
I'ISO participent également aux travaux.
mentales, en liaison avec
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I'ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I'ISO qui requièrent l'approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale IS0 7402 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
L'attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu'il s'agit, sauf indication
contraire, de la dernière édition.
@ Organisation internationale de normalisation, 1985 O
Imprimé en Suisse
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IS0 7402-1985 (F)
NORM E I N TE R NAT1 O NA LE
Microbiologie - Directives générales pour le
dénombrement sans revivification des
Enterobacteriaceae - Technique NPP et méthode par
comptage des colonies
O Introduction 1 Objet et domaine d'application
La présente Norme internationale donne des directives généra-
La présente Norme internationale se propose de fournir des
directives générales pour l'examen de produits non concernés les pour le dénombrement des Enterobacteriaceae dans les pro-
duits destinés à la consommation humaine ou à l'alimentation
par les Normes internationales existant actuellement, et pour
l'étude par les organismes élaborant des méthodes d'essais animale
microbiologiques destinées à être appliquées à des produits ali-
- par calcul du nombre le plus probable (NPP) après incu-
mentaires ou à des aliments pour animaux. En raison de ta
bation à 35 OC ou 37 OC en milieu liquide;
grande diversité des produits entrant dans ce domaine d'appli-
- par comptage des colonies obtenues en milieu solide
cation, il est possible que ces directives, dans tous leurs détails,
à 35 OC ou 37 OC.
ne conviennent pas exactement à certains produits et que, pour après incubation
certains autres produits, il puisse être nécessaire d'employer
Pour les petits nombres, la technique NPP est préférable, sinon
des méthodes différentes. Néanmoins, il est à espérer que,
dans tous les cas, tous les efforts seront faits pour appliquer, on préférera la méthode par comptage des colonies.
chaque fois qu'il sera possible, ces directives, et qu'on n'aura
recours à des dérogations que si cela est absolument nécessaire La présente Norme internationale n'inclut pas de technique de
revivification, et les résultats ne doivent pas être reliés aux cri-
pour des raisons techniques.
tères ou spécifications basés sur la supposition qu'une revivifi-
cation a été effectuée.
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il
sera tenu compte de tous les renseignements disponibles à ce
Des limites sont imposées aux possibilités d'application de la
moment-là, à savoir dans quelle mesure les directives auront
été suivies et les raisons pour lesquelles il aura été nécessaire présente Norme internationale, du fait que ces méthodes sont
sujettes à de grandes variations. II est recommandé d'employer
d'y déroger dans le cas de produits particuliers.
ces méthodes et d'interpréter les résultats à la lumière des ren-
seignements donnés en 10.3.
L'harmonisation des méthodes d'essai ne peut pas être immé-
diate et, pour certains groupes de produits, des Normes inter-
nationales etiou des normes nationales, qui ne concordent pas
avec ces directives, existent peut-être déjà. Dans le cas où des 2 Référence
Normes internationales existent déjà pour le produit à essayer,
elles devront être appliquées, mais il serait souhaitable que, IS0 6887, Microbiologie - Directives générales pour la prépa-
ration des dilutions en vue de l'examen microbiologique.
lorsqu'elles viendront en révision, elles soient alignées sur la
présente Norme internationale, si bien que, finalement, les
seules divergences restantes seront celles qui sont nécessaires
pour des raisons techniques bien établies. 3 Définitions
Dans le cadre de la présente Norme internationale, les défini-
Pour chaque produit particulier, la méthode à utiliser sera préci-
tions suivantes sont applicables.
sée dans la Norme internationale concernant ce produit.
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 7402-1985 (FI
3.1 Enterobacteriaceae : Micro-organismes fermentant le Dans les mêmes conditions, ensemencement d‘autres paires de
boîtes avec les dilutions décimales obtenues à partir de I’échan-
glucose et donnant une réaction oxydase négative lorsque
l’essai est effectué selon la méthode spécifiée. tillon pour essai ou de la suspension mère.
Incubation des boîtes à 35 OC ou 37 OC pendant 24 h.
3.2 dénombrement des Enterobacteriaceae : Nombre
d’Enterobacteriaceae trouvé par millilitre ou par gramme
À partir du nombre de colonies caractéristiques confirmées par
d’échantillon lorsque l’essai est effectué selon la méthode
boîte de Petri, calcul du nombre d‘Enterobacteriaceae par milli-
spécifiée.
litre ou par gramme d‘échantillon pour essai.
4 Principe
5 Diluant, milieux de culture et réactif
4.1 Préparation des dilutions
5.1 Composants de base
À partir de l’échantillon pour essai, préparation des dilutions
Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il est recom-
décimales.
mandé d’utiliser, pour la préparation du diluant et des milieux
de culture, des composants de base déshydratés ou des milieux
complets déshydratés. De la même facon, des préparations
4.2 Dénombrement des Enterobacteriaceae
commerciales de réactifs peuvent être utilisées. Les instructions
du fabricant doivent être suivies scrupuleusement.
4.2.1 Technique du nombre le plus probable (NPPI
Les produits chimiques utilisés doivent être de qualité analyti-
NOTE - II est recommandé d‘utiliser cette technique lorsque le nom-
que reconnue.
1 à 100 par milli-
bre cherché est supposé se trouver dans l‘intervalle de
litre ou par gramme d’échantillon pour essai.
L‘eau utilisée doit être de l’eau distillée ou déionisée, exempte
de substances susceptibles d’inhiber la croissance des Entero-
Ensemencement de trois tubes de milieu double concentration
bacteriaceae dans les conditions de l’essai.
avec une quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le
produit à examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée
Si le diluant et les milieux ne sont pas utilisés extemporané-
de suspension mère dans le cas d‘autres produits.
ment, ils doivent, sauf spécifications contraires, être conservés
à l’obscurité entre O et 5 OC pendant 1 mois maximum, dans
Ensemencement de trois tubes de milieu simple concentration
des conditions évitant toute modification de leur composition.
avec une quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le
produit à examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée
de suspension mère dans le cas d’autres produits, puis, dans
5.2 Diluant
les mêmes conditions, ensemencement de trois tubes de milieu
simple concentration avec la première dilution décimale obte-
Voir IS0 6887 et la norme spécifique traitant du produit à
nue à partir de l’échantillon pour essai ou de la suspension
analyser.
mère.
Incubation des tubes à 35 OC ou 37 OC pendant 24 h.
5.3 Milieux de culture
À partir du nombre de tubes confirmés positifs, calcul du nom-
bre le plus probable d‘Enterobacteriaceae par millilitre ou par
5.3.1 Milieu tamponné, à la bile, au vert brillant et au
gramme d’échantillon pour essai au moyen de la table NPP (voir
glucose (milieu E.E.)
annexe A).
Composition a) bl
Milieu Milieu
4.2.2 Comptage des colonies
double simple
concentration concentration
NOTE - II est recommandé d’utiliser cette technique lorsque le nom-
bre cherché est supposé supérieur à 100 par millilitre ou par gramme
Peptone 20,o !J 10,o 9
d’échantillon pour essai.
Glucose
10,o 9 5,O g
Hydrogéno-orthop hosp hate
Ensemencement en profondeur du milieu gélosé à la bile, au
disodique ( Na2H PO4)
12,w g 6,45 g
cristal violet et au glucose, coulé dans deux boîtes de Petri, Dihydrogéno-orthophosphate
avec une quantité déterminée de l‘échantillon pour essai si le
de potassium (KH2P04)
40 g 2,o 9
produit à examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée
Bile de bœuf déshydratée 40,o g 20,o 9
de la suspension mère dans le cas d‘autres produits. Recouvre- Vert brillant 0,030 g 0,015 g
ment avec une couche du même milieu. Eau 1000 ml
1000 ml
1) La température doit faire l’objet d‘un accord entre les parties concernées et doit être notée dans le procès-verbal d‘essai.
2
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IS0 7402-1985 (FI
Préparation
5.3.3 Gélose glucosée
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté
Composition
dans l‘eau, en portant le tout à ébullition. Ne pas chauffer le
milieu plus de 30 min. Refroidir le milieu rapidement.
Tryptone
Extrait de levure
Ajuster le pH de sorte qu‘après ébullition, il soit de 7,2 à
Glucose
25 OC.
Chlorure de sodium
Pourpre de bromocrésol
Répartir le milieu de culture par quantités de 10 ml dans des
Gélose
tubes stériles (6.5).
Eau
Ne pas stériliser le milieu.
Préparation
Le milieu peut être conservé 1 semaine au maximum entre
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté
O et 5 OC.
dans l’eau, en portant le tout à ébullition.
5.3.2 Gélose à la bile, au cristal violet et au glucose
Ajuster le pH de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,O à
25 OC.
Composition
Répartir le milieu de culture par quantités de 15 ml dans des
Peptone
tubes (6.5).
Extrait de levure
Sels biliaires Stériliser le milieu à 121 -I 1 OC durant 15 min.
Glucose
Maintenir les tubes en position verticale.
Chlorure de sodium
Rouge neutre
Le milieu peut être conservé 1 semaine au maximum entre O
Cristal violet
et 5 OC.
Gélose
€au
Juste avant l’emploi, chauffer dans de l’eau bouillante ou
sous courant de vapeur pendant 15 min, puis refroidir rapi-
Préparation
dement à la température d’incubation.
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté
5.3.4 Gélose nutritive
dans l‘eau, en portant le tout à ébullition.
Composition
Ajuster le pH de sorte qu‘après ébullition, il soit de 7,4 à
25 OC.
Extrait de viande de bœuf 3,O g
Répartir le milieu de culture dans des tubes stériles ou dans
Peptone
5,O g
des flacons stériles (6.5) de 500 ml de capacité maximale.
Gélose 8à 18 gl)
O00 ml
Eau 1
Ne pas stériliser le milieu.
Préparation
Préparer ce milieu extemporanément (voir 9.2.2 et 9.3.1).
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté
dans l’eau, en portant le tout à ébullition.
Préparation des boîtes de gélose (seulement pour la technique
NPP - voir 9.2.2)
Ajuster le pH de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,O à
Transférer immédiatement environ 15 ml du milieu de 25 OC.
culture, refroidi à environ 45 OC, dans des boîtes de Petri
Répartir le milieu de culture dans des tubes ou des flacons
(6.7) et laisser se solidifier.
(6.5) de 500 ml de capacité maximale.
Juste avant l’emploi, sécher les boîtes de gélose, de préfé-
Stériliser le milieu à 121 f 1 OC durant 15 min.
rence avec le couvercle enlevé et la surface de la gélose
tournée vers le bas, dans une étuve (6.3) réglée à 50 OC,
durant 30 min.
Préparation des boîtes de gélose (voir 9.4.1)
Si elles ont été préparées à l‘avance, les boîtes de gélose
Transférer des quantités d’environ 15 ml du milieu de cul-
non séchées ne doivent pas être conservées plus de 4 h à la
ture, fondu puis refroidi à environ 45 OC, dans des boîtes de
température ambiante ou plus de 1 jour entre O et 5 OC.
Petri (6.7) et laisser se solidifier.
Selon les instructions du fabricant.
1)
3
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IS0 7402-1985 (F)
Juste avant l'emploi, sécher les boîtes de gélose, de préfé- 6.7 Anse bouclée, d'un diamètre d'environ 3 mm, et fil, en
platine iridié ou en nickel-chrome, et/ou baguette de verre.
rence avec le couvercle enlevé et la surface de la gélose
tournée vers le bas, dans une étuve (6.3) réglée à 50 OC,
durant 30 min. NOTE - L'attention est attirée en 9.4.2.1 sur le fait que le nickel-
chrome ne convient pas pour i'essai à i'oxydase.
Si elles ont été préparées à l'avance, les boîtes de gélose
non séchées ne doivent pas être conservées plus de 4 h à la
6.8 Pipettes graduées à écoulement total, de capacités
température ambiante ou plus de 1 jour entre O et 5 OC.
nominales de 1 et 10 ml, graduées respectivement en 0,l ml et
0,5 ml, et dont l'orifice d'écoulemeri: a un diamètre de 2 à
5.4 Réactif pour l'essai à l'oxydase 3 mm.
Composition
pH-mètre, avec une précision de lecture de I0,l unité
6.9
pH à 25 OC.
Dichlorhydrate de N,N,N',N'-tétraméthyl-
p-phénylène diamine 1,o 9
Eau 100 ml
7 Échantillonnage
Préparation
Effectuer l'échantillonnage conformément à la norme . iu pro-
duit concerné. S'il n'y a pas de telle norme disponible, il est
Dissoudre le réactif dans l'eau froide.
recommandé que les parties concernées se mettent d'accord à
ce sujet.
Préparer le réactif immédiatement avant usage.
8 Préparation de l'échantillon pour essai
6 Appareillage et verrerie
Voir la norme spécifique traitant du produit concerné. S'il n'y a
NOTE - Le matériel à usage unique est acceptable au même titre que
la verrerie réutilisable, si ses spécifications sont appropriées. pas de telle norme, il est recommandé aux parties concernées
de se mettre d'accord à ce sujet.
Matériel courant de laboratoire de microbiologie, et notam-
ment :
9 Mode opératoire
Appareil pour la stérilisation en chaleur sèche (four)
6.1
ou en chaleur humide (autoclave)
9.1 Prise d'essai, suspension mère et dilutions
Le matériel destiné à entrer en contact
...
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