ISO 7937:2004
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of Clostridium perfringens — Colony-count technique
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of Clostridium perfringens — Colony-count technique
ISO 7937:2004 describes a horizontal method for the enumeration of viable Clostridium perfringens. It is applicable to products intended for human consumption and the feeding of animals, and environmental samples in the area of food production and food handling.
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement de Clostridium perfringens — Technique par comptage des colonies
L'ISO 7937:2004 décrit une méthode horizontale pour le dénombrement des Clostridium perfringens revivifiables. La présente norme est applicable aux produits pour l'alimentation humaine et animale, et aux échantillons d'environnement pour la production et la distribution des aliments.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 7937
Third edition
2004-08-15
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal method for the
enumeration of Clostridium
perfringens — Colony-count technique
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le
dénombrement de Clostridium perfringens — Technique par comptage
des colonies
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ISO 2004
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Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope. 1
2 Normative references. 1
3 Terms and definitions. 2
4 Principle. 2
5 Diluent, culture media and reagents . 2
6 Apparatus and glassware. 7
7 Sampling. 7
8 Preparation of test sample. 7
9 Procedure. 7
10 Expression of results. 9
11 Test report. 11
Annex A (informative) Results of interlaboratory test . 12
Bibliography . 16
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 7937 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 7937:1997, EN 13401:1999), which has been
technically revised.
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Introduction
Because of the large variety of food and feed products, this horizontal method may not be appropriate in every
detail for certain products. In this case, different methods that are specific to these products may be used if
absolutely necessary for justified technical reasons. Nevertheless, every attempt should be made to apply this
horizontal method as far as possible.
When this International Standard is next reviewed, account will be taken of all information then available
regarding the extent to which this horizontal method has been followed and the reasons for deviations from
this method in the case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate and, for certain groups of products, International
Standards and/or national standards may already exist that do not comply with this horizontal method. It is
hoped that when such standards are reviewed they will be changed to comply with this international Standard
so that eventually the only remaining departures from this horizontal method will be those necessary for
well-established technical reasons.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 7937:2004(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal
method for the enumeration of Clostridium perfringens —
Colony-count technique
1 Scope
This International Standard describes a horizontal method for the enumeration of viable Clostridium
perfringens. It is applicable to
products intended for human consumption and the feeding of animals, and
environmental samples in the area of food production and food handling.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial
suspension and decimal dilutions
ISO 6887-2, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 2: Specific rules for the preparation of meat and
meat products
ISO 6887-3, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 3: Specific rules for the preparation of fish and
fishery products
ISO 6887-4, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 4: Specific rules for the preparation of products
other than milk and milk products meat and meat products, and fish and fishery products
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations
ISO 8261, Milk and milk products — General guidance for the preparation of test samples, initial suspensions
and decimal dilutions for microbiological examination
ISO/TS 11133-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production
of culture media — Part 1 : General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the
laboratory
ISO/TS 11133-2:2003, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and
production of culture media — Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
Clostridium perfringens
C. perfringens
bacteria that form characteristic colonies (black precipitate, caused by the reduction of sulfite to sulfide, which
colours the colonies black) in the specified selective medium, and which give positive confirmatory reactions
when the test is carried out by either of two techniques specified in this International Standard
3.2
enumeration of C. perfringens
determination of the number of culturable and confirmed Clostridium perfringens bacteria per millilitre or per
gram of sample when the test is carried out by the method specified in this International Standard
4 Principle
4.1 Petri dishes are inoculated with a specified quantity of the test sample if the initial product is liquid, or a
specified quantity of the initial suspension in the case of other products.
Further Petri dishes are inoculated, under the same conditions, using decimal dilutions of the test sample or of
the initial suspension.
A selective medium is added (poured-plate technique) and then an overlay of the same medium.
4.2 The plates are incubated anaerobically at 37 °C for 20 h ± 2 h.
4.3 The characteristic colonies are enumerated.
4.4 The numbers of characteristic colonies are confirmed and the number of C. perfringens per millilitre or
per gram of sample is calculated.
5 Diluent, culture media and reagents
See ISO 7218, ISO/TS 11133-1 and ISO/TS 11133-2 for the preparation, production and performance testing
of culture media.
5.1 Diluent
See the relevant part of ISO 6887 or ISO 8261.
5.2 Sulfite-cycloserine agar (SC)
NOTE This was originally designated “egg-yolk-free TSC” (see [1]).
2 © ISO 2004 – All rights reserved
5.2.1 Base
5.2.1.1 Composition
Enzymatic digest of protein 15,0 g
Enzymatic digest of soya 5,0 g
Yeast extract 5,0 g
Disodium disulfite (Na S O ), anhydrous 1,0 g
2 2 5
a
Ammonium iron(III) citrate 1,0 g
b
Agar 9,0 g to 18,0 g
Water 1 000 ml
a
This reagent should contain at least 15 % (mass fraction) of iron.
b
Depending on the gel strength of the agar.
5.2.1.2 Preparation
Dissolve the components in the water by boiling. Adjust the pH so that after sterilization it will be 7,6 ± 0,2 at
25 °C. Dispense the base into flasks or bottles of appropriate capacity. Sterilize for 15 min at 121 °C. Store in
a refrigerator at 5 °C ± 3 °C. Discard unused medium 2 weeks after preparation.
In some cases (see 9.4.3.1), it may be necessary to prepare dishes of SC agar base medium for confirmation
with the nitrate motility medium (5.5) and the lactose-gelatin medium (5.8). For this purpose, transfer portions
of about 15 ml of the base [melted and cooled to approximately 44 °C to 47 °C using a water bath (6.10)] into
Petri dishes and allow to solidify. Immediately before use, dry the plates (see ISO 7218).
5.2.2 D-Cycloserine solution
5.2.2.1 Composition
a
D-Cycloserine 4,0 g
Water 100 ml
a
Use white crystalline powder only.
5.2.2.2 Preparation
Dissolve the D-cycloserine in the water and sterilize the solution by filtration.
Store in a refrigerator at 3 °C ± 2 °C.
Discard unused solution 4 weeks after preparation.
5.2.3 Complete medium
Immediately before use in the pour-plate method (see 9.2), to each 100 ml of sterile molten base (5.2.1)
cooled to 44 °C to 47 °C, add 1 ml of D-cycloserine solution (5.2.2).
5.2.4 Performance testing for the quality assurance of SC medium
For the definition of selectivity and productivity, refer to ISO/TS 11133-1. To check the performance, refer to
ISO/TS 11133-2:2003, Table B.1 [see TS(C)].
5.3 Fluid thioglycollate medium
5.3.1 Composition
Enzymatic digest of casein 15,0 g
L-Cystine 0,5 g
D-Glucose 5,5 g
Yeast extract 5,0 g
Sodium chloride 2,5 g
Sodium thioglycollate (mercaptoacetate) 0,5 g
a
Agar
0,5 g to 2,0 g
Resazurin 0,001 g
Water 1 000 ml
a
Depending on the gel strength of the agar.
5.3.2 Preparation
Dissolve the components in the water by boiling. Adjust the pH so that after sterilization it will be 7,1 ± 0,2 at
25 °C.
Dispense 10 ml portions into tubes and sterilize at 121 °C for 15 min.
Before use, this medium shall be de-aerated.
5.3.3 Performance testing for the quality assurance of thioglycollate broth
For the definition of selectivity and productivity, refer to ISO/TS 11133-1. To check the performance, refer to
ISO/TS 11133-2:2003, Table B.4.
5.4 Lactose sulfite medium (LS) (optional)
5.4.1 Base medium
5.4.1.1 Composition
Enzymatic digest of casein 5,0 g
Yeast extract 2,5 g
Sodium chloride 2,5 g
Lactose 10 g
L-Cysteine hydrochloride 0,3 g
Water 1 000 ml
5.4.1.2 Preparation
Dissolve the components in the water by boiling (if necessary). Adjust the pH so that after sterilization it will be
7,1 ± 0,2 at 25 °C.
Dispense 8 ml portions into test tubes wit
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 7937
Troisième édition
2004-08-15
Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour le dénombrement de
Clostridium perfringens — Technique par
comptage des colonies
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for
the enumeration of Clostridium perfringens — Colony-count technique
Numéro de référence
©
ISO 2004
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Publié en Suisse
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Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe. 2
5 Diluant, milieux de culture et réactifs . 2
6 Appareillage et verrerie. 7
7 Échantillonnage. 8
8 Préparation de l'échantillon pour essai. 8
9 Mode opératoire. 8
10 Expression des résultats. 10
11 Rapport d'essai. 12
Annexe A (informative) Résultats d'essai interlaboratoires. 13
Bibliographie . 17
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 7937 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 7937:1997, EN 13401:1999), qui a fait
l'objet d'une révision technique.
iv © ISO 2004 – Tous droits réservés
Introduction
En raison de la grande diversité des produits alimentaires, il est possible que cette méthode horizontale ne
convienne pas exactement, dans tous ses détails, pour certains produits pour lesquels il peut être nécessaire
d'employer des méthodes différentes ou spécifiques à ces produits si cela est absolument nécessaire pour
des raisons techniques justifiées. Néanmoins, il convient que tous les efforts soient faits pour appliquer cette
méthode horizontale chaque fois que ce sera possible.
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il sera tenu compte de tous les renseignements
disponibles à ce moment-là, à savoir dans quelle mesure cette méthode horizontale aura été suivie et les
raisons pour lesquelles il aura été nécessaire d'y déroger dans le cas de produits particuliers.
L'harmonisation des méthodes d'essai ne peut être réalisée de façon immédiate et, pour certains groupes de
produits, des Normes internationales et/ou des normes nationales qui ne concordent pas avec cette méthode
horizontale, existent peut-être déjà. Lorsque de telles normes viendront en révision, il serait souhaitable de les
aligner sur la présente Norme internationale, si bien que, finalement, les seules divergences restantes seront
celles qui sont nécessaires pour des raisons techniques bien établies.
NORME INTERNATIONALE ISO 7937:2004(F)
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le
dénombrement de Clostridium perfringens — Technique par
comptage des colonies
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale décrit une méthode horizontale pour le dénombrement des Clostridium
perfringens revivifiables. La présente norme est applicable
aux produits pour l'alimentation humaine et animale, et
aux échantillons d'environnement pour la production et la distribution des aliments.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887-1, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de
la suspension mère et des dilutions décimales
ISO 6887-2, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 2: Règles spécifiques pour la préparation
des viandes et produits à base de viande
ISO 6887-3, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 3: Règles spécifiques pour la préparation
des produits de la pêche
ISO 6887-4, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 4: Règles spécifiques pour la préparation de
produits autres que les produits laitiers, les produits carnés et les produits de la pêche
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques
ISO 8261, Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation des échantillons pour
essai, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
ISO TS 11133-1, Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 1: Guide général pour l'assurance de la qualité pour la préparation des milieux de culture en
laboratoire
ISO TS 11133-2 Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 2: Guide général pour les essais de performance des milieux de culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les définitions suivantes s'appliquent.
3.1
Clostridium perfringens
C. perfringens
bactéries qui forment des colonies caractéristiques (précipité noir, causé par la réduction du sulfite en sulfure
qui colore les colonies en noir) dans le milieu sélectif spécifié et qui donnent des réactions de confirmation
positives lorsque l'essai est effectué par l'une des deux méthodes spécifiées dans la présente Norme
internationale
3.2
dénombrement de C. perfringens
détermination du nombre de bactéries Clostridium perfringens que l'on peut mettre en culture et confirmées
par millilitre ou par gramme d'échantillon lorsque l'essai est effectué conformément à la méthode spécifiée
dans la présente Norme internationale
4 Principe
4.1 Des boîtes de Petri sont ensemencées avec une quantité déterminée de l'échantillon pour essai si le
produit à examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de la suspension mère dans le cas d'autres
produits.
D'autres boîtes de Petri sont ensemencées, dans les mêmes conditions, en utilisant des dilutions décimales
obtenues à partir de l'échantillon pour essai ou de la suspension mère.
Un milieu sélectif est ajouté (technique d'ensemencement dans la masse) puis une couche du même milieu
est ajoutée par le dessus.
4.2 Les boîtes sont incubées en anaérobiose à 37 °C pendant 20 h ± 2 h.
4.3 Les colonies caractéristiques sont dénombrées.
4.4 La quantité de colonies caractéristiques est confirmée et le nombre de C. perfringens par millilitre ou
par gramme d'échantillon est calculé.
5 Diluant, milieux de culture et réactifs
Voir l'ISO 7218, l'ISO/TS 11133-1 et l'ISO/TS 11133-2. Pour la préparation, la production et le contrôle des
milieux de culture.
5.1 Diluant
Voir la partie pertinente de l'ISO 6887 ou l'ISO 8261.
5.2 Gélose tryptose-Sulfite à la cyclosérine (SC)
NOTE SC était désigné à l'origine comme «egg-yolk-free TSC» (TSC exempt de jaune d'œuf), (voir [1]).
2 © ISO 2004 – Tous droits réservés
5.2.1 Milieu de base
5.2.1.1 Composition
Digestat enzymatique de protéine 15,0 g
Digestat enzymatique de Soja 5,0 g
Extrait de levure 5,0 g
Bisulfite disodique (Na S O ), anhydre 1,0 g
2 2 5
a
Citrate de fer(III) ammoniacal 1,0 g
b
Agar 9,0 g à 18,0 g
Eau 1 000 ml
a
Il convient que ce réactif contienne au moins 15 % (en fraction massique) de fer.
b
Selon le pouvoir gélifiant de l'agar.
5.2.1.2 Préparation
5.2.1.2.1 Dissoudre les composants dans l'eau, en portant à ébullition. Ajuster le pH de sorte qu'après
stérilisation, il soit de 7,6 ± 0,2 à 25 °C. Répartir le milieu de base dans des flacons ou des fioles de capacité
appropriée. Stériliser pendant 15 min à 121 °C. Conserver au réfrigérateur à 5 °C ± 3 °C. Éliminer le milieu
inutilisé deux semaines après sa préparation.
5.2.1.2.2 Dans certains cas (voir 9.4.3.1), il est nécessaire de préparer des boîtes de milieu de base SC en
vue de la confirmation utilisant le milieu nitrate motilité (5.5) et le milieu lactose gélatine (5.8). Pour ce faire,
transférer des quantités d'environ 15 ml de milieu [refroidis à approximativement 44 °C à 47 °C à l'aide du
bain d'eau (6.10)] dans des boîtes de Petri. Laisser solidifier. Sécher les boîtes juste avant leur utilisation (voir
l'ISO 7218).
5.2.2 Solution de D-Cyclosérine
5.2.2.1 Composition
a
D-Cyclosérine 4,0 g
Eau 100 ml
a
Utiliser uniquement de la poudre blanche cristalline.
5.2.2.2 Préparation
Dissoudre la D-cyclosérine dans l'eau et stériliser la solution par filtration.
Conserver au réfrigérateur à 3 °C ± 2 °C.
Éliminer la solution inutilisée quatre semaines après sa préparation.
5.2.3 Milieu complet
Immédiatement avant de commencer la méthode d'ensemencement dans la masse (voir 9.2), ajouter 1 ml de
la solution de D-cyclosérine (5.2.2) pour chaque 100 ml de milieu de base stérile (5.2.1) fondu et refroidi entre
44 °C et 47 °C.
5.2.4 Essai de performance pour l'assurance qualité du milieu
Pour la définition de la sélectivité et de la productivité se référer à l'ISO/TS 11133-2. Pour vérifier les
performances, se référer à l' ISO/TS 11133-2:2003, Tableau B.1 [voir TS(C)].
5.3
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.