ISO 4833:2003
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of microorganisms — Colony-count technique at 30 degrees C
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of microorganisms — Colony-count technique at 30 degrees C
ISO 4833:2003 specifies a horizontal method for the enumeration of microorganisms, by counting the colonies growing in a solid medium after aerobic incubation at 30 degrees Celsius. Subject to some limitations, it is applicable to products intended for human consumption or the feeding of animals. The applicability of ISO 4833:2003 to the examination of certain fermented food and animal feeding stuffs is limited. For the examination of fermented food and animal feeding stuffs, other media and/or incubation conditions might be more appropriate.
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement des micro-organismes — Technique de comptage des colonies à 30 degrés C
L'ISO 4833:2003 spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement des micro-organismes par comptage des colonies obtenues en milieu solide après incubation en aérobiose à 30 degrés Celsius. En dehors de certaines limitations, elle est applicable aux produits destinés à la consommation humaine ou à l'alimentation animale. L'application de l'ISO 4833:2003 à l'analyse de certains aliments fermentés est limitée. D'autres milieux et/ou conditions d'incubation peuvent être plus appropriés à l'analyse des aliments fermentés.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 4833
Third edition
2003-02-01
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal method for the
enumeration of microorganisms —
Colony-count technique at 30 °C
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le
dénombrement des micro-organismes — Technique de comptage des
colonies à 30 °C
Reference number
ISO 4833:2003(E)
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ISO 2003
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ISO 4833:2003(E)
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ISO 4833:2003(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 4833 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 4833:1991). The following technical changes
have been made:
subclause 5.2, Plate count agar: an examination of dairy products is included;
Clause 10, Expression of results: precision data are given, and an example of precision data for dairy
products.
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ISO 4833:2003(E)
Introduction
Because of the large variety of food and feed products, this horizontal method may not be appropriate in every
detail for certain products. In this case, different methods which are specific to these products may be used if
absolutely necessary for justified technical reasons. Nevertheless, every attempt should be made to apply this
horizontal method as far as possible.
When this International Standard is next reviewed, account will be taken of all information then available
regarding the extent to which this horizontal method has been followed and the reasons for deviations from
them in the case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate, and for certain groups of products International
Standards and/or national standards may already exist that do not comply with this horizontal method. In
cases where International Standards already exist for the product to be tested, they should be followed. It is
hoped that when such standards are reviewed, they will be changed to comply with this International Standard
so that eventually the only remaining departures from this horizontal method will be those necessary for well-
established technical reasons.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 4833:2003(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal
method for the enumeration of microorganisms —
Colony-count technique at 30 °C
1 Scope
This International Standard specifies a horizontal method for the enumeration of microorganisms, by counting
the colonies growing in a solid medium after aerobic incubation at 30 °C. Subject to the limitations discussed
in the introduction, this International Standard is applicable to products intended for human consumption or
the feeding of animals.
The applicability of this International Standard to the examination of certain fermented food and animal
feeding stuffs is limited. For the examination of fermented food and animal feeding stuffs, other media and/or
incubation conditions might be more appropriate.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887 (all parts), Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial
suspension and decimal dilutions for microbiological examination
ISO 7218:1996, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological
examinations
ISO 8261, Milk and milk products — General guidance for the preparation of test samples, initial suspensions
and decimal dilutions for microbiological examination
ISO/TS 11133-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production
of culture media — Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the
laboratory
3 Term and definition
For the purposes of this document, the following term and definition applies.
3.1
microorganism
bacteria, yeast and mould-forming countable colony, produced under the conditions specified in this
International Standard
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ISO 4833:2003(E)
4 Principle
4.1 Two poured plates are prepared using a specified culture medium and a specified quantity of the test
sample, if the initial product is liquid, or using a specified quantity of an initial suspension in the case of other
products.
Other pairs of poured plates are prepared, under the same conditions, using decimal dilutions of the test
sample or of the initial suspension.
4.2 The plates are aerobically incubated at 30 °C for 72 h.
4.3 The number of microorganisms per millilitre or per gram of sample is calculated from the number of
colonies obtained on selected plates (see Clause 10).
5 Culture media and diluents
For current laboratory practice, see ISO 7218 and ISO/TS 11133-1.
5.1 Diluents
See the relevant part of ISO 6887.
5.2 Plate count agar (PCA)
5.2.1 Composition
Enzymatic digestion of casein 5,0 g
Yeast extract 2,5 g
Glucose, anhydrous (C H O ) 1,0 g
6 12 6
1)
9 g to 18 g
Agar
Water 1 000 ml
When dairy products are examined, add 1,0 g of skimmed milk powder per litre of the culture medium. The
skimmed milk powder shall be free from inhibitory substances.
5.2.2 Preparation
5.2.2.1 Preparation from commercial dehydrated complete medium
Follow the manufacturer's instructions and add, if necessary, the skimmed milk powder (see 5.2.1).
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
5.2.2.2 Preparation from dehydrated basic components
Dissolve and disperse in the water, in the following order: the yeast extract, the enzymatic digestion of casein,
the glucose and, if necessary, the skimmed milk powder. Heating the water will assist this procedure.
Add the agar and heat to boiling, stirring frequently until the agar is completely dissolved.
1) Depending on the gel strength of the agar.
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ISO 4833:2003(E)
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
5.2.2.3 Distribution, sterilization and storage
Dispense the medium into test tubes (6.8), in quantities of 12 ml to 15 ml per tube, or into flasks or bottles
(6.8) of capacity not greater than 500 ml.
Sterilize in an autoclave at 121 °C for 15 min.
lf the medium is to be used immediately, cool it to 44 °C to 47 °C in a water bath (6.5) before use. If not, store
it in the dark at a temperature of 3 °C ± 2 °C for no longer than 3 months, under conditions which do not allow
any change in its composition and properties.
Before beginning the microbiological examination, in order to avoid any delay when pouring the medium,
completely melt the medium, then cool it to 44 °C to 47 °C in a water bath (6.5) before use.
In order to check the temperature of the agar, it is recommended to place a thermometer into a portion of
15 g/l agar control solution in a separate container identical to that used for the medium. The temperature
control solution should be exposed to the same heating and cooling operations as the medium itself.
5.2.3 Performance testing for the quality assurance of the culture medium
To test the performance of the medium, see ISO/TS 11133-1.
5.3 Overlay medium (if necessary; see 9.2.7)
5.3.1 Composition
1)
12 g to 18 g
Agar
Water 1 000 ml
5.3.2 Preparation
Add the agar to the water and heat to boiling, stirring frequently until the agar is completely dissolved, or
steam for about 30 min.
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
5.3.3 Distribution, sterilization and storage
Dispense the medium into test tubes (6.8) in quantities of 4 ml per tube, or into flasks or bottles (6.8) of
appropriate capacity.
Sterilize in an autoclave at 121 °C for 15 min.
lf the medium is to be used immediately, cool it to 44 °C to 47 °C in a water bath (6.5) before use. If not, store
it in the dark at a temperature of 3 °C ± 2 °C for no longer than 3 months, under conditions which do not allow
any change in its composition and properties.
Before beginning the microbiological examina
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 4833
Troisième édition
2003-02-01
Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour le dénombrement des
micro-organismes — Technique par
comptage des colonies à 30 °C
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for
the enumeration of microorganisms — Colony-count technique at 30 °C
Numéro de référence
ISO 4833:2003(F)
©
ISO 2003
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ISO 4833:2003(F)
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Publié en Suisse
ii © ISO 2003 — Tous droits réservés
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ISO 4833:2003(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 4833 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 4833:1991). Les modifications techniques
suivantes ont été apportées:
Paragraphe 5.2, Gélose pour dénombrement: un examen des produits laitiers est inclus;
Article 10, Expression des résultats: des données de fidélité sont données, ainsi qu’un exemple de
données de fidélité concernant les produits laitiers.
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ISO 4833:2003(F)
Introduction
En raison de la grande diversité des produits alimentaires, il est possible que la présente méthode horizontale,
dans tous ses détails, ne convienne pas exactement à certains produits. Dans ces cas, des méthodes
différentes qui sont spécifiques à ces produits peuvent être utilisées si cela s’avère absolument nécessaire,
pour des raisons techniques justifiées. Néanmoins, il est à espérer que, dans tous les cas, tous les efforts
seront faits pour appliquer, chaque fois qu’il sera possible, la présente méthode horizontale.
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il sera tenu compte de tous les renseignements
disponibles à ce moment-là, à savoir dans quelle mesure la présente méthode horizontale aura été suivie et
les raisons pour lesquelles il aura été nécessaire d’y déroger dans le cas de produits particuliers.
L’harmonisation des méthodes d’essai ne peut pas être immédiate et, pour certains groupes de produits, il se
peut que des Normes internationales et/ou nationales, qui ne sont pas conformes à la présente méthode
horizontale, existent déjà pour le produit à contrôler. Lorsque des Normes internationales existent déjà, il
convient de les appliquer. Il serait souhaitable que, lorsque de telles normes sont revues, elles soient alignées
sur la présente Norme internationale, si bien que finalement les seules divergences restantes par rapport à la
présente méthode horizontale seront celles qui sont nécessaires pour des raisons techniques bien établies.
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NORME INTERNATIONALE ISO 4833:2003(F)
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le
dénombrement des micro-organismes — Technique par
comptage des colonies à 30 °C
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement des micro-
organismes par comptage des colonies obtenues en milieu solide après incubation en aérobiose à 30 °C. En
dehors des limitations exposées en introduction, la présente Norme internationale est applicable aux produits
destinés à la consommation humaine ou à l’alimentation animale.
L'application de la présente Norme internationale à l’analyse de certains aliments fermentés est limitée.
D'autres milieux et/ou conditions d'incubation peuvent être plus appropriés à l'analyse des aliments fermentés.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887 (toutes les parties), Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension
mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
ISO 7218:1996, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques
ISO 8261, Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation des échantillons pour
essai, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
ISO/TS 11133-1, Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 1: Guide général pour l'assurance de la qualité pour la préparation des milieux de culture en
laboratoire
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
micro-organisme
bactéries, levures ou moisissures formant des colonie dénombrables, se développant dans les conditions
spécifiées dans la présente Norme internationale
4 Principe
4.1 Ensemencement en profondeur d’un milieu de culture défini, coulé dans deux boîtes de Petri, avec une
quantité déterminée de l’échantillon pour essai si le produit à examiner est liquide, ou avec une quantité
déterminée de suspension mère dans le cas d’autres produits.
© ISO 2003 — Tous droits réservés 1
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ISO 4833:2003(F)
Préparation d’autres paires de boîtes de Petri, dans les mêmes conditions, à partir de dilutions décimales de
l’échantillon pour essai ou de la suspension mère.
4.2 Incubation en aérobiose des boîtes à 30 °C, pendant 72 h.
4.3 Calcul du nombre de micro-organismes par millilitre ou par gramme d’échantillon, à partir du nombre de
colonies obtenues dans les boîtes de Petri choisies (voir l’Article 10).
5 Milieux de culture et diluants
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir l’ISO 7218 et l'ISO/TS 11133-1.
5.1 Diluants
Voir la partie pertinente de l’ISO 6887.
5.2 Gélose pour dénombrement (PCA)
5.2.1 Composition
Digestat enzymatique de caséine 5,0 g
Extrait de levure 2,5 g
Glucose anhydre (C H O ) 1,0 g
6 12 6
1)
9 g à 18 g
Agar
Eau 1 000 ml
Dans le cas d'analyse de produits laitiers, ajouter 1,0 g de lait écrémé en poudre par litre de milieu de culture.
Le lait écrémé en poudre doit être exempt de substance inhibitrice.
5.2.2 Préparation
5.2.2.1 Préparation à partir de milieu commercial complet déshydraté
Suivre les instructions du fabricant et ajouter, si nécessaire, la poudre de lait écrémé (voir 5.2.1).
Ajuster le pH, si nécessaire, de façon qu'après stérilisation il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
5.2.2.2 Préparation à partir de composants de base déshydratés
Dissoudre les composants dans l’eau, dans l'ordre suivant: l'extrait de levure, le digestat enzymatique de
caséine, le glucose et, si nécessaire, le lait écrémé en poudre. Chauffer l'eau facilite la préparation.
Ajouter l'agar et amener à ébullition, tout en mélangeant fréquemment de façon à dissoudre complètement
l'agar.
Ajuster le pH, si nécessaire, de façon qu'après stérilisation il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
1) Selon le pouvoir gélifiant de l’agar.
2 © ISO 2003 — Tous droits réservés
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ISO 4833:2003(F)
5.2.2.3 Distribution, stérilisation et stockage
Répartir le milieu dans des tubes à essais (6.8), à raison de 12 ml à 15 ml par tube, ou dans des fioles (6.8)
dont la capacité ne dépasse pas 500 ml.
Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Si le milieu est utilisé extemporanément, le refroidir entre 44 °C et 47 °C avant l’emploi dans un bain d’eau
(6.5). Sinon, stocker le milieu à l'obscurité pendant 3 mois au plus, à une température de 3 °C ± 2 °C et dans
des conditions qui n'altèrent pas sa composition ni ses propriétés.
Avant de commencer l’examen microbiologique, et afin d’éviter toute attente au moment de couler le milieu,
faire fondre complètement le milieu, puis le refroidir entre 44 °C et 47 °C dans un bain d’eau (6.5) avant
l’emploi.
Afin de vérifier la température de l'agar, il est recommandé de placer un thermomètre dans une solution de
contrôle de l'agar à 15 g/l, dans un conteneur séparé identique à ceux utilisés pour le milieu. Il convient que la
solution de contrôle de température soit exposée aux mêmes conditions de chauffage et de refroidissement
que le milieu lui-même.
5.2.3 Contrôle de performance pour l'assurance de la qualité du milieu de culture
Se reporter à l'ISO/TS 11133-1 afin de contrôler la performance du milieu.
5.3 Milieu double couche (si nécessaire; voir 9.2.7)
5.3.1 Composition
1)
12 g à 18 g
Agar
Eau 1 000 ml
5.3.2 Préparation
Ajouter l'agar dans l'eau et porter à ébullition, tout en mélangeant fréquemment de façon à dissoudre
complètement l'agar, ou étuver pendant environ 30 min.
Ajuster le pH si nécessaire de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
5.3.3 Distribution, stérilisation et stockage
Répartir le milieu dans des tubes à essais (6.8), à raison de 4 ml par tube, ou dans des fioles (6.8) de
capacité appropriée.
Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Si le milieu est utilisé extemporanément, le refroidir entre 44 °C et 47 °C avant l’emploi dans un bain d’eau
(6.5). Sinon, stocker le milieu à l'
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Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.