Foodstuffs - DNA barcoding of fish and fish products using defined mitochondrial cytochrome b and cytochrome c oxidase I gene segments

This document describes a procedure for the identification of single fish and fish fillets to the level of genus or species.
The identification of fish species is carried out by PCR amplification of either a segment of the mitochondrial cytochrome b gene (cytb) or the cytochrome c oxidase I gene (cox1, syn COI) or both, followed by sequencing of the PCR products and subsequent sequence comparison with entries in databases. The methodology allows the identification of a large number of commercially important fish species.
The decision whether the cytb or cox1 gene segment or both are used for fish identification depends on the declared fish species, the applicability of the PCR method for the fish species and the availability of comparative sequences in the public databases.
This method has been successfully validated on raw fish fillets, however, laboratory experience is available that it can also be applied to processed, e.g. cold smoked, hot smoked, salted, frozen, cooked, fried, deep-fried samples.
This document is usually unsuitable for the analysis of highly processed foods, e.g. tins of fish, with highly degraded DNA where the fragment lengths are not sufficient for amplification of the targets. Furthermore, it is not applicable for complex fish products containing mixtures of two or more fish species.

Lebensmittel - DNA-Barcoding von Fisch und Fischprodukten anhand definierter mitochondrialer Cytochrom-b- und Cytochrom-c-Oxidase-I-Genabschnitte

Dieses Dokument legt ein Verfahren für die Identifizierung von Einzelfischen oder Fischfilets auf Gattungs- oder Speziesebene fest.
Die Identifizierung der Fischspezies erfolgt durch PCR-Amplifikation entweder eines Segments des mitochondrialen Cytochrom-b-Gens (cytb) [1] oder des Cytochrom-c-Oxidase-I-Gens (cox1, syn COI) [2], [3] - oder von beiden, gefolgt von der Sequenzierung der PCR-Produkte und einem anschließenden Datenbankabgleich der Sequenzen [4], [5]. Diese Methodik erlaubt die Identifizierung einer großen Zahl kommerziell wichtiger Fischspezies.
Die Entscheidung, ob der cytb- oder der cox1-Genabschnitt oder beide für die Fischidentifizierung herangezogen werden, hängt von der deklarierten Fischspezies, der Anwendbarkeit des PCR-Verfahrens für die Fischspezies und der Verfügbarkeit vergleichbarer Sequenzen in den öffentlichen Datenbanken ab.
Dieses Verfahren wurde erfolgreich an rohen Fischfilets validiert, Laborerfahrungen zeigen jedoch, dass dieses Verfahren auch an verarbeiteten Proben wie z. B. kalt- und heißgeräucherten, gesalzenen, tiefgefrorenen, gekochten, gebratenen und frittierten Proben angewendet werden kann.
Dieses Dokument ist in der Regel ungeeignet für die Untersuchung stark verarbeiteter Lebensmittel - z. B. Fischkonserven mit stark degradierter DNA, bei denen die Fragmentlängen nicht für eine Amplifizierung der Zielsequenzen ausreichen. Außerdem ist es nicht anwendbar auf zusammengesetzte Fischprodukte, die aus mehr als einer Fischspezies bestehen.

Produits alimentaires - Codes-barres d’ADN de poissons et de produits à base de poissons à l’aide de segments de gènes mitochondriaux du cytochrome b et cyctochrome c oxydase I

Le présent document décrit un mode opératoire d’identification au niveau du gène ou de l’espèce des poissons individuels et des filets de poisson.
L’identification des espèces de poisson s’effectue par amplification par réaction de polymérisation en chaîne (PCR : Polymerase Chain Reaction) d’un segment du gène du cytochrome b mitochondrial (cytb) 1], du gène du cytochrome c oxydase I (cox1 ou COI) [2], [3] ou des deux, suivie d’un séquençage des produits de la PCR et d’une comparaison des séquences aux entrées de bases de données [4], [5]. Cette méthodologie permet l’identification d’un grand nombre d’espèces de poisson à forte importance commerciale.
Le choix de l’utilisation de segments de gènes de cytb ou de cox1 ou des deux pour l’identification du poisson dépend de l’espèce de poisson déclarée, de la facilité d’application de la méthode de la PCR à l’espèce de poisson considérée et de la disponibilité des séquences de comparaison dans les bases de données publiques.
Cette méthode a été validée avec succès sur des filets de poisson cru mais des expériences menées en laboratoire montrent qu’elle est également applicable à des échantillons après transformation (fumage à froid ou à chaud, salage, congélation, cuisson, friture, etc.).
Le présent document est de manière générale inadapté à l’analyse d’aliments hautement transformés comme les poissons en conserve dont l’ADN est fortement dégradé et dont les longueurs des fragments se révèlent insuffisantes pour l’amplification des cibles. En outre, la méthode présentée ici n’est pas applicable aux produits complexes à base de poisson qui mélangent deux espèces de poissons et plus.

Živila - Črtno kodiranje DNK rib in ribjih proizvodov z uporabo segmentov genov, ki nosijo zapis za mitohondrijski citokrom b in citokrom c oksidaze I

Ta metoda določa postopek za identifikacijo posameznih surovih, hladno prekajenih, soljenih, zamrznjenih ali kuhanih (prekuhanih, pečenih, ocvrtih, vroče dimljenih) rib in ribjih filejev glede na rod ali vrsto.
Identifikacija vrst rib se izvaja s povečanjem polimerazne verižne reakcije (PCR) segmenta mitohondrijskega gena za citokrom b (cytb) ali gena za citokrom c oksidaze I (cox1, syn COI) ali obojega, čemur sledi sekvenciranje produktov polimerazne verižne reakcije in nadaljnja primerjava sekvenc z vnosi v zbirkah podatkov. Metodologija omogoča identifikacijo velikega števila komercialno pomembnih vrst rib.
Odločitev o tem, ali se za identifikacijo rib uporablja segment gena cytb ali cox1 ali oba, je odvisna od navedene vrste rib, uporabnosti metode polimerazne verižne reakcije za vrsto rib in razpoložljivosti primerjalnih sekvenc v javnih zbirkah podatkov.
Ta standard običajno ni primeren za analizo živil z visoko stopnjo predelave, npr. ribjih konzerv, z zelo razgrajeno DNK, pri katerih dolžine delcev ne zadostujejo za povečanje ciljev. Poleg tega se ne uporablja za kompleksne ribje proizvode, ki vsebujejo mešanico dveh ali več vrst rib.

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TS CEN/TS 17303:2019
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SIST-TS CEN/TS 17303:2019
Foodstuffs - DNA barcoding of fish and fish products using defined mitochondrial
cytochrome b and cytochrome c oxidase I gene segments
Lebensmittel - DNA-Barcoding von Fisch und Fischprodukten anhand definierter
mitochondrialer Cytochrom b- und Cytochrom c-Oxidase I-Genabschnitte
Produits alimentaires - Codes-barres d’ADN de poissons et de produits à base de
poissons à l'aide de segments de gènes mitochondriaux du cytochrome b et
cyctochrome c oxydase I
Ta slovenski standard je istoveten z: CEN/TS 17303:2019
67.120.30 Ribe in ribji proizvodi Fish and fishery products
SIST-TS CEN/TS 17303:2019 en,fr,de
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

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SIST-TS CEN/TS 17303:2019

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SIST-TS CEN/TS 17303:2019

CEN/TS 17303


March 2019
ICS 67.120.30
English Version

Foodstuffs - DNA barcoding of fish and fish products using
defined mitochondrial cytochrome b and cytochrome c
oxidase I gene segments
Produits alimentaires - Codes-barres d'ADN de Lebensmittel - DNA-Barcoding von Fisch und
poissons et de produits à base de poissons à l'aide de Fischprodukten anhand definierter mitochondrialer
segments de gènes mitochondriaux du cytochrome b et Cytochrom-b- und Cytochrom-c-Oxidase-I-
cyctochrome c oxydase I Genabschnitte
This Technical Specification (CEN/TS) was approved by CEN on 14 January 2019 for provisional application.

The period of validity of this CEN/TS is limited initially to three years. After two years the members of CEN will be requested to
submit their comments, particularly on the question whether the CEN/TS can be converted into a European Standard.

CEN members are required to announce the existence of this CEN/TS in the same way as for an EN and to make the CEN/TS
available promptly at national level in an appropriate form. It is permissible to keep conflicting national standards in force (in
parallel to the CEN/TS) until the final decision about the possible conversion of the CEN/TS into an EN is reached.

CEN members are the national standards bodies of Austria, Belgium, Bulgaria, Croatia, Cyprus, Czech Republic, Denmark, Estonia,
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Luxembourg, Malta, Netherlands, Norway, Poland, Portugal, Romania, Serbia, Slovakia, Slovenia, Spain, Sweden, Switzerland,
Turkey and United Kingdom.



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SIST-TS CEN/TS 17303:2019
CEN/TS 17303:2019 (E)
Contents Page
European foreword . 3
Introduction . 4
1 Scope . 5
2 Normative references . 5
3 Terms and definitions . 5
4 Principle . 7
5 Reagents and materials . 7
5.1 General . 7
5.2 PCR reagents . 8
6 Apparatus .

Questions, Comments and Discussion

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