ISO 6739:1982
(Main)Whey cheese — Determination of nitrate and nitrite contents — Method by cadmium reduction and photometry
Whey cheese — Determination of nitrate and nitrite contents — Method by cadmium reduction and photometry
Fromage de sérum — Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites — Méthode par réduction au cadmium et photométrie
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International Standard 6739
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANOARDlZATlON~ME~YHAPO~HAR OPTAHH3AUHR nO CTAHAAPTH3AUHH.ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Whey cheese - Determination of nitrate and nitrite
contents - Method by cadmium reduction and photometry
Fromage de sérum - Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites - Méthode par réduction au cadmium et photométrie
First edition - 1982-12-01
UDC 637.344 : 543.242.8 : 546.1731.175 Ref. No. IS0 6739-1982 (E)
Descriptors : agricultural products, dairy products, cheeses, chemical analysis, determination of content, nitrates, nitrites, spectrophotometric
analysis.
i
Price based on 6 pages
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Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards institutes (IS0 member bodies). The work of developing Inter-
national Standards is carried out through IS0 technical committees. Every member
body interested in a subject for which a technical committee has been set up has the
right to be represented on that committee. International organizations, governmental
ISO, also take part in the work.
and non-governmental, in liaison with
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. I
International Standard IS0 6739 was developed by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products, and was circulated to the member bodies in June 1981.
It has been approved by the member bodies of the following countries :
Australia Romania
Hungary
Austria India South Africa, Rep. of
Belgium Spain
Iraq
Brazil
Israel Sri Lanka
Canada Korea, Rep. of Tanzania
Czechoslovakia Netherlands Thailand
Egypt, Arab Rep. of New Zealand Turkey
Ethiopia Peru United Kingdom
France Philippines USSR
Germany, F. R. Portugal Yugoslavia
No member body expressed disapproval of the document. I
0 International Organization for Standardization, 1982 O
Printed in Switzerland
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IS0 039-1982 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Whey cheese - Determination of nitrate and nitrite
contents - Method by cadmium reduction and photometry
1 Scope and field of application NOTE - In order to avoid possible inclusion of small gas bubbles in the
copperized cadmium column (6.1 I), the distilled or deionized water
This International Standard specifies a method by cadmium used for the preparation of the column (8.1), for checking the reducing
capacity of the column (8.2). and for regeneration of the column (8.3)
reduction and photometry for the determination of the nitrate
should preferably be freshly boiled and afterwards cooled to room
and nitrite contents of whey cheese.
temperature.
The method is suitable for all kinds of whey cheese.
5.1 Cadmium, granules, diameter 0,3 to 0,8 mm.
NOTE - Methods for the determination of the nitrate and nitrite con-
tents of dried milk and dried whey are specified in IS0 6736 and
If cadmium granules are not available commercially, they may
IS0 6740 respectively.
be prepared as follows.
Place a suitable number of zinc rods in a beaker and cover
2 Reference
with a 40 g/l solution of cadmium sulphate octahydrate
(CdS04.8H20). From time to time, scrape the cadmium
IS0 707, Milk and milk products - Methods of sampling. 1)
sponge from the rods over a period of 24 h. Remove the zinc
rods and decant the liquid until only sufficient remains to cover
3 Definition
the cadmium. Wash the sponge two or three times with dis-
tilled water. Transfer the cadmium to a laboratory blender
nitrate and nitrite contents of whey cheese : The contents
together with 400 ml of 0,l mol/l hydrochloric acid solution
of substances determined by the procedure specified in this
and blend for a few seconds to obtain granules of the required
International Standard and expressed respectively as milligrams
size. Return the contents of the blender to the beaker and leave
of nitrate ion (NO$ and of nitrite ion (NO;) per kilogram (parts
to stand for several hours, occasionally stirring to remove bub-
per million).
bles. Decant most of the liquid and immediately copperize as
described in 8.1.1 to 8.1.5.
4 Principle
5.2 Copper(lli sulphate solution.
Extraction of the whey cheese with warm water, precipitation
Dissolve 20 g of copper(ll1 sulphate pentahydrate
of the fat and proteins, and filtration.
(CuS04-5H20) in water and dilute to 1 O00 ml.
Reduction of the nitrate in a portion of the filtrate to nitrite, by
means of copperized cadmium.
Buffer solution, pH 9,6 to 9,7.
5.3
Development of a red colour, in portions of both unreduced
Dilute 50 ml of concentrated hydrochloric acid [em 1,19 g/ml,
filtrate and of the reduced solution, by addition of sulpha-
about 38% (rnlrn) solution1 with 600 ml of water. After mixing,
nilamide and N-I-naphthyl-ethylenediamine dihydrochloride,
add 135 ml of ammonium hydroxide solution 0,91 g/ml,
and photometric measurement at a wavelength of 538 nm.
about 25% (mlrn) solutionl. Dilute to 1 O00 ml with water
Calculation of the nitrite content of the sample and of the total
and mix.
nitrite content after reduction of nitrate, by comparing the
measured absorbances with those of a series of standard NOTE - If ammonium hydroxide solution of this concentration is not
available, an equivalent amount of a more concentrated solution may
sodium nitrite solutions; calculation of the nitrate content from
be used, for example 100 ml of 35 % (rn/rn) solution (e20 0,8û g/mli.
the difference between these two contents.
Adjust the pH to 9.6 to 9,7 if necessary.
5 Reagents
5.4 Hydrochloric acid, about 2 mol/l solution.
All reagents shall be of recognized analytical quality. The water
used shall be distilled or deionized water, free from nitrate and
Dilute 160 ml of concentrated hydrochloric acid
1,19 g/ml)
nitrite.
to 1 O00 ml with water.
1) At present at the stage of draft. (Revision of ISO/R 707-1968.)
1
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IS0 6739-1982 (E)
On the day of use, dilute 5 ml of this solution with 20 ml of the
Hydrochloric acid, about 0,l mol/l solution.
5.5
1
buffer solution (5.3) and dilute further to 1 O00 ml with water in
a one-mark volumetric flask. Mix.
Dilute 50 ml of the hydrochloric acid solution (5.4) to 1 O00 ml
with water.
1 ml of this standard solution contains 4,50 pg of NO;.
5.6 Solutions for precipitation of proteins and fat.
5.6.1 Zinc sulphate solution.
6 Apparatus
Dissolve 53,5 g of zinc sulphate heptahydrate (ZnS04.7H20) in
All glassware shall be thoroughly cleaned and rinsed with dis-
water and dilute to 100 ml.
tilled water to ensure that it is free from nitrate and nitrite.
5.6.2 Potassium hexacyanoferrate(ll1 solution.
Usual laboratory apparatus, and in particular
Dissolve 172 g of potassium hexacyanoferrate( Il) trihydrate
6.1 Analytical balance.
[K,Fe(CN),.3H201 in water and dilute to 100 ml.
5.7 EDTA solution.
6.2 Appropriate grinding device.
Dissolve 33,s g of disodium ethylenediaminetetraacetate
6.3 Sample container, provided with an airtight lid.
dihydrate (Na2C10H,4N208.2H20) in water and dilute to
1 O00 ml.
6.4 Suitable laboratory mixer/hamogenizer, with glass
5.8 Solutions for colour development.
containers of capacity 250 or 400 ml.
5.8.1 Solution I.
Conical flasks, of capacity 250 ml.
6.5
Dissolve, by heating on a water bath, 0,5 g of sulphanilamide
(NH2C6H4S02NH2) in a mixture of 75 ml of water and 5 ml of
Volumetric flasks, of capacity 100 - 500 and 1 O00 ml,
6.6
concentrated hydrochloric acid 1,19 g/ml). Cool to room
complying with the requirements of IS0 1042, class B.
to 100 ml with water. Filter if necessary.
temperature and dilute
6.7 Pipettes, to deliver 2 - 4 - 5 - 6 - 8 - 10 - 12 -
5.8.2 Solution II.
20 - 25 and 50 ml, complying with the requirements of
IS0 648, class A, or IS0 835.
Dilute 450 ml of concentrated hydrochloric acid 1 ,I9 g/ml)
to 1 O00 ml with water.
NOTE - Where appropriate, burettes may be used instead of pipettes.
5.8.3 Solution 111.
6.8 Graduated cylinders, of capacity 5 - 10 - 25 -
Dissolve O, 1 g of N-I-naphthyl-ethylenediamine dihydrochloride
100 - 250 - 500 and 1000 ml.
(C,oH,NHCH2CH2NH2.2HCI) in water. Dilute to 100 ml with
water. Filter if necessary.
6.9 Glass funnels, of diameter about 7 cm, with short
The solution may be stored for up to 1 week in a well-stoppered stem.
brown bottle in a refrigerator.
6.10 Filter paper, medium grade, of diameter about 15 cm,
5.9 Sodium nitrite, standard solution corresponding to
free from nitrate and nitrite.
0,001 g of nitrite ion per litre.
6.11 Reduction column (for example as shown in the
On the day of use, dissolve in water 0,150 g of sodium nitrite
figure).
(NaNo*), dried to constant mass at 110 to 120 OC, dilute to
1 O00 ml with water in a one-mark volumetric flask and mix.
6.12 Photoelectric colorimeter or spectrophotometer,
Dilute 10 ml of this solution with 20 ml of the buffer solution
suitable for making readings at a wavelength of 538 nm, with
(5.3) and dilute further to IO00 ml with water in a one-mark
cells of optical path length 1 to 2 cm.
volumetric flask. Mix.
1 ml of this standard solution contains 1,OO pg of NO:.
7 Sampling
Potassium nitrate, standard solution corresponding to
5.10
0,004 5 g of nitrate ion per litre.
7.1 See IS0 707.
Dissolve in water 1,468 g of potassium nitrate (KNO,), dried to
7.2 Store the sample in such a way that deterioration and
constant mass at 110 to 120 OC, dilute to 1 000 rnl with water in
change in composition are prevented.
a one-mark volumetric flask and mix.
2
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E)
8 Procedure 8.2.3 After nearly 100 ml of eluate has been collected, remove
the volumetric flask, make up to the mark with water and mix
well.
8.1 preparation of the copperized cadmium
column
8.2.4 Pipette 10 ml of the eluate into a 100 ml volumetric
flask. Add water to obtain a volume of about 60 ml. Proceed as
8.1.1 Transfer the cadmium granules (5.1) (approximately 40
8.9.2, 8.9.3 and 8.9.4.
specified in
to 60 g for each column) into a conical flask (6.5).
8.2.5 From the nitrite content (in micrograms of nitrite ion per
8.1.2 Add sufficient of the hydrochloric acid solution (5.4) to
millilitre) of the diluted eluate (8.2.41, determined from the
cover the cadmium. Swirl for a few minutes.
calibration curve (8.1 I), calculate the percentage reducing
capa
...
Norme internationale 6739
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANOAROlZATlONOME~YHAPO~HAR OPïAHkI3Al4kIR Il0 CTAHflAPTH3AUHM*ORGANlSATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
0 Fromage de sérum - Détermination des teneurs en
- Méthode par réduction au
nitrates et en nitrites
cadmium et photométrie
Whey cheese - Determination of nitrate and nitrite contents - Method by cadmium reduction and photometry
Première édition - 1982-12-01
CDU 637.344 : 543.242.8 : 546.173/.175 Réf. no : IS0 6739-1982 (FI
-
Descripteurs : produit agricole, produit laitier, fromage, analyse chimique, dosage, nitrate, nitrite, méthode spectrophotométrique.
O
E Prix basé sur 6 pages
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Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de I'ISO). L'élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I'ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
*
mentales, en liaison avec I'ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I'ISO.
La Norme internationale IS0 6739 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires, et a été soumise aux comités membres en juin 1981.
Les comités membres des pays suivants l'ont approuvée :
Afrique du Sud, Rép. d' Éthiopie Portugal
Allemagne, R.F. France Roumanie
Australie Hongrie Royaume-Uni
Autriche
Inde Sri Lanka
Belgique Iraq Tanzanie
Brésil
Israël Tchécoslovaquie
Canada Nouvelle-Zélande Thaïlande
Corée, Rép. de
Pays-Bas Turquie
Égypte, Rép. arabe d' Pérou URSS
Espagne
Philippines Yougoslavie
Aucun comité membre ne l'a désapprouvée.
O
Organisation internationale de normalisation, 1982
0
Imprimé en Suisse
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N OR M E I N TE R N AT1 O NA LE IS0 6739-1982 (F)
Fromage de sérum - Détermination des teneurs en
nitrates et en nitrites - Méthode par réduction au
cadmium et photométrie
5 Réactifs
1 Objet et domaine d'application
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
La présente Norme internationale spécifie une méthode par
L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou désionisée, exempte
réduction au cadmium et photométrie, pour la détermination
des teneurs en nitrates et en nitrites du fromage de sérum. de nitrates et de nitrites.
0 La méthode est applicable à toutes les sortes de fromage de
NOTE - Dans le but d'éviter l'inclusion de petites bulles de gaz dans la
colonne de cadmium cuivré (6.1 I), l'eau distillée ou désionisée, utilisée
sérum.
pour la préparation de la colonne (8.1), pour la vérification du pouvoir
(8.2) et pour la régénération de la colonne
réducteur de la colonne
NOTE - Des méthodes de détermination des teneurs en nitrates et en
(8.31, doit être de préférence récemment bouillie puis refroidie à la tem-
nitrites du lait sec et du lactosérum sont spécifiées respectivement
pérature ambiante.
dans I'ISO 6736 et I'ISO 6740.
Cadmium, sous forme de granulés, diamètre des parti-
5.1
2 Référence
cules 0,3 à 0,8 mm.
IS0 707, Lait et produits laitiers - Méthodes &échantillon-
S'il n'est pas possible de se procurer dans le commerce des gra-
nage. 1)
nulés de cadmium, ceux-ci peuvent être préparés de la manière
suivante.
3 Définition
Placer, dans un bécher, un nombre convenable de baguettes de
zinc et les recouvrir avec une solution de sulfate de cadmium
teneurs en nitrates et nitrites du fromage de sérum :
octohydraté (CdS0,.8H20) à 40 g/l. Gratter de temps en
Teneurs en substances déterminées selon la méthode spécifiée
le cadmium spongieux déposé sur les baguettes et cela
temps
dans la présente Norme internationale et exprimées respective-
durant une période de 24 h. Retirer les baguettes de zinc et
ment en milligrammes d'ion nitrate (NO;) et d'ion nitrite (NO21
décanter le liquide jusqu'à ce qu'il en reste seulement une quan-
par kilogramme (parties par million).
tité suffisante pour recouvrir le cadmium. Laver deux ou trois
e
fois le cadmium spongieux avec de l'eau. Transférer le cad-
mium dans un broyeur de laboratoire avec 400 ml de solution
4 Principe
d'acide chlorhydrique à 0,l mol/l et broyer durant quelques
secondes afin d'obtenir des granulés de la dimension requise.
Extraction du fromage de sérum avec de l'eau chaude, précipi-
Replacer le contenu du broyeur dans le bécher et l'y maintenir
tation de la matière grasse et des protéines, et filtration.
durant plusieurs heures en agitant de temps en temps pour
chasser les bulles. Décanter la majeure partie du liquide et pro-
Sur une portion du filtrat, réduction, à l'état de nitrites, des
céder immédiatement au cuivrage comme décrit de 8.1.1
nitrates extraits, au moyen de cadmium cuivré.
à 8.1.5.
Développement d'une coloration rouge à partir de portions de
filtrat non réduit et à partir de portions de filtrat réduit, par addi-
5.2 Sulfate de cuivre(ll1, solution.
tion de sulfanilamide et de dichlorhydrate de K(naphty1-1)
éthylène diamine, puis mesurage photométrique à une lon-
Dissoudre 20 g de sulfate de cuivre(l1) pentahydraté
gueur d'onde de 538 nm.
(CuSO4.5H2O) dans de l'eau et compléter à 1 O00 mi.
Calcul de la teneur en nitrites de l'échantillon et de la teneur
totale en nitrites après réduction des nitrates, par comparaison 5.3 Solution tampon, de pH 9,6 à 9,7.
des absorbances mesurées avec celles d'une série de solutions
étalons de nitrite de sodium; calcul de la teneur en nitrates à Diluer 50 ml d'acide chlorhydrique concentré [e20 1,19 g/ml;
partir de la différence entre ces deux teneurs. solution à environ 38% (rnlrn)] avec 600 ml d'eau. Après
1) Actuellement au stade de projet. (Révision de I'ISO/R 707-1968.)
1
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IS0 6739-1982 (FI
Nitrite de sodium, solution étalon correspondant à
5.9
mélange, ajouter 135 ml de solution d‘hydroxyde d‘ammonium
0,001 g d’ion nitrite par litre.
0,91 g/ml; solution à environ 25% (rnlrnll. Compléter à
1 000 ml avec de l‘eau et homogénéiser.
Le jour de l’utilisation, dissoudre 0,150 g de nitrite de sodium
NOTE - Si la solution d‘hydroxyde d‘ammonium n‘est pas disponible (NaN021, préalabtement séché à 110 à 120 OC jusqu‘a masse
à cette concentration, une quantité équivalente d’une solution plus constante, dans de l’eau; compléter à 1 O00 ml avec de l‘eau
concentrée peut être utilisée, par exemple 100 ml de solution à 35 %
et homogénéiser.
dans une fiole jaugée
(rn/m) (e20 0,88 g/ml).
Diluer 10 ml de cette solution avec 20 ml de la solution tampon
Ajuster le pH de 9,6 à 9,7 si nécessaire.
(5.3), compléter ensuite à 1 O00 ml avec de l‘eau dans une fiole
jaugée et homogénéiser.
Acide chlorhydrique, solution à environ 2 mol/l.
5.4
1 ml de cette solution étalon contient 1,OO pg de NOi.
1,19 g/ml) à
Diluer 160 ml d‘acide chlorhydrique concentré
1 000 ml avec de l’eau.
5.10 Nitrate de potassium, solution étalon correspondant à
0,004 5 g d’ion nitrate par litre.
Acide chlorhydrique, solution à environ 0,l mol/l.
5.5
Dissoudre 1,468 g de nitrate de potassium (KN03), préalable-
Diluer 50 ml de la solution d’acide chlorhydrique (5.4) à 1 O00 ml
ment séché à 110 à 120 OC jusqu’à masse constante, dans de
avec de l‘eau.
à 1 000 ml avec de l’eau dans une fiole jaugée
l‘eau; compléter
et homogénéiser.
Solutions pour la précipitation des protéines et de la
5.6
matidre grasse.
Le jour de l‘utilisation, diluer 5 ml de cette solution avec 20 mi
de la solution tampon (5.31, compléter ensuite à 1 O00 ml avec
de l’eau dans une fiole jaugée et homogénéiser.
5.6.1 Sulfate de zinc, solution.
Dissoudre 53.5 g de sulfate de zinc heptahydraté 1 ml de cette solution étalon contient 430 pg de N03.
(ZnS04.7H20) dans de l‘eau et compléter à 100 ml.
6 Appareillage
5.6.2 Hexacyanoferrate(l1) de potassium, solution.
Toute la verrerie doit être soigneusement lavée et rincée avec
Dissoudre 17,2 g d’hexacyanoferrate(I1) de potassium trihy-
de l‘eau distillée pour être certain qu’elle est exempte de nitra-
draté [K4Fe(CN)6.3H20] dans de l’eau et compléter à 100 ml.
tes et de nitrites.
5.7 EDTA, solution.
Matériel courant de laboratoire, et notamment
Dissoudre 33,5 g d’éthylène diamine tétraacétate disodique
6.1 Balance analytique.
dihydraté (Na2CloHl4N2O8 .2H20) dans de l’eau et compléter à
IO00 ml.
6.2 Dispositif de broyage approprié.
Solutions pour le développement de la coloration.
5.8
6.3 Récipient pour échantillon, muni d‘un couvercle étan-
che à l’air.
5.8.1 Solution I.
Dissoudre, en chauffant au bain d‘eau, 0.5 g de sulfanilamide
6.4 Mixeur-homogénéiseur de laboratoire, avec réci-
(NH2C,H,S02NH2) dans un mélange constitué par 75 ml d‘eau
pients en verre de 250 ou 400 ml de capacité.
et 5 ml d’acide chlorhydrique concentré 1,19 g/ml). Refroi-
dir à la température ambiante et compléter à 100 ml avec de
6.5 Fioles coniques, de 250 ml de capacité.
l’eau. Filtrer si nécessaire.
6.6 Fioles jaugées à un trait, de 100 - 500 et 1 O00 ml de
5.8.2 Solution II.
capacités, conformes aux spécifications de I’ISO 1042,
classe B.
Diluer 450 ml d‘acide chlorhydrique concentré 1,19 g/ml) à
1 000 ml avec de l’eau.
6.7 Pipettes, permettant de délivrer 2 - 4 - 5 - 6 - 8 -
10 - 12 - 20 - 25 et 50 ml, conformes aux spécifications de
5.8.3 Solution 111.
I‘ISO 648, classe A, ou de I’ISO 835.
Dissoudre 0,l g de dichlorhydrate de N-(naphtyl-l) éthylène
NOTE - Le cas échéant, des burettes peuvent être utilisées à la place
diamine (CloH,NHCH2CH2NH2.2HCl) dans de l’eau. Compléter
des pipettes.
à 100 ml avec de l’eau. Filtrer si nécessaire.
6.8 Éprouvettes graduées, de 5 - 10 - 25 - 100 -
La solution peut être conservée jusqu’à 1 semaine au réfrigéra-
teur, dans un récipient en verre bien bouché. 250 - 500 et 1 O00 ml de capacités.
2
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IS0 6739-1982 (FI
8.1.8 Conditionner la colonne qui vient d'être préparée en y
6.9 Entonnoirs en verre, d'environ 7 cm de diamètre, à tige
faisant circuler un mélange constitué par 750 ml d'eau, 225 ml
courte.
de la solution étalon de nitrate de potassium (5.101, 20 rnl de la
solution tampon (5.3) et 20 ml de la solution d'EDTA (5.71, à un
6.10 Papier filtre, pour filtration moyenne, d'environ 15 cm
débit ne dépassant pas 6 ml/min. Laver ensuite la colonne avec
de diamètre, exempt de nitrates et de nitrites.
50 ml d'eau.
6.11 Appareil pour la reduction des nitrates (par exemple
8.2 Contrôle du pouvoir réducteur de la colonne
celui qui est représenté par la figure).
Procéder à ce contrôle au moins deux fois par jour, au début et
6.12 Colorimètre photoélectrique, ou spectrophoto-
à la fin d'une série de déterminations.
mètre, permettant d'effectuer des mesurages à une longueur
d'onde de 538 nm, avec cellules de 1 à 2 cm de parcours
8.2.1 Prélever, à la pipette, 20 ml de la solution étalon de
optique.
nitrate de potassium (5.10) et les introduire dans le réservoir
situé à la partie supérieure de la colonne. Ajouter immédiate-
ment 5 ml de la solution tampon (5.3) au contenu du réservoir.
7 Échantillonnage
100 mi. Le débit r%
Recueillir I'éluat dans une fiole jaugée de
doit pas dépasser 6 ml/min.
7.1 Voir IS0 707.
8.2.2 Lorsque le réservoir est presque vide, laver les patois
7.2 Conserver l'échantillon de manière qu'il ne se produise
avec environ 15 ml d'eau et, lorsque celle-ci s'est écoulée, rép&
aucune détérioration,
...
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