SIST ISO 3356:2001

Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk powder, whey and whey powder -- Determination of phosphatase activity (Reference method)

Can be applied for the control of proper pasteurization of the products specified in the title of this standard. Uses a principle of determination based on the dilution of the liquid product or the reconstituted liquid product with a buffer at pH 10.6 containing disodium phenylphosphate and incubation at 37 degrees centigrade for 1 h. By reaction with the alkaline phosphatase present in the product phenol is liberated which reacts with dibromopquinonechloroimide. Then the colour formed is measured photometrically.

Lait et lait sec, babeurre et poudre de babeurre, sérum et poudre de sérum -- Détermination de l'activité phosphatasique (Méthode de référence)

Mleko in mleko v prahu, pinjenec in pinjenec v prahu, sirotka in sirotka v prahu; Določevanje aktivnosti fosfataze (Referenčna metoda)

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 31-Jan-2001
• Withdrawal Date: 15-May-2011
• ICS: 67.100.10 - Milk and processed milk products
• Technical Committee: KŽP - Agricultural food products
• Current Stage: 9900 - Withdrawal (Adopted Project)
• Start Date: 12-May-2011
• Due Date: 04-Jun-2011
• Completion Date: 16-May-2011
• Ref Project: ISO 3356:1975 - Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk powder, whey and whey powder — Determination of phosphatase activity (Reference method)

Relations

• Revised: ISO 3356:2009 - Milk — Determination of alkaline phosphatase
• Effective Date: 12-May-2008
• Replaced By: SIST ISO 3356:2011 - Milk -- Determination of alkaline phosphatase
• Effective Date: 01-Jun-2011

Standards Content (Sample)

INTERNAT1
335
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION l MEXAYHAPOAHAJI OPI-AHM3AL(MII I-IO CTAHAAPTM3AL(Mki~ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk powder,
whey and whey powder -
Determination of phosphatase
activity (Reference method)
Lait et lait sec, babeurre et poudre de babeurre, s&um et poudre de skr-um - Determination de lactivit&
phospha tasique (Mthode de r6fkence)
First edition - 1975-07-15
UDC 637.14: 545
Ref. No. ISO 3356-1975 (E)
Descriptors : dairy products, mil k, buttermilk, dried milk, Serum (whey), Chemical analysis, determination of content, enzymatic activity,
phosphatases.
Price based on 3 pages

---------------------- Page: 1 ----------------------
FOREWORQ
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation
of national Standards institutes (ISO Member Bodies). The work of developing
International Standards is carried out through ISO Technical Committees. Every
Member Body interested in a subject for which a Technical Committee has been set
up has the right to be represented on that Committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the Technical Committees are circulated
to the Member Bodies for approval before their acceptance as International
Standards by the ISO Council.
International Standard ISO 3356 was drawn up by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, and circulated to the Member Bodies in
April 1974.
lt has been approved by the Member Bodies of the following countries :
Austria Hungary Pol and
India
Belgium Romania
Iran South Africa, Rep. of
Bulgaria
Canada Ireland Spain
Chile Israel Thailand
Czechoslovakia Italy Turkey
Netherlands U.S.S.R.
France
New Zealand Yugoslavia
Germany
The Member Body sf the following country expressed disapproval of the document
on technical grounds :
United Kingdom
0 International Organkation for Standardkation, 1975 o
Printed in Switzerland

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 3356-1975 (El
INTERNATIONAL STANDARD
Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk povvder,
whey and whey powder -
Determination of phosphatase
activity (Reference method)
5.1.2 Dissolve 22,0 g of boric acid (H3B03) in water to a
1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION
volume of 1 000 ml.
This International Standard specifies a reference method
for the determination of the phosphatase activity in milk
5.1.3 Warm 500 ml of each Solution to 50 ‘C, mix the
and dried milk, buttermilk and buttermilk powder, whey
solutions, stir, cool rapidly to about 20 ‘C, adjust the pH if
and whey powder.
necessary to IO,6 + 0,l by addition of Solution 5.1 .l or
5.1.2 and filter.
The method tan be applied for the control of proper
pasteurization of these products.
Store the Solution in a tightly stoppered Container.
Dilute the Solution before use with an equal volume of
water.
2 REFERENCE
ISOIR 707, Milk and milk products - Sampling.
5.2 Colour development buffer.
Dissolve 6,0 g of sodium metaborate (NaBO*) or 12,6 g of
NaB02~4H20, and 20,O g of sodium chloride NaCI) in
3 DEFINITION
water to a volume of 1 000 ml.
For the purposes of this International Standard, the
following definition applies :
5.3 Colour dilution buffer.
phosphatase activity : The quantity of active alkaline
Dilute IO ml of the colour development buffer (5.2) to
phosphatase present in the product, expressed as the
100 ml with water.
quantity of Phenol, in micrograms, liberated under the
specified conditions by 1 ml of the liquid product or, in the
5.4 Buffer su bstrate.
case of dried products, by 1 ml of the reconstituted liquid
Dissolve of disodium phenylphosphate
product. 015 g
in 4,5 ml of the colour development
buffer (5.2), add twc drops of the BQC Solution (5.6) and
let stand at room temperature for 30 min. Extract the
4 PRINCIPLE
colour so formed with 2,5 ml of butan-1-01 and let stand
until the butan-1-01 separates. Remove the butan-1-01 and
Dilution of the liquid product or the reconstituted liquid
discard. Repeat this extraction if necessary.
product with a buffer at pH IO,6 containing disodium
phenylphosphate and incubation at 37 “C for 1 h, Iiberating
The Solution may be stored in a refrigerator for a few days;
Phenol by reaction with the alkaline phosphatase present in
develop the colour and re-extract before use. Prepare the
the product. Reaction of the Phenol with dibromoqui-
buffer Substrate immediately before use by diluting 1 ml of
nonechloroimide and photometric measurement of the
this Solution to 100 ml with the barium borate-hydroxide
colour formed.
buffer (5.1).
5.5 Zinc-topper precipitant.
5 REAGENTS
Dissolve 3,0 g of zinc sulphate (ZnS04.7H20) and 0,6 g of
All reagents shall be of analytical reagent quality and water
copper(ll) sulphate (CuS04.5HzO) in water to a volume of
shall be freshly boiled distilled water, or water of a least
100 ml.
equal purity, free from carbon dioxide.
5.6 2,6-dibromoquinonechloroimide
Solution (Gibb’s
5.1 Barium borate-hydroxide buffer.
reagent).
5.1 .l Dissolve 50,o g of barium hydroxide Dissolve 40 + 1 mg
of 2,6-dibromoquinonechloroimide
[Ba(OH)2SH20], free from carbonate, in water to a (BQC) (0 = CeH2Br2 = NCI) in IO ml of 96 % (V/V)
ethanol.
volume of 1 000 ml.
1

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ISO 3356-1975 (El
Store in a dar k-coloured bottle in a refrigerator. Reject if 8 PROCEDURE
discoloured or more than 1 month old.
NOTES
1 Avoid the influence of direct sunlight during the determination.
5.7 Copper(ll) sulphate solution.
2 Contamination with traces of saliva or Perspiration tan give false
Dissolve O,Q5 g of copper(ll) sulphate (CuS04.5H20) in
positive results and must be avoided. In this respect special attention
water to a volume of 100 ml.
shall be devoted to the pipetting.
5.8 Sodium hydroxide, 0,5 N Solution. 8.1 Preparation of the test Sample
5.9 Phenol Standard solutions. 8.1.1 Milk, buttermilk and whey
5.91 Weigh 200 + 2 mg of pure anhydrous Phenol, 8.l.M Carry out the analysis preferably directly after
transfer to a 100 ml volumetric flask, fill to the mark with sampling. Otherwise, keep the Sample in a refrigerator, but
water and mix. not for more than 2 days.
This stock Solution remains stable for several months in a
8.1.1.2 Mix the Sample carefully, if necessary with
refrigerator.
mo
...

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 3356:2001
01-februar-2001
0OHNRLQPOHNRYSUDKXSLQMHQHFLQSLQMHQHFYSUDKXVLURWNDLQVLURWNDYSUDKX
'RORþHYDQMHDNWLYQRVWLIRVIDWD]H5HIHUHQþQDPHWRGD
Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk powder, whey and whey powder --
Determination of phosphatase activity (Reference method)
Lait et lait sec, babeurre et poudre de babeurre, sérum et poudre de sérum --
Détermination de l'activité phosphatasique (Méthode de référence)
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 3356:1975
ICS:
67.100.10 0OHNRLQSUHGHODQLPOHþQL Milk and processed milk
SURL]YRGL products
SIST ISO 3356:2001 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

---------------------- Page: 1 ----------------------

SIST ISO 3356:2001

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SIST ISO 3356:2001
INTERNAT1
335
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION l MEXAYHAPOAHAJI OPI-AHM3AL(MII I-IO CTAHAAPTM3AL(Mki~ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk powder,
whey and whey powder -
Determination of phosphatase
activity (Reference method)
Lait et lait sec, babeurre et poudre de babeurre, s&um et poudre de skr-um - Determination de lactivit&
phospha tasique (Mthode de r6fkence)
First edition - 1975-07-15
UDC 637.14: 545
Ref. No. ISO 3356-1975 (E)
Descriptors : dairy products, mil k, buttermilk, dried milk, Serum (whey), Chemical analysis, determination of content, enzymatic activity,
phosphatases.
Price based on 3 pages

---------------------- Page: 3 ----------------------

SIST ISO 3356:2001
FOREWORQ
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation
of national Standards institutes (ISO Member Bodies). The work of developing
International Standards is carried out through ISO Technical Committees. Every
Member Body interested in a subject for which a Technical Committee has been set
up has the right to be represented on that Committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the Technical Committees are circulated
to the Member Bodies for approval before their acceptance as International
Standards by the ISO Council.
International Standard ISO 3356 was drawn up by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, and circulated to the Member Bodies in
April 1974.
lt has been approved by the Member Bodies of the following countries :
Austria Hungary Pol and
India
Belgium Romania
Iran South Africa, Rep. of
Bulgaria
Canada Ireland Spain
Chile Israel Thailand
Czechoslovakia Italy Turkey
Netherlands U.S.S.R.
France
New Zealand Yugoslavia
Germany
The Member Body sf the following country expressed disapproval of the document
on technical grounds :
United Kingdom
0 International Organkation for Standardkation, 1975 o
Printed in Switzerland

---------------------- Page: 4 ----------------------

SIST ISO 3356:2001
ISO 3356-1975 (El
INTERNATIONAL STANDARD
Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk povvder,
whey and whey powder -
Determination of phosphatase
activity (Reference method)
5.1.2 Dissolve 22,0 g of boric acid (H3B03) in water to a
1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION
volume of 1 000 ml.
This International Standard specifies a reference method
for the determination of the phosphatase activity in milk
5.1.3 Warm 500 ml of each Solution to 50 ‘C, mix the
and dried milk, buttermilk and buttermilk powder, whey
solutions, stir, cool rapidly to about 20 ‘C, adjust the pH if
and whey powder.
necessary to IO,6 + 0,l by addition of Solution 5.1 .l or
5.1.2 and filter.
The method tan be applied for the control of proper
pasteurization of these products.
Store the Solution in a tightly stoppered Container.
Dilute the Solution before use with an equal volume of
water.
2 REFERENCE
ISOIR 707, Milk and milk products - Sampling.
5.2 Colour development buffer.
Dissolve 6,0 g of sodium metaborate (NaBO*) or 12,6 g of
NaB02~4H20, and 20,O g of sodium chloride NaCI) in
3 DEFINITION
water to a volume of 1 000 ml.
For the purposes of this International Standard, the
following definition applies :
5.3 Colour dilution buffer.
phosphatase activity : The quantity of active alkaline
Dilute IO ml of the colour development buffer (5.2) to
phosphatase present in the product, expressed as the
100 ml with water.
quantity of Phenol, in micrograms, liberated under the
specified conditions by 1 ml of the liquid product or, in the
5.4 Buffer su bstrate.
case of dried products, by 1 ml of the reconstituted liquid
Dissolve of disodium phenylphosphate
product. 015 g
in 4,5 ml of the colour development
buffer (5.2), add twc drops of the BQC Solution (5.6) and
let stand at room temperature for 30 min. Extract the
4 PRINCIPLE
colour so formed with 2,5 ml of butan-1-01 and let stand
until the butan-1-01 separates. Remove the butan-1-01 and
Dilution of the liquid product or the reconstituted liquid
discard. Repeat this extraction if necessary.
product with a buffer at pH IO,6 containing disodium
phenylphosphate and incubation at 37 “C for 1 h, Iiberating
The Solution may be stored in a refrigerator for a few days;
Phenol by reaction with the alkaline phosphatase present in
develop the colour and re-extract before use. Prepare the
the product. Reaction of the Phenol with dibromoqui-
buffer Substrate immediately before use by diluting 1 ml of
nonechloroimide and photometric measurement of the
this Solution to 100 ml with the barium borate-hydroxide
colour formed.
buffer (5.1).
5.5 Zinc-topper precipitant.
5 REAGENTS
Dissolve 3,0 g of zinc sulphate (ZnS04.7H20) and 0,6 g of
All reagents shall be of analytical reagent quality and water
copper(ll) sulphate (CuS04.5HzO) in water to a volume of
shall be freshly boiled distilled water, or water of a least
100 ml.
equal purity, free from carbon dioxide.
5.6 2,6-dibromoquinonechloroimide
Solution (Gibb’s
5.1 Barium borate-hydroxide buffer.
reagent).
5.1 .l Dissolve 50,o g of barium hydroxide Dissolve 40 + 1 mg
of 2,6-dibromoquinonechloroimide
[Ba(OH)2SH20], free from carbonate, in water to a (BQC) (0 = CeH2Br2 = NCI) in IO ml of 96 % (V/V)
ethanol.
volume of 1 000 ml.
1

---------------------- Page: 5 ----------------------

SIST ISO 3356:2001
ISO 3356-1975 (El
Store in a dar k-coloured bottle in a refrigerator. Reject if 8 PROCEDURE
discoloured or more than 1 month old.
NOTES
1 Avoid the influence of direct sunlight during the determination.
5.7 Copper(ll) sulphate solution.
2 Contamination with traces of saliva or Perspiration tan give false
Dissolve O,Q5 g of copper(ll) sulphate (CuS04.5H20) in
positive results and must be avoided. In this respect special attention
water to a volu
...

NORME INTERNATIONALE ISO 33564975 (F)/AMENDEMENT 2
Publié 1975-11-01
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION l EIK~YHAPO~HAII OPrAHkl3AlJHR Il0 Cl-AH~APTW3AUHW .ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Lait et lait sec, babeurre et poudre de babeurre, sérum et poudre de sérum - Détermination de l’activité
phosphatasique (Méthode de référence)
AMENDEMENT 2
Avan t-propos (Page de couverture intérieure)
Ajouter à la fin :
#Cette Norme Internationale a été élaborée conjointement avec la FI L (Fédération Internationale de Laiterie) et I’AOAC
(Association des Chimistes Analytiques Officiels, U.S.A.) sur la base d’un projet FIL. Le texte, approuvé par les organisations
susmentionnées, a été également publié par la FIL (Norme FIL no 63) et par I’AOAC (Officia1 Methods of Analysis).))

---------------------- Page: 1 ----------------------
Page blanche

---------------------- Page: 2 ----------------------
8
NORME INTERNATIONALE
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION l MEXAYHAPOAHAII OPI-AHM3AuMfl I-I0 CTAHAAPTM3A~WW.ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Lait et lait sec, babeurre et poudre de babeurre, sérum et
poudre de sérum - Détermination de l’activité phosphatasique
(Méthode de référence)
â
Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk po wdw, dey and wky pow&r - Detefmination 0 f
phosphatase activity (Reference method)
Première édition - 1975-07-l 5
Réf. no : ISO 3356-1975 (F)
CDU 637.14 : 545
Descripteurs : produit laitier, lait, babeurre, lait en poudre, petit-lait, analyse chimique, dosage, activité enzymatique, phosphatase.
Prix basé sur 3 pages

---------------------- Page: 3 ----------------------
AVANT-PROPOS
L’ISO (Organisation Internationale de Normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (Comités Membres ISO). L’élaboration de
Normes Internationales est confiée aux Comités Techniques ISO. Chaque Comité
Membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du Comité Technique
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les Projets de Normes Internationales adoptés par les Comités Techniques sont
soumis aux Comités Membres pour approbation, avant leur acceptation comme
Normes Internationales par le Conseil de I’ISO. h
La Norme Internationale ISO 3356 a été établie par le Comité Technique
ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, et soumise aux Comités Membres en
avril 1974.
Elle a été approuvée par les Comités Membres des pays suivants :
France
Afrique du Sud, Rép. d’ Pays-Bas
Allemagne Hongrie Pologne
Autriche Inde Roumanie
Belgique , Iran Tchécoslovaquie
Bulgarie Irlande Thaïlande
Canada Israël Turquie
Chili . Italie U.R.S.S.
Nouvelle-Zélande Yougoslavie
Espagne
Le Comité Membre du pays suivant a désapprouvé
le document pour des raisons
techniques :
Royaume-Uni
0 Organisation Internationale de Normalisation, 1975 l
Imprimé en Suisse

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 33564975 (F)
NORME INTERNATIONALE
Lait et lait sec, bab.eurre et poudre de babeurre, sérum et
poudre de sérum - Détermination de l’activité phosphatasique
(Méthode de référence)
5.1.2 Dissoudre 22,0 g d’acide borique ( H3B03) dans
1 OBJET ET DOMAINE D’APPLICATION
l’eau et compléter à 1 000 ml.
La présente Norme Internationale spécifie une méthode de
référence pour la détermination de l’activité phosphatasique
5.1.3 Chauffer à 50 “C 500 ml de chacune de ces
du lait et du lait sec, du babeurre et de la poudre de
solutions, les mélanger, agiter, refroidir rapidement à 20 OC,
babeurre, ainsi que du sérum et de la poudre de sérum.
ajuster le pH, si nécessaire, à 10,6 k 0,l par addition de
solution 5.1 .l ou 5.1.2, puis filtrer.
La méthode peut être utilisée pour contrôler si la
Conserver la solution dans un récipient bouché
pasteurisation de ces produits a été effectuée correctement.
hermétiquement.
Avant utilisation, diluer la solution avec un égal volume
c
d’eau.
2 RÉFÉRENCE
Iso/R 707, Lait et produits laitiers - Méthode d’échantil-
5.2 Tampon pour le développement de la coloration.
lonnage.
Dissoudre dans l’eau 6,0 g de métaborate de sodium
(NaBO*) ou 12,6 g de NaB02=4H20 et 20,O g de chlorure
de sodium (NaCI) et compléter à 1 000 ml.
3 DÉFINITION
Dans le cadre de la présente Norme Internationale, la 5.3 Tampon de couleur dilué.
définition suivante est applicable :
Prendre 10 ml du tampon pour le développement de la
Quantité de phosphatase alcaline
activité phosphatasique : coloration (5.2) et diluer à 100 ml avec de l’eau.
active présente dans un produit, exprimée par le nombre de
libéré, dans les conditions 5.4 Substrat tamponné.
microgrammes de phénol
spécifiées, par 1 ml de produit liquide ou, s’il s’agit de
Dissoudre disodique
0,5 g de phénylphosphate
produits déshydratés, par 1 ml de produit liquide
(Na2CeHgP04~2H20) d ans 4,5 ml de tampon pour le
reconstitué.
développement de la coloration (5.2), ajouter 2 gouttes de
la solution de BQC (5.6) et laisser reposer à la température
ambiante durant 30 min. Au moyen de 2,5 ml de
4 PRINCIPE
butanol-1, extraire la coloration obtenue et laisser reposer
Dilution du produit liquide ou du produit liquide jusqu’à séparation du butanol-1. Soutirer et éliminer le
reconstitué avec une solution tampon de pH 10,6 contenant butanol-1. Recommencer l’extraction, si nécessaire.
du phénylphosphate de sodium et incubation durant 1 h à La solution peut être conservée quelques jours au
37 OC, libérant du phénol par réaction avec la phosphatase
réfrigérateur. Développer la couleur et extraire à nouveau
alcaline présente dans le produit. Réaction du phénol avec
avant l’emploi. Préparer le substrat tamponné,
la dibromoquinonechlorimide et mesurage photométrique
immédiatement avant emploi, en diluant 1 ml de cette
de la coloration obtenue.
solution et en complétant à 100 ml avec le tampon
borate-hydroxyde de baryum (5.1).
5.5 Défécant cuivre-zinc.
5 RÉACTIFS
Dissoudre dans l’eau 3,O,g de sulfate de zinc (ZnS04=7H20)
Les réactifs doivent être de pureté analytique, et l’eau
utilisée doit être de l’eau distillée ou de pureté au moins et 0,6 g de sulfate de cuivre(II) (CuS04=5H20) et
compléter à 100 ml.
équivalente rendue exempte de dioxyde de carbone.
5.6 2,6dibromoquinonechlorimide, solution (Réactif de
5.1 Tampon borate-hydroxyde de baryum.
Gibbs).
5.1.1 Dissoudre dans l’eau 50,O g d’hydroxyde de baryum
Dissoudre 40 rt 1 mg de 2,6-dibromoquinonechlorimide
[Ba(OH)2*8H20] exempt de carbonate. Compléter à
= NCI) dans 10 ml d’éthanol à 96 %
(BQC) (0 = CsHzBrz
1 000 ml.
WV).
1

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO3356=1975(F)
7 ÉCHANTILLONNAGE
Conserver au réfrigérateur dans un récipient de couleur
foncée. Rejeter la solution si elle change de couleur ou si
Voir ISO/R 707 (5.3
...

NORME INTERNATIONALE ISO 33564975 (F)/AMENDEMENT 2
Publié 1975-11-01
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION l EIK~YHAPO~HAII OPrAHkl3AlJHR Il0 Cl-AH~APTW3AUHW .ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Lait et lait sec, babeurre et poudre de babeurre, sérum et poudre de sérum - Détermination de l’activité
phosphatasique (Méthode de référence)
AMENDEMENT 2
Avan t-propos (Page de couverture intérieure)
Ajouter à la fin :
#Cette Norme Internationale a été élaborée conjointement avec la FI L (Fédération Internationale de Laiterie) et I’AOAC
(Association des Chimistes Analytiques Officiels, U.S.A.) sur la base d’un projet FIL. Le texte, approuvé par les organisations
susmentionnées, a été également publié par la FIL (Norme FIL no 63) et par I’AOAC (Officia1 Methods of Analysis).))

---------------------- Page: 1 ----------------------
Page blanche

---------------------- Page: 2 ----------------------
8
NORME INTERNATIONALE
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION l MEXAYHAPOAHAII OPI-AHM3AuMfl I-I0 CTAHAAPTM3A~WW.ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Lait et lait sec, babeurre et poudre de babeurre, sérum et
poudre de sérum - Détermination de l’activité phosphatasique
(Méthode de référence)
â
Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk po wdw, dey and wky pow&r - Detefmination 0 f
phosphatase activity (Reference method)
Première édition - 1975-07-l 5
Réf. no : ISO 3356-1975 (F)
CDU 637.14 : 545
Descripteurs : produit laitier, lait, babeurre, lait en poudre, petit-lait, analyse chimique, dosage, activité enzymatique, phosphatase.
Prix basé sur 3 pages

---------------------- Page: 3 ----------------------
AVANT-PROPOS
L’ISO (Organisation Internationale de Normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (Comités Membres ISO). L’élaboration de
Normes Internationales est confiée aux Comités Techniques ISO. Chaque Comité
Membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du Comité Technique
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les Projets de Normes Internationales adoptés par les Comités Techniques sont
soumis aux Comités Membres pour approbation, avant leur acceptation comme
Normes Internationales par le Conseil de I’ISO. h
La Norme Internationale ISO 3356 a été établie par le Comité Technique
ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, et soumise aux Comités Membres en
avril 1974.
Elle a été approuvée par les Comités Membres des pays suivants :
France
Afrique du Sud, Rép. d’ Pays-Bas
Allemagne Hongrie Pologne
Autriche Inde Roumanie
Belgique , Iran Tchécoslovaquie
Bulgarie Irlande Thaïlande
Canada Israël Turquie
Chili . Italie U.R.S.S.
Nouvelle-Zélande Yougoslavie
Espagne
Le Comité Membre du pays suivant a désapprouvé
le document pour des raisons
techniques :
Royaume-Uni
0 Organisation Internationale de Normalisation, 1975 l
Imprimé en Suisse

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 33564975 (F)
NORME INTERNATIONALE
Lait et lait sec, bab.eurre et poudre de babeurre, sérum et
poudre de sérum - Détermination de l’activité phosphatasique
(Méthode de référence)
5.1.2 Dissoudre 22,0 g d’acide borique ( H3B03) dans
1 OBJET ET DOMAINE D’APPLICATION
l’eau et compléter à 1 000 ml.
La présente Norme Internationale spécifie une méthode de
référence pour la détermination de l’activité phosphatasique
5.1.3 Chauffer à 50 “C 500 ml de chacune de ces
du lait et du lait sec, du babeurre et de la poudre de
solutions, les mélanger, agiter, refroidir rapidement à 20 OC,
babeurre, ainsi que du sérum et de la poudre de sérum.
ajuster le pH, si nécessaire, à 10,6 k 0,l par addition de
solution 5.1 .l ou 5.1.2, puis filtrer.
La méthode peut être utilisée pour contrôler si la
Conserver la solution dans un récipient bouché
pasteurisation de ces produits a été effectuée correctement.
hermétiquement.
Avant utilisation, diluer la solution avec un égal volume
c
d’eau.
2 RÉFÉRENCE
Iso/R 707, Lait et produits laitiers - Méthode d’échantil-
5.2 Tampon pour le développement de la coloration.
lonnage.
Dissoudre dans l’eau 6,0 g de métaborate de sodium
(NaBO*) ou 12,6 g de NaB02=4H20 et 20,O g de chlorure
de sodium (NaCI) et compléter à 1 000 ml.
3 DÉFINITION
Dans le cadre de la présente Norme Internationale, la 5.3 Tampon de couleur dilué.
définition suivante est applicable :
Prendre 10 ml du tampon pour le développement de la
Quantité de phosphatase alcaline
activité phosphatasique : coloration (5.2) et diluer à 100 ml avec de l’eau.
active présente dans un produit, exprimée par le nombre de
libéré, dans les conditions 5.4 Substrat tamponné.
microgrammes de phénol
spécifiées, par 1 ml de produit liquide ou, s’il s’agit de
Dissoudre disodique
0,5 g de phénylphosphate
produits déshydratés, par 1 ml de produit liquide
(Na2CeHgP04~2H20) d ans 4,5 ml de tampon pour le
reconstitué.
développement de la coloration (5.2), ajouter 2 gouttes de
la solution de BQC (5.6) et laisser reposer à la température
ambiante durant 30 min. Au moyen de 2,5 ml de
4 PRINCIPE
butanol-1, extraire la coloration obtenue et laisser reposer
Dilution du produit liquide ou du produit liquide jusqu’à séparation du butanol-1. Soutirer et éliminer le
reconstitué avec une solution tampon de pH 10,6 contenant butanol-1. Recommencer l’extraction, si nécessaire.
du phénylphosphate de sodium et incubation durant 1 h à La solution peut être conservée quelques jours au
37 OC, libérant du phénol par réaction avec la phosphatase
réfrigérateur. Développer la couleur et extraire à nouveau
alcaline présente dans le produit. Réaction du phénol avec
avant l’emploi. Préparer le substrat tamponné,
la dibromoquinonechlorimide et mesurage photométrique
immédiatement avant emploi, en diluant 1 ml de cette
de la coloration obtenue.
solution et en complétant à 100 ml avec le tampon
borate-hydroxyde de baryum (5.1).
5.5 Défécant cuivre-zinc.
5 RÉACTIFS
Dissoudre dans l’eau 3,O,g de sulfate de zinc (ZnS04=7H20)
Les réactifs doivent être de pureté analytique, et l’eau
utilisée doit être de l’eau distillée ou de pureté au moins et 0,6 g de sulfate de cuivre(II) (CuS04=5H20) et
compléter à 100 ml.
équivalente rendue exempte de dioxyde de carbone.
5.6 2,6dibromoquinonechlorimide, solution (Réactif de
5.1 Tampon borate-hydroxyde de baryum.
Gibbs).
5.1.1 Dissoudre dans l’eau 50,O g d’hydroxyde de baryum
Dissoudre 40 rt 1 mg de 2,6-dibromoquinonechlorimide
[Ba(OH)2*8H20] exempt de carbonate. Compléter à
= NCI) dans 10 ml d’éthanol à 96 %
(BQC) (0 = CsHzBrz
1 000 ml.
WV).
1

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ISO3356=1975(F)
7 ÉCHANTILLONNAGE
Conserver au réfrigérateur dans un récipient de couleur
foncée. Rejeter la solution si elle change de couleur ou si
Voir ISO/R 707 (5.3
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