ISO 4833-1:2013
(Main)Microbiology of the food chain — Horizontal method for the enumeration of microorganisms — Part 1: Colony count at 30 °C by the pour plate technique
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the enumeration of microorganisms — Part 1: Colony count at 30 °C by the pour plate technique
ISO 4833-1:2013 specifies a horizontal method for enumeration of microorganisms that are able to grow and form colonies in a solid medium after aerobic incubation at 30 °C. The method is applicable to: a) products intended for human consumption and for animal feed; b) environmental samples in the area of food and feed production and handling. ISO 4833-1:2013 is applicable to: 1) products that require a reliable count when a low limit of detection is specified (below 102/g or 102/ml for liquid samples or below 103/g for solid samples); 2) products expected to contain spreading colonies that obscure colonies of other organisms, e.g. milk and milk products likely to contain spreading Bacillus spp. The applicability of ISO 4833-1:2013 to the examination of certain fermented food and animal feeds is limited and other media or incubation conditions can be more appropriate. However, this method can be applied to such products even though it is possible that the predominant microorganisms in those products are not detected effectively. For some matrices, the method specified in ISO 4833-1:2013 can give different results to those obtained using the method specified in ISO 4833‑2.
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale pour le dénombrement des micro-organismes — Partie 1: Comptage des colonies à 30 °C par la technique d'ensemencement en profondeur
L'ISO 4833-1:2013 spécifie une méthode horizontale de dénombrement des micro-organismes capables de se développer et de former des colonies dans un milieu solide après incubation aérobie à 30 °C. La méthode est applicable: a) aux produits destinés à la consommation humaine et aux aliments pour animaux; b) aux échantillons d'environnement dans le domaine de la production d'aliments destinés à l'homme ou aux animaux et de la préparation des aliments. L'ISO 4833-1:2013 est applicable: 1) aux produits qui exigent un comptage fiable lorsqu'une limite inférieure de détection est spécifiée (inférieure à 102/g ou 102/ml pour des échantillons liquides ou inférieure à 103/g pour des échantillons solides); 2) aux produits supposés contenir des colonies envahissantes qui masquent les colonies d'autres organismes, par exemple le lait et les produits laitiers susceptibles de contenir diverses espèces envahissantes de Bacillus. L'ISO 4833-1:2013 peut ne pas être adaptée à l'analyse de certains aliments fermentés et aliments pour animaux et d'autres milieux ou conditions d'incubation peuvent être plus appropriés. Toutefois, cette méthode peut être appliquée à de tels produits même si elle ne détecte pas totalement les micro-organismes présents en majorité dans ces produits. Pour certaines matrices, la méthode spécifiée dans l'ISO 4833-1:2013 peut donner des résultats différents de ceux obtenus avec la méthode spécifiée dans l'ISO 4833-2.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 4833-1
First edition
2013-09-01
Microbiology of the food chain —
Horizontal method for the
enumeration of microorganisms —
Part 1:
Colony count at 30 °C by the pour plate
technique
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale pour
le dénombrement des micro-organismes —
Partie 1: Comptage des colonies à 30 °C par la technique
d’ensemencement en profondeur
Reference number
©
ISO 2013
© ISO 2013
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior
written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2013 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Culture media and diluents . 2
5.1 General . 2
5.2 Diluents . 2
5.3 Agar medium: plate count agar (PCA) . 2
5.4 Overlay medium (if necessary; see 9.2.7) . 3
6 Apparatus . 4
7 Sampling . 4
8 Preparation of test sample . 4
9 Procedure. 4
9.1 Test portion, initial suspension and dilutions . 4
9.2 Inoculation and incubation . 4
9.3 Counting of colonies . 5
10 Expression of results . 5
10.1 Method of calculation . 5
10.2 Precision . 5
10.3 Interpretation of test results . 6
11 Test report . 7
Annex A (informative) Use of the critical difference for the interpretation of results .8
Bibliography . 9
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2, www.iso.org/directives.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received, www.iso.org/patents.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
This first edition, together with ISO 4833-2, cancels and replaces ISO 4833:2003.
ISO 4833 consists of the following parts, under the general title Microbiology of the food chain —
Horizontal method for the enumeration of microorganisms:
— Part 1: Colony count at 30 °C by the pour plate technique
— Part 2: Colony count at 30 °C by the surface plating technique
iv © ISO 2013 – All rights reserved
INTERNATIONAL STANDARD ISO 4833-1:2013(E)
Microbiology of the food chain — Horizontal method for
the enumeration of microorganisms —
Part 1:
Colony count at 30 °C by the pour plate technique
1 Scope
This part of ISO 4833 specifies a horizontal method for enumeration of microorganisms that are able to
grow and form colonies in a solid medium after aerobic incubation at 30 °C. The method is applicable to:
a) products intended for human consumption and for animal feed;
b) environmental samples in the area of food and feed production and handling.
This part of ISO 4833 is applicable to:
/g
1) products that require a reliable count when a low limit of detection is specified (below 10
2 3
or 10 /ml for liquid samples or below 10 /g for solid samples);
2) products expected to contain spreading colonies that obscure colonies of other organisms, e.g. milk
and milk products likely to contain spreading Bacillus spp.
The applicability of this part of ISO 4833 to the examination of certain fermented food and animal feeds
is limited and other media or incubation conditions can be more appropriate. However, this method can
be applied to such products even though it is possible that the predominant microorganisms in those
products are not detected effectively.
For some matrices, the method specified in this part of ISO 4833 can give different results to those
obtained using the method specified in ISO 4833-2.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated
references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 6887 (all parts), Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial
suspension and decimal dilutions for microbiological examination
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
ISO 11133, Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and performance
testing of culture media
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
microorganism
entity of microscopic size, encompassing bacteria, fungi, protozoa and viruses
[SOURCE: ISO/TS 11139:2006, 2.26]
Note 1 to entry: For the purposes of this part of ISO 4833, microorganisms are bacteria, yeasts and moulds that
are able to produce colonies under the conditions specified in this part of ISO 4833.
4 Principle
A specified quantity of the liquid test sample, or a specified quantity of an initial suspension in the case
of other products, is dispensed into an empty Petri dish and mixed with a specified molten agar culture
medium to form a poured plate.
Other plates are prepared under the same conditions using decimal dilutions of the test sample or of the
initial suspension.
The plates are incubated under aerobic conditions at 30 °C for 72 h.
The number of microorganisms per gram or per millilitre of the test sample is calculated from the
number of colonies obtained in the plates containing fewer than 300 colonies.
5 Culture media and diluents
5.1 General
Follow ISO 11133 for preparation, production and performance testing of culture media.
5.2 Diluents
Use the diluent(s) specified in ISO 6887 for the product concerned or the specific International Standard
dealing with the product under examination.
5.3 Agar medium: plate count agar (PCA)
5.3.1 Composition
Enzymatic digestion of casein 5,0 g
Yeast extract 2,5 g
Glucose, anhydrous (C H O ) 1,0 g
6 12 6
a
Agar 9 g to 18 g
Water 1 000 ml
a
Depending on the gel strength of the agar.
When dairy products are examined, add skimmed milk powder at 1,0 g/l of the culture medium. The
skimmed milk powder shall be free from inhibitory substances.
5.3.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water, by heating if necessary. Mix
thoroughly and leave to stand for several minutes.
2 © ISO 2013 – All rights reserved
Adjust the pH (6.4), if necessary, so that after sterilization it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
Dispense the medium into tubes, flasks or bottles (6.8) of suitable capacity. Sterilize in an autoclave (6.1)
at 121 °C for 15 min.
lf the medium is to be used immediately, cool it to 44 °C to 47 °C in a water bath (6.3) before use. If not,
store it in the dark at a temperature of (5 ± 3) °C for no longer than 3 months, under conditions which do
not allow any change in its composition and properties.
Before beginning the microbiological examination, completely melt the medium, then cool it to 44 °C
to 47 °C in a water bath (6.3) before use. See ISO 11133.
Use the molten agar as soon as possible; it should not be retained for more than 4 h.
5.3.3 Performance testing of the culture medium
5.3.3.1 General
Plate count agar is a non-selective medium, used in this part of ISO 4833 as a pour plate. Productivity
shall be tested according to ISO 11133.
5.3.3.2 Productivity
Incubation (30 ± 1) °C for (72 ± 3) h
a
Control strains Escherichia coli WDCM 00013 or WDCM 00012 [World Data Centre for Micro-
organisms (WDCM)]
a
Bacillus subtilis subsp. spizizenii WDCM 00003
Staphylococcus aureus WDCM 00032 or WDCM 00034
Reference medium Tryptone soya agar
Control method Quantitative
Criterion Productivity ratio (PR) ≥0,7
a
The strains to be used as a minimum by the user laboratory. See Reference [7] for information on culture collection strain
numbers and contact details.
5.4 Overlay medium (if necessary; see 9.2.7)
5.4.1 Composition
a
Agar 12 g to 18 g
Water 1 000 ml
a
Depending on the gel strength of the agar.
5.4.2 Preparation
Add the agar to the water and heat to boiling, stirring frequently until the agar is completely dissolved,
or steam for about 30 min.
Adjust the pH (6.4), if necessary, so that after sterilization it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
Dispense the medium into tubes, flasks or bottles (6.8) of appropriate capacity.
Sterilize in an autoclave at 121 °C for 15 min.
lf the medium is to be used immediately, cool it to 44 °C to 47 °C in a water bath (6.3) before use. If not,
store it in the d
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 4833-1
Première édition
2013-09-01
Microbiologie de la chaîne
alimentaire — Méthode horizontale
pour le dénombrement des micro-
organismes —
Partie 1:
Comptage des colonies à 30 °C par
la technique d’ensemencement en
profondeur
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the
enumeration of microorganisms —
Part 1: Colony count at 30 °C by the pour plate technique
Numéro de référence
©
ISO 2013
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2013
Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée
sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2013 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
5 Milieux de culture et diluants . 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Diluants . 2
5.3 Milieu gélosé: gélose pour dénombrement (PCA) . 2
5.4 Milieu pour seconde couche (si nécessaire; voir 9.2.7) . 3
6 Appareillage . 4
7 Échantillonnage . 4
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
9 Mode opératoire. 5
9.1 Prise d’essai, suspension mère et dilutions . 5
9.2 Ensemencement et incubation . 5
9.3 Dénombrement des colonies . 5
10 Expression des résultats. 6
10.1 Méthode de calcul . 6
10.2 Fidélité . 6
10.3 Interprétation des résultats d’essai . 6
11 Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Utilisation de la différence critique pour l’interprétation des résultats .8
Bibliographie . 9
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/CEI, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/CEI, Partie 2, www.iso.
org/directives.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou sur la liste ISO des déclarations de brevets reçues,
www.iso.org/brevets.
Les éventuelles appellations commerciales utilisées dans le présent document sont données pour
information à l’intention des utilisateurs et ne constituent pas une approbation ou une recommandation.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 9, Microbiologie.
Cette première édition, conjointement avec l’ISO 4833-2, annule et remplace l’ISO 4833:2003.
L’ISO 4833 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie de la chaîne
alimentaire — Méthode horizontale pour le dénombrement des micro-organismes:
— Partie 1: Comptage des colonies à 30 °C par la technique d’ensemencement en profondeur
— Partie 2: Comptage des colonies à 30 °C par la technique d’ensemencement en surface
iv © ISO 2013 – Tous droits réservés
NORME INTERNATIONALE ISO 4833-1:2013(F)
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode
horizontale pour le dénombrement des micro-organismes —
Partie 1:
Comptage des colonies à 30 °C par la technique
d’ensemencement en profondeur
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 4833 spécifie une méthode horizontale de dénombrement des micro-
organismes capables de se développer et de former des colonies dans un milieu solide après incubation
aérobie à 30 °C. La méthode est applicable:
a) aux produits destinés à la consommation humaine et aux aliments pour animaux;
b) aux échantillons d’environnement dans le domaine de la production d’aliments destinés à l’homme
ou aux animaux et de la préparation des aliments.
La présente partie de l’ISO 4833 est applicable:
1) aux produits qui exigent un comptage fiable lorsqu’une limite inférieure de détection est spécifiée
2 2 3
(inférieure à 10 /g ou 10 /ml pour des échantillons liquides ou inférieure à 10 /g pour des
échantillons solides);
2) aux produits supposés contenir des colonies envahissantes qui masquent les colonies d’autres
organismes, par exemple le lait et les produits laitiers susceptibles de contenir diverses espèces
envahissantes de Bacillus.
La présente partie de l’ISO 4833 peut ne pas être adaptée à l’analyse de certains aliments fermentés
et aliments pour animaux et d’autres milieux ou conditions d’incubation peuvent être plus appropriés.
Toutefois, cette méthode peut être appliquée à de tels produits même si elle ne détecte pas totalement
les micro-organismes présents en majorité dans ces produits.
Pour certaines matrices, la méthode spécifiée dans la présente partie de l’ISO 4833 peut donner des
résultats différents de ceux obtenus avec la méthode spécifiée dans l’ISO 4833-2.
2 Références normatives
Les documents suivants, en tout ou partie, sont référencés de manière normative dans le présent
document et sont indispensables pour son application. Pour les références datées, seule l’édition citée
s’applique. Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y
compris les éventuels amendements).
ISO 6887 (toutes les parties), Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension
mère et des dilutions décimales en vue de l’examen microbiologique
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations
ISO 11133, Microbiologie des aliments et de l’eau — Préparation, production, stockage et essais de
performance des milieux de culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
micro-organisme
entité de taille microscopique, comprenant les bactéries, les champignons, les protozoaires et les virus
[SOURCE: ISO/TS 11139:2006, 2.26]
Note 1 à l’article: Pour les besoins de la présente partie de l’ISO 4833, les micro-organismes sont des bactéries, levures
et moisissures capables de produire des colonies dans les conditions spécifiées dans la présente partie de l’ISO 4833.
4 Principe
Une quantité déterminée de l’échantillon pour essai liquide, ou une quantité déterminée de suspension
mère dans le cas d’autres produits, est déposée dans une boîte de Petri vide et mélangée à un milieu de
culture gélosé fondu spécifié, constituant ainsi une boîte de gélose ensemencée en profondeur.
D’autres boîtes sont préparées dans les mêmes conditions, à partir de dilutions décimales de l’échantillon
pour essai ou de la suspension mère.
Les boîtes sont incubées en conditions aérobies à 30 °C pendant 72 h.
Le nombre de micro-organismes par gramme d’échantillon ou le nombre de micro-organismes par
millilitre d’échantillon est calculé à partir du nombre de colonies obtenues sur les boîtes contenant
moins de 300 colonies.
5 Milieux de culture et diluants
5.1 Généralités
Suivre l’ISO 11133 pour la préparation, la production et les essais de performance du milieu de culture.
5.2 Diluants
Utiliser le ou les diluants spécifiés dans l’ISO 6887 pour le produit concerné ou la Norme internationale
spécifique du produit soumis à l’examen.
5.3 Milieu gélosé: gélose pour dénombrement (PCA)
5.3.1 Composition
Digestat enzymatique de caséine 5,0 g
Extrait de levure 2,5 g
Glucose anhydre (C H O ) 1,0 g
6 12 6
a
Gélose 9 g à 18 g
Eau 1 000 ml
a
En fonction du pouvoir gélifiant de la gélose.
Dans le cas d’analyse de produits laitiers, ajouter 1,0 g de poudre de lait écrémé par litre de milieu de
culture. La poudre de lait écrémé doit être exempte de substances inhibitrices.
2 © ISO 2013 – Tous droits réservés
5.3.2 Préparation
Dissoudre, dans de l’eau, les composants ou le milieu complet déshydraté, en chauffant si nécessaire.
Mélanger soigneusement et laisser reposer plusieurs minutes.
Ajuster le pH (6.4), si nécessaire, de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
Répartir le milieu dans des tubes, des fioles ou des flacons (6.8)de capacité appropriée.
Stériliser pendant 15 min à l’autoclave (6.1) à 121 °C.
Si le milieu est utilisé extemporanément, le refroidir dans un bain d’eau (6.3) maintenu entre 44 °C et
47 °C, avant utilisation. Sinon, stocker le milieu dans l’obscurité pendant 3 mois au plus, à une température
de (5 ± 3) °C, et dans des conditions qui n’altèrent ni sa composition ni ses propriétés.
Avant de commencer l’examen microbiologique, faire fondre complètement le milieu, puis le refroidir
entre 44 °C et 47 °C dans un bain d’eau (6.3) avant utilisation. Voir l’ISO 11133.
Utiliser la gélose fondue dès que possible; il est recommandé de ne pas la conserver pendant plus de 4 h.
5.3.3 Essai de performance du milieu de culture
5.3.3.1 Généralités
La gélose pour dénombrement (PCA) est un milieu non sélectif, utilisé dans la présente partie de
l’ISO 4833 comme milieu ensemencé en profondeur. Les essais portant sur la productivité doivent être
réalisés conformément à l’ISO 11133.
5.3.3.2 Productivité
Incubation (72 ± 3) h à (30 ± 1) °C
a
Souches témoins Escherichia coli WDCM 00013 ou WDCM 00012 [World Data Centre for
Microorganisms (WDMC), C
...
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 4833-1
Первое издание
2013-09-01
Микробиология в цепи создания
пищевой продукции. Горизонтальный
метод подсчета микроорганизмов.
Часть 1.
Метод подсчета колоний при
температуре 30 °С при посеве заливкой
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the enumeration
of microorganisms —
Part 1: Colony-count at 30 degrees C by the pour plate technique
Ссылочный номер
©
ISO 2013
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на установку интегрированных шрифтов в компьютере, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe – торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в какой-либо форме или
каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без предварительного письменного
согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по адресу, приведенному ниже, или в
комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 734 09 47
E-mail copyright @ iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii ©ISO 2013 – Все права сохраняются
Содержание
Предисловие .iv
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .2
4 Сущность метода.2
5 Питательные среды и разбавители.2
5.1 Разбавители .2
5.2 Разбавители .2
5.3 Агар для подсчета колоний (РСА) .2
5.4 Среда, используемая в качестве верхнего слоя (если необходимо, см. 9.2.7) .3
6 Аппаратура.4
7 Отбор проб.4
8 Приготовление пробы для анализа.4
9 Проведение анализа .4
9.1 Проба для анализа, исходная суспензия и разведения.4
9.2 Посев и инкубация .5
9.3 Подсчет колоний .5
10 Обработка результатов.5
10.1 Метод вычисления.5
10.2 Прецизионность .5
10.3 Интерпретация результатов испытания .6
11 Протокол испытания.7
Приложение А (информативное) Применение критической разности для интерпретации
результатов .8
Библиография.9
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) всемирная федерация национальных органов
по стандартизации (комитеты-члены ISO). Работа по подготовке международных стандартов обычно
ведется через технические комитеты ISO. Каждый комитет-член ISO, проявляющий интерес к
тематике, по которой учрежден технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные организации, государственные и негосударственные, имеющие связи с ISO,
также принимают участие в работе. ISO тесно сотрудничает с Международной электротехнической
комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.
Процедуры, используемые для разработки данного документа, и процедуры, предусмотренные для его
дальнейшего ведения, описаны в Директивах ISO/IEC, Часть 1. В частности, следует отметить
различные критерии утверждения, требуемые для различных типов документов ISO. Проект данного
документа был разработан в соответствии с редакционными правилами Директив ISO/IEC, Часть 2.
www.iso.org/directives.
Необходимо обратить внимание на возможность того, что ряд элементов данного документа могут
быть предметом патентных прав. Международная организация ISO не должна нести ответственность
за идентификацию таких прав, частично или полностью. Сведения о патентных правах,
идентифицированных при разработке документа, будут указаны во Введении и/или в перечне
полученных ISO объявлениях о патентном праве. www.iso.org/patents.
Любое торговое название, использованное в данном документе, является информацией,
предоставляемой для удобства пользователей, а не свидетельством в пользу того или иного товара
или той или иной компании.
Технический комитет, несущий ответственность за данный документ, ISO/TC 24, Пищевые продукты,
Подкомитет SC 9, Микробиология.
Настоящее первое издание наряду с ISO 4833-2 отменяет и заменяет ISO 4833:2003.
ISO 4833 состоит из следующих частей под общим названием Микробиология в цепи создания
пищевой продукции. Горизонтальный метод подсчета микроорганизмов:
⎯ Часть 1. Метод подсчета колоний при температуре 30 °С при посеве заливкой;
⎯ Часть 2. Метод подсчета колоний при температуре 30 °С при посеве на поверхность.
iv © ISO 2013 – Все права сохраняются
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 4833-1:2013(R)
Микробиология в цепи создания пищевой продукции.
Горизонтальный метод подсчета микроорганизмов.
Часть 1.
Метод подсчета колоний при температуре 30°°С при посеве
заливкой
1 Область применения
Настоящая часть ISO 4833 устанавливает горизонтальный метод подсчета микроорганизмов, которые
растут и образуют колонии на твердой среде после аэробной инкубации при температуре 30 °С. Этот
метод применяется к
а) продуктам, предназначенным для потребления человеком и животными;
b) пробам окружающей среды в зоне производства и отгрузки пищевых продуктов и кормов для
животных.
Данная часть ISO 4833 применяется также к
1) продукции, требующей надежного подсчета, когда установлен низкий предел обнаружения (ниже
2 2 3
10 /г или 10 /мл для жидких проб или ниже 10 /г для твердых проб);
2) продукции, для которой ожидается распространение колоний, которые скрывают колонии других
микроорганизмов, например, молоко и молочные продукты могут содержать распространяющиеся
Bacillus spp.
Применимость данной части ISO 4833 к изучению определенных сброженных пищевых продуктов и
кормов для животных ограничена и более подходящими могут быть другие питательные среды и
условия инкубации. В то же время данные метод можно применить и к такой продукции, даже если
существует возможность, что преобладающие микроорганизмы в этих продуктах не будут эффективно
обнаруживаться.
Для некоторых матриц метод, установленный в данной части ISO 4833, может давать результаты,
отличающиеся от результатов, полученных методом, установленным в ISO 4833-2.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные документы являются обязательными при применении данного документа. Для
датированных ссылок применяется только цитированное издание документа. Для недатированных
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 6887 (все части), Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка
образцов для испытания, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологических
исследований.
ISO 7218, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие правила и
руководство по проведению микробиологических исследований
ISO 11133, Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление,
производство, хранение и проверка соответствия требованиям питательных сред
3 Термины и определения
Применительно к данному документу используется следующие термины и определения.
3.1
микроорганизм
microorganism
организм микроскопического размера, включая бактерии, грибы и плесень, простейшие
(одноклеточные) и вирусы
[ИСТОЧНИК: ISO/TS 11139:2006, 2.26]
Примечание 1 к статье: В данной части ISO 4833 микроорганизмами являются бактерии, дрожжи и плесени,
которые способны создавать колонии в условиях, установленных в данной части ISO 4833.
4 Сущность метода
Установленное количество жидкой пробы или установленное количество исходной суспензии в случае
других продуктов заливают в пустую чашку Петри и перемешивают с установленной питательной
средой на расплавленном агар-агаре, чтобы получить засеянный застывший агар.
Готовят еще несколько чашек в таких же условиях, используя десятичные разбавления испытуемой
пробы или исходной суспензии.
Чашки подвергают аэробной инкубации при температуре 30 °С в течение 72 ч.
Количество микроорганизмов на миллилитр или грамм пробы рассчитывают по числу колоний,
полученных на чашках, содержащих меньше 300 колоний.
5 Питательные среды и разбавители
5.1 Разбавители
Для подготовки, производства и проверки соответствия требованиям питательных сред см. ISO 11133.
5.2 Разбавители
Пользуются разбавителями, установленными в ISO 6887 для рассматриваемого продукта или
конкретного международного стандарта, касающегося исследуемого продукта.
5.3 Агар для подсчета колоний (РСА)
5.3.1 Состав
Ферментативный перевар казеина 5,0 г
Дрожжевой экстракт 2,5 г
Глюкоза, безводная (СН О ) 1,0 г
6 12 6
а
Агар от 9 г до 18 г
Вода 1 000 мл
а
В зависимости от прочности геля – агара
При исследовании молочных продуктов добавляют 1,0 г снятого порошкового молока на литр
питательной среды. Порошковое снятое молоко не должно содержать ингибиторных добавок.
2 © ISO 2013 – Все права сохраняются
5.3.2 Подготовка
Растворяют компоненты или обезвоженную полную среду в воде, если необходимо, при нагревании.
Тщательно перемешивают и оставляют на несколько минут.
Регулируют рН (6.4), если необходимо, так чтобы после стерилизации рН составил 7,0 ± 0,2 при
температуре 25 °С.
Распределяют среду по пробиркам, колбам или склянкам (6.8) подходящей вместимости. Стерилизуют
в автоклаве(6.1) при температуре 121 °С в течение 15 мин.
Если среда будет использоваться немедленно, охлаждают ее до температуры от 44 °С до 47 °С на
водяной бане (6.3) перед использованием. Если не предполагается использовать среду сразу, ее
хранят в темноте при температуре (5 ± 3) °С в течение не более 3 месяцев в таких условиях, чтобы не
допустить изменений в составе и свойствах питательной среды.
Перед началом микробиологического исследования полностью расплавляют среду, затем охлаждают
ее до температуры от 44 °С до 47 °С на водяной бане (6.3) и используют. См. ISO 11133.
Расплавленный агар стараются использовать срезу, так как его не следует оставлять более чем на 4 часа.
5.3.3 Оценочное испытание для обеспечения качества питательной среды
5.3.3.1 Общие положения
Агар для подсчета колоний является неселективной средой, используемой в данной части ISO 4833
для посева в чашках. Ее продуктивность должна проверяться в соответствии с ISO 11133.
5.3.3.2 Продуктивность
Инкубация
(30 ± 1) °С в течение (72 ± 3) ч
a
Контрольные штаммы Echerichia cоli WDCM 00013 или WDCM 00012 [World data Centre for
Microorganisms (WDCM)]]
Bacillus subtilis subsp. Spizizenii WDCM 00003
Staphylococcus aureus WDCM 00032 или WDCM 00034
Контрольная среда Триптоновый соевый агар
Контрольный метод Количественный
Критерий
Коэффициент продуктивности (PR) ≥ 0,7
а
Лаборатория пользователя должна использовать, как минимум, указанные штаммы. См. Ссылку [2] в
отношении информации по номерам коллекционных штаммов культур и контактам.
5.4 Среда, используемая в качестве верхнего слоя (если необходимо, см. 9.2.7)
5.4.1 Состав
1)
Агар от 12 до 18 г
Вода 1 000 мл
а
В зависимости от прочности геля – агара
5.4.2 Приготовление
Добавляют агар в
...
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 4833-1
Первое издание
2013-09-01
Микробиология в цепи создания
пищевой продукции. Горизонтальный
метод подсчета микроорганизмов.
Часть 1.
Метод подсчета колоний при
температуре 30 °С при посеве заливкой
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the enumeration
of microorganisms —
Part 1: Colony-count at 30 degrees C by the pour plate technique
Ссылочный номер
©
ISO 2013
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на установку интегрированных шрифтов в компьютере, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe – торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в какой-либо форме или
каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без предварительного письменного
согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по адресу, приведенному ниже, или в
комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 734 09 47
E-mail copyright @ iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii ©ISO 2013 – Все права сохраняются
Содержание
Предисловие .iv
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .2
4 Сущность метода.2
5 Питательные среды и разбавители.2
5.1 Разбавители .2
5.2 Разбавители .2
5.3 Агар для подсчета колоний (РСА) .2
5.4 Среда, используемая в качестве верхнего слоя (если необходимо, см. 9.2.7) .3
6 Аппаратура.4
7 Отбор проб.4
8 Приготовление пробы для анализа.4
9 Проведение анализа .4
9.1 Проба для анализа, исходная суспензия и разведения.4
9.2 Посев и инкубация .5
9.3 Подсчет колоний .5
10 Обработка результатов.5
10.1 Метод вычисления.5
10.2 Прецизионность .5
10.3 Интерпретация результатов испытания .6
11 Протокол испытания.7
Приложение А (информативное) Применение критической разности для интерпретации
результатов .8
Библиография.9
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) всемирная федерация национальных органов
по стандартизации (комитеты-члены ISO). Работа по подготовке международных стандартов обычно
ведется через технические комитеты ISO. Каждый комитет-член ISO, проявляющий интерес к
тематике, по которой учрежден технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные организации, государственные и негосударственные, имеющие связи с ISO,
также принимают участие в работе. ISO тесно сотрудничает с Международной электротехнической
комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.
Процедуры, используемые для разработки данного документа, и процедуры, предусмотренные для его
дальнейшего ведения, описаны в Директивах ISO/IEC, Часть 1. В частности, следует отметить
различные критерии утверждения, требуемые для различных типов документов ISO. Проект данного
документа был разработан в соответствии с редакционными правилами Директив ISO/IEC, Часть 2.
www.iso.org/directives.
Необходимо обратить внимание на возможность того, что ряд элементов данного документа могут
быть предметом патентных прав. Международная организация ISO не должна нести ответственность
за идентификацию таких прав, частично или полностью. Сведения о патентных правах,
идентифицированных при разработке документа, будут указаны во Введении и/или в перечне
полученных ISO объявлениях о патентном праве. www.iso.org/patents.
Любое торговое название, использованное в данном документе, является информацией,
предоставляемой для удобства пользователей, а не свидетельством в пользу того или иного товара
или той или иной компании.
Технический комитет, несущий ответственность за данный документ, ISO/TC 24, Пищевые продукты,
Подкомитет SC 9, Микробиология.
Настоящее первое издание наряду с ISO 4833-2 отменяет и заменяет ISO 4833:2003.
ISO 4833 состоит из следующих частей под общим названием Микробиология в цепи создания
пищевой продукции. Горизонтальный метод подсчета микроорганизмов:
⎯ Часть 1. Метод подсчета колоний при температуре 30 °С при посеве заливкой;
⎯ Часть 2. Метод подсчета колоний при температуре 30 °С при посеве на поверхность.
iv © ISO 2013 – Все права сохраняются
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 4833-1:2013(R)
Микробиология в цепи создания пищевой продукции.
Горизонтальный метод подсчета микроорганизмов.
Часть 1.
Метод подсчета колоний при температуре 30°°С при посеве
заливкой
1 Область применения
Настоящая часть ISO 4833 устанавливает горизонтальный метод подсчета микроорганизмов, которые
растут и образуют колонии на твердой среде после аэробной инкубации при температуре 30 °С. Этот
метод применяется к
а) продуктам, предназначенным для потребления человеком и животными;
b) пробам окружающей среды в зоне производства и отгрузки пищевых продуктов и кормов для
животных.
Данная часть ISO 4833 применяется также к
1) продукции, требующей надежного подсчета, когда установлен низкий предел обнаружения (ниже
2 2 3
10 /г или 10 /мл для жидких проб или ниже 10 /г для твердых проб);
2) продукции, для которой ожидается распространение колоний, которые скрывают колонии других
микроорганизмов, например, молоко и молочные продукты могут содержать распространяющиеся
Bacillus spp.
Применимость данной части ISO 4833 к изучению определенных сброженных пищевых продуктов и
кормов для животных ограничена и более подходящими могут быть другие питательные среды и
условия инкубации. В то же время данные метод можно применить и к такой продукции, даже если
существует возможность, что преобладающие микроорганизмы в этих продуктах не будут эффективно
обнаруживаться.
Для некоторых матриц метод, установленный в данной части ISO 4833, может давать результаты,
отличающиеся от результатов, полученных методом, установленным в ISO 4833-2.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные документы являются обязательными при применении данного документа. Для
датированных ссылок применяется только цитированное издание документа. Для недатированных
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 6887 (все части), Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка
образцов для испытания, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологических
исследований.
ISO 7218, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие правила и
руководство по проведению микробиологических исследований
ISO 11133, Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление,
производство, хранение и проверка соответствия требованиям питательных сред
3 Термины и определения
Применительно к данному документу используется следующие термины и определения.
3.1
микроорганизм
microorganism
организм микроскопического размера, включая бактерии, грибы и плесень, простейшие
(одноклеточные) и вирусы
[ИСТОЧНИК: ISO/TS 11139:2006, 2.26]
Примечание 1 к статье: В данной части ISO 4833 микроорганизмами являются бактерии, дрожжи и плесени,
которые способны создавать колонии в условиях, установленных в данной части ISO 4833.
4 Сущность метода
Установленное количество жидкой пробы или установленное количество исходной суспензии в случае
других продуктов заливают в пустую чашку Петри и перемешивают с установленной питательной
средой на расплавленном агар-агаре, чтобы получить засеянный застывший агар.
Готовят еще несколько чашек в таких же условиях, используя десятичные разбавления испытуемой
пробы или исходной суспензии.
Чашки подвергают аэробной инкубации при температуре 30 °С в течение 72 ч.
Количество микроорганизмов на миллилитр или грамм пробы рассчитывают по числу колоний,
полученных на чашках, содержащих меньше 300 колоний.
5 Питательные среды и разбавители
5.1 Разбавители
Для подготовки, производства и проверки соответствия требованиям питательных сред см. ISO 11133.
5.2 Разбавители
Пользуются разбавителями, установленными в ISO 6887 для рассматриваемого продукта или
конкретного международного стандарта, касающегося исследуемого продукта.
5.3 Агар для подсчета колоний (РСА)
5.3.1 Состав
Ферментативный перевар казеина 5,0 г
Дрожжевой экстракт 2,5 г
Глюкоза, безводная (СН О ) 1,0 г
6 12 6
а
Агар от 9 г до 18 г
Вода 1 000 мл
а
В зависимости от прочности геля – агара
При исследовании молочных продуктов добавляют 1,0 г снятого порошкового молока на литр
питательной среды. Порошковое снятое молоко не должно содержать ингибиторных добавок.
2 © ISO 2013 – Все права сохраняются
5.3.2 Подготовка
Растворяют компоненты или обезвоженную полную среду в воде, если необходимо, при нагревании.
Тщательно перемешивают и оставляют на несколько минут.
Регулируют рН (6.4), если необходимо, так чтобы после стерилизации рН составил 7,0 ± 0,2 при
температуре 25 °С.
Распределяют среду по пробиркам, колбам или склянкам (6.8) подходящей вместимости. Стерилизуют
в автоклаве(6.1) при температуре 121 °С в течение 15 мин.
Если среда будет использоваться немедленно, охлаждают ее до температуры от 44 °С до 47 °С на
водяной бане (6.3) перед использованием. Если не предполагается использовать среду сразу, ее
хранят в темноте при температуре (5 ± 3) °С в течение не более 3 месяцев в таких условиях, чтобы не
допустить изменений в составе и свойствах питательной среды.
Перед началом микробиологического исследования полностью расплавляют среду, затем охлаждают
ее до температуры от 44 °С до 47 °С на водяной бане (6.3) и используют. См. ISO 11133.
Расплавленный агар стараются использовать срезу, так как его не следует оставлять более чем на 4 часа.
5.3.3 Оценочное испытание для обеспечения качества питательной среды
5.3.3.1 Общие положения
Агар для подсчета колоний является неселективной средой, используемой в данной части ISO 4833
для посева в чашках. Ее продуктивность должна проверяться в соответствии с ISO 11133.
5.3.3.2 Продуктивность
Инкубация
(30 ± 1) °С в течение (72 ± 3) ч
a
Контрольные штаммы Echerichia cоli WDCM 00013 или WDCM 00012 [World data Centre for
Microorganisms (WDCM)]]
Bacillus subtilis subsp. Spizizenii WDCM 00003
Staphylococcus aureus WDCM 00032 или WDCM 00034
Контрольная среда Триптоновый соевый агар
Контрольный метод Количественный
Критерий
Коэффициент продуктивности (PR) ≥ 0,7
а
Лаборатория пользователя должна использовать, как минимум, указанные штаммы. См. Ссылку [2] в
отношении информации по номерам коллекционных штаммов культур и контактам.
5.4 Среда, используемая в качестве верхнего слоя (если необходимо, см. 9.2.7)
5.4.1 Состав
1)
Агар от 12 до 18 г
Вода 1 000 мл
а
В зависимости от прочности геля – агара
5.4.2 Приготовление
Добавляют агар в
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.