CEN/TS 15633-2:2013

Foodstuffs - Detection of food allergens by immunological methods - Part 2: Quantitative determination of hazelnut with an enzyme immunoassay using monoclonal antibodies and bicinchoninic acid-protein detection

This Technical Specification specifies an enzyme linked immunsorbent assay (ELISA) method for the determination of hazelnut from food samples. In the ELISA the antibodies bind to hazelnut proteins from the food sample. The result of the ELISA is given in mg hazelnut/kg (ppm) because the calibrators consist of an extract of whole hazelnut.
Matrices like cereals, ice cream, cookies, chocolate, sausage, cottage cheese, yogurt and salad dressing were validated by spiking experiments with a carboxymethylcellulose-suspension containing hazelnut paste [2].
The monoclonal antibodies, raised against the whole aqueous extract of hazelnut, detect proteins with approximate molecular weights of 14 kDa, 18 kDa, and 42 kDa. The antibodies detect the major thermostable allergen Cor a9 (11S storage protein). Both antibodies were evaluated by western blots with partially purified hazelnut extracts and purified allergenic proteins.
The ELISA test method is commercially available ). The performance has been validated by an in house validation performed by the manufacturer. All parameters of interest are indicated.
In addition, the ELISA was successfully validated by a collaborative study in order to determine the interlaboratory reproducibility. This ring trial was organised by the working group established by the Federal Office of Consumer Protection and Food Safety (BVL) for the execution of § 64 of the German Food and Feed Code (LFGB) for the determination of hazelnut content in dark chocolate. Fourteen German laboratories participated in this collaborative study.

Lebensmittel - Nachweis von Lebensmittelallergenen mit immunologischen Verfahren - Teil 2: Quantitative Bestimmung von Haselnuss mit einem Enzym-Immunoassayverfahren unter Verwendung von monoklonalen Antikörpern und Proteindetektion mit Bicinchoninsäure

Diese Technische Spezifikation legt ein ELISA-Verfahren (enzymgebundenes Immunosorbent-Verfahren, en: enzyme linked immunosorbent assay) für den Nachweis von Haselnuss aus Lebensmittelproben fest. Im ELISA-Verfahren binden die Antikörper an die Haselnussproteine aus den Lebensmittelproben. Das Ergebnis aus dem ELISA-Verfahren wird in mg Haselnuss/kg (ppm) angegeben, da die Kalibratoren aus einem Extrakt der ganzen Haselnuss bestehen.
Matrices wie Zerealien, Eiscreme, Kekse, Schokolade, Würstchen, Hüttenkäse, Joghurt und Salatdressing wurden durch Aufstockversuche mit einer Haselnusspaste enthaltenden Carboxymethylcellulose-Suspension [2] validiert.
Die monoklonalen Antikörper, die gegen den gesamten wässrigen Haselnussextrakt gerichtet sind, weisen sowohl Proteine mit ungefähren Molekulargewichten von 14 kDa, 18 kDa und 42 kDa als auch das thermostabile Major-Allergen Cor a9 (11S-Speicherprotein) nach. Beide Antikörper wurden durch den Western Blot, mit teilweise gereinigten Haselnussextrakten und gereinigten allergenen Proteinen, bewertet.
Das ELISA-Prüfverfahren ist kommerziell erhältlich1). Die Leistungsfähigkeit wurde in einer vom Hersteller durchgeführten betriebsinternen Validierung bestätigt. Alle interessierenden Parameter sind angegeben.
Zusätzlich wurde das ELISA-Verfahren durch einen Ringversuch erfolgreich validiert, um die Vergleich-präzision zwischen den Laboratorien zu bestimmen. Dieser Ringversuch, an dem 14 deutsche Laboratorien beteiligt waren, wurde durch die beim Bundesamt für Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit (BVL) bestehende Arbeitsgruppe zur Durchführung von § 64 des Lebensmittel-, Bedarfsgegenstände- und Futter-mittelgesetzbuches (LFGB) für die Bestimmung des Haselnussgehalts in feinherber Schokolade organisiert.

Produits alimentaires - Détection des allergènes alimentaires par des méthodes d'analyse immunologiques - Partie 2: Détermination quantitative de la présence de noisette par un immuno-essai enzymatique à l'aide d'anticorps monoclonaux et détection des protéines avec l'acide bicinchoninique

La présente Norme européenne spécifie une méthode ELISA pour le dosage des noisettes dans des échantillons de produits alimentaires.
La méthode a été développée pour déterminer la quantité de noisettes dans les produits alimentaires. Les matrices telles que les céréales, les crèmes glacées, les biscuits, le chocolat, les saucisses, le fromage blanc, le yaourt et les sauces salade ont été validées par des expériences de dopage (additions volontaires de noisettes) réalisé avec une suspension de carboxyméthylcellulose contenant de la pâte de noisettes [2].
Les anticorps monoclonaux de cette méthode ont été obtenus contre un extrait aqueux de noisettes : ils détectent des protéines ayant des poids moléculaires apparents de 14 kDa et 18 kDa, une protéine ayant un poids moléculaire apparent de 42 kDa ainsi que l’allergène majeur thermostable Cor a9 (protéine de stockage 11S). Cette spécificité des 2 anticorps a été évaluée par technique de Western blot avec des extraits de noisettes partiellement purifiés et des protéines allergéniques purifiées.
La méthode est commercialisée ). Les performances ont été validées lors d’une validation interne réalisée par le fabricant. Tous les paramètres étudiés sont indiqués.
Cette méthode ELISA a également été validée lors d’un essai interlaboratoires afin de déterminer la reproductibilité interlaboratoires. Cet essai interlaboratoires a été organisé par le groupe de travail constitué par l’Office fédéral allemand pour la protection des consommateurs et la sécurité alimentaire (BVL) dans le cadre de la mise en application du paragraphe 64 du règlement allemand sur les denrées alimentaires et les produits de consommation (LFGB), en vue de doser les noisettes dans le chocolat noir. Cette étude regroupait 14 laboratoires allemands.

Živila - Odkrivanje prisotnosti alergenov v živilih z imunološkimi metodami - 2. del: Kvantitativno določanje lešnika z encimsko-imunološko metodo z uporabo monoklonskih protiteles in detekcijo beljakovin z bicinhoninsko kislino

Ta tehnična specifikacija določa encimsko-imunološko metodo ELISA za določanje lešnika v vzorcih živil. Pri metodi ELISA se protitelesa vežejo na beljakovine lešnika iz vzorca živila. Rezultat metode ELISA je naveden v mg lešnika/kg (ppm), ker kalibratorji vsebujejo ekstrakt celega lešnika. Matrice, kot so žita, sladoled, piškoti, čokolada, klobasa, skuta, jogurt in solatni preliv, so bile potrjene s preskusi z dodatkom razredčine karboksimetilceluloze z lešnikovo pasto [2]. Monoklonska protitelesa v celotnem vodnem ekstraktu lešnika odkrijejo prisotnost beljakovin s približno molekularno težo 14 kDa, 18 kDa in 42 kDa. Protitelesa zaznajo glavni termostabilni alergen Cor a9 (skladiščni protein 11S). Obe protitelesi so ocenili z metodo western blot z delno prečiščenimi ekstrakti lešnika in prečiščenimi alergenskimi beljakovinami.
Preskusna metoda ELISA je na voljo na tržišču (1). Učinkovitost je bila potrjena z internim potrjevanjem, ki ga je izvedel proizvajalec. Vsi obravnavani parametri so navedeni. Poleg tega je bila metoda ELISA uspešno potrjena z medlaboratorijsko študijo za določitev medlaboratorijske ponovljivosti. Ta primerjalni preskus je organizirala delovna skupina, ki jo je ustanovil Zvezni urad za zaščito potrošnikov in varnost živil (BVL) za izvedbo člena 64 nemškega zakonika za živila in krmo (LFGB) za določitev vsebnosti lešnikov v temni čokoladi. V tej medlaboratorijski študiji je sodelovalo štirinajst nemških laboratorijev.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 09-Apr-2013
• ICS: 67.050 - General methods of tests and analysis for food products
• Technical Committee: CEN/TC 275 - Food analysis - Horizontal methods
• Drafting Committee: CEN/TC 275/WG 12 - Food allergens
• Current Stage: 9093 - Decision to confirm - Review Enquiry
• Completion Date: 01-Mar-2023
• Ref Project: SIST-TS CEN/TS 15633-2:2013 - Foodstuffs - Detection of food allergens by immunological methods - Part 2: Quantitative determination of hazelnut with an enzyme immunoassay using monoclonal antibodies and bicinchoninic acid-protein detection

Standards Content (Sample)

SLOVENSKI STANDARD
SIST-TS CEN/TS 15633-2:2013
01-junij-2013
äLYLOD2GNULYDQMHSULVRWQRVWLDOHUJHQRYYåLYLOLK]LPXQRORãNLPLPHWRGDPLGHO
.YDQWLWDWLYQRGRORþDQMHOHãQLND]HQFLPVNRLPXQRORãNRPHWRGR]XSRUDER
PRQRNORQVNLKSURWLWHOHVLQGHWHNFLMREHOMDNRYLQ]ELFLQKRQLQVNRNLVOLQR
Foodstuffs - Detection of food allergens by immunological methods - Part 2: Quantitative
determination of hazelnut with an enzyme immunoassay using monoclonal antibodies
and bicinchoninic acid-protein detection
Lebensmittel - Nachweis von Lebensmittelallergenen mit immunologischen Verfahren -
Teil 2: Quantitative Bestimmung von Haselnuss mit einem Enzym-
Immunoassayverfahren unter Verwendung von monoklonalen Antikörpern und
Proteindetektion mit Bicinchoninsäure
Produits alimentaires - Détection des allergènes alimentaires par méthodes
immunologiques - Partie 2: Détermination quantitative de la présence de noisette par un
immuno-essai enzymatique à l'aide d'anticorps monoclonaux et détection des protéines
avec l'acide bicinchoninique
Ta slovenski standard je istoveten z: CEN/TS 15633-2:2013
ICS:
67.050 Splošne preskusne in General methods of tests and
analizne metode za živilske analysis for food products
proizvode
SIST-TS CEN/TS 15633-2:2013 en,de
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

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SIST-TS CEN/TS 15633-2:2013

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SIST-TS CEN/TS 15633-2:2013


TECHNICAL SPECIFICATION
CEN/TS 15633-2

SPÉCIFICATION TECHNIQUE

TECHNISCHE SPEZIFIKATION
April 2013
ICS 67.050
English Version
Foodstuffs - Detection of food allergens by immunological
methods - Part 2: Quantitative determination of hazelnut with an
enzyme immunoassay using monoclonal antibodies and
bicinchoninic acid-protein detection
Produits alimentaires - Détection des allergènes Lebensmittel - Nachweis von Lebensmittelallergenen mit
alimentaires par des méthodes d'analyse immunologiques - immunologischen Verfahren - Teil 2: Quantitative
Partie 2: Détermination quantitative de la présence de Bestimmung von Haselnuss mit einem Enzym-
noisette par un immuno-essai enzymatique à l'aide Immunoassayverfahren unter Verwendung von
d'anticorps monoclonaux et détection des protéines avec monoklonalen Antikörpern und Proteindetektion mit
l'acide bicinchoninique Bicinchoninsäure
This Technical Specification (CEN/TS) was approved by CEN on 7 January 2013 for provisional application.

The period of validity of this CEN/TS is limited initially to three years. After two years the members of CEN will be requested to submit their
comments, particularly on the question whether the CEN/TS can be converted into a European Standard.

CEN members are required to announce the existence of this CEN/TS in the same way as for an EN and to make the CEN/TS available
promptly at national level in an appropriate form. It is permissible to keep conflicting national standards in force (in parallel to the CEN/TS)
until the final decision about the possible conversion of the CEN/TS into an EN is reached.

CEN members are the national standards bodies of Austria, Belgium, Bulgaria, Croatia, Cyprus, Czech Republic, Denmark, Estonia,
Finland, Former Yugoslav Republic of Macedonia, France, Germany, Greece, Hungary, Iceland, Ireland, Italy, Latvia, Lithuania,
Luxembourg, Malta, Netherlands, Norway, Poland, Portugal, Romania, Slovakia, Slovenia, Spain, Sweden, Switzerland, Turkey and United
Kingdom.





EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION
COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION

EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG

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worldwide for CEN national Members.

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SIST-TS CEN/TS 15633-2:2013
CEN/TS 15633-2:2013 (E)
Contents Page
Foreword . 3
Introduction . 4
1 Scope . 5
2 Principles . 5
3 Reagents . 6
4 Apparatus and equipment . 6
5 Procedure .
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