ISO 16297:2020

Milk — Bacterial count — Protocol for the evaluation of alternative methods

This document specifies a protocol for the evaluation of instrumental alternative methods for total bacterial count in raw milk from animals of different species. NOTE The document is complementary to ISO 16140-2 and ISO 8196 | IDF 128 (all parts).

Lait — Dénombrement bactériologique — Protocole pour l'évaluation de méthodes alternatives

Le présent document spécifie un protocole pour l'évaluation de méthodes instrumentales alternatives pour le dénombrement bactérien total dans le lait cru provenant d'animaux de différentes espèces. NOTE Le document est complémentaire à l'ISO 16140-2 et à l'ISO 8196 | FIL 128 (toutes les parties).

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 05-Jan-2020
• ICS: 67.100.10 - Milk and processed milk products
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 06-Jan-2020
• Due Date: 29-Mar-2020
• Completion Date: 06-Jan-2020

Relations

• Consolidates: ISO 22117:2019 - Microbiology of the food chain — Specific requirements and guidance for proficiency testing by interlaboratory comparison
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revises: ISO 16297:2013 - Milk — Bacterial count — Protocol for the evaluation of alternative methods
• Effective Date: 15-Dec-2017

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 16297
IDF 161
Second edition
2020-01
Milk — Bacterial count — Protocol for
the evaluation of alternative methods
Lait — Dénombrement bactériologique — Protocole pour
l'évaluation de méthodes alternatives
Reference numbers
ISO 16297:2020(E)
IDF 161:2020(E)
©
ISO and IDF 2020

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ISO 16297:2020(E)
IDF 161:2020(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO and IDF 2020
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on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
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Published in Switzerland
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IDF 161:2020(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Transformation of results . 1
5 Attributes of the alternative method . 2
5.1 General . 2
5.2 Description of the method to be evaluated . 2
5.2.1 Description . . . 2
5.2.2 Checklist . 2
5.3 Measuring range . 2
5.3.1 Lower limit of quantification. 2
5.3.2 Upper limit of quantification . 3
5.3.3 Linearity of the instrument signal . 3
5.4 Carry-over . 4
5.5 Stability . 5
5.6 Precision . 6
5.6.1 General. 6
5.6.2 Repeatability . 6
5.6.3 Reproducibility . 6
5.6.4 Evaluation of factors affecting the results . 6
6 Alternative method as an estimate of the anchor method . 6
6.1 General . 6
6.2 Evaluation of factors affecting the estimation . 7
6.3 Measurement protocol . 7
6.4 Calculations . 7
6.4.1 General. 7
6.4.2 Visual check of a scatter diagram . 7
6.4.3 Outliers . 8
6.4.4 Accuracy of the estimate and accuracy profile . 8
6.5 Attributes of the alternative method expressed in units of the anchor method .10
7 Rating of the elaborated attributes .10
Bibliography .11
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IDF 161:2020(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national
standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally
carried out through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented on that committee.
International organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part
in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all
matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO
and IDF.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 16297 | IDF 161:2013), which has been
technically revised with the following main changes:
— the number of samples and the calculation of the lower limit of quantification has been changed and
aligned with ISO 16140-2;
— an example of carry-over effect given in Figure 1 has been omitted;
— the requirements for the evaluation of the accuracy of the estimate and the accuracy profile have
been clarified and aligned with ISO 16140-2;
— Annex A (informative) has been omitted.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
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ISO 16297:2020(E)
IDF 161:2020(E)
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit private sector organization representing the
interests of various stakeholders in dairying at the global level. IDF members are organized in National
Committees, which are national associations composed of representatives of dairy-related national
interest groups including dairy farmers, dairy processing industry, dairy suppliers, academics and
governments/food control authorities.
ISO and IDF collaborate closely on all matters of standardization relating to methods of analysis
and sampling for milk and milk products. Since 2001, ISO and IDF jointly publish their International
Standards using the logos and reference numbers of both organizations.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
This document was prepared by the IDF Standing Committee on Statistics and Automation and ISO
Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being
published jointly by IDF and ISO.
The work was carried out by the IDF/ISO Action Team (S18) of the Standing Committee on Statistics and
Automation under the aegis of its project leaders, Mrs V. Tzeneva (NL) and Mrs I. Andersson (SE).
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IDF 161:2020(E)
Introduction
Any quantitative measurement in microbiology should consider that there is a requirement for the
microbiological state in a sample to be regarded as one point within the coordinates of a multidimensional
system, which is to be projected on to the one-dimensional scale of the method applied, i.e. plate count,
flow cytometry. Aspects such as flora (types and numbers of microorganisms and their distribution),
growth phase, sub-lethal damage, metabolic activity, and history, influence to a greater or lesser extent
any parameter that is measured. It is evident that any projection of an n-dimensional situation onto a
one-dimensional scale is bound to provide a picture of the real situation that is rather restricted. In this
respect, one has to bow to the inevitable, regardless of which method of measurement is preferred.
The term “anchor method” in this document means a method internationally recognized by experts,
used in legislation or by agreement between the parties. There are requirements for evaluation of
an alternative method to refer to the anchor method and to be based on the examination of suitable
samples for its intended use.
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ISO 16297:2020(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 161:2020(E)
Milk — Bacterial count — Protocol for the evaluation of
alternative methods
1 Scope
This document specifies a protocol for the evaluation of instrumental alternative methods for total
bacterial count in raw milk from animals of different species.
NOTE The document is complementary to ISO 16140-2 and ISO 8196 | IDF 128 (all parts).
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 5725-1, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 1: General
principles and definitions
ISO 5725-2, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 2: Basic method
for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method
ISO 8196 | IDF 128 (all parts), Milk — Definition and evaluation of the overall accuracy of alternative
methods of milk analysis
ISO 16140-1, Microbiology of the food chain — Method validation — Part 1: Vocabulary
ISO 21187 | IDF 196, Milk — Quantitative determination of bacteriological quality — Guidance for
establishing and verifying a conversion relationship between results of an alternative method and anchor
method results
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 5725-1, ISO 5725-2,
ISO 8196-1 | IDF 128-1, ISO 8196-2 | IDF 128-2, ISO 8196-3 | IDF 128-3 and ISO 16140-1 apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
4 Transformation of results
A prerequisite for statistics most common in the evaluation of measuring methods is the approximation
of a normal distribution of the data. The exponential multiplication of microorganisms usually leads to a
right-tailed distribution with quantitative microbiological parameters. Thus, in general, transformation
of the raw data is necessary for approximation of normality. This is usually a common logarithmic
transformation. The most appropriate transformation can be checked by comparing histograms. All
statistics are then computed from the transformed data, unless specified otherwise, and only the final
results are re-transformed to give a more expressive idea of the situation to the user (see Reference [2]).
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IDF 161:2020(E)
5 Attributes of the alternative method
5.1 General
For each alternative method, only the relevant parameters outlined in this clause shall be evaluated.
For example, the measuring range (see 5.3) of the plate loop method is determined by the loop(s) used
and the determination of the parameter is not relevant.
5.2 Description of the method to be evaluated
5.2.1 Description
The description of the method under study shall be in line with the checklist in 5.2.2.
Most of the information is found in the specification of the method given by the responsible supplier or
any other source (author) of the technique specified.
5.2.2 Checklist
a) Principle of the method.
b) Parameter or unit.
c) Technical design of the measurement procedure.
d) Field of application:
1) purpose, e.g. research, screening, milk grading;
2) matrix, e.g. raw milk from cows.
e) Supplier(s) of instrument, reagents and standards.
f) Specification of the method given by the producer or the author:
1) prerequisites for sampling (often compared to the situation of fat analysis);
2) possibilities for sample preservation [reagent(s), storage condition(s)];
3) quantitative (units: method under study or anchor method) and qualitative (the kind of
microorganisms covered) spectrum;
4) precision (in units of the method under study or in anchor method units);
5) accuracy of the estimate (in anchor method units);
6) samples per hour;
7) list of references.
5.3 Measuring range
5.3.1 Lower limit of quantification
The lower limit of quantification is defined on milk samples without or with a very low concentration of
bacteria. The standard deviation of n-fold measurements is estimated; generally, n = 20. The standard
2 © ISO and IDF 2020 – All rights reserved

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IDF 161:2020(E)
deviation s is calculated in units of the alternative method without any transformation of the data
0
using Formula (1):
n
2
1
s = yy− (1)
()
0 ∑ j
n−1
j=1
where
n is the total number of test portions used;
y is the not transformed result of the test portion j;
j
y
is the average not transformed result of all test portions.
The lower limit of quantification is calculated as Ls=10 (see also ISO 16140-2).
q 0
5.3.2 Upper limit of quantification
The upper limit of quantification is determined by the highest possible reading of the method or by
methodological limitations, e.g. coincidence effects, inaccuracy in the upper measuring range, clogging
of filters. Coincidence is when two or more elements of the measurand are detected simultaneously and
identified as only one unit. For e
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 16297
FIL 161
Deuxième édition
2020-01
Lait — Dénombrement
bactériologique — Protocole pour
l'évaluation de méthodes alternatives
Milk — Bacterial count — Protocol for the evaluation of
alternative methods
Numéros de référence
ISO 16297:2020(F)
FIL 161:2020(F)
©
ISO et FIL 2020

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ISO 16297:2020(F)
FIL 161:2020(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO et FIL 2020
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office International Dairy Federation
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Tél.: [phone] Tél.: + 32 2 325 67 40
Fax: [phone] Fax: + 32 2 325 67 41
E-mail: [e-mail] E-mail: [e-mail]
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Publié en Suisse
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ISO 16297:2020(F)
FIL 161:2020(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Transformation des résultats . 1
5 Caractéristiques d’une méthode alternative . 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Description de la méthode à évaluer . 2
5.2.1 Description . . . 2
5.2.2 Liste de contrôle . 2
5.3 Plage de mesure . 2
5.3.1 Limite inférieure de quantification . 2
5.3.2 Limite supérieure de quantification . 3
5.3.3 Linéarité du signal de l’appareil . 3
5.4 Contamination entre échantillons . 4
5.5 Stabilité . 5
5.6 Fidélité . 6
5.6.1 Généralités . 6
5.6.2 Répétabilité . 6
5.6.3 Reproductibilité . 6
5.6.4 Évaluation des facteurs affectant les résultats . 6
6 Méthode alternative utilisée comme estimation de la méthode d’ancrage .7
6.1 Généralités . 7
6.2 Évaluation des facteurs affectant l’estimation . 7
6.3 Protocole d’essai . 7
6.4 Calculs . 8
6.4.1 Généralités . 8
6.4.2 Contrôle visuel d’un diagramme de dispersion . 8
6.4.3 Valeurs aberrantes . 8
6.4.4 Précision d’estimation et profil d’exactitude . 9
6.5 Caractéristiques de la méthode alternative exprimées dans les unités de la
méthode d’ancrage .10
7 Évaluation des caractéristiques obtenues .10
Bibliographie .12
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ISO 16297:2020(F)
FIL 161:2020(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et par la Fédération internationale du lait (FIL). Il est publié conjointement
par l’ISO et la FIL.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 16297 | FIL 161:2013) qui a fait
l’objet d’une révision technique en appliquant les modifications suivantes:
— le nombre d’échantillons et le calcul de la limite inférieure de quantification ont été modifiés et mis
en conformité avec l’ISO 16140-2;
— un exemple d’effet de contamination entre les échantillons, donné à la Figure 1, a été supprimé;
— les exigences d’évaluation de la précision d’estimation et du profil d’exactitude ont été clarifiées et
mises en conformité avec l’ISO 16140-2;
— l’Annexe A (informative) a été supprimée.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO et FIL 2020 – Tous droits réservés

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ISO 16297:2020(F)
FIL 161:2020(F)
La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation privée à but non lucratif qui représente
les intérêts des divers acteurs de la filière laitière au niveau international. Les membres de la FIL sont
organisés en comités nationaux, qui sont des associations nationales composées de représentants de
groupes d’intérêt nationaux dans le secteur des produits laitiers, incluant des producteurs laitiers, des
acteurs de l’industrie de transformation des produits laitiers, des fournisseurs de produits laitiers, des
universitaires et des représentants des gouvernements/autorités chargées du contrôle des aliments.
L’ISO et la FIL collaborent étroitement sur toutes les activités de normalisation concernant les méthodes
d’analyse et d’échantillonnage du lait et des produits laitiers. Depuis 2001, l’ISO et la FIL publient
conjointement leurs Normes internationales en utilisant les logos et les numéros de référence des deux
organisations.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Le présent document a été élaboré par le Comité permanent de la FIL chargé des Statistiques et de
l’automatisation de la Fédération internationale du lait (FIL) et le comité technique ISO/TC 34, Produits
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Il est publié conjointement par l’ISO et la FIL.
L’ensemble des travaux a été confié à l’équipe d’action ISO/FIL (S18) du Comité permanent chargé
des Statistiques et l’automatisation, sous la direction de ses cheffes de projet, Mme V. Tzeneva (NL) et
Mme I. Andersson (SE).
© ISO et FIL 2020 – Tous droits réservés v

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ISO 16297:2020(F)
FIL 161:2020(F)
Introduction
En microbiologie, il convient que toute détermination quantitative tienne compte du fait que l’état
microbiologique dans un échantillon exige d’être considéré comme un point parmi les coordonnées
d’un système multidimensionnel, qui doit être projeté sur l’échelle unidimensionnelle de la méthode
appliquée, c’est-à-dire le dénombrement sur boîte, la cytométrie de flux. Les aspects tels que la flore
(types et nombres de micro-organismes ainsi que leur distribution), la phase de croissance, les
dommages sublétaux, l’activité et l’histoire métaboliques, influencent à un degré plus ou moins élevé
tout paramètre mesuré. Il est évident que toute projection d’une situation n-dimensionnelle sur une
échelle unidimensionnelle est une représentation plutôt limitée de la situation réelle. À cet égard, il faut
s’incliner devant l’inévitable, quelle que soit la méthode de mesure préférée.
Dans le présent document, la «méthode d’ancrage» désigne une méthode internationalement reconnue
par les experts, utilisée dans la législation ou dans le cadre d’un accord entre les parties. Il est exigé
que l’évaluation d’une méthode alternative se réfère à la méthode d’ancrage et repose sur l’examen
d’échantillons appropriés à l’usage prévu.
vi © ISO et FIL 2020 – Tous droits réservés

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ISO 16297:2020(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 161:2020(F)
Lait — Dénombrement bactériologique — Protocole pour
l'évaluation de méthodes alternatives
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie un protocole pour l’évaluation de méthodes instrumentales alternatives
pour le dénombrement bactérien total dans le lait cru provenant d’animaux de différentes espèces.
NOTE Le document est complémentaire à l’ISO 16140-2 et à l’ISO 8196 | FIL 128 (toutes les parties).
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 5725-1, Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes de mesure — Partie 1: Principes
généraux et définitions
ISO 5725-2, Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes de mesure — Partie 2: Méthode de
base pour la détermination de la répétabilité et de la reproductibilité d’une méthode de mesure normalisée
ISO 8196 | FIL 128 (toutes les parties), Lait — Définition et évaluation de la précision globale des méthodes
alternatives d’analyse du lait
ISO 16140-1, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Validation des méthodes — Partie 1: Vocabulaire
ISO 21187 | FIL 196, Lait — Détermination quantitative de la qualité bactériologique — Lignes directrices
pour établir et vérifier une relation de conversion entre les résultats d’une méthode de routine et les
résultats d’une méthode d’ancrage
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et les définitions de l’ISO 5725-1, dans l’ISO 5725-2,
dans l’ISO 8196-1 | FIL 128-1, dans l’ISO 8196-2 | FIL 128-2, dans l’ISO 8196-3 | FIL 128-3 et dans
l’ISO 16140-1 s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
4 Transformation des résultats
Un préalable aux traitements statistiques le plus couramment utilisé en évaluation de méthodes de
mesure est que la distribution des données suive une loi normale. La multiplication exponentielle des
micro-organismes entraîne généralement une distribution dissymétrique vers la droite des paramètres
microbiologiques quantitatifs. Ainsi, une transformation des données brutes est en général nécessaire
pour l’obtention d’une population normale. Il s’agit habituellement d’une transformation logarithmique
décimale. La transformation la plus adaptée peut être contrôlée en comparant les histogrammes. Sauf
indication contraire, toutes les statistiques sont ensuite calculées à partir des données transformées
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ISO 16297:2020(F)
FIL 161:2020(F)
et seuls les résultats finaux sont retransformés pour donner une idée plus réaliste de la situation à
l’utilisateur (voir Référence [2]).
5 Caractéristiques d’une méthode alternative
5.1 Généralités
Pour chaque méthode alternative, seuls les paramètres pertinents mentionnés dans ce paragraphe
doivent être évalués. Par exemple, la plage de mesure (voir 5.3) de la méthode de l’anse calibrée est
déterminée par l’anse ou (les anses) utilisée(s) et la détermination du paramètre n’est pas pertinente.
5.2 Description de la méthode à évaluer
5.2.1 Description
La description de la méthode étudiée doit être conforme à la liste de contrôle donnée en 5.2.2.
La majorité des informations figure dans la spécification de la méthode donnée par le fournisseur
responsable ou par toute autre source (auteur) de la technique spécifiée.
5.2.2 Liste de contrôle
a) Principe de la méthode.
b) Paramètre ou unité.
c) Conception technique du mode opératoire de mesure.
d) Domaine d’application:
1) objectif: par exemple recherche, criblage, classement du lait;
2) matrice: par exemple lait cru de vaches.
e) Fournisseur(s) de l’appareil, des réactifs et des étalons.
f) Spécification de la méthode donnée par le producteur ou l’auteur:
1) préalables à l’échantillonnage (souvent comparés au cas de l’analyse de la matière grasse);
2) possibilités de conservation de l’échantillon [réactif(s), condition(s) de stockage];
3) aspect quantitatif (unités: méthode étudiée ou méthode d’ancrage) et qualitatif (type de micro-
organismes concernés) de la méthode;
4) fidélité (dans les unités de la méthode étudiée ou de la méthode d’ancrage);
5) précision d’estimation (dans les unités de la méthode d’ancrage);
6) échantillons par heure;
7) liste des références.
5.3 Plage de mesure
5.3.1 Limite inférieure de quantification
La limite inférieure de quantification est définie sur des échantillons de lait sans ou ayant une très
faible concentration en bactéries. L’écart-type de n mesures est estimé; généralement, n = 20. L’écart-
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ISO 16297:2020(F)
FIL 161:2020(F)
type s est calculé dans les unités de la méthode alternative sans transformation des données, d’après
0
la Formule (1):
n
2
1
s = yy− (1)
()
0 ∑ j
n−1
j=1
où
n est le nombre total de prises d’essai utilisées;
y est le résultat non transformé de la prise d’essai j;
j
y
est le résultat non transformé moyen de toutes les prises d’essai.
La limite inférieure de quantification est calculée sous la forme Ls=10 (voir également ISO 16140-2).
q 0
5.3.2 Limite supérieure de quantification
La limite supérieure de quantification est déterminée par le résultat de mesure le plus élevé permis
par la méthode ou par des limites méthodologiques, par exemple les effets de coïncidence, l’imprécision
dans la partie supérieure de la plage, le colmatage des filtres. La coïncidence a lieu lorsque deux
éléments ou plus du mesurande sont détectés simultanément et identifiés comme étant une seule unité.
Par exemple, avec la cytométrie de flux, si deux cellules bactériennes traversent en même temps le
détecteur, elles sont détectées comme étant une seule unité. L’effet de coïncidence est supérieur avec
des concentrations plus élevées d’un mesurande.
La limite supérieure de quantification est déterminée comme étant la concentration maximale à
laquelle l’instrument reste linéaire, conformément à 5.3.3.
5.3.3 Linéarité du signal de l’appareil
La relation entre les lectures de l’instrument et les valeurs attendues doit être linéaire dans la gamme de
dénombrements bactériens souhaitée. Tout écart à la linéarité peut provenir de signaux non spécifiques
et d’effets de coïncidence.
Pour évaluer la linéarité, utiliser les donné
...