ISO 7251:2005

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection and enumeration of presumptive Escherichia coli — Most probable number technique

ISO 7251:2005 gives general guidelines for the detection and enumeration of presumptive Escherichia coli by means of the liquid-medium culture technique and calculation of the most probable number (MPN) after incubation at 37 °C, then at 44 °C. This International Standard is applicable to products intended for human consumption and the feeding of animals, and environmental samples in the area of food production and food handling.

Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour la recherche et le dénombrement d'Escherichia coli présumés — Technique du nombre le plus probable

L'ISO 7251:2005 donne des directives générales pour la détection et le dénombrement d'Escherichia coli présumés, au moyen de la technique de culture en milieu liquide avec calcul du nombre le plus probable (NPP) après incubation à 37 °C, puis à 44 °C. La présente Norme internationale est applicable aux produits pour l'alimentation humaine et animale et aux échantillons d'environnement dans les domaines de la production et de la distribution des aliments.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 08-Feb-2005
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 16-Dec-2019

Relations

• Revises: ISO 7251:1993 - Microbiology — General guidance for enumeration of presumptive Escherichia coli — Most probable number technique
• Effective Date: 15-Apr-2008
• Revises: ISO 11866-1:1997 - Milk and milk products — Enumeration of presumptive Escherichia coli — Part 1: Most probable number technique
• Effective Date: 15-Apr-2008
• Revises: ISO 3811:1979 - Meat and meat products — Detection and enumeration of presumptive coliform bacteria and presumptive Escherichia coli — (Reference method)
• Effective Date: 11-Mar-2017

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 7251
Third edition
2005-02-01

Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal method for the
detection and enumeration of
presumptive Escherichia coli — Most
probable number technique
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour la recherche et
le dénombrement d'Escherichia coli présumés — Technique du nombre
le plus probable




Reference number
ISO 7251:2005(E)
©
ISO 2005

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ISO 7251:2005(E)
PDF disclaimer
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Published in Switzerland

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ISO 7251:2005(E)
Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope. 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions. 2
4 Principle . 2
4.1 Detection method. 2
4.2 Enumeration method . 2
5 Diluent, culture media and reagent . 3
6 Apparatus and glassware. 5
7 Sampling . 6
8 Preparation of test sample. 6
9 Procedure. 6
9.1 Detection method. 6
9.2 Enumeration method . 7
10 Expression of results. 8
10.1 Detection method. 8
10.2 Enumeration method . 8
11 Test report. 8
Annex A (normative) MPN table. 10
Bibliography . 13

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ISO 7251:2005(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 7251 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 7251:1993), and also ISO 11866-1:1997 and
IDF 170-1:1999.
Clauses 4, 9 and 10 of ISO 7251:1993 have been technically revised. The main changes are as follows:
 the temperature of the second incubation is now 44 °C ± 1 °C (see 4.2.5);
 detection (9.1) and enumeration (9.2) of presumptive E. coli are covered;
 the use of five tubes per dilution is allowed for some specific products (see 9.2.2.1);
 some products (dairy products) may hinder the collection of gas (see 9.1.2 and 9.2.2.5);
 the MPN calculation refers to ISO 7218 (see Clause 10).
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ISO 7251:2005(E)
Introduction
Because of the large variety of products within this field of application, these guidelines may not be
appropriate in every detail for certain products, and for some other products it may be necessary to use
different methods. Nevertheless, it is hoped that in all cases every attempt will be made to apply the provided
guidelines as far as possible and that deviations from them will only be made if absolutely necessary for
technical reasons.
When this International Standard is next reviewed, account will be taken of all information then available
regarding the extent to which the guidelines have been followed and the reasons for deviations from them in
the case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate, and for certain groups of products International
Standards and/or national standards may already exist that do not comply with these guidelines. In cases
where International Standards already exist for the product to be tested, they should be followed, but it is
hoped that when such standards are reviewed they will be changed to comply with this International Standard
so that eventually the only remaining departures from these guidelines will be those necessary for
well-established technical reasons.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 7251:2005(E)

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal
method for the detection and enumeration of presumptive
Escherichia coli — Most probable number technique
1 Scope
This International Standard gives general guidelines for the detection and enumeration of presumptive
Escherichia coli by means of the liquid-medium culture technique and calculation of the most probable number
(MPN) after incubation at 37 °C, then at 44 °C. This International Standard is applicable to
 products intended for human consumption and the feeding of animals, and
 environmental samples in the area of food production and food handling.
WARNING — Some pathogenic strains of Escherichia coli do not grow at 44 °C.
A limitation of the applicability of this International Standard is imposed by the susceptibility of the method to a
large degree of variability (see Clause 10).
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial
suspension and decimal dilutions
ISO 6887-2, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 2: Specific rules for the preparation of meat and
meat products
ISO 6887-3, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 3: Specific rules for the preparation of fish and
fishery products
ISO 6887-4, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 4: Specific rules for the preparation of products
other than milk and milk products, meat and meat products, and fish and fishery products
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations
ISO 8261, Milk and milk products — General guidance for the preparation of test samples, initial suspensions
and decimal dilutions for microbiological examination
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ISO 7251:2005(E)
ISO/TS 11133-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production
of culture media — Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the
laboratory
ISO/TS 11133-2, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production
of culture media — Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
presumptive Escherichia coli
bacteria which at 44 °C ferment lactose with the production of gas, and which at 44 °C produce indole from
tryptophan, when the test is carried out in accordance with the method specified in this International Standard
3.2
enumeration of presumptive Escherichia coli
most probable number of E. coli per millilitre or per gram of the test sample when the test is carried out
according to the method specified in this International Standard
4 Principle
4.1 Detection method
4.1.1 A liquid selective enrichment medium is inoculated with a specified quantity of the initial suspension of
the test sample.
4.1.2 The tube is incubated at 37 °C for up to 48 h. The tube is examined for gas production after 24 h and
48 h.
4.1.3 If the tube has given rise to opacity, cloudiness or gaseous emission, it is subcultured to a tube
containing a liquid selective medium (EC broth).
4.1.4 The tube obtained in 4.1.3 is incubated at 44 °C for up to 48 h. The tube is examined for gas
production after 24 h and 48 h.
4.1.5 If the tube of medium obtained in 4.1.4 has given rise to gaseous emission, it is subcultured to a tube
containing indole-free peptone water.
4.1.6 The tube obtained in 4.1.5 is incubated at 44 °C for 48 h. The tube is examined for indole production
resulting from the degradation of tryptophan in the peptone constituent.
4.1.7 Tubes showing opacity, cloudiness or gas production in the liquid selective enrichment medium
(4.1.1) and whose subcultures have produced gas in the EC broth and indole in the peptone water at 44 °C
are considered to contain presumptive Escherichia coli. The results are given as the "presence" or "absence"
of presumptive Escherichia coli in x g or x ml of product.
4.2 Enumeration method
4.2.1 Three tubes of double-strength liquid selective enrichment medium are inoculated with a specified
quantity of the initial suspension.
4.2.2 Three tubes of single-strength liquid enrichment medium are inoculated with a specified quantity of
the initial suspension.
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ISO 7251:2005(E)
Then, under the same conditions, another three tubes of the single-strength medium are inoculated with a
specified quantity of decimal dilutions of the initial suspension.
4.2.3 The tubes of double- and single-strength medium are incubated at 37 °C for up to 48 h. The tubes are
examined for gas production after 24 h and 48 h.
4.2.4 Each tube of double-strength medium that has given rise to opacity, cloudiness or gaseous emission,
and each tube of single-strength medium that has given rise to gaseous emission, is subcultured to a tube
containing a liquid selective medium (EC broth).
4.2.5 The tubes obtained in 4.2.4 are incubated at 44 °C for up to 48 h. The tubes are examined for gas
production after 24 h and 48 h.
4.2.6 Each tube of medium obtained in 4.2.5 that has given rise to gaseous emission is subcultured to a
tube containing indole-free peptone water.
4.2.7 The tubes obtained in 4.2.6 are incubated at 44 °C for 48 h. The tubes are examined for indole
production resulting from the degradation of tryptophan in the peptone constituent.
4.2.8 The most probable number of presumptive Escherichia coli is determined by means of the MPN table
(see Annex A), according to the number of tubes of single- and double-strength medium whose subcultures
have produced gas in the EC broth and indole in the peptone water at 44 °C.
5 Diluent, culture media and reagent
For current laboratory practice, see ISO 7218.
5.1 Diluent
In general, see ISO 6887-1, but for milk products see ISO 8261.
5.2 Selective enrichment medium (lauryl sulfate broth)
5.2.1 Composition
a) b)
Double-strength Single-strength
medium medium
Enzymatic digest of plant and animal tissues 40,0 g 20,0 g
Lactose 10,0 g 5,0 g
Dipotassium monohydrogen phosphate (K HPO) 5,5 g 2,75 g
2 4
Potassium dihydrogen phosphate (KH PO) 5,5 g 2,75 g
2 4
Sodium chloride 10,0 g 5,0 g
Sodium lauryl sulfate [CH (CH ) OSO Na] 0,2 g 0,1 g
3 2 11 3
Water 1 000 ml 1 000 ml

5.2.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water, by heating if necessary.
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 6,8 ± 0,2 at 25 °C.
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Dispense the media in quantities of 9 ml into tubes of dimensions 16 mm × 160 mm (6.4) containing Durham
tubes (6.6) in the case of single-strength medium, and 10 ml into test tubes of dimensions 18 mm × 180 mm
or 20 mm × 200 mm (6.4) containing Durham tubes (6.6) in the case of the double-strength medium.
Sterilize for 15 min in an autoclave (6.1) set at 121 °C.
The Durham tubes shall not contain air bubbles after sterilization.
5.3 EC broth (selective medium)
5.3.1 Composition
Enzymatic digest of casein 20,0 g
Lactose 5,0 g
a
Bile salts No. 3 1,5 g
Potassium monohydrogen phosphate (K HPO) 4,0 g
2 4
Potassium dihydrogen phosphate (KH PO) 1,5 g
2 4
Sodium ch
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 7251
Troisième édition
2005-02-01


Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour la recherche et le
dénombrement d'Escherichia coli
présumés — Technique du nombre
le plus probable
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for
the detection and enumeration of presumptive Escherichia coli — Most
probable number technique




Numéro de référence
ISO 7251:2005(F)
©
ISO 2005

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ISO 7251:2005(F)
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veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.


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ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax. + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Publié en Suisse

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ISO 7251:2005(F)
Sommaire
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
4.1 Méthode de détection . 2
4.2 Méthode de dénombrement . 2
5 Diluant, milieux de culture et réactif . 3
6 Appareillage et verrerie . 5
7 Échantillonnage . 5
8 Préparation de l'échantillon pour essai. 6
9 Procédure. 6
9.1 Méthode de détection . 6
9.2 Méthode de dénombrement . 7
10 Expression des résultats. 8
10.1 Méthode de détection . 8
10.2 Méthode de dénombrement . 8
11 Rapport d'essai . 8
Annexe A (normative) Table NPP. 10
Bibliographie . 13

© ISO 2005 – Tous droits réservés iii

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ISO 7251:2005(F)
Avant-propos
L'ISO(Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 7251 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 7251:1993), ainsi que l'ISO 11866-1:1997
et la FIL 170-1:1999.
Les Articles 4, 9 et 10 de l'ISO 7251:1993 ont fait l'objet d'une révision technique. Les modifications
principales portent sur les points suivants:
 la température de la seconde incubation est de 44 °C ± 1 °C (voir 4.2.5);
 la détection (9.1) et le dénombrement (9.2) d'E. coli présumés sont couverts;
 pour certains produits spécifiques, cinq tubes par dilution peuvent être utilisés (voir 9.2.2.1);
 certains produits (produits laitiers) peuvent gêner l'observation de la production de gaz (voir 9.1.2 et
9.2.2.5);
 se référer à l'ISO 7218 pour les calculs NPP (voir l'Article 10).
iv © ISO 2005 – Tous droits réservés

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ISO 7251:2005(F)
Introduction
En raison de la grande diversité des aliments entrant dans ce domaine d'application, la présente méthode
horizontale peut ne pas être appropriée dans tous ses détails pour certains produits, et pour d'autres produits
des méthodes différentes peuvent être utilisées. Néanmoins on peut s'attendre à ce que, dans tous les cas,
tous les efforts seront faits pour appliquer, chaque fois que cela sera possible, cette méthode horizontale et
qu'il sera fait recours à des dérogations que si cela est absolument nécessaire pour des raisons techniques.
Lorsque la présente Norme internationale sera révisée, il sera tenu compte de tous les renseignements
disponibles à ce moment là, à savoir dans quelle mesure cette méthode horizontale aura été suivie et les
raisons justifiant toute dérogation dans le cas de produits particuliers.
L'harmonisation des méthodes d'essai ne peut pas être immédiate et il existe peut-être déjà des Normes
internationales et/ou des Normes nationales pour certains groupes de produits, lesquelles ne sont pas
conformes à cette méthode horizontale. Dans le cas où des Normes internationales existent déjà pour le
produit à contrôler, il convient qu'elles soient appliquées, mais il est souhaitable que lorsqu'elles seront
révisées ces normes soient modifiées de façon à se conformer à la présente Norme internationale et que les
seules divergences éventuelles restantes soient celles nécessaires pour des raisons techniques bien établies.
© ISO 2005 – Tous droits réservés v

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NORME INTERNATIONALE ISO 7251:2005(F)

Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour la
recherche et le dénombrement d'Escherichia coli présumés —
Technique du nombre le plus probable
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale donne des directives générales pour la détection et le dénombrement
d'Escherichia coli présumés, au moyen de la technique de culture en milieu liquide avec calcul du nombre le
plus probable (NPP) après incubation à 37 °C, puis à 44 °C. La présente Norme internationale est applicable
 aux produits pour l'alimentation humaine et animale, et
 aux échantillons d'environnement dans les domaines de la production et de la distribution des aliments.
AVERTISSEMENT — Certaines souches d'Escherichia coli pathogènes ne cultivent pas à 44 °C.
Des limites sont imposées aux possibilités d'application de la présente Norme internationale, du fait que cette
méthode est sujette à de grandes variations (voir l'Article 10).
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887-1, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de
la suspension mère et des dilutions décimales
ISO 6887-2, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 2: Règles spécifiques pour la préparation
des viandes et produits à base de viande
ISO 6887-3, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 3: Règles spécifiques pour la préparation
des produits de la pêche
ISO 6887-4, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 4: Règles spécifiques pour la préparation de
produits autres que les produits laitiers, les produits carnés et les produits de la pêche
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques
ISO 8261, Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation des échantillons pour
essai, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
ISO/TS 11133-1, Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 1: Guide général pour l'assurance de la qualité pour la préparation des milieux de culture en
laboratoire
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ISO 7251:2005(F)
ISO/TS 11133-2, Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 2: Guide général pour les essais de performance des milieux de culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
Escherichia coli présumés
bactéries qui, à 44 °C, fermentent le lactose avec production de gaz et qui, à 44 °C, produisent de l'indole à
partir du tryptophane, lorsque l'essai est effectué selon la méthode spécifiée dans la présente Norme
internationale
3.2
dénombrement d'Escherichia coli présumés
nombre le plus probable d'E. coli par millilitre ou par gramme d'échantillon pour essai lorsque l'essai est
effectué selon la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale
4 Principe
4.1 Méthode de détection
4.1.1 Inoculer un milieu d'enrichissement sélectif liquide avec une quantité déterminée de la suspension
initiale de l'échantillon pour essai.
4.1.2 Incuber le tube à 37 °C pendant 48 h. Examiner la formation de gaz dans le tube après 24 h et 48 h.
4.1.3 Si le tube montre une opacité, un aspect trouble ou un dégagement gazeux, faire une subculture dans
un tube contenant un milieu sélectif liquide (bouillon EC).
4.1.4 Le tube obtenu en 4.1.3 est incubé à 44 °C pendant 48 h. Examiner la formation de gaz après 24 h et
48 h.
4.1.5 Si un dégagement gazeux est noté dans le tube en 4.1.4, réaliser une subculture dans un tube
contenant de l'eau peptonée exempte d'indole.
4.1.6 Le tube obtenu en 4.1.5 est incubé 48 h à 44 °C. Le tube est examiné pour la production d'indole
résultant de la dégradation du tryptophane dans les constituants peptonés.
4.1.7 Les tubes, présentant une opacité, un aspect trouble ou un dégagement gazeux dans le milieu
d'enrichissement sélectif liquide (4.1.1) et dont les sous-cultures ont produit du gaz dans le bouillon EC et de
l'indole dans l'eau peptonée à 44 °C, sont considérés comme contenant Escherichia coli présumé. On donne
les résultats «présence» ou «absence» d'Escherichia coli présumé dans x g ou x ml de produit.
4.2 Méthode de dénombrement
4.2.1 Trois tubes de milieu d'enrichissement sélectif double concentration sont inoculés avec une quantité
déterminée de la suspension initiale.
4.2.2 Trois tubes de milieu d'enrichissement simple concentration sont inoculés avec une quantité
déterminée de la suspension initiale.
Par ailleurs, dans les mêmes conditions, trois autres tubes de milieu simple concentration sont inoculés avec
une quantité déterminée des dilutions décimales de la suspension initiale.
2 © ISO 2005 – Tous droits réservés

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ISO 7251:2005(F)
4.2.3 Les tubes de milieu simple et double concentration sont incubés à 37 °C pendant 48 h. Les tubes sont
examinés pour la production de gaz après 24 h et 48 h.
4.2.4 Pour chaque tube double concentration présentant une opacité, un aspect trouble ou un dégagement
gazeux et pour chaque tube simple concentration présentant une opacité, un aspect trouble ou un
dégagement gazeux, réaliser une subculture dans un milieu sélectif liquide (bouillon EC).
4.2.5 Les tubes obtenus en 4.2.4 sont incubés à 44 °C pendant 48 h. Les tubes sont examinés pour la
production de gaz après 24 h et 48 h.
4.2.6 À partir de chaque tube de milieu obtenu en 4.2.5 présentant un dégagement gazeux, faire une
subculture dans un tube contenant de l'eau peptonée exempte d'indole.
4.2.7 Les tubes obtenus en 4.2.6 sont incubés 48 h à 44 °C. Les tubes sont examinés pour la production
d'indole résultant de la dégradation du tryptophane dans les constituants peptonés.
4.2.8 Le nombre le plus probable d'Escherichia coli présumé est déterminé au moyen de la table NPP (voir
l'Annexe A), d'après le nombre de tubes de milieu simple et double concentration dont les subcultures ont
donné une production de gaz dans le bouillon EC et une production d'indole dans l'eau peptonée à 44 °C.
5 Diluant, milieux de culture et réactif
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir l'ISO 7218.
5.1 Diluant
En règle générale voir l'ISO 6887-1, mais pour les produits laitiers voir l'ISO 8261.
5.2 Bouillon au lauryl sulfate (milieu d'enrichissement sélectif)
5.2.1 Composition
a) b)
Milieu double Milieu simple
concentration concentration
Digestat enzymatique de tissus végétaux et
40,0 g 20,0 g
animaux
Lactose 10,0 g 5,0 g
Monohydrogénophospate de dipotassium
5,5 g 2,75 g
(K HPO )
2 4
Dihydrogénophosphate de potassium (KH PO ) 5,5 g 2,75 g
2 4
Chlorure de sodium 10,0 g 5,0 g
Lauryl sulfate de sodium [CH (CH ) OSO Na] 0,2 g 0,1 g
3 2 11 3
Eau 1 000 ml 1 000 ml

5.2.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau, en chauffant si nécessaire.
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation il soit de 6,8 ± 0,2 à 25 °C.
Répartir les milieux par quantités de 9 ml dans des tubes de 16 mm × 160 mm (6.4) contenant des cloches de
Durham (6.6) dans le cas du milieu simple concentration, et par quantités de 10 ml dans des tubes de
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ISO 7251:2005(F)
18 mm × 180 mm ou 20 mm × 200 mm (6.4) contenant des cloches de Durham (6.6) dans le cas du milieu
double concentration.
Stériliser à l'autoclave (6.1) réglé à 121 °C pendant 15 min.
Les cloches de Durham ne doivent pas contenir de bulles d'air après stérilisation.
5.3 Bouillon EC (milieu sélectif)
5.3.1 Composition
Digestat enzymatique de caséine 20,0 g
Lactose 5,0 g
a
Sel
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