ISO/TS 15213-3:2024
(Main)Microbiology of the food chain — Horizontal method for the detection and enumeration of Clostridium spp. — Part 3: Detection of Clostridium perfringens
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the detection and enumeration of Clostridium spp. — Part 3: Detection of Clostridium perfringens
This document specifies the detection of Clostridium (C.) perfringens. This document is applicable to: — products intended for human consumption; — products intended for animal feeding; — environmental samples in the area of food and feed production and handling; — samples from the primary production stage. This horizontal method was originally developed for the examination of all samples belonging to the food chain. Based on the information available at the time of publication of this document, this method is considered to be fully suited to the examination of all samples belonging to the food chain. However, because of the large variety of products in the food chain, it is possible that this horizontal method is not appropriate in every detail for all products. Nevertheless, it is expected that the required modifications are minimized so that they do not result in a significant deviation from this horizontal method. NOTE Interlaboratory studies with a small number of participating laboratories ( — ready-to-eat, ready-to-reheat meat products; — eggs and egg products (derivates); — ready-to-eat, ready-to-reheat fishery products; — processed fruits and vegetables; — infant formula and infant cereals (with probiotics); — multi-component foods or meal components. It has also been validated with a small number of participating laboratories for the following other category: — environmental samples (food or feed production). Since the method is not commonly used for samples in the primary production stage, this category was not included in the interlaboratory study. Therefore, no performance characteristics were obtained for this category. The method has not been validated for the category ‘pet food and animal feed’, as the test samples used for the interlaboratory study were already naturally contaminated with C. perfringens. Given the limited number of participating laboratories in the interlaboratory studies, the calculated performance characteristics can be used as indicative values of the method performance. For detailed information on the validation, see Clause 11 and Annexes C to F.
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale pour la recherche et le dénombrement de Clostridium spp. — Partie 3: Recherche de Clostridium perfringens
Le présent document définit la recherche de Clostridium (C.) perfringens. Le présent document s’applique: — aux produits destinés à la consommation humaine; — aux produits destinés à l’alimentation animale; — aux échantillons environnementaux prélevés dans les secteurs de la production et de la distribution des aliments; — aux échantillons issus du stade de la production primaire. Cette méthode horizontale a été initialement développée pour l’examen de tous les échantillons provenant de la chaîne alimentaire. Sur la base des informations disponibles au moment de la publication du présent document, cette méthode est considérée comme parfaitement adaptée à l’examen de tous les échantillons provenant de la chaîne alimentaire. Cependant, en raison de la grande diversité des produits de la chaîne alimentaire, il est possible que cette méthode horizontale ne soit pas appropriée dans ses moindres détails à tous les produits. Néanmoins, il est attendu que les modifications requises soient réduites au minimum afin qu’elles n’entraînent pas de déviation significative de cette méthode horizontale. NOTE Des études interlaboratoires avec un petit nombre de laboratoires participants ( — les produits à base de viande prêts à consommer et prêts à réchauffer; — les œufs et ovoproduits (dérivés); — les produits à base de poisson prêts à consommer et prêts à réchauffer; — les fruits et légumes transformés; — les préparations et céréales pour nourrissons (avec probiotiques); — les aliments composés et les composants de repas. La méthode a également été validée avec un petit nombre de laboratoires participants pour la catégorie suivante: — les échantillons environnementaux (production d’aliments ou d’aliments pour animaux). Étant donné que cette méthode n’est pas couramment utilisée pour les échantillons au stade de la production primaire, cette catégorie n’a pas été incluse dans l’étude interlaboratoires. Par conséquent, aucune caractéristique de performance n’a été déterminée pour cette catégorie. La méthode n’a pas été validée pour la catégorie «aliments pour animaux», car les échantillons pour essai utilisés dans l’étude interlaboratoires étaient déjà naturellement contaminés par C. perfringens. Étant donné le nombre limité de laboratoires participants dans les études interlaboratoires, les caractéristiques de performance calculées peuvent être utilisées comme valeurs indicatives pour la performance de la méthode. Pour de plus amples informations sur la validation, voir l’Article 11 et les Annexes C à F.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
Technical
Specification
ISO/TS 15213-3
First edition
Microbiology of the food chain —
2024-05
Horizontal method for the
detection and enumeration of
Clostridium spp. —
Part 3:
Detection of Clostridium perfringens
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale
pour la recherche et le dénombrement de Clostridium spp. —
Partie 3: Recherche de Clostridium perfringens
Reference number
© ISO 2024
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 2
3 Terms and definitions . 2
4 Principle . 3
4.1 General .3
4.2 Enrichment in selective liquid medium . .3
4.3 Isolation on selective solid medium .3
4.4 Confirmation .3
5 Culture media and reagents . 3
6 Equipment and consumables . 3
7 Sampling . 4
8 Preparation of test sample . 4
9 Procedure . 5
9.1 General .5
9.2 Test portion and initial suspension .5
9.3 Selective enrichment .5
9.4 Isolation .5
9.5 Confirmation of C. perfringens .5
9.5.1 Selection of colonies for confirmation .5
9.5.2 Acid phosphatase test .6
9.5.3 Sulfite indole motility (SIM) agar test .6
9.5.4 Differentiation between human pathogenic and non-pathogenic C. perfringens
strains (optional) .6
9.5.5 Interpretation .7
10 Expression of results . 7
11 Indicative performance characteristics of the method. 7
11.1 Validation based on principles of ISO 17468 .7
11.2 Indicative performance characteristics .7
12 Test report . 9
13 Quality assurance . 10
Annex A (normative) Flow diagram of the procedure .11
Annex B (normative) Culture media and reagents .12
Annex C (informative) Indicative performance characteristics of the method using TSC
isolation agar and acid phosphatase confirmation test .21
Annex D (informative) Indicative performance characteristics of the method using TSC
isolation agar and SIM agar test .24
Annex E (informative) Indicative performance characteristics of the method using LENA
isolation agar and acid phosphatase confirmation test .27
Annex F (informative) Indicative performance characteristics of the method using LENA
isolation agar and SIM agar confirmation test .30
Annex G (informative) Molecular differentiation between pathogenic and non-pathogenic
Clostridium perfringens .33
Bibliography .34
iii
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee
has been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types
of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the
ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received notice of (a)
patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that
this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee
CEN/TC 463, Microbiology of the food chain, in accordance with the Agreement on technical cooperation
between ISO and CEN (Vienna Agreement).
A list of all parts in the ISO 15213 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
Introduction
Clostridium (C.) perfringens is a gram-positive, anaerobic, spore-forming bacterium. As a ubiquitous
bacterium, C. perfringens is predominantly found in soil, but also in the intestinal tract of humans and
animals. Therefore, the presence of C. perfringens in high numbers can be an indication of inadequate
preparation or handling of food.
High numbers of C. perfringens in ready-to-eat-food can cause human illness, mainly diarrhoea. The strains
are classified into toxin types, depending on the ability to produce different so called “major” and “minor”
toxins. Food poisonings related to C. perfringens are mostly caused by C. perfringens isolates with the ability
to produce C. perfringens enterotoxin (CPE).
A characteristic feature is the heat resistance of the spores; they have the ability to germinate and multiply
in ready-to-eat food after the cooking process. Ingestion of contaminated food is followed by gastrointestinal
disease, when enzyme-resistant C. perfringens enterotoxins are set free during sporulation in the small
intestine. The strains are classified into different types.
This document describes the horizontal method for the detection of C. perfringens in food, feed,
environmental samples and samples from the primary production stage. The method for the enumeration
of sulfite-reducing Clostridium spp. is described in ISO 15213-1 and ISO 15213-2 describes the method for
the enumeration of C. perfringens. These three parts are published as a series of International Standards
because the methods are closely linked to each other. These methods are often conducted in association
with each other in a laboratory.
v
Technical Specification ISO/TS 15213-3:2024(en)
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the
detection and enumeration of Clostridium spp. —
Part 3:
Detection of Clostridium perfringens
WARNING — In order to safeguard the health of laboratory personnel, it is essential that tests for the
detection of Clostridium perfringens are only undertaken in properly equippe
...
Spécification
technique
ISO/TS 15213-3
Première édition
Microbiologie de la chaîne
2024-05
alimentaire — Méthode
horizontale pour la recherche et le
dénombrement de Clostridium spp. —
Partie 3:
Recherche de Clostridium
perfringens
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the
detection and enumeration of Clostridium spp. —
Part 3: Detection of Clostridium perfringens
Numéro de référence
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2024
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 2
3 Termes et définitions . 2
4 Principe. 3
4.1 Généralités .3
4.2 Enrichissement en milieu sélectif liquide .3
4.3 Isolement sur milieu sélectif solide .3
4.4 Confirmation .3
5 Milieux de culture et réactifs . 3
6 Appareillage et consommables . 3
7 Échantillonnage . 4
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 5
9 Mode opératoire . 5
9.1 Généralités .5
9.2 Prise d’essai et suspension mère .5
9.3 Enrichissement sélectif .5
9.4 Isolement .5
9.5 Confirmation de C. perfringens .6
9.5.1 Sélection des colonies à confirmer .6
9.5.2 Essai à la phosphatase acide .6
9.5.3 Essai sur gélose SIM (Mobilité indole sulfite) .7
9.5.4 Différenciation entre souches de C. perfringens pathogènes et non pathogènes
pour l’Homme (facultatif) .7
9.5.5 Interprétation .7
10 Expression des résultats . 7
11 Caractéristiques de performance indicatives de la méthode . 7
11.1 Validation basée sur les principes de l’ISO 17468 .7
11.2 Caractéristiques de performance indicatives .7
12 Rapport d’essai . 10
13 Contrôle qualité . 10
Annexe A (normative) Logigramme du mode opératoire .11
Annexe B (normative) Milieux de culture et réactifs .12
Annexe C (informative) Caractéristiques de performance indicatives de la méthode utilisant la
gélose d’isolement TSC et l’essai de confirmation à la phosphatase acide .21
Annexe D (informative) Caractéristiques de performance indicatives de la méthode utilisant
la gélose d’isolement TSC et l’essai sur gélose SIM .24
Annexe E (informative) Caractéristiques de performance indicatives de la méthode utilisant la
gélose d’isolement LENA et l’essai de confirmation à la phosphatase acide .27
Annexe F (informative) Caractéristiques de performance indicatives de la méthode utilisant
la gélose d’isolement LENA et l’essai de confirmation sur gélose SIM .30
Annexe G (informative) Différenciation moléculaire entre Clostridium perfringens pathogènes
et non pathogènes .33
Bibliographie .34
iii
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de propriété revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l’adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié de tels droits de
brevets.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de
l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 463, Microbiologie de la chaîne alimentaire,
du Comité européen de normalisation (CEN), conformément à l’Accord de coopération technique entre l’ISO
et le CEN (Accord de Vienne).
Une liste de toutes les parties de la série ISO 15213 se trouve sur le site Web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv
Introduction
Clostridium (C.) perfringens est une bactérie à coloration de Gram positive, anaérobie, formant des spores.
S’agissant d’une bactérie ubiquitaire, C. perfringens se trouve principalement dans le sol, mais également
dans le tube digestif des humains et des animaux. La présence d’un nombre élevé de C. perfringens peut donc
indiquer une préparation ou une manipulation inadéquate des produits alimentaires.
Un nombre élevé de C. perfringens dans les aliments prêts à consommer peut provoquer des maladies chez
l’Homme, qui se traduisent essentiellement par une diarrhée. Les souches sont classées par type toxinique,
selon leur capacité à produire différentes toxines dites «majeures» et «mineures». Les toxi-infections
alimentaires liées à C. perfringens sont essentiellement causées par des isolats de C. perfringens qui
produisent l’entérotoxine CPE (Clostridium Perfringens Enterotoxin).
Un élément caractéristique est la thermorésistance des spores; elles ont la capacité de germer et de se
multiplier dans les aliments prêts à consommer après le processus de cuisson. L’ingestion d’aliments
contaminés est suivie d’une maladie gastro-intestinale lorsque les entérotoxines de C. perfringens, capables
de résister à la lyse enzymatique, sont libérées pendant la phase de sporulation dans l’intestin grêle.
Les souches sont classées par type.
Le présent document décrit la méthode horizontale pour la recherche de C. perfringens dans les aliments,
les aliments pour animaux, les échantillons environnementaux et les échantillons prélevés au stade de la
production primaire. La méthode de dénombrement des bactéries Clostridium spp. Sulfito-réductrices est
décrite dans l’ISO 15213-1 et l’ISO 15213-2 décrit la méthode de dénombrement de C. perfringens. Ces trois
parties sont publiées dans le cadre d’une série de Normes internationales, car les méthodes sont étroitement
liées les une
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.