ISO 11290-1:2017
(Main)Microbiology of the food chain — Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes and of Listeria spp. — Part 1: Detection method
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes and of Listeria spp. — Part 1: Detection method
ISO 11290-1:2017 specifies a horizontal method for - the detection of L. monocytogenes, and - the detection of Listeria spp. (including L. monocytogenes). ISO 11290-1:2017 is applicable to - products intended for human consumption and for the feeding of animals, and - environmental samples in the area of food production and food handling.
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale pour la recherche et le dénombrement de Listeria monocytogenes et de Listeria spp. — Partie 1: Méthode de recherche
ISO 11290-1:2017 spécifie une méthode horizontale pour: - la recherche de L. monocytogenes; et - la recherche de Listeria spp. (y compris L. monocytogenes). ISO 11290-1:2017 s'applique aux: - produits destinés à la consommation humaine ou à l'alimentation animale; et - échantillons de l'environnement de production et de distribution des aliments.
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 11290-1
Second edition
2017-05
Microbiology of the food chain —
Horizontal method for the detection
and enumeration of Listeria
monocytogenes and of Listeria spp. —
Part 1:
Detection method
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale pour
la recherche et le dénombrement de Listeria monocytogenes et de
Listeria spp. —
Partie 1: Méthode de recherche
Reference number
ISO 11290-1:2017(E)
©
ISO 2017
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ISO 11290-1:2017(E)
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ISO 11290-1:2017(E)
Contents Page
Foreword .v
Introduction .vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 2
4 Principle . 2
4.1 General . 2
4.2 Primary enrichment in a selective liquid enrichment medium with reduced
concentration of selective agents (half-Fraser broth) . . 2
4.3 Secondary enrichment with a selective liquid enrichment medium with full
concentration of selective agents (Fraser broth) . 3
4.4 Plating out and identification . 3
4.5 Confirmation . 3
5 Culture media and reagents . 3
6 Equipment and consumables . 3
7 Sampling . 4
8 Preparation of test sample . 4
9 Procedure. 4
9.1 Test portion and initial suspension . 4
9.2 Primary enrichment . 4
9.3 Secondary enrichment . 5
9.4 Plating out and identification . 5
9.4.1 General . 5
9.4.2 Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti . 5
9.4.3 Second selective medium . 6
9.5 Confirmation of Listeria monocytogenes or Listeria spp. . 6
9.5.1 Selection of colonies for confirmation . 6
9.5.2 Confirmation of L. monocytogenes . . 6
9.5.3 Confirmation of Listeria spp. . 10
9.6 Interpretation of morphological and physiological properties and of the
biochemical reactions .11
9.7 Additional characterization of isolated strains (optional) .11
10 Expression of results .11
11 Performance characteristics of the method .11
11.1 Method validation studies .11
11.2 Sensitivity .11
11.3 Specificity .11
11.4 Level of detection (LOD ) .11
50
12 Test report .12
13 Quality assurance .12
Annex A (normative) Diagram of procedure .13
Annex B (normative) Composition and preparation of culture media and reagents .14
Annex C (informative) Distinction of Listeria spp. from other genera .27
Annex D (informative) Reactions for the identification of Listeria species .28
Annex E (informative) Listeria selective agars .30
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ISO 11290-1:2017(E)
Annex F (informative) Results of the interlaboratory studies for detection of
Listeria monocytogenes .31
Bibliography .35
iv © ISO 2017 – All rights reserved
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ISO 11290-1:2017(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following
URL: w w w . i s o .org/ iso/ foreword .html.
This document was prepared by the European Committee for Standardization (CEN) Technical
Committee CEN/TC 275, Food analysis — Horizontal methods, in collaboration with ISO Technical
Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9, Microbiology, in accordance with the
agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 11290-1:1996), which has been technically
revised. It also incorporates the amendment ISO 11290-1:1996/Amd.1:2004.
The main changes, compared to ISO 11290-1:1996, are the following.
— The detection of Listeria monocytogenes has been modified as listed below.
— Primary enrichment in half-Fraser broth: incubation for 25 h ± 1 h.
[29]
— Secondary enrichment in Fraser broth: incubation for 24 h ± 2 h.
— Half-Fraser and Fraser broths may be refrigerated before transfer or isolation on selective agar for
a maximum of 72 h.
— Storage of isolation plates: incubated plates can be refrigerated for a maximum of two days before
reading.
— Microscopic aspect for confirmation is optional if the isolation agar allows distinction between
pathogenic and non-pathogenic Listeria spp.
— CAMP test and catalase test are optional.
— Inclusion of new performance characteristics.
— Moreover, detection of Listeria spp. has been included in the scope and the title changed accordingly.
A list of parts in the ISO 11290 series can be found on the ISO website.
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ISO 11290-1:2017(E)
Introduction
The main changes, listed in the foreword, introduced in this document compared to ISO 11290-1:1996
[28]
are considered as major (see ISO 17468 ). The technical changes were assessed and were considered
to have no significant effect on the method performance characteristics or test results.
Because of the large variety of food and feed products, this horizontal method may not be appropriate
in every detail for certain products for which it may be necessary to use different or specific methods.
Nevertheless, in all cases, this horizontal method is intended to be applied as far as possible and
deviations from this only be made for justified technical reasons.
When this document is next reviewed, account will be taken of all information then available regarding
the extent to which this horizontal method has been followed and the reasons for deviations from it in
the case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate, and for certain groups of products
International Standards and/or national standards may already exist that do not comply with this
horizontal method. It is hoped that when such standards are reviewed, they will be changed to comply
with this document so that eventually the only remaining departures from this horizontal method will
be those necessary for well-established technical reasons.
vi © ISO 2017 – All rights reserved
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 11290-1:2017(E)
Microbiology of the food chain — Horizontal method for
the detection and enumeration of Listeria monocytogenes
and of Listeria spp. —
Part 1:
Detection method
WARNING — In order to safeguard the health of laboratory personnel, it is essential that tests
for detecting L. monocytogenes and Listeria spp. are only undertaken in properly equipped
laboratories, under the control of a skilled microbiologist, and that great care is taken in the
disposal of all incubated materials. Persons using this document should be familiar with
normal laboratory practice. This document does not purport to address all of the safety aspects,
if any, associated with its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate
safety and health practices. In particular, it is strongly recommended that tests for detecting
L. monocytogenes are undertaken in laboratories providing biosafety level 2 conditions. It is
strongly recommended that female laboratory staff are made aware of the particular risk to the
developing foetus presented by infection of the mother through exposure to L. monocytogenes
and Listeria spp., and that pregnant personnel and persons with recognized underlying
conditions or diseases that impair cell-mediated immunity do not manipulate cultures of
L. monocytogenes and Listeria spp.
1 Scope
This document specifies a horizontal method for
— the detection of L. monocytogenes, and
— the detection of Listeria spp. (including L. monocytogenes).
This document is applicable to
— products intended for human consumption and for the feeding of animals, and
— environmental samples in the area of food production and food handling.
It is possible that certain additionally described Listeria species may not be detected or confirmed by
[5],[10],[12],[14],[25],[26],[27]
this method.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 6887 (all parts), Microbiology of the food chain — Preparation of test samples, initial suspension and
decimal dilutions for microbiological examination
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
ISO 11133, Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and
performance testing of culture media
© ISO 2017 – All rights reserved 1
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ISO 11290-1:2017(E)
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
— ISO Online browsing platform: available at http:// www .iso .org/ obp
3.1
Listeria monocytogenes
microorganisms which form typical colonies on solid selective media and which display the
morphological, physiological and biochemical characteristics described when tests are carried out in
accordance with this document
3.2
detection of Listeria monocytogenes
determination of the detection/non detection of Listeria monocytogenes (3.1), in a given mass or volume
of product or a specified surface, when tests are carried out in accordance with this document
3.3
Listeria spp.
microorganisms which form typical colonies on solid selective media and which display the
morphological, physiological and biochemical characteristics described when tests are carried out in
accordance with this document
3.4
detection of Listeria spp.
determination of the detection/non detection of Listeria spp. (3.3), in a given mass or volume of product
or a specified surface, when tests are carried out in accordance with this document
4 Principle
4.1 General
Listeria spp. may be present in small numbers and are often accompanied by considerably larger
numbers of other microorganisms, therefore selective enrichment is necessary. It is also necessary to
detect injured and stressed Listeria spp. and the primary selective enrichment medium, with reduced
inhibitor concentration, fulfils at least part of this function.
NOTE Presence of L. monocytogenes can be masked by the presence of other Listeria species, in particular
L. innocua or L. ivanovii.
Within the limits of this document, the detection of L. monocytogenes and of Listeria spp. necessitates
four successive stages, as described in the flowchart in Annex A.
4.2 Primary enrichment in a selective liquid enrichment medium with reduced
concentration of selective agents (half-Fraser broth)
Inoculation of a selective primary enrichment medium containing half the concentrations of
acriflavine and nalidixic acid (half-Fraser broth, see B.1), which is also used as a dilution fluid for the
test portion (9.1).
Incubation of the initial suspension at 30 °C for 24 h to 26 h.
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ISO 11290-1:2017(E)
4.3 Secondary enrichment with a selective liquid enrichment medium with full
concentration of selective agents (Fraser broth)
Inoculation of full-strength secondary liquid enrichment medium (Fraser broth) with a culture
obtained from 4.2.
[29]
Incubation of the Fraser broth at 37 °C for 24 h.
4.4 Plating out and identification
From the cultures obtained in 4.2 and 4.3, plating out on the two selective solid media:
— Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti (see References [16] and [17] and B.3);
— any other solid selective medium at the choice of the laboratory complementary to Agar Listeria
according to Ottaviani and Agosti, using a different substrate and/or principle than the one used in
Listeria agar according to Ottaviani and Agosti (see B.4). See Annex E for information about media.
Incubation of the Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti at 37 °C for a total of 48 h. If colonies of
presumptive L. monocytogenes or Listeria spp. are evident at 24 h the incubation may be stopped at this
stage. Incubation of the second selective medium at the appropriate temperature and examination after
the appropriate time.
4.5 Confirmation
Subculturing of the colonies of presumptive L. monocytogenes or Listeria spp., plated out as described
in 4.4, and confirmation by means of appropriate morphological and/or biochemical tests.
5 Culture media and reagents
For current laboratory practices, refer to ISO 11133.
Composition and performance testing of culture media and reagents and their preparation are
described in Annex B.
6 Equipment and consumables
Usual microbiological equipment (as specified in ISO 7218) and, in particular, the following.
6.1 Apparatus for dry sterilization (oven) or wet sterilization (autoclave).
As specified in ISO 7218.
6.2 Drying cabinet or incubator, capable of being maintained between 25 °C and 50 °C.
6.3 Incubators, capable of operating at 30 °C ± 1 °C, 37 °C ± 1 °C and at 25 °C ± 1 °C (optional).
6.4 Water bath, capable of operating at 47 °C to 50 °C.
6.5 Sterile loops approximately 3 mm in diameter or 10 µl, and inoculating needle or wire.
6.6 pH meter, capable of being read to the nearest 0,01 pH unit at 25 °C, enabling measurements to be
made which are accurate to ± 0,1 pH unit.
6.7 Graduated pipettes or automatic pipettes, of nominal capacities 1 ml and 10 ml.
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ISO 11290-1:2017(E)
6.8 Petri dishes, for example of diameter 90 mm.
6.9 Microscope, preferably with phase-contrast, and with slides and cover slips.
6.10 Refrigerator, capable of operating at 5 °C ± 3 °C.
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this document. If there is no specific International
Standard dealing with sampling of the product concerned, it is recommended that the parties
[3]
concerned come to an agreement on this subject. For food and feed samples, refer to ISO/TS 17728 .
[2]
For environmental samples, use ISO 18593 and see Reference [24].
It is important that the laboratory receives a sample which is truly representative and has not been
damaged or changed during transport or storage (see ISO 7218).
8 Preparation of test sample
Prepare the test sample in accordance with the specific International Standard dealing with the product
[2]
concerned [see ISO 6887 (all parts) and ISO 18593 ]. If there is no specific International Standard, it is
recommended that the parties concerned come to an agreement on this subject.
9 Procedure
9.1 Test portion and initial suspension
Refer to ISO 6887 (all parts) and any specific International Standard appropriate to the product
concerned.
For preparation of the initial suspension, use as dilution fluid the selective primary enrichment medium
specified in B.1 (half-Fraser broth).
In general, to prepare the initial suspension, add a test portion of 25 g or 25 ml to 225 g or 225 ml of the
selective primary enrichment medium (B.1), to obtain a tenfold dilution, and homogenize. Pre-warm
the selective primary enrichment medium to room temperature before use.
This document has been validated for test portions of 25 g or ml. A smaller test portion may be used,
without the need for additional validation/verification, providing that the same ratio between primary
enrichment broth and test portion is maintained. A larger test portion than that initially validated may
be used, if a validation/verification study has shown that there are no adverse effects on the detection
of L. monocytogenes or Listeria spp.
[1]
NOTE 1 Validation can be conducted in accordance with the appropriate document of ISO 16140 (all parts) .
Verification for pooling samples can be conducted in accordance with the protocol described in ISO 6887-1:2017,
Annex D (verification protocol for pooling samples for qualitative tests). See References [21] and [22] as they
provide information on the particular case of Listeria pooling samples.
NOTE 2 For large quantities, it is recommended to pre-warm the selective primary enrichment medium to
30 °C ± 1 °C before mixing it with the test portion.
9.2 Primary enrichment
Incubate the primary enrichment medium (half-Fraser broth, see B.1), prepared in accordance with 9.1,
at 30 °C (6.3) for 25 h ± 1 h.
NOTE 1 A black coloration can develop during the incubation.
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ISO 11290-1:2017(E)
NOTE 2 It is possible to store at 5 °C (6.10) the pre-enriched sample after incubation before transfer to Fraser
broth for a maximum of 72 h.
(See Reference [20].)
9.3 Secondary enrichment
9.3.1 After incubation of the initial suspension (primary enrichment) for 25 h ± 1 h (9.2), transfer 0,1 ml
of the culture obtained in 9.2 (regardless of its colour) to a tube or bottle containing 10 ml of secondary
enrichment medium (Fraser broth) (B.2).
9.3.2 Incubate the inoculated medium (9.3.1) for 24 h ± 2 h at 37 °C (6.3).
NOTE In the case of Listeria spp. other than Listeria monocytogenes detection, additional 24 h incubation can
allow for recovery of more species.
9.4 Plating out and identification
9.4.1 General
9.4.1.1 From the primary enrichment culture (9.2) incubated for 25 h ± 1 h at 30 °C (6.3), inoculate,
by means of a loop (6.5), the surface of the first selective plating medium, Agar Listeria according to
Ottaviani and Agosti (B.3), to obtain well-separated colonies.
Proceed in the same way with the second selective plating-out medium of choice (B.4).
NOTE Half-Fraser broth and Fraser broth can be refrigerated at 5 °C (6.10) before isolation on selective agar
[20]
for a maximum of 72 h.
9.4.1.2 From the secondary enrichment medium incubated for 24 h ± 2 h at 37 °C (6.3) (9.3.2), repeat
the procedure described in 9.4.1.1 with the two selective plating-out media.
9.4.1.3 Invert the Petri dishes obtained in 9.4.1.1 and 9.4.1.2 and place them in an incubator set at
37 °C (6.3) for Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti (B.3). For the second selective medium (B.4),
follow the manufacturer’s instructions.
9.4.1.4 For Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti incubate for a total of 48 h ± 2 h. If colonies of
presumptive L. monocytogenes or Listeria spp. are evident at 24 h ± 2 h the incubation may be stopped at
this stage. For second selective agar incubate for the appropriate time. Examine the dishes (9.4.1.3) for
the presence of presumptive colonies of L. monocytogenes or Listeria spp.
NOTE After incubation plates can be refrigerated at 5 °C (6.10) for a maximum of 48 h before reading.
9.4.2 Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti
Consider as presumptive L. monocytogenes the blue-green colonies surrounded by an opaque halo
(typical colonies). Colonies of L. ivanovii are also blue-green and surrounded by an opaque halo.
Consider as presumptive Listeria spp. the blue-green colonies with or without opaque halo.
NOTE 1 Some strains of L. monocytogenes exposed to stress conditions, particularly acid stress, can show a
very weak halo (or even no halo).
NOTE 2 Some rare L. monocytogenes are characterized by a slow PIPLC (phosphatidyl inositol phospholipase C)
activity. Such bacteria are detected when the total duration of incubation is more than, for example, four days.
[13]
Some of these strains could be pathogenic. No L. monocytogenes strains have been described as PIPLC
negative.
© ISO 2017 – All rights reserved 5
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ISO 11290-1:2017(E)
NOTE 3 Some organisms other than Listeria spp. can produce blue colonies on this medium. See Annex C and
Reference [23].
9.4.3 Second selective medium
After the appropriate time, examine the plates for the presence of colonies which are considered to be
presumptive Listeria spp. or L. monocytogenes, based on their characteristics for the type of medium
used (B.4). See Annex E for more information.
9.5 Confirmation of Listeria monocytogenes or Listeria spp.
9.5.1 Selection of colonies for confirmation
9.5.1.1 For confirmation of presumptive L. monocytogenes, take at least one colony presumed to be
L. monocytogenes (see 9.4.2 and 9.4.3). One confirmed isolate per sample is sufficient. If the first colony
is negative take further colonies presumed to be L. monocytogenes from selective medium (up to a
maximum of five colonies from each plate of each selective medium).
Streak the selected colonies onto the surface of pre-dried plates of a non-selective agar, for example
blood agar, nutrient agar, tryptone soya yeast ext
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 11290-1
Deuxième édition
2017-05
Microbiologie de la chaîne
alimentaire — Méthode horizontale
pour la recherche et le
dénombrement de Listeria
monocytogenes et de Listeria spp. —
Partie 1:
Méthode de recherche
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the
detection and enumeration of Listeria monocytogenes and of
Listeria spp. —
Part 1: Detection method
Numéro de référence
ISO 11290-1:2017(F)
©
ISO 2017
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ISO 11290-1:2017(F)
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ISO 11290-1:2017(F)
Sommaire Page
Avant-propos .v
Introduction .vii
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
4.1 Généralités . 2
4.2 Enrichissement primaire en milieu d’enrichissement sélectif liquide avec
concentration réduite en agents sélectifs (bouillon Fraser-demi) . 2
4.3 Enrichissement secondaire en milieu d’enrichissement sélectif liquide avec
concentration complète en agents sélectifs (bouillon Fraser) . 3
4.4 Isolement et identification . 3
4.5 Confirmation . 3
5 Milieux de culture et réactifs . 3
6 Matériel et consommables . 3
7 Échantillonnage . 4
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
9 Mode opératoire. 4
9.1 Prise d’essai et suspension mère. 4
9.2 Enrichissement primaire . 4
9.3 Enrichissement secondaire . 5
9.4 Isolement et identification . 5
9.4.1 Généralités . 5
9.4.2 Gélose Listeria selon Ottaviani et Agosti . 5
9.4.3 Deuxième milieu sélectif . 6
9.5 Confirmation de Listeria monocytogenes ou de Listeria spp. . 6
9.5.1 Sélection des colonies pour confirmation . 6
9.5.2 Confirmation de L. monocytogenes . 7
9.5.3 Confirmation de Listeria spp. . 10
9.6 Interprétation des propriétés morphologiques et physiologiques et des
réactions biochimiques.11
9.7 Caractérisation supplémentaire de souches isolées (facultative) .11
10 Expression des résultats.12
11 Caractéristiques de performance de la méthode .12
11.1 Études de validation de la méthode .12
11.2 Sensibilité .12
11.3 Spécificité .12
11.4 Niveau de détection (LOD ) .12
50
12 Rapport d’essai .12
13 Assurance qualité .12
Annexe A (normative) Logigramme du mode opératoire .13
Annexe B (normative) Composition et préparation des milieux de culture et des réactifs .14
Annexe C (informative) Distinction de Listeria spp. des autres genres .27
Annexe D (informative) Réactions pour l’identification des espèces de Listeria .28
Annexe E (informative) Géloses sélectives pour Listeria .30
© ISO 2017 – Tous droits réservés iii
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ISO 11290-1:2017(F)
Annexe F (informative) Résultats des études interlaboratoires pour la recherche de
Listeria monocytogenes .31
Bibliographie .36
iv © ISO 2017 – Tous droits réservés
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ISO 11290-1:2017(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: w w w . i s o .org/ iso/ fr/ avant -propos .html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique CEN/TC 275, Analyse des produits alimentaires
— Méthodes horizontales, du Comité européen de normalisation (CEN) en collaboration avec le
comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie, de l’Organisation
internationale de normalisation (ISO), conformément à l’accord de coopération technique entre l’ISO et
le CEN (Accord de Vienne).
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 11290-1:1996) qui a fait l’objet
d’une révision technique. Elle intègre également l’amendement ISO 11290-1:1996/Amd.1:2004.
Les principales modifications par rapport à ISO 11290-1:1996 sont les suivantes.
— La recherche de Listeria monocytogenes a été modifiée comme indiqué ci-dessous.
— Enrichissement primaire en bouillon Fraser-demi: incubation pendant 25 h ± 1 h.
[29]
— Enrichissement secondaire en bouillon Fraser: incubation pendant 24 h ± 2 h .
— Les bouillons Fraser-demi et Fraser peuvent être réfrigérés avant le transfert en bouillon Fraser ou
l’isolement sur la gélose sélective pendant 72 h maximum.
— Stockage des boîtes d’isolement: les boîtes incubées peuvent être réfrigérées pendant deux jours
maximum avant d’être lues.
— L’aspect microscopique pour la confirmation est facultatif si la gélose d’isolement permet de
distinguer les Listeria spp. pathogènes et non pathogènes.
— Le test de CAMP et la réaction de la catalase sont facultatifs.
— Inclusion de nouvelles caractéristiques de performance.
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ISO 11290-1:2017(F)
— En outre, la détection des Listeria spp. a été incluse dans le domaine d’application et le titre modifié
en conséquence.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 11290 est disponible sur le site web de l’ISO.
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ISO 11290-1:2017(F)
Introduction
Les principales modifications, énumérées dans l’avant-propos, introduites dans ce document
[28]
comparativement à l’ISO 11290-1:1996, sont considérées comme majeures (voir l’ISO 17468 ). Les
modifications techniques ont été évaluées et considérées comme n’ayant pas d’effet significatif sur les
caractéristiques de performance de la méthode ou sur les résultats des essais.
En raison de la grande diversité des produits alimentaires, il est possible que cette méthode horizontale
ne convienne pas exactement, dans tous ses détails, pour certains produits pour lesquels il peut être
nécessaire d’employer des méthodes différentes ou spécifiques. Néanmoins, cette méthode horizontale
est destinée à être appliquée chaque fois qu’il sera possible et l’on n’aura recours à des dérogations que
pour des raisons techniques justifiées.
Lorsque le présent document sera réexaminé, il sera tenu compte de tous les renseignements disponibles
à ce moment-là, à savoir dans quelle mesure cette méthode horizontale aura été suivie et les raisons
pour lesquelles il aura été nécessaire d’y déroger dans le cas de produits particuliers.
L’harmonisation des méthodes d’essai ne peut être réalisée de façon immédiate et, pour certains
groupes de produits, des Normes internationales et/ou des normes nationales qui ne concordent pas
avec cette présente méthode horizontale existent peut-être déjà. Lorsque de telles normes viendront en
révision, il serait souhaitable de les aligner avec le présent document et de ne conserver que les seules
divergences justifiées indispensables pour des raisons techniques bien établies.
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NORME INTERNATIONALE ISO 11290-1:2017(F)
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode
horizontale pour la recherche et le dénombrement de
Listeria monocytogenes et de Listeria spp. —
Partie 1:
Méthode de recherche
AVERTISSEMENT — Afin de préserver la santé du personnel de laboratoire, il est essentiel
que les essais de détection des L. monocytogenes et Listeria spp. ne soient réalisés que dans
des laboratoires équipés à cet effet, sous le contrôle d’un microbiologiste expérimenté, et
qu’un grand soin soit pris lors de l’élimination de tous les éléments incubés. Il convient que
les utilisateurs du présent document maîtrisent les pratiques courantes de laboratoire. Le
présent document ne prétend pas aborder la totalité des aspects liés à la sécurité qui pourraient
découler de son utilisation. Il est de la responsabilité de l’utilisateur d’établir les pratiques de
sécurité et de santé appropriées. Il est en particulier fortement recommandé que les essais de
recherche de L. monocytogenes soient réalisés dans des laboratoires appliquant des conditions
de biosécurité de niveau 2. II est fortement recommandé que le personnel de laboratoire féminin
soit informé du risque particulier pour le fœtus en développement dû à l’infection de la mère par
le biais d’une exposition aux L. monocytogenes et Listeria spp., et que les femmes enceintes ainsi
que le personnel de laboratoire souffrant de pathologies sous-jacentes ou affectant l’immunité
cellulaire ne manipulent pas les cultures de L. monocytogenes et Listeria spp.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode horizontale pour:
— la recherche de L. monocytogenes; et
— la recherche de Listeria spp. (y compris L. monocytogenes).
Le présent document s’applique aux:
— produits destinés à la consommation humaine ou à l’alimentation animale; et
— échantillons de l’environnement de production et de distribution des aliments.
Il est possible que cette méthode ne permette pas de détecter ou de confirmer certaines espèces de
[5],[10],[12],[14],[25],[26],[27]
Listeria récemment décrites .
2 Références normatives
Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des
exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 6887 (toutes les parties), Microbiologie de la chaîne alimentaire — Préparation des échantillons, de la
suspension mère et des dilutions décimales en vue de l’examen microbiologique
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations
ISO 11133, Microbiologie des aliments, des aliments pour animaux et de l’eau — Préparation, production,
stockage et essais de performance des milieux de culture
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ISO 11290-1:2017(F)
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/ .
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse http:// www .iso .org/ obp.
3.1
Listeria monocytogenes
micro-organismes formant des colonies typiques sur des milieux sélectifs solides et possédant les
caractéristiques morphologiques, physiologiques et biochimiques décrites lorsque les essais sont
effectués conformément au présent document
3.2
recherche de Listeria monocytogenes
détermination de la détection ou non-détection de Listeria monocytogenes (3.1), dans une masse
ou un volume déterminé(e) de produit ou sur une surface spécifiée, lorsque les essais sont effectués
conformément au présent document
3.3
Listeria spp.
micro-organismes formant des colonies typiques sur des milieux sélectifs solides et possédant les
caractéristiques morphologiques, physiologiques et biochimiques décrites lorsque les essais sont
effectués conformément au présent document
3.4
recherche de Listeria spp.
détermination de la détection ou non-détection de Listeria spp. (3.3), dans une masse ou un volume
déterminé(e) de produit ou sur une surface spécifiée, lorsque les essais sont effectués conformément au
présent document
4 Principe
4.1 Généralités
Les Listeria spp. peuvent être présentes en petit nombre et sont souvent accompagnées d’un nombre
beaucoup plus élevé d’autres micro-organismes; un enrichissement sélectif est donc nécessaire. De plus,
il est aussi nécessaire de rechercher les Listeria spp. ayant subi un stress et le milieu d’enrichissement
sélectif primaire, présentant une concentration réduite en inhibiteurs, permet de remplir au moins en
partie cette fonction.
NOTE La présence de L. monocytogenes peut être masquée par la présence d’autres espèces de Listeria, en
particulier L. innocua ou L. ivanovii.
Dans le cadre du présent document, la recherche de L. monocytogenes et de Listeria spp. nécessite quatre
phases successives, comme décrit dans le logigramme de l’Annexe A.
4.2 Enrichissement primaire en milieu d’enrichissement sélectif liquide avec
concentration réduite en agents sélectifs (bouillon Fraser-demi)
Inoculation d’un milieu d’enrichissement sélectif primaire, contenant la moitié des concentrations
d’acriflavine et d’acide nalidixique (bouillon Fraser-demi, voir B.1), qui est également utilisé comme
diluant pour la prise d’essai (9.1).
Incubation de la suspension mère à 30 °C pendant 24 h à 26 h.
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ISO 11290-1:2017(F)
4.3 Enrichissement secondaire en milieu d’enrichissement sélectif liquide avec
concentration complète en agents sélectifs (bouillon Fraser)
Inoculation du milieu d’enrichissement secondaire liquide complet (bouillon Fraser) avec une culture
obtenue comme indiqué en 4.2.
[29]
Incubation du bouillon Fraser à 37 °C pendant 24 h .
4.4 Isolement et identification
À partir des cultures obtenues en 4.2 et 4.3, isolement sur les deux milieux sélectifs solides:
— gélose Listeria selon Ottaviani et Agosti (voir Références [16] et [17] et B.3);
— tout autre milieu sélectif solide choisi par le laboratoire, complémentaire à la gélose Listeria selon
Ottaviani et Agosti, utilisant un substrat et/ou principe différent de celui utilisé dans la gélose
Listeria selon Ottaviani et Agosti (voir B.4). Voir l’Annexe E pour des informations sur les milieux.
Incubation de la gélose Listeria selon Ottaviani et Agosti à 37 °C pendant un total de 48 h. Si des colonies
présumées de L. monocytogenes ou de Listeria spp. sont visibles à 24 h, l’incubation peut être arrêtée à
ce stade. Incubation du deuxième milieu sélectif à la température appropriée et lecture après le temps
approprié.
4.5 Confirmation
Repiquage des colonies présumées de L. monocytogenes ou de Listeria spp., isolées comme décrit en 4.4,
et confirmation par des essais morphologiques et/ou biochimiques appropriés.
5 Milieux de culture et réactifs
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir l’ISO 11133.
La composition et les essais de performance des milieux de culture et des réactifs et leur préparation
sont décrits à l’Annexe B.
6 Matériel et consommables
Matériel de microbiologie courant (comme précisé dans l’ISO 7218) et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Appareil pour la stérilisation en chaleur sèche (four) ou en chaleur humide (autoclave).
Comme spécifié dans l’ISO 7218.
6.2 Enceinte de séchage ou étuve, pouvant être maintenue à une température comprise entre 25 °C
et 50 °C.
6.3 Étuves, réglables à 30 °C ± 1 °C, 37 °C ± 1 °C et à 25 °C ± 1 °C (facultatif).
6.4 Bain d’eau, réglable de 47 °C à 50 °C.
6.5 Anses bouclées stériles d’environ 3 mm de diamètre ou de 10 µl, et aiguille ou fil à ensemencer.
6.6 pH-mètre, ayant une précision de lecture de ±0,01 unité pH à 25 °C, permettant de réaliser des
mesures précises à ±0,1 unité pH.
6.7 Pipettes graduées ou pipettes automatiques, de capacités nominales de 1 ml et 10 ml.
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6.8 Boîtes de Petri, par exemple de 90 mm de diamètre.
6.9 Microscope, de préférence à contraste de phase, avec lames et lamelles couvre-objet.
6.10 Réfrigérateur, réglable à 5 °C ± 3 °C.
7 Échantillonnage
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode indiquée dans le présent document. S’il n’existe aucune
Norme internationale spécifique pour l’échantillonnage du produit concerné, il convient que les parties
[3]
concernées se mettent d’accord à ce sujet. Pour les échantillons d’aliments, consulter l’ISO/TS 17728 .
[2]
Pour les échantillons d’environnement, consulter ISO 18593 et voir la Référence [24].
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, non endommagé ou
modifié lors du transport ou du stockage (voir l’ISO 7218).
8 Préparation de l’échantillon pour essai
Préparer l’échantillon pour essai conformément à la Norme internationale spécifique appropriée
[2]
au produit concerné [voir l’ISO 6887 (toutes les parties) et l’ISO 18593 ]. S’il n’existe pas de Norme
internationale spécifique, il est recommandé que les parties concernées se mettent d’accord à ce sujet.
9 Mode opératoire
9.1 Prise d’essai et suspension mère
Voir l’ISO 6887 (toutes les parties) et la Norme internationale spécifique appropriée au produit concerné.
Pour la préparation de la suspension mère, utiliser comme diluant le milieu d’enrichissement primaire
sélectif spécifié en B.1 (bouillon Fraser-demi).
En général, pour préparer la suspension mère, ajouter une prise d’essai de 25 g ou 25 ml dans 225 g ou
225 ml du milieu d’enrichissement primaire sélectif (B.1), de façon à obtenir une dilution par dix, puis
homogénéiser. Préchauffer le milieu d’enrichissement primaire sélectif à température ambiante avant
utilisation.
Le présent document est validé pour des prises d’essai allant jusqu’à 25 g ou ml. Une prise d’essai plus
petite peut être utilisée sans validation ou vérification supplémentaire, dans la mesure où le rapport
entre le bouillon d’enrichissement primaire et la prise d’essai demeure le même. Il est permis d’utiliser
une prise d’essai plus importante que celle validée à l’origine si une étude de validation/vérification a
démontré l’absence d’effets indésirables sur la détection de L. monocytogenes ou Listeria spp.
NOTE 1 Une validation peut être effectuée conformément au document approprié de l’ISO 16140 (toutes les
[1]
parties) . La vérification du regroupement des échantillons peut être réalisée conformément au protocole
décrit dans l’ISO 6887-1:2017, Annexe D (protocole de vérification du regroupement des échantillons pour les
essais qualitatifs). Voir les Références [21] et [22] qui fournissent des informations sur le cas particulier du
regroupement des échantillons dans le cas de Listeria.
NOTE 2 Pour les grandes quantités, il est recommandé de préchauffer le milieu d’enrichissement primaire
sélectif à 30 °C ± 1 °C avant de le mélanger avec la prise d’essai.
9.2 Enrichissement primaire
Incuber le milieu d’enrichissement primaire (bouillon Fraser-demi, voir B.1), préparé selon 9.1, à
30 °C (6.3) pendant 25 h ± 1 h.
NOTE 1 Une coloration noire peut se développer au cours de l’incubation.
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NOTE 2 Il est possible de stocker à 5 °C (6.10) l’échantillon préenrichi après incubation avant le transfert dans
le bouillon Fraser pendant un maximum de 72 h.
(Voir la Référence [20].)
9.3 Enrichissement secondaire
9.3.1 Après incubation de la suspension mère (enrichissement primaire) pendant 25 h ± 1 h (9.2),
transférer 0,1 ml de la culture obtenue en 9.2 (quelle que soit sa coloration) dans un tube ou un flacon
contenant 10 ml de milieu d’enrichissement secondaire (bouillon Fraser) (B.2).
9.3.2 Incuber le milieu inoculé (9.3.1) pendant 24 h ± 2 h à 37 °C (6.3).
NOTE En cas de recherche de Listeria spp. autre que Listeria monocytogenes, 24 h supplémentaires
d’incubation peuvent permettre de récupérer davantage d’espèces.
9.4 Isolement et identification
9.4.1 Généralités
9.4.1.1 À partir de la culture d’enrichissement primaire (9.2) incubée pendant 25 h ± 1 h à 30 °C
(6.3), inoculer, à l’aide d’une anse bouclée (6.5), la surface du premier milieu d’isolement sélectif (gélose
Listeria selon Ottaviani et Agosti (B.3), pour obtenir des colonies bien séparées.
Procéder de la même façon avec le deuxième milieu d’isolement sélectif choisi (B.4).
NOTE Les bouillons Fraser-demi et Fraser peuvent être réfrigérés à 5 °C (6.10) avant l’isolement sur la gélose
[20]
sélective pendant 72 h maximum .
9.4.1.2 À partir du milieu d’enrichissement secondaire incubé pendant 24 h ± 2 h à 37 °C (6.3) (9.3.2),
répéter le mode opératoire décrit en 9.4.1.1 avec les deux milieux d’isolement sélectifs.
9.4.1.3 Retourner les boîtes de Petri obtenues en 9.4.1.1 et 9.4.1.2 et les placer dans une étuve réglée
à 37 °C (6.3) pour la gélose Listeria selon Ottaviani et Agosti (B.3). Pour le deuxième milieu sélectif (B.4),
suivre les instructions du fabricant.
9.4.1.4 Pour la gélose Listeria selon Ottaviani et Agosti, incuber pendant un total de 48 h ± 2 h. Si des
colonies présumées de L. monocytogenes ou des Listeria spp. sont visibles à 24 h ± 2 h, l’incubation peut
être arrêtée à ce stade. Pour la deuxième gélose sélective, incuber pendant le temps approprié. Examiner
les boîtes (9.4.1.3) afin de rechercher la présence de colonies présumées de L. monocytogenes ou de
Listeria spp.
NOTE Après incubation, les boîtes peuvent être réfrigérées à 5 °C (6.10) pendant 48 h maximum avant
d’être lues.
9.4.2 Gélose
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.