ISO 7346-1:1984
(Main)Water quality — Determination of the acute lethal toxicity of substances to a freshwater fish (Brachydanio rerio, Hamilton-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae)) — Part 1: Static method
Water quality — Determination of the acute lethal toxicity of substances to a freshwater fish (Brachydanio rerio, Hamilton-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae)) — Part 1: Static method
Qualité de l'eau — Détermination de la toxicité aiguë létale de substances vis-à-vis d'un poisson d'eau douce (Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae)) — Partie 1: Méthode statique
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International Standard @ 734611
INTF RNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONOMENAYHAPOAHAfl OPrAHH3AUMfl no CTAHAAPTH3AUMH*ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Water quality - Determination of the acute lethal toxicity
of substances to a freshwater fish [Brachydanio rerio
x
Ham il ton- Buc hana n (Teleostei, Cyprinidae11 -
Part 1: Static method
Qualité de l'eau - Détermination de la toxicité aiguë létale de substances vis-à-vis d'un poisson d'eau douce (Brachydanio rerio
Hamilton-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae)] - Partie I : Méthode statique
>i
First edition - 1984-12-01
UDC 574.63/.64 Ref. No. IS0 7%6/1-1984 (E)
Descriptors : water, quality, tests, determination, toxicity, toxic substances, fresh water, fishes.
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Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for apprpval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 7346/1 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 147, Water quality.
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INTERNATIONAL STANDARD IS0 7346/1-1984 (E)
Water quality - Determination of the acute lethal toxicity
of substances to a freshwater fish [Brachydanio rerio
Hamilton-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae)l -
Part I: Static method
O Introduction those substances whose concentrations can be maintained
satisfactorily throughout the test by renewal of the solutions
every 24 h.
0 The three parts of IS0 7346 describe methods of determining
~ the acute lethal toxicity of substances to the zebra fish
To assist in the preparation and maintenance of concentrations
(Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan), but it must be
of substances which may be lethal at concentrations close to
emphasized that the recommended use of the zebra fish does
that of their aqueous solubility, a small volume of solvent may
not preclude the use of other species. The methodologies
be used , as specified in the methods.
presented here may also be used for other species of
freshwater, marine of brackish water fish, with appropriate
modifications of, for example, dilution water quality and the
1 Scope and field of application
temperature conditions of the test.
This part of IS0 7346 specifies a static method for the deter-
Within the three parts of IS0 7346, a choice can be made
mination of the acute lethal toxicity of substances soluble in
between static, semi-static and flow-through methods. The
water under specified conditions to a species of freshwater fish
static test, described in IS0 734611, in which the solution is not
[Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae)
renewed, has the advantage of requiring simple apparatus
- common name, zebra fish] in water of a specified quality.
although the substance in the test vessel may become depleted
during the course of the test and the general quality of the
The method is applicable for assigning, for each test
water may deteriorate. The flow-through method, described in
substance, broad categories of acute lethal toxicity to
IS0 7346/3, in which the test solution is replaced almost con-
Brachydanio rerio under the test conditions.
tinuously, overcomes such problems but requires the use of
more complex apparatus. In the semi-static procedure, describ-
The results are insufficient by themselves to define water qual-
ed in IS0 7346/2, the test solutions are renewed daily, this
ity standards for environmental protection.
0
method being a compromise between the other two.
The method is also applicable when using certain other species
The flow-through method can be used for most types of of freshwater fish as the test organism.')
substances, including those unstable in water, but the concen-
trations of the test substance are determined wherever poss- The method may be adapted for use with other freshwater fish
ible. The static method is limited to the study of substances
and marine and brackish water fish with appropriate modifi-
whose tested concentrations remain relatively constant during cation of the test conditions, particularly with respect to the
the test period. The semi-static method can be used for testing
quantity and quality of the dilution water and temperature.
1) The following species of freshwater fish can be used, in addition to Brachyda 10 rerio, without modification to this part of IS0 7346:
c
- Cichlasoma nigrofasciatum (Teleostei, Cichlidae)
- Lepomis macrochirus (Teleostei, Centrarchidae)
- Oryzias latipes (Teleostei, Poeciliidae)
- fimephales promelas (Teleostei, Cyprinidae)
- foecilia reticulata (Teleostei, Poeciliidae)
The results obtained from a test with one species cannot, however, be extrapolated to other species.
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3.2 Standard bilution water
2 Principle
DeterminatiQn, under specified conditions, of the concentra-
The freshly prepar$d standard dilution water shall have a pH of
tions at which a substance is lethal to 50 % of a test population
7,8 f 0,2, and calcium hardness of approximately 250 mg/l,
of Brachydanio rerio after exposure periods of 24 and 48 h to
expressed as calcium carbonate, and shall be prepared as
that substance in the ambient water. These median lethal con-
follows.
centrations are designated the 24 h LC50 and 48 h LC50. If ap-
propriate, the test can be continued up to an exposure period
Prepare the follohng solutions using distilled or deionized
of 96 h.
water:
The test is carried out in two stages:
a) Calcium chloride solution
a) a preliminary test which gives an approximate indication
of the acute median lethal concentrations and serves to
Dissolve 11,76 9 of calcium chloride dihydrate (CaC1,.2H20)
determine the range of concentrations for the final test;
in water and dilute to 1 litre.
b) a final test, the results of which alone are recorded.
b) Magnesiut$ sulfate solution
Where evidence is available to show that test conc$ntrations
remain relatively constant (i.e. within about 20 % of the Dissolve 4,93 ;g of magnesium sulfate heptahydrate
nominal values) throughout the test then either measured or
(MgS0,.7H20) in water and dilute to 1 litre.
nominal concentrations may be used in the estimation of the
LC50. Where such analyses show that the concentrations pre-
c) Sodium hydrogen carbonate solution
sent remain relatively constant but are less than about 80 % of
the nominal values, then the analytical values shall be used in
estimating the LC50. Where evidence is not available to show Dissolve 2,59 g,of sodium hydrogen carbonate (NaHC03) in
that the test concentrations remained at an acceptable level
water and dilut'e to 1 litre.
throughout the test period or where it is known (or suspected)
that the concentrations of the test chemical have declined
d) Potassium lchloride solution
significantly at any stage during the test then irrespective of
whether or not chemical analytical data are available the LC50
cannot be defined, using this test method. In these cases the
Dissolve 0,23 g of potassium chloride (KCI) in water and
test is not necessarily invalidated but it can only be stated that
dilute to 1 litre.
the LC50 of the substance is < x mg/l, the value, x, given
being estimated from the nominal concentrations used.
Mix 25 ml of each1 of these four solutions and dilute to 1 litre
with water.
3 Test organism and reagents
I
Aerate the dilutio water until the concentration of dissolved
oxygen reaches its n air saturation value (ASV) and the pH value
The reagents shall be of recognized analytical grade. The water
is constant at 7,8l k 0,2. If necessary, adjust the pH of the
used for the preparation of solutions shall be glass-distilled
solution by adding sodium hydroxide solution or hydrochloric
water or deionized water of at least equivalent purity.
acid. The dilution water thus prepared shall receive no further
forced aeration before use in the tests.
i
3.1 Test organism
3.3 Stock solsitions of test substances
The test species shall be Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan
(Teleostei, Cyprinidae), commonly known as the zebra fish.
Each test fish shall have a total length of 30 f 5 mm and a
A stock solution d f the test substance should be prepared by
mass of 0,3 k 0.1 g. They shall be selected from a population
dissolving a knodn amount of test substance in a defined
of a single stock. This stock should have been acclimated and,
volume of dilutioth water, deionized water or glass-distilled
in any case, maintained for at least 2 weeks prior to the test in
water. The stock solution should be prepared daily except
dilution water, continuously aerated (using bubbled air) (see
it is knowii that the material is stable in solution, in
where
3.21, under conditions of water quality and illumination similar
which case sufficient solution for use over 2 days may be
to those used in the test. They shall be fed as normal up to the
prepared. To enable stock solutions to be prepared and to
24 h period immediately preceding the test.
assist in their trankfer to the test vessels, substances of low
aqueous solubility may be dissolved or dispersed by suitable
Test fish shall be free of overt disease or visible malformation. means, including ltrasonic devices and using organic solvents
They shall not receive treatment for disease during the test or in of low toxicity to ish. If any such organic solvent is used, its
I
the 2 weeks preceding the test. concentration in the test solution shall not exceed 0,l ml/l, and
two sets of controls, one containing
Environmental conditions for the maintenance and breeding of concentration useü in any test vessel
zebra fish are given in annex A.
or test substance, shall be included. c_-.--
2
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3.4 Test solutions carried out using a suitable reference substance. The results of
such tests shall be in reasonable agreement with results ob-
Test solutions are prepared by adding appropriate amounts of tained previously in the same laboratory.
the stock solution of the test substance to the dilution water to
give the required concentrations. It is recommended that when
6.2 Preliminary test
a stock solution is prepared in distilled or deionized water, no
more than 100 ml of stock solution should be added per 10 I of
Add at least 2,5 I, preferably 5 I, of standard dilution water (3.2)
dilution water.
to each of six vessels and aerate if necessary to restore the con-
centration of dissolved oxygen to its air saturation value.
Prepare test solutions by adding appropriate amounts of stock
4 Apparatus
solution of the test substance (3.3) to five of the vessels in
order to obtain an adequate range of concentrations, for
All materials which may come into contact with aliy liquid into
example 1 000; 100; IO; 1; and 0,l mg/l. Nothing is added to
which the fish ?re to be placed, or with which they may come
the sixth vessel, which serves as a control. The solutions
into contact, shall be inert and should not absorb the test
should be adjusted to and maintained at 23 f 1 OC.
substance significantly.
Place five fish in each vessel.
Usual laboratory equipment [including a dip-net, made of nylon
or of another chemically inert material, for the control vessels
At least twice a day for a suitable period, note the numbers of
and another for all the test vessels (4.111, and
dead fish and the dissolved oxygen concentration in each
vessel. Remove dead fish.
4.1 Test vessels
If there are insufficient data for establishing the range of con-
Test vessels shall have sufficient capacity (which may need to
centrations required for the final test, repeat this preliminary
be greater than 10 I) with a large area of interface between the
test with alternative ranges of concentrations.
air and the test medium (of about 800 cm2 for 10 I of medium)
and shall be equipped with a securely fixed and close-fitting
cover.
6.3 Final test
Before use, new test vessels shall be carefully washed and then
Select at least five concentrations, forming an approximately
rinsed successively with water and the dilution water. At the
geometric series, for example 8; 4; 2; 1 ; and 0,5 mg/l, be-
end of the test, the 'vessels shall be emptied, cleaned by
tween, but including, the lowest concentration killing all the
appropriate means, rinsed with water to remove all traces of
fish in the preliminary test, and the highest non-lethal concen-
the te
...
Norme internationale 73461 1
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION*MEMiAYHAPOLlHAR OPrAHH3AUHR ii0 CTAHAAPTH3AUHH*ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Qualité de l'eau - Détermination de la toxicité aiguë
m
létale de substances vis-à-vis d'un poisson d'eau douce
[ Brach ydanio rerio Ham i It on- B u c ha na n
(Teleostei, Cyprinidae)] -
Partie I : Méthode statique
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i
Water quality - Determination of the acute lethal toxicity of substances to a freshwater fish [Brachydanio rerio Hamilton-
Buchanan (Teleostei, Cyprinidae)] - Part I: Static method
Première édition - 1984-12-01
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E
CDU 574.63/.64 Réf. no : IS0 7346/1-1984 (FI
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F Descripteurs : eau, qualité, essai, détermination, toxicité, substance toxique, eau douce, poisson.
s
Prix basé sur 9 pages
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Avant-propos
L‘ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I‘ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale IS0 734611 a été élaborée par le comité technique
ISO/TC 147, Qualité de l’eau.
@ Organisation internationale de normalisation, 1984 O
Imprimé en Suisse
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IS0 7346/1-1984 (F)
NORM E I NTE R NAT1 O NALE
Qualité de l'eau - Détermination de la toxicité aiguë
létale de substances vis-à-vis d'un poisson d'eau douce
[ Brach ydanio rerio H a m i It o n- B u c ha na n
(Teleostei, Cyprinidae)] -
Partie 1 : Méthode statique
O Introduction pendant la durée de l'essai. La méthode semi-statique peut être
utilisée pour expérimenter des substances dont les concentra-
tions peuvent être maintenues constantes de facon satisfai-
Les trois parties de I'ISO 7346 décrivent des procédures d'essais
pour déterminer la toxicité aiguë létale de substances vis-à-vis sante tout au long de l'essai par le renouvellement des solutions
toutes les 24 h.
du poisson zèbre, Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan, mais
il faut souligner que l'emploi recommandé du poisson zèbre
n'exclut pas l'utilisation d'autres espèces. Les méthodologies
Pour faciliter la préparation et le maintien en solution de subs-
présentées ici peuvent être aussi utilisées pour d'autres espèces
tances dont les concentrations létales sont supérieures à leur
de poissons d'eaux douces, d'eaux de mer ou d'eaux saumâ-
solubilité dans l'eau, il est possible d'utiliser un faible volume de
tres, avec les modifications appropriées de la qualité de l'eau de
solvant, comme indiqué dans les méthodes.
dilution ou des conditions de température de l'essai, par exem-
ple.
1 Objet et domaine d'application
Parmi les trois parties de la Norme, un choix peut être fait entre
les méthodes statique, semi-statique et avec renouvellement
La présente partie de I'ISO 7346 spécifie une méthode statique
continu. L'essai statique décrit dans I'ISO 7346/1, dans lequel
pour la détermination dans une eau de qualité donnée, de la
la solution n'est pas renouvelée, a l'avantage de ne nécessiter
toxicité aiguë létale d'une substance, soluble dans l'eau dans
qu'un appareillage simple, quoique la substance puisse s'épui-
les conditions de l'essai, vis-à-vis d'un poisson d'eau douce
ser dans le récipient d'essai au cours de l'essai et la qualité glo-
[Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Téléostei, Cyprinidae)
bale de l'eau se détériorer. La méthode avec renouvellement
- nom commun, poisson zèbre].
continu, décrite dans I'ISO 7346/3, dans laquelle la solution
d'essai est renouvelée de facon presque continue, évite de tels
Pour chaque substance à expérimenter, le mode opératoire est
problèmes mais nécessite l'emploi d'un appareillage plus com-
applicable pour donner une idée globale de la toxicité aiguë
plexe. Dans la méthode semi-statique, décrite dans
létale vis-à-vis du Brachydanio rerio, dans les conditions de
1'1S0 7346/2, les solutions d'essais sont renouvelées chaque
l'essai.
jour, offrant ainsi un compromis entre les deux.
Les résultats sont en eux-mêmes insuffisants pour définir des
La méthode avec renouvellement continu peut être utilisée pour
la plupart des types de Substances, y compris celles qui sont normes de qualité d'eau en vue de la protection de I'environne-
ment.
instables dans l'eau, mais les concentrations de la substance à
expérimenter sont déterminées chaque fois que possible. La
méthode statique est limitée à l'étude des substances dont les La méthode est également applicable à certaines autres espèces
concentrations expérimentales restent relativement constantes
de poissons d'eaux douces comme organismes d'essais.l)
1) Les espèces suivantes de poissons d'eaux douces peuvent être utilisées, en sus de Brachydanio rerio, sans modification de la présente partie de
I'ISO 7346:
- Cich/asoma nigrofasciafum (Téléostei, Cichlidae)
- Lepomis macrochirus (Téléostei, Centrarchidae)
- Oryzias laripes (Téléostei, Poeciliidae)
- Pimepha/es promelas (Téléostei, Cyprinidae)
- Poeci/ia reficulata (Téléostei, Poeciliidae)
Néanmoins, les résultats des essais obtenus avec une espèce ne peuvent être extrapolés aux autres espèces
1
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La méthode peut être adaptée à d’autres poissons d’eaux dou- des conditions de qualité de l‘eau et d‘éclairement semblables à
celles utilisées pour l‘essai. Ils doivent être nourris normalement
ces, marines ou saumâtres avec des modifications appropriées
jusqu’aux 24 h précédant immédiatement l’essai.
des conditions d’essais, concernant notamment la quantité et
la qualité de l‘eau de dilution et la température.
i
Les poissons pour essai doivent être exempts de maladies ou de
\
malformations visibles. Ils ne doivent subir aucun traitement
Principe
pendant l’essai ou pendant les 2 semaines précédant l‘essai.
Détermination, dans des conditions définies, des concentra-
Les conditions d’environnement pour la maintenance et I’éle-
tions auxquelles une substance est létale pour 50 % d’une
vage du Brachydanio rerio sont données dans l’annexe A.
population d’essai de Brachydanio rerio, après des périodes
d‘exposition de 24 et 48 h à cette substance dans l’eau
3.2 Eau de dillution normalisée
ambiante. Ces concentrations moyennes létales sont désignées
par CL 50 - 24 h et CL 50 - 48 h. Si cela est approprié, l’essai
L‘eau de dilution normalisée fraîchement préparée doit avoir un
peut être poursuivi jusqu‘à une période d’exposition de 96 h.
pH de 7,8 f 0,2, une durée calcique d’environ 250 mg/l expri-
mée en carbonate de calcium et doit être préparée de la facon
L‘essai est réalisé en deux étapes:
suivante. I
a) un essai préliminaire qui donne une indication approxi-
Préparer les solutions suivantes, en utilisant de l‘eau distillée ou
mative des concentrations moyennes aiguës létales et sert à
déterminer la gamme des concentrations pour l‘essai défi- déionisée: I
nitif;
Solution de chlorure de calcium.
a)
un essai définitif dont seuls les résultats sont retenus.
b)
Dissoudre 11,76 g de chlorure de calcium dihydraté
S‘il est manifeste que les concentrations restent relativement (CaC1,.2HzO) dans l’eau et diluer à 1 litre.
constantes (par exemple s’écartant au plus de 20 % de la valeur
nominale) pendant l’essai, les concentrations nominales ou b) Solution e sulfate de magnésium.
f
mesurées peuvent être utilisées pour l‘estimation de la CL 50.
Si des analyses montrent que les concentrations réelles restent Dissoudre 4,9 g de sulfate de magnésium heptahydraté
relativement constantes, mais à moins de 80 % des valeurs (MgSO4.7HzO) dans l’eau et diluer à 1 litre.
nominales, les valeurs analytiques doivent être utilisées pour
1
c) Solution d’hydrogénocarbonate de sodium.
l’estimation de la CL 50. S’il n’est pas manifeste que les con-
centrations d’essais restent à un niveau acceptable pendant la
durée de l’essai ou s‘il est connu (ou suspecté) que les concen- Dissoudre 2,59 g d’hydrogénocarbonate de sodium
trations de la substance d‘essai ont décru significativement à (NaHCO,) dans l‘eau et diluer à 1 litre.
un certain stade de l‘essai, alors, sans tenir compte des don-
nées analytiques disponibles ou non, la CL 50 ne peut être d) Solution e chlorure de potassium.
déterminée en utilisant la présente méthode d’essai. Dans ce
cas, l‘essai n’est pas nécessairement invalidé, mais il ne peut
Dissoudre 0,2 g de chlorure de potassium (KCI) dans l’eau
être établi seulement que la CL 50 de la substance est et diluer à 1 li re.
I l
a x mg/l, la valeur, x, donnée étant estimée à partir des con-
centrations nominales utilisées.
Mélanger 25 ml det chacune des solutions ai à d) et compléter à
1 litre avec de l‘eau.
3 Organismes pour essai et réactifs Aérer l’eau de dilution jusqu‘à ce que la concentration en oxy-
gène dissous atqeigne la valeur de saturation dans l‘air et
Les réactifs chimiques doivent être de qualité analytique recon-
nue. L‘eau utilisée pour la préparation des solutions de réactif
doit être distillée dans un appareil en verre, ou déionisée, d‘une
pureté au moins équivalente.
3.1 Organisme pour essai
3.3 Solution mère de la substance à expérimenter
L’espèce utilisée pour l‘essai doit être le Brachydanio rerio
Hamilton-Buchanan (Téléostei, Cyprinidae), appelé communé- Une solution mère de la substance à expérimenter doit être pré-
ment ((poisson zèbre)). Chaque poisson pour essai doit avoir
une longueur totale de 30 f 5 mm et une masse de
0,3 I 0,l g. un appareil en verre. La solution mère doit
Ils doivent être sélectionnés à partir d’une population d’un
stock unique. Ce stock doit avoir été acclimaté et, dans tous les
cas, maintenu au moins 2 semaines avant l’essai, dans l’eau de permettre la préparation des solutions mères et d‘aider à leur
dilution, aérée de manière continue par barbotage d’air, dans transfert dans les récipients d’essai, les substances de faible
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solubilité aqueuse peuvent être solubilisées ou dispersées par Éviter soigneusement toute perturbation indésirable susceptible
des moyens adéquats tels que des dispositifs à ultrasons et des de modifier le comportement des poissons. Les essais doivent
solvants organiques de faible toxicité vis-à-vis du poisson. être réalisés sous un éclairement normal de laboratoire et un
Lorsqu‘un solvant organique est employé, sa concentration photopériodisme de 12 à 16 h d‘éclairement.
dans la solution d’essai ne doit pas excéder 0,l ml/l, et deux
jeux d’essais témoins, l’un contenant le solvant à la concentra-
tion maximale utilisée dans les récipients d’essai et l’autre sans
6 Mode opératoire
solvant ni substance à expérimenter, doivent être inclus.
6.1 État des poissons
3.4 Solutions d‘essais
En cas de changement de la population mère, un essai de toxi-
cité selon la méthode définie dans la présente partie de
Les solutions d’essais sont préparées par ajout des quantités
1‘1S0 7346 doit être effectué en utilisant une substance de réfé-
appropriées de la solution mère de la substance à expérimenter
rence appropriée. Les résultats de tels essais doivent être en
à l‘eau de dilution pour obtenir les concentrations nécessaires.
accord raisonnable avec les résultats obtenus précédemment
II est recommandé, lorsqu’une solution mère est préparée dans
par le même laboratoire.
de l’eau déionisée ou de l’eau distillée, de ne pas ajouter plus de
100 ml de la solution mère pour 10 I d’eau de dilution.
6.2 Essai préliminaire
4 Appareillage
Placer au moins 2,5 I, de préférence 5 I, d‘eau de dilution nor-
malisée (3.2) dans six récipients et les aérer si nécessaire pour
Tout matériau qui est susceptible d‘entrer en contact avec tout
restituer la concentration de l’oxygène dissous à sa valeur de
liquide dans lequel les poissons sont placés ou avec lequel ils saturation dans l‘air.
sont mis en contact, doit être inerte et ne doit pas adsorber
significativement la substance à expérimenter. Préparer les solutions d’essai par addition des quantités appro-
priées de la solution mère de la substance à expérimenter (3.3)
dans cinq des récipients afin d‘obtenir un domaine de concen-
Matériel courant de laboratoire, y compris un filet en nylon ou
tration adéquat, par exemple 1 000; 100; IO; 1; et 0,l mg/l. Ne
en autre matériau chimiquement inerte pour les récipients de
rien ajouter au sixième récipient qui tient lieu de témoin. Les
contrôle et un autre pour tous les récipients pour essai (4.11, et
solutions doivent être amenées et maintenues à 23 $: 1 OC.
4.1 Récipients pour essai
Placer cinq poissons dans chaque récipient.
Les récipients pour essai doivent être de capacité suffisante Au moins une fois par jour pendant la période qui convient,
(une capacité supérieure à 10 I peut être nécessaire) avec une
noter le nombre de poissons morts et la concentration en oxy-
grande aire d‘interface entre l‘air et le milieu d’essai (d’environ
gène dissous dans chaque récipient. Retirer les poissons morts.
800 cm2 pour 10 I de milieu) et doivent être équipés d’un cou-
vercle sûrement fixé.
Si les données sont insuffisantes pour établir la gamme de con-
centrations nécessaires à la réalisation de l’essai définitif,
...
Questions, Comments and Discussion
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