ISO 6341:1989
(Main)Water quality — Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea)
Water quality — Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea)
Qualité de l'eau — Détermination de l'inhibition de la mobilité de Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea)
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INTER NATIONAL IS0
STANDARD 6341
Second edition
1989-10-01
Water quality - Determination of the inhibition
of the mobility of Daphnia magna Straus
(Cladocera, Crustacea)
Qualité de l'eau - Détermination de l'inhibition de la mobilité de Daphnia magna
Straus (Ciadocera, Crustacea)
Reference number
IS0 6341 : 1989 (E)
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IS0 6341 : 1989 (E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all
matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 YO approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 6341 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147,
Water quality.
This second edition cancels and replaces the first edition (IS0 6341 : 19821, of which it
constitutes a minor revision.
Annex A forms an integral part of this International Standard. Annex B is for infor-
mation only.
O IS0 1989
All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any
means, electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in
writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case postale 56 0 CH-1211 Genève 20 0 Switzerland
Printed in Switzerland
II
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IS0 6341 : 1989 (E)
Introduction
The sensitivity of organisms to the toxic properties of a substance may vary consid-
erably from one species to another, owing to differences in their metabolisms and the
natures of their habitats. Thus, the proposed method enables the effect of an effluent,
or a substance which has been rendered soluble in water, on Daphnia magna to be
studied, but the results obtained should not be extrapolated to other species.
Under these circumstances, this toxicity test alone cannot be sufficient for an accurate
prediction of the environmental toxicity of a substance or effluent, and a series of
tests, with species belonging to different taxonomic groups and responding to dif-
ferent environmental conditions, is necessary.
Toxicity tests are conducted in the laboratory under arbitrarily defined conditions,
which are incapable of perfectly simulating environmental conditions. They enable
inter-laboratory comparisons to be made of the possible toxic effects of a substance or
an effluent, but they have only a limited value in assessing the effect of this substance
or effluent in actual environmental conditions in which many other factors may have an
influence, for example the presence of organic and inorganic materials, hardness, pH,
buffering capacity.
For an accurate prediction in a specific environmental situation, the results obtained by
strict application of standardized methods should therefore be complemented by data
obtained under conditions which better simulate aspects of the environment and by
data obtained under field conditions.
...
III
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IS0 6341 : 1989 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Water quality - Determination of the inhibition of the
mobility of Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea)
1 Scope The test is carried out in one or two stages :
- a preliminary test which gives an approximate value of
This International Standard describes a method for the
the 24 h - EC (1) 50 [and, where appropriate, the 48 h -
determination of the acute toxicity to Daphnia magna Straus
EC (1) 501 and determines the range of concentrations to be
(Cladocera, Crustacea) of
tested in the final toxicity test;
a) chemical substances which are soluble under the
- if necessary (in cases where the approximate value
conditions of the test;
given by the preliminary test is not sufficient), a definitive
b) industrial effluents, treated or untreated, after
test, the result of this test alone being used [24 h - EC (1)
decantation or filtration if necessary; 50, 48 h - EC (1) 50 or concentrations corresponding to O
and 100 % immobilizationl.
ci sewage effluents, treated or untreated, after
decantation or filtration if necessary;
If the method described in this International Standard is used
for chemical substances, analyses of these substances may be
d) surface or ground waters.
carried out during the test. If these analyses show that, for
each concentration tested, the standard deviation of the
concentrations measured during the test, randomly varying, is
2 Normative reference
not greater than 20 % of the mean, the median inhibitory
concentrations may be calculated from the means of the
The following standard contains provisions which, through
measurements rather than from the initial concentrations; they
reference in this text, constitute provisions of this International
are then designated 24 h - EC 50 (and, where appropriate,
Standard. At the time of publication, the edition indicated was
48 h - EC 50).
valid. All standards are subject to revision, and parties to
agreements based on this International Standard are encouraged
to investigate the possibility of applying the most recent edition
4 Test environment
of the standard indicated below. Members of IEC and IS0
maintain registers of currently valid International Standards.
The preparation and storage of the solutions and all stages of
the procedure described in this International Standard shall be
IS0 5667-2 : 1982, Water quaiity - Sampling - Part2:
carried out in an atmosphere controlled at 20 OC f 2 OC and
Guidance on sampling techniques.
which is free from vapours or dusts toxic to Daphnia magna.
3 Principle
5 Reagents and materials
Determination of the initial concentration (that is, the
5.1 Test organism : Daphnia magna Straus (Uadocera,
concentration present at the beginning of the test) which, in
at least third generation, obtained by acyclical
Crustacea),
24 h, immobilizes 50 % of exposed Daphnia magna, under the
parthenogenesis under specified breeding conditions (see
conditions defined in this International Standard.
annex B).
This concentration, known as the effective initial inhibitory
The animals used for the test, obtained by filtration through a
concentration, is designated 24 h - EC (1) 50.
nest of sieves of specified aperture sizes, shall be less than 24 h
old.
NOTE - If possible and if necessary, the initial concentration which
immobilizes 50 % of the exposed Daphnia magna in 48 h may also be
Since the sensitivity of Daphnia magna to toxicants is age-
determined. This concentration is designated 48 h - EC (1) 50.
dependent, the age of the Daphnia magna used shall be
in the test report.
An indication of the lowest concentration tested which indicated
immobilizes all the Daphnia magna and the highest
concentration tested which does not immobilize any of the
5.2 Dilution water.
Daphnia magna is desirable and provides useful information in
cases where the 24 h - EC (1) 50 [and, where appropriate, the Dissolve known quantities of reagents of recognized analytical
48 h - EC (1) 501 cannot be determined. grade in ground water, distilled water or deionized water of
1
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IS0 ô341 : 1989 (E)
Test containers, of chemically inert material and of suf-
at least equivalent purity, having a maximum conductivity 6.2
of 10 pS/cm. ficient capacity (for example glass test tubes or beakers).
The dilution water thus prepared shall have a pH of 7,8 I 0,2, Before use, the test containers shall be carefully washed then
rinsed, first with water and then with the dilution water (5.2).
a hardness of 250 mg/l I 25 mg/l (expressed as CaC03), a
: 1 and a dissolved oxygen concentra- At the end of the test, the containers shall be emptied, rinsed
Ca/Mg ratio close to 4
with water to eliminate any trace of the test solution and then
tion above 80 % of the air saturation value.
dried.
As an example, the preparation of water meeting these re-
quirements is described below :
7 Treatment and preparation of samples
Prepare the following solutions :
a)
7.1 Special precautions for sampling and
1) Calcium chloride solution
transportation of samples of water or effluent
Dissolve 11,76 g of calcium chloride dihydrate
For the sampling of water or effluent, refer to the general pro-
in water and make up to 1 litre with dis-
(CaCI2.2H2O)
cedure specified in IS0 5667-2.
tilled or deionized water.
Bottles shall be completely filled to exclude air.
2) Magnesium sulfate solution
The toxicity test shall be carried out as soon as possible, within
Dissolve 4,93 g of magnesium sulfate heptahydrate
6 h of collection.
(MgS04.7H20) in water and make up to 1 litre with
w
distilled or deionized water.
If this time interval cannot be observed, the sample may be
cooled ( + 4 OC) or frozen ( -20 OC) at the place of collection. If
3) Sodium bicarbonate solution
the sample is to be frozen, do not fill the bottles completely, in
order to avoid breakage on freezing. The conditions in which
Dissolve 2,59 g of sodium bicarbonate (NaHC03) in
the sample is frozen and the method of preliminary filtration or
water and make up to 1 litre with distilled or deionized
decantation shall be indicated in the test report. Never use a
water.
chemical preservative.
4) Potassium chloride solution
7.2 Preparation of solutions of substances to be
Dissolve 0,23 g of potassium chloride (KCI) in water and
tested
make up to 1 litre with distilled or deionized water.
7.2.1 Preparation of stock solutions
bJ Mix 25 ml of each of the four solutions 1) to 4) and
1 litre with distilled or deionized
bring the total volume to
The stock solutions of the substances to be tested shall be
water.
prepared by dissolving a known quantity of the substance to be
tested in a specified volume of dilution water, deionized water
The dilution water shall be aerated until the dissolved oxygen
or distilled water in a glass container. They shall be prepared at
concentration has reached saturation and the pH has stabilized.
the moment of use unless the stability of the substance in solu-
If necessary, adjust the pH to 7,8 f 0,2 by adding sodium
tion is known, in which case the stock solution may be
hydroxide (NaOH) solution or hydrochloric acid (HCI) solution.
prepared in a sufficient quantity for 2 days.
The dilution water prepared in this way shall not be further
aerated before use.
+'
For the preparation of the stock solutions, substances which
are poorly soluble in water may be solubilized or dispersed by
NOTE - If the test is performed for purposes necessitating the use of
a dilution water with characteristics differing from those described suitable means, including ultrasonic devices or solvents of low
above, mention should be made in the test report of the main toxicity to Daphnia magna. If a solvent is used, the concentra-
characteristics of the dilution water used.
tion of the solvent in the final test solution shall not exceed
0.1 mlh, and two series of control tests, one with no solvent,
The dilution water shall permit survival of the Daphnia magna
the other with the maximum concentration of solvent, shall be
for at least 4.8 h. As far as possible, check that the dilution
carried out at the same time as the test.
water does not contain any substances which are known to be
toxic to Daphnia magna, such as chlorine, h
...
NORME IS0
I NTER NATIONALE 6341
Deuxième édition
1 989- 1 0-0 1
Qualité de l'eau - Détermination de l'inhibition
la mobilité de Daphnia magna Straus
de
(Cladocera, Crustacea)
Water quality - Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia magna
Straus (Ciadocera, Crustaceal
~~
Numéro de reference
IS0 6341 : 1989 (FI
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IS0 ô341 : 1989 (FI
Avant-propos
L'ISO (organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de I'ISO). L'élaboration
des Normes internationales est en général confiée aux comités techniques de I'ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
technique créé
gouvernementales, en liaison avec I'ISO participent égaiement aux travaux. L'ISO coi-
labore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I'ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de 1'1S0 qui requièrent l'approbation de 75 YO au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale IS0 6341 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147,
Qualité de I'eau.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (IS0 6341 : 19821, dont
elle constitue une révision mineure.
L'annexe A fait partie intégrante de la présente Norme internationale. L'annexe B est
donnée uniquement à titre d'information.
O IS0 1989
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni
utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit de l'éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 CH-1211 Genève 20 Suisse
Imprimé en Suisse
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IS0 ô341 : 1989 (FI
Introduction
Du fait de différences entre leurs métabolismes et leurs conditions de vie, la sensibilité
des organismes aux propriétés toxiques d‘une substance peut varier considérablement
en fonction des espèces concernées. Ainsi, la méthode proposée permet d’étudier les
effets d’un effluent ou d’une substance solubilisée dans l‘eau vis-à-vis de Daphnia
magna et l’extrapolation des résultats obtenus à d‘autres espèces ne peut être envisa-
gée.
Dans ces conditions, cet essai de toxicité ne peut seul suffire pour prédire réellement
I‘écotoxicité d’une substance ou d’un effluent, et il est nécessaire de mettre en œuvre
une batterie d’essais faisant intervenir plusieurs espèces appartenant à des groupes
taxonomiques différents et répondant à des conditions d’environnement différentes.
Les essais de toxicité sont réalisés en laboratoire dans des conditions arbitrairement
définies, conditions qui ne peuvent exactement simuler l‘environnement. Ils permet-
tent de comparer, dans différents laboratoires, les effets toxiques possibles d’une
substance ou d’un effluent; mais ils n’ont qu‘une valeur limitée pour juger des effets
résultant de cette substance ou de cet effluent dans les conditions réelles de I’environ-
nement qui font intervenir de très nombreux facteurs, par exemple : composition miné-
rale et organique des eaux, dureté, pH, pouvoir tampon.
Pour prédire les effets réels sur l‘environnement, les résultats obtenus par la stricte
application des méthodes normalisées doivent donc être complétés par des données
obtenues dans des conditions simulant mieux tel ou tel aspect de l‘environnement et
par des observations faites sur le terrain.
...
111
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W
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NORM E I NTERN ATlON ALE IS0 6341 : 1989 (FI
Qualité de l'eau - Détermination de l'inhibition de la
mobilité de Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea)
1 Domaine d'application Dans les cas où il est impossible de déterminer la CE (I) 50 -
24 h [et éventuellement la CE (I) 50 - 48 h1, l'indication de la
La présente Norme internationale prescrit une méthode pour la
plus faible concentration testée qui immobilise toutes les daph-
détermination de la toxicité aiguë vis-à-vis de Daphnia magna nies et de la plus forte concentration testée qui n'immobilise
Straus (Cladocera, Crustacea) aucune daphnie est souhaitable et constitue une information
utile.
des substances chimiques solubles dans les conditions
a)
-_- de l'essai; :
L'essai est conduit en une ou deux étapes
- un essai préliminaire qui donne une indication approxi-
des effluents industriels épurés ou non, s'il y a lieu
b)
après décantation ou filtration;
mative de la CE (I) 50 - 24 h [et éventuellement de la
CE (I) 50 - 48 h1 et sert à déterminer la gamme des concen-
c) des effluents urbains épurés ou non, s'il y a lieu après trations pour l'essai définitif;
décantation ou filtration;
- si nécessaire (dans le cas où l'indication approximative
des eaux de surface et des eaux souterraines. fournie par l'essai préliminaire ne peut suffire), un essai défi-
d)
(1) 50 - 24 h,
nitif dont seul le résultat est retenu [CE
CE (I) 50 - 48 h ou concentrations correspondant à O et à
100 % d'immobilisation].
2 Référence normative
Lorsque la présente Norme internationale est appliquée aux
La norme suivante contient des dispositions qui, par suite de la
substances chimiques, des analyses de ces substances peuvent
référence qui en est faite, constituent des dispositions valables
être éventuellement effectuées au cours de l'essai. Si ces analy-
pour la présente Norme internationale. Au moment de la publi-
ses montrent que, pour chaque concentration expérimentée,
cation, l'édition indiquée était en vigueur. Toute norme est
l'écart-type des concentrations mesurées au cours de l'essai,
à révision et les parties prenantes des accords fondés
sujette
variant de facon aléatoire, ne s'écarte pas de + 20 % de la
sur la présente Norme internationale sont invitées à rechercher
moyenne, les concentrations inhibitrices médianes peuvent être
la possibilité d'appliquer l'édition la plus récente de la norme
à partir des moyennes des mesures plutôt qu'à partir
calculées
indiquée ci-après. Les membres de la CE1 et de I'ISO possèdent
des concentrations initiales; elles sont alors désignées par
à un moment
le registre des Normes internationales en vigueur
~ ,
CE 50 - 24 h (et éventuellement CE 50 - 48 h).
donné.
IS0 5667-2 : 1982, Qualité de l'eau - Échantillonnage -
4 Environnement de l'essai
Partie 2 : Principes directeurs pour les techniques d'échantil-
lonnage.
La préparation, la conservation des solutions et l'ensemble des
manipulations décrites ci-après doivent être effectuées dans
une enceinte climatisée à 20 OC I 2 OC, exempte de poussiè-
3 Principe res ou de vapeurs toxiques vis-à-vis de Daphnia magna.
Détermination, dans les conditions définies par la présente
Norme internationale, de la concentration initiale (c'est-à-dire la
5 Réactifs et produits
concentration présente au début de l'essai) qui, en 24 h, immo-
bilise 50 % des daphnies mises en expérimentation.
5.1 Organismes pour essai : Daphnia magna Straus (Cla-
docera, Crustacea) de troisième génération au moins, obtenue
Cette concentration, dite concentration efficace initiale inhibi-
par parthénogénèse acyclique dans des conditions d'élevage
trice, est désignée par CE (1) 50 - 24 h.
définies (voir annexe B).
NOTE - Si possible et si nécessaire, la concentration initiale qui, en
Les animaux utilisés, obtenus par filtration sur un jeu de tamis
48 h, immobilise 50 % des daphnies mises en expérimentation peut
d'ouvertures de mailles déterminées doivent être âgés de moins
être également déterminée. Dans ce cas, cette concentration est dési-
gnée par CE (1) 50 - 48 h.
de 24 h.
1
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IS0 ô341 : 1989 (FI
pas de substances reconnues toxiques vis-à-vis des daphnies
La sensibilité des daphnies aux toxiques est influencée par leur
telles que par exemple : chlore, métaux lourds, pesticides,
âge; en conséquence, l'âge des daphnies utilisées doit être
ammoniaque ou polychlorodiphényls.
mentionné dans le rapport d'essai.
Dichromate de potassium (K2Cr207), de qualité analy-
5.3
5.2 Eau de dilution.
tique reconnue.
Dissoudre des quantités connues de réactifs de qualité analyt-
que reconnue dans de l'eau souterraine, de l'eau distillée ou de
6 Appareillage
l'eau déionisée de pureté au moins équivalente et de conducti-
à 10 pS/cm.
vité au plus égaie
Matériel courant de laboratoire, et notamment
L'eau de dilution ainsi préparée doit avoir un pH de 7,8 I 0,2,
6.1 Appareil de mesurage de l'oxygène dissous.
une dureté totale de 250 mg/l I 25 mg/l (exprimée en
CaC03), un rapport Ca/Mg voisin de 4 : 1 et une concentration
6.2 Récipients pour essai, en matériau chimiquement
en oxygène dissous supérieure à 80 % de la saturation dans
inerte et de capacité suffisante (par exemple : tubes à essais ou
l'air.
béchers en verre).
À titre d'exemple, la préparation d'une eau répondant à ces
Avant emploi, les récipients pour essai doivent être soigneuse-
:
caractéristiques est décrite ci-après
ment lavés puis rincés successivement avec de l'eau et de l'eau
de dilution (5.2). À la fin de l'essai, les récipients doivent être b'
Préparer les solutions suivantes :
a)
vidés, rincés avec de l'eau pour éliminer toute trace de la solu-
tion d'essai, puis séchés.
Solution de chlorure de calcium
1)
Dissoudre 11,76 g de chlorure de calcium dihydraté
7 Traitement et préparation des échantillons
(CaCI2,2H20) dans de l'eau et compléter à 1 litre avec de
l'eau distillée ou déionisée.
7.1 Précautions particulières concernant le
prélèvement et le transport des échantillons
Solution de sulfate de magnésium
2)
d'eaux ou d'effluents
Dissoudre 4,93 g de sulfate de magnésium heptahydraté
Pour le prélèvement des échantillons d'eaux ou d'effluents, se
(MgS0,,7H20) dans de l'eau et compléter à 1 litre avec
référer à la procédure générale définie dans I'ISO 5667-2.
de l'eau distillée ou déionisée.
Les flacons doivent être complètement remplis pour ne plus
3) Solution d'hydrogénocarbonate de sodium
contenir d'air.
Dissoudre 2,s g d'hydrogénocarbonate de sodium
L'essai de toxicité doit être réalisé dès que possible, dans les
iNaHCO3) dans de l'eau et compléter à 1 litre avec de
6 h qui suivent le prélèvement.
l'eau distillée ou déionisée.
Si ce délai ne peut pas être respecté, l'échantillon peut être
4) Solution de chlorure de potassium
réfrigéré ( + 4 OC) ou congelé ( - 20 OC) sur le lieu du prélève-
ment. Dans le cas de la congélation, ne pas remplir complète- -
Dissoudre 0,23 g de chlorure de potassium (KCI) dans de
ment les récipients de facon à éviter qu'ils ne se brisent au
l'eau et compléter à 1 litre avec de l'eau distillée ou déio-
moment de la congélation. Si l'échantillon doit être filtré ou
nisée.
décanté, la filtration ou la décantation doit précéder la congéla-
tion. Les conditions dans lesquelles l'échantillon est congelé
b) Mélanger 25 ml de chacune des quatre solutions 1) à 4)
ainsi que la facon dont a été réalisée la filtration ou la décanta-
et amener le volume total à 1 litre avec de l'eau distillée ou
tion préalable doivent être mentionnées dans le rapport d'essai.
déionisée.
Ne jamais utiliser de conservateur chimique.
L'eau de dilution doit être aérée jusqu'à ce que la concentration
7.2 Préparation des solutions des substances à
en oxygène dissous ait atteint la valeur de saturation dans l'air
expérimenter
et jusqu'à stabilisation du pH. Si nécessaire, ajuster le pH à
7,8 it 0,2 par ajout d'hydroxyde de sodium (NaOH) ou d'acide
7.2.1 Préparation des solutions mères
chlorhydrique (HCI). L'eau de dilution ainsi préparée ne doit
plus être aérée avant emploi.
Les solutions mères des substances à expérimenter doivent être
préparées par dissolution d'une quantité connue de la subs-
NOTE - Si l'essai est conduit en vue de besoins qui impliquent
tance à expérimenter dans un volume défini d'eau de dilution
l'utilisation d'une eau de dilution dont les caractéristiques diffèrent de
celles prévues ci-dessus, mentionner dans le rapport d'essai les prin- (5.2), d'eau déionisée ou d'eau distillée dans un appareil en
cipales caractéristiques de l'eau de dilution utilisée.
verre. Elles doivent être préparées au moment de l'emploi à
moins que la stabilité de la substance en solution ne soit con-
L'eau de dilution doit permettre la survie des daphnies durant
nue, auquel cas la solution mère peut être préparée en quantité
au moins 48 h. Vérifier autant que pos
...
Questions, Comments and Discussion
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