ISO 20631:2024
(Main)Infant formula and adult nutritionals — Determination of total folate content by trienzyme extraction and ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS)
Infant formula and adult nutritionals — Determination of total folate content by trienzyme extraction and ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS)
This document specifies a method for the analysis of total folate in infant formula and adult nutritionals using trienzyme extraction and ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS).
Préparations pour nourrissons et produits nutritionnels pour adultes — Détermination de la teneur en folates totaux par extraction trienzymatique et chromatographie liquide à ultra performance (CLUHP) couplée à une spectrométrie de masse en tandem (SM/SM)
General Information
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Standards Content (Sample)
International
Standard
ISO 20631
First edition
Infant formula and adult
2024-07
nutritionals — Determination
of total folate content by
trienzyme extraction and
ultra high performance liquid
chromatography tandem mass
spectrometry (UHPLC-MS/MS)
Préparations pour nourrissons et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de la teneur en folates totaux par
extraction trienzymatique et chromatographie liquide à ultra
performance (CLUHP) couplée à une spectrométrie de masse en
tandem (SM/SM)
Reference number
© ISO 2024
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents and materials . 2
5.1 List of reagents .2
5.2 Preparation of solvent for standard solutions .3
5.3 Preparation of folate standard solutions .4
5.4 Preparation of folate internal standard stock solutions .5
5.5 Preparation of calibration standard solutions .6
5.6 Preparation of substrate solution to test plasma conjugase activity .7
5.7 Reagent for folate analysis .8
6 Apparatus . 9
7 Procedure .10
7.1 Sample preparation .10
7.1.1 Sample processing to make them homogenous .10
7.1.2 Reconstitution of powder sample into liquid .11
7.2 Extraction .11
7.3 Extract purification .11
7.4 Instrumental analysis . 12
7.4.1 Analysis of instrument blank, calibration standards, method blank and samples . 12
7.4.2 UHPLC conditions and MS parameters for different systems . 12
8 Calculations .13
8.1 Calculation of ratios of peak areas of the folate compounds to the respective internal
standard peak areas . 13
8.2 Calibration curve . 13
8.3 Calculation of concentration of folate compounds in the method blank . 13
8.4 Calculation of concentration of folate compounds in the sample extracts . 13
8.5 Calculation of folate compounds and total folate in reconstituted or RTF samples
(μg/100 g) .14
8.6 Calculation of total folate in powder samples (μg/100 g) as-is basis . 15
8.7 Calculation of folic acid nanograms released in the conjugase test . 15
8.8 Calculation of per cent conversion of Pte-Glu3 to folic acid in the conjugase assay . 15
9 Precision .15
9.1 General . 15
9.2 Repeatability . 15
9.3 Reproducibility .16
Annex A (informative) Precision data . 17
Bibliography .18
iii
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee
has been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types
of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the
ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received notice of (a)
patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that
this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, in collaboration with
AOAC INTERNATIONAL. It is being published by ISO and separately by AOAC INTERNATIONAL. The method
described in this document is equivalent to the AOAC Official Method 2011.06 Total Folate in Infant Formula
and Adult Nutritionals by Trienzyme Extraction and LC-MS/MS Quantitation.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
International Standard ISO 20631:2024(en)
Infant formula and adult nutritionals — Determination
of total folate content by trienzyme extraction and ultra
high performance liquid chromatography tandem mass
spectrometry (UHPLC-MS/MS)
1 Scope
This document specifies a method for the analysis of total folate in infant formula and adult nutritionals
using trienzyme extraction and ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry
(UHPLC-MS/MS).
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
adult nutritional
nutritionally complete, specially formulated food, consumed in liquid form, which may constitute the sole
source of nourishment, made from any combination of milk, soy, rice, whey, hydrolysed protein, starch and
amino acids, with and without intact protein
3.2
infant formula
breast-milk substitute specially manufactured to satisfy, by itself, the nutritional requirements of infants
during the first month of life up to the introduction of appropriate complementary feeding
[SOURCE: Codex Standard 72-1981]
4 Principle
Folates in a sample are extracted in a buffer (pH = 6,0) containing internal standards by treatments with
protease, amylase and rat plasma conjugase (trienzyme digestion). The extract is purified and concentrated
using a weak anion exchange (WAX) solid phase extraction (SPE). Polyglutamate forms of folates in the
sample are deconjugated to monoglutamates during the extraction and are analysed by UHPLC-MS/MS. Folic
acid, 5-methyl-tetrahydrofolate (5-CH -THF) and, 5-formyl-tetrahydrofolate (5-CHO-THF) are quantified,
and total folate is estimated and expressed as folic acid. Isotopically labelled folic acid ( C-folic acid), 5-CH -
13 13
THF ( C-5-CH -THF) and 5-CHO-THF ( C-5-CHO-THF) are used as the internal standards (IS).
5 Reagents and materials
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and distilled
or demineralized water or water of equivalent purity.
Most of the chemicals used are LC-MS grade unless specified. Product numbers and suppliers, when listed,
reflect those used in validation. Equivalent chemicals can be used.
All chemicals used in preparation of standards were stored at a minimum at −20 °C or as directed by the
manufacturer. Because folate compounds are light sensitive, all samples and standards shall be prepared,
handled and stored in the dark or under yellow-shielded lighting or UV-filtered lighting. If standards and
samples shall be transported through or into an area without UV-filtered lighting, they shall be tightly
wrapped in foil.
Store chemicals per manufacturer guidelines or s
...
Norme
internationale
ISO 20631
Première édition
Préparations pour nourrissons
2023-12
et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de
la teneur en folates totaux par
extraction trienzymatique et
chromatographie liquide à ultra
performance (CLUHP) couplée à une
spectrométrie de masse en tandem
(SM/SM)
Infant formula and adult nutritionals — Determination of
total folate content by trienzyme extraction and ultra high
performance liquid chromatography tandem mass spectrometry
(UHPLC-MS/MS)
Numéro de référence
ISO 20631:2023(fr) © ISO 2023
PROJET FINAL
ISO 20631:2023(fr)
Norme
internationale
ISO/FDIS 20631.2
ISO/TC 34
Préparations pour nourrissons
Secrétariat: AFNOR
et produits nutritionnels pour
Début de vote:
adultes — Détermination de la teneur
2024-04-04
en folates totaux par extraction
Vote clos le:
trienzymatique et chromatographie
2024-05-30
liquide à ultra performance (CLUHP)
couplée à une spectrométrie de
masse en tandem (SM/SM)
Infant formula and adult nutritionals — Determination of
total folate content by trienzyme extraction and ultra high
performance liquid chromatography tandem mass spectrometry
(UHPLC-MS/MS)
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT
INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSERVATIONS,
NOTIFICATION DES DROITS DE PROPRIÉTÉ DONT ILS
AURAIENT ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE.
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES FINS
© ISO 2023 INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET COM-MERCIALES,
AINSI QUE DU POINT DE VUE DES UTILISATEURS, LES
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE CONSIDÉRÉS
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
DU POINT DE VUE DE LEUR POSSI BILITÉ DE DEVENIR DES
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
NORMES POUVANT
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA RÉGLEMENTATION
NATIONALE.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
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Web: www.iso.org
Publié en Suisse Numéro de référence
ISO/FDIS 20631.2:2024(fr) © ISO 2024
ii
ISO/FDIS 20631.2:2024(fr)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d'application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 1
5 Réactifs et matériaux . 2
5.1 Liste de réactifs.2
5.2 Préparation du solvant pour solutions étalons .3
5.3 Préparation des solutions étalons de folates .4
5.4 Préparation des solutions mères d’étalons internes de folates .5
5.5 Préparation des solutions d’étalonnage .7
5.6 Préparation de la solution de substrat pour évaluer l’activité conjugase de plasma .8
5.7 Réactif pour l’analyse des folates .8
6 Appareillage . 10
7 Mode opératoire .11
7.1 Préparation des échantillons .11
7.1.1 Traitement des échantillons pour les rendre homogènes.11
7.1.2 Reconstitution de l'échantillon en poudre en liquide .11
7.2 Extraction .11
7.3 Purification des échantillons . 12
7.4 Analyse instrumentale . 12
7.4.1 Analyse du blanc d’instrument, des solutions d’étalonnage, du blanc de méthode
et des échantillons . 12
7.4.2 Conditions de CLUHP et paramètres de SM pour différents systèmes . 12
8 Calculs . 14
8.1 Calcul des rapports des aires de pics des vitamères de folates aux aires de pics des
étalons internes .14
8.2 Courbe d’étalonnage .14
8.3 Calcul de la concentration des vitamères de folates dans le blanc de méthode .14
8.4 Calcul de la concentration des vitamères de folates dans les échantillons .14
8.5 Calcul de la concentration des vitamères de folates et des folates totaux dans des
échantillons reconstitués ou RTF (µg/100 g) . 15
8.6 Calcul de la concentration de folates totaux dans les échantillons en poudre (μg/100 g)
en l'état .16
8.7 Calcul de la concentration d’acide folique (en nanogrammes) libéré lors du test de la
conjugase .16
8.8 Calcul du pourcentage de conversion du Pte-Glu3 en acide folique lors du test de la
conjugase .16
9 Fidélité . 17
9.1 Généralités .17
9.2 Répétabilité .17
9.3 Reproductibilité .17
Annexe A (informative) Données de fidélité . 19
Bibliographie .20
iii
ISO/FDIS 20631.2:2024(fr)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de propriété revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n'avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l'adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de
tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion de
l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, en collaboration
avec l’AOAC INTERNATIONAL. Il est publié par l’ISO, et séparément par l’AOAC INTERNATIONAL. La méthode
décrite dans le présent document est l’équivalent de la méthode officielle de l’AOAC 2011.06, Total Folate in
Infant Formula and Adult Nutritionals by Trienzyme Extraction and LC-MS/MS Quantitation.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv
PROJET FINAL Norme internationale ISO/FDIS 20631.2:2024(fr)
Préparations pour nourrissons et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de la teneur en folates totaux par
extraction trienzymatique et chromatographie liquide à ultra
performance (CLUHP) couplée à une spectrométrie de masse
en tandem (SM/SM)
1 Domaine d'application
Le présent document spécifie une méthode de détermination de la teneur en folates totaux dans les
préparations pour nourrissons et produits nutritionnels pour adultes par extraction trienzymatique et
chromatographie liquide à ultra haute performance (CLUHP) couplée à une spectrométrie de masse en
tandem (SM/SM).
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20631
First edition
Infant formula and adult
nutritionals — Determination of
total folate content by trienzyme
extraction and ultra high performance
liquid chromatography tandem mass
spectrometry (UHPLC-MS/MS)
Préparations pour nourrissons et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de la teneur en folates totaux par
extraction trienzymatique et chromatographie liquide à ultra haute
performance (CLUHP) couplée à une spectrométrie de masse en
tandem (SM/SM)
PROOF/ÉPREUVE
Reference number
ISO 20631:2023(E)
ISO 20631:2023(E)
© ISO 2023
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
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Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii
PROOF/ÉPREUVE © ISO 2023 – All rights reserved
ISO 20631:2023(E)
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents and materials . 2
5.1 List of reagents . 2
5.2 Preparation of solvent for standard solutions . 3
5.3 Preparation of folate standard solutions . 4
5.4 Preparation of folate internal standard stock solutions . 5
5.5 Preparation of calibration standard solutions . 7
5.6 Preparation of substrate solution to test plasma conjugase activity . 8
5.7 Reagent for folate analysis . 8
6 Apparatus .10
7 Procedure .11
7.1 Sample preparation . 11
7.1.1 Sample processing to make them homogenous . 11
7.1.2 Reconstitution of powder sample into liquid . 11
7.2 Extraction . 11
7.3 Extract purification .12
7.4 Instrumental analysis . 12
7.4.1 Analysis of instrument blank, calibration standards, method blank and
samples . 12
7.4.2 UHPLC conditions and MS parameters for different systems .12
8 Calculations .14
8.1 Calculation of ratios of peak areas of the folate compounds to the respective
internal standard peak areas . 14
8.2 Calibration curve . 14
8.3 Calculation of concentration of folate compounds in the method blank . 14
8.4 Calculation of concentration of folate compounds in the sample extracts . 14
8.5 Calculation of folate compounds and total folate in reconstituted or RTF samples
(μg/100 g) . 14
8.6 Calculation of total folate in dry samples (μg/100 g) as-is basis .15
8.7 Calculation of folic acid nanograms released in the conjugase test . 15
8.8 Calculation of per cent conversion of Pte-Glu3 to folic acid in the conjugase assay . 16
9 Precision .16
9.1 General . 16
9.2 Repeatability . 16
9.3 Reproducibility . 16
Annex A (informative) Precision data .18
Bibliography .19
iii
ISO 20631:2023(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use
of (a) patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed
patent rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received
notice of (a) patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are
cautioned that this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent
database available at www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all
such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, in collaboration with
AOAC INTERNATIONAL. It is being published by ISO and separately by AOAC INTERNATIONAL. The
method described in this document is equivalent to the AOAC Official Method 2011.06 Total Folate in
Infant Formula and Adult Nutritionals by Trienzyme Extraction and LC-MS/MS Quantitation.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
PROOF/ÉPREUVE © ISO 2023 – All rights reserved
INTERNATIONAL STANDARD ISO 20631:2023(E)
Infant formula and adult nutritionals — Determination
of total folate content by trienzyme extraction and ultra
high performance liquid chromatography tandem mass
spectrometry (UHPLC-MS/MS)
1 Scope
This document specifies a method for the analysis of total folate in infant formula and adult nutritionals
using trienzyme extraction and ultra high performance liquid chromatography tandem mass
spectrometry (UHPLC-MS/MS) .
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
adult nutritional
nutritionally complete, specially formulated food, consumed in liquid form, which may constitute the
sole source of nourishment, made from any combination of milk, soy, rice, whey, hydrolysed protein,
starch and amino acids, with and without intact protein
3.2
infant formula
breast-milk substitute specially manufactured to satisfy, by itself, the nutritional requirements of
infants during the first month of life up to the introduction of appropriate complementary feeding
[SOURCE: Codex Standard 72-1981]
4 Principle
Folates in a sample are extracted in a buffer (pH = 6,0) containing internal standards by treatments
with protease, amylase and rat plasma conjugase (trienzyme digestion). The extract is purified and
concentrated using a weak anion exchange (WAX) solid phase extraction (SPE). Polyglutamate forms
of folates in the sample are deconjugated to monoglutamates during the extraction and are analysed
by UHPLC-MS/MS. Folic acid, 5-methyl-tetrahydrofolate (5-CH -THF) and, 5-formyl-tetrahydrofolate
(5-CHO-THF) are quantified, and total folate is estimated and expressed as folic acid. Isotopically
13 13 13
labelled folic acid ( C-folic acid), 5-CH -THF ( C-5-CH THF) and 5-CHO-THF ( C-5-CHO-THF) are
3 3-
used as the internal standards (IS).
ISO 20631:2023(E)
5 Reagents and materials
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
Most of the chemicals used are LC-MS grade unless specified. Product numbers and suppliers, when
listed, reflect those used in validation. Equivalent chemicals can be used.
All chemicals used in preparation of standards were stored at a minimum at −20 °C or as directed by
the manufacturer. Because folate compounds are light sensitive, all samples and standards shall be
prepared, handled and stored in the dark or under yellow-shielded lighting or UV-filtered lighting. If
standards and samples shall be transported through or into an area without UV-filtered lighting, they
shall be tightly wrapped in foil.
Store chemicals per manufacturer guidelines or set conventions.
5.1 List of reagents
1)
5.1.1 Folic acid (standard) (FA), Schircks Laboratories, Cat. No. 16.203 .
5.1.2 (6R,S)-5-Methyl-5,6,7,8-Tetrahydrofolic acid (5-CH -THF), calcium salt, Schircks
1)
Laboratories, Cat. No. 16.
...
DRAFT INTERNATIONAL STANDARD revISO/DIS 20631:2023(E)
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revISO/DIS ISO 20631:2023(E)
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ISO/TC 34
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Infant formula and adult nutritionals — Determination of total folate content by trienzyme
Font: Bold
extraction and ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry
(UHPLC-MS/MS)
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Style Definition: Smart Hyperlink2
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revISO/DIS ISO 20631:2023(E)
Formatted: Font: 11.5 pt, Bold
Formatted: Normal, Space After: 36 pt
Formatted: Font: 12 pt
Formatted
Formatted: Font: 11 pt, Font color: Blue, English (United
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation,
Kingdom)
no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, Formatted: std_publisher, Font: 11 pt, Font color: Blue,
English (United Kingdom)
without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
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text, Don't adjust space between Asian text and
ISO Copyright Office
numbers
Formatted: Font: 11 pt, Font color: Blue, English (United
CP 401 • CH-1214 Vernier, Geneva
Kingdom)
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2 © ISO 2023 – All rights reserved
ii © ISO 2023 – All rights reserved
revISO/DIS ISO 20631:2023(E)
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Contents
Foreword . iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents and materials . 2
5.1 List of reagents . 2
5.2 Preparation of solvent for standard solutions . 3
5.3 Preparation of folate standard solutions . 4
5.4 Preparation of folate internal standard stock solutions . 5
5.5 Preparation of calibration standard solutions . 7
5.6 Preparation of substrate solution to test plasma conjugase activity . 8
5.7 Reagent for folate analysis . 8
6 Apparatus . 9
7 Procedure . 11
7.1 Sample preparation . 11
7.1.1 Sample processing to make them homogenous . 11
7.1.2 Reconstitution of powder sample into liquid . 11
7.2 Extraction . 11
7.3 Extract purification . 11
7.4 Instrumental analysis . 12
7.4.1 Analysis of instrument blank, calibration standards, method blank and samples . 12
7.4.2 LC conditions and MS parameters for different systems . 12
8 Calculations . 13
8.1 Calculation of ratios of peak areas of the folate compounds to the respective internal
standard peak areas . 14
8.2 Calibration curve . 14
8.3 Calculation of concentration of folate compounds in the method blank . 14
8.4 Calculation of concentration of folate compounds in the sample extracts. 14
8.5 Calculation of folate compounds and total folate in reconstituted or RTF samples
(μg/100 g) . 14
8.6 Calculation of total folate in dry samples (μg/100 g) as-is basis . 15
8.7 Calculation of folic acid nanograms released in the conjugase test . 15
8.8 Calculation of per cent conversion of Pte-Glu3 to folic acid in the conjugase assay . 16
9 Precision . 16
9.1 General . 16
9.2 Repeatability . 16
9.3 Reproducibility . 16
Formatted: Font: 11 pt
Annex A (informative) Precision data . 18
Formatted: Line spacing: single
revISO/DIS ISO 20631:2023(E)
Formatted: Font: 11.5 pt, Bold
Formatted: Normal, Space After: 36 pt
Formatted: Font: 12 pt
Bibliography . 19
Formatted: Font: 11 pt
Formatted: Line spacing: single
4 © ISO 2023 – All rights reserved
iv © ISO 2023 – All rights reserved
revISO/DIS ISO 20631:2023(E)
Formatted: Font: 11.5 pt, Bold
Formatted: Normal, Space After: 36 pt
Formatted: Font: 12 pt
Foreword . 7
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents and materials . 2
5.1 List of reagents . 2
5.2 Preparation of solvent for standard solutions . 3
5.3 Preparation of folate standard solutions . 4
5.4 Preparation of folate internal standard stock solutions . 5
5.5 Preparation of calibration standard solutions . 7
Table 1 — Preparation of folate calibration standard solutions . 8
5.6 Preparation of substrate solution to test plasma conjugase activity . 8
5.7 Reagent for folate analysis . 9
6 Apparatus . 10
7 Procedure . 12
7.1 Sample preparation . 12
7.1.1 Sample processing to make them homogenous . 12
7.1.2 Reconstitution of powder sample into liquid . 12
7.2 Extraction . 12
7.3 Extract purification . 13
7.4 Instrumental analysis . 13
7.4.1 Analysis of instrument blank, calibration standards, method blank and samples . 13
7.4.2 UHPLC conditions and MS parameters for different systems. 13
Table 2 — LC gradient . 13
2)
Table 3 — MS source conditions Sciex triple quads . 14
Table 4 — MRM transitions for different folates and MS parameters for their detection . 14
8 Calculations . 15
8.1 Calculation of ratios of peak areas of the folate compounds to the respective internal
standard peak areas . 15
8.2 Calibration curve . 15
8.3 Calculation of concentration of folate compounds in the method blank . 15
8.4
...
Norme
internationale
ISO 20631
Première édition
Préparations pour nourrissons
2023-12
et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de
la teneur en folates totaux par
extraction trienzymatique et
chromatographie liquide à ultra
performance (CLUHP) couplée à une
spectrométrie de masse en tandem
(SM/SM)
Infant formula and adult nutritionals — Determination of
total folate content by trienzyme extraction and ultra high
performance liquid chromatography tandem mass spectrometry
(UHPLC-MS/MS)
Numéro de référence
ISO 20631:2023(fr) © ISO 2023
PROJET FINAL
ISO 20631:2023(fr)
Norme
internationale
ISO/FDIS 20631.2
ISO/TC 34
Préparations pour nourrissons
Secrétariat: AFNOR
et produits nutritionnels pour
Début de vote:
adultes — Détermination de la teneur
2024-04-04
en folates totaux par extraction
Vote clos le:
trienzymatique et chromatographie
2024-05-30
liquide à ultra performance (CLUHP)
couplée à une spectrométrie de
masse en tandem (SM/SM)
Infant formula and adult nutritionals — Determination of
total folate content by trienzyme extraction and ultra high
performance liquid chromatography tandem mass spectrometry
(UHPLC-MS/MS)
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT
INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSERVATIONS,
NOTIFICATION DES DROITS DE PROPRIÉTÉ DONT ILS
AURAIENT ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE.
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES FINS
© ISO 2023 INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET COM-MERCIALES,
AINSI QUE DU POINT DE VUE DES UTILISATEURS, LES
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE CONSIDÉRÉS
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
DU POINT DE VUE DE LEUR POSSI BILITÉ DE DEVENIR DES
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
NORMES POUVANT
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA RÉGLEMENTATION
NATIONALE.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse Numéro de référence
ISO/FDIS 20631.2:2024(fr) © ISO 2024
ii
ISO/FDIS 20631.2:2024(fr)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d'application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 1
5 Réactifs et matériaux . 2
5.1 Liste de réactifs.2
5.2 Préparation du solvant pour solutions étalons .3
5.3 Préparation des solutions étalons de folates .4
5.4 Préparation des solutions mères d’étalons internes de folates .5
5.5 Préparation des solutions d’étalonnage .7
5.6 Préparation de la solution de substrat pour évaluer l’activité conjugase de plasma .8
5.7 Réactif pour l’analyse des folates .8
6 Appareillage . 10
7 Mode opératoire .11
7.1 Préparation des échantillons .11
7.1.1 Traitement des échantillons pour les rendre homogènes.11
7.1.2 Reconstitution de l'échantillon en poudre en liquide .11
7.2 Extraction .11
7.3 Purification des échantillons . 12
7.4 Analyse instrumentale . 12
7.4.1 Analyse du blanc d’instrument, des solutions d’étalonnage, du blanc de méthode
et des échantillons . 12
7.4.2 Conditions de CLUHP et paramètres de SM pour différents systèmes . 12
8 Calculs . 14
8.1 Calcul des rapports des aires de pics des vitamères de folates aux aires de pics des
étalons internes .14
8.2 Courbe d’étalonnage .14
8.3 Calcul de la concentration des vitamères de folates dans le blanc de méthode .14
8.4 Calcul de la concentration des vitamères de folates dans les échantillons .14
8.5 Calcul de la concentration des vitamères de folates et des folates totaux dans des
échantillons reconstitués ou RTF (µg/100 g) . 15
8.6 Calcul de la concentration de folates totaux dans les échantillons en poudre (μg/100 g)
en l'état .16
8.7 Calcul de la concentration d’acide folique (en nanogrammes) libéré lors du test de la
conjugase .16
8.8 Calcul du pourcentage de conversion du Pte-Glu3 en acide folique lors du test de la
conjugase .16
9 Fidélité . 17
9.1 Généralités .17
9.2 Répétabilité .17
9.3 Reproductibilité .17
Annexe A (informative) Données de fidélité . 19
Bibliographie .20
iii
ISO/FDIS 20631.2:2024(fr)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de propriété revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n'avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l'adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de
tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion de
l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, en collaboration
avec l’AOAC INTERNATIONAL. Il est publié par l’ISO, et séparément par l’AOAC INTERNATIONAL. La méthode
décrite dans le présent document est l’équivalent de la méthode officielle de l’AOAC 2011.06, Total Folate in
Infant Formula and Adult Nutritionals by Trienzyme Extraction and LC-MS/MS Quantitation.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv
PROJET FINAL Norme internationale ISO/FDIS 20631.2:2024(fr)
Préparations pour nourrissons et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de la teneur en folates totaux par
extraction trienzymatique et chromatographie liquide à ultra
performance (CLUHP) couplée à une spectrométrie de masse
en tandem (SM/SM)
1 Domaine d'application
Le présent document spécifie une méthode de détermination de la teneur en folates totaux dans les
préparations pour nourrissons et produits nutritionnels pour adultes par extraction trienzymatique et
chromatographie liquide à ultra haute performance (CLUHP) couplée à une spectrométrie de masse en
tandem (SM/SM).
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC
...
ISO/TC 34
Style Definition: Heading 1: Indent: Left: 0 pt, First
line: 0 pt
Date: 2023-08-09
Style Definition: Heading 2: Font: Bold, Tab stops: Not
at 18 pt
ISO 20631:2023(F)
Style Definition: Heading 3: Font: Bold
ISO/TC 34
Style Definition: Heading 4: Font: Bold
Style Definition: Heading 5: Font: Bold
Secrétariat: AFNOR
Style Definition: Heading 6: Font: Bold
Préparations pour nourrissons et produits nutritionnels pour adultes — Détermination
Style Definition: ANNEX
de la teneur en folates totaux par extraction trienzymatique et chromatographie liquide
Style Definition: RefNorm
à ultra performance (CLUHP) couplée à une spectrométrie de masse en tandem (SM/SM)
Style Definition: Body Text_Center
Infant formula and adult nutritionals — Determination of total folate content by
Style Definition: Dimension_100
trienzyme extraction and ultra high performance liquid chromatography tandem mass
Style Definition: Figure Graphic
spectrometry (UHPLC-MS/MS)
Style Definition: Figure subtitle
ICS: 67.050
Style Definition: List Continue 1
Style Definition: List Number 1
Style Definition: AMEND Terms Heading: Font: Bold
Style Definition: AMEND Heading 1 Unnumbered:
Font: Bold
Type du document : Error! Reference source not found.
Sous-type du document : Error! Reference source not found.
Stade du document : Error! Reference source not found.
Langue du document : Error! Reference source not found.
Error! Reference source not found.
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
Commented [eXtyles1]: The reference is to a withdrawn
standard which has been replaced
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre,
ISO 20344, Équipement de protection individuelle —
aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit
Méthodes d'essai pour les chaussures
et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, ou la diffusion sur
Formatted: Pattern: Clear
l'internet ou un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut être demandée à
l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
Formatted: Pattern: Clear
ISO copyright office
Case Postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: + 41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.orgwww.iso.org
Publié en Suisse
Error! Reference source not found.
ii
Error! Reference source not found.
Sommaire Page
Avant-propos . v
1 Domaine d'application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs et matériaux . 2
5.1 Liste de réactifs . 2
5.2 Préparation du solvant pour solutions étalons . 4
5.3 Préparation des solutions étalons de folates . 4
5.4 Préparation des solutions mères d’étalons internes de folates . 6
5.5 Préparation des solutions d’étalonnage . 8
5.6 Préparation de la solution de substrat pour évaluer l’activité conjugase de plasma . 9
5.7 Réactif pour l’analyse des folates . 9
6 Appareillage . 11
7 Mode opératoire . 13
7.1 Préparation des échantillons . 13
7.1.1 Traitement des échantillons pour les rendre homogènes . 13
7.1.2 Reconstitution de l'échantillon en poudre en liquide . 13
7.2 Extraction . 13
7.3 Purification des échantillons . 14
7.4 Analyse instrumentale . 14
7.4.1 Analyse du blanc d’instrument, des solutions d’étalonnage, du blanc de méthode et des
échantillons . 14
7.4.2 Conditions de CLUHP et paramètres de SM pour différents systèmes . 14
8 Calculs . 16
8.1 Calcul des rapports des aires de pics des vitamères de folates aux aires de pics des
étalons internes . 16
8.2 Courbe d’étalonnage . 16
8.3 Calcul de la concentration des vitamères de folates dans le blanc de méthode . 16
8.4 Calcul de la concentration des vitamères de folates dans les échantillons . 17
8.5 Calcul de la concentration des vitamères de folates et des folates totaux dans des
échantillons reconstitués ou RTF (µg/100 g) . 17
8.6 Calcul de la concentration de folates totaux dans les échantillons secs (μg/100 g) en
l'état . 18
8.7 Calcul de la concentration d’acide folique (en nanogrammes) libéré lors du test de la
conjugase . 18
8.8 Calcul du pourcentage de conversion du Pte-Glu3 en acide folique lors du test de la
conjugase . 19
9 Fidélité . 19
9.1 Généralités . 19
9.2 Répétabilité. 19
Error! Reference source not found.
iii
Error! Reference source not found.
9.3 Reproductibilité . 19
Annexe A (informative) Données de fidélité . 21
Bibliographie . 22
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iv
Error! Reference source not found.
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement
avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation
électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directiveswww.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner
l’utilisation d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à
l’applicabilité de tout droit de propriété revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent
document, l’ISO n'avait pas reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa
mise en application. Toutefois, il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent
document que des informations plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de
brevets, disponible à l'adresse www.iso.org/brevets.www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour
responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion de
l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir: www.iso.org/avant-propos.htmlwww.iso.org/avant-propos.html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, en
collaboration avec l’AOAC INTERNATIONAL. Il est publié par l’ISO, et séparément par l’AOAC
INTERNATIONAL. La méthode décrite dans le présent document est l’équivalent de la méthode officielle de
l’AOAC 2011.06, Total Folate in Infant Formula and Adult Nutritionals by Trienzyme Extraction and LC-
Formatted: Pattern: Clear
MS/MS Quantitation.
Formatted: Pattern: Clear
Formatted: Pattern: Clear
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
.
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.htmlwww.iso.org/fr/members.html
Error! Reference source not found.
v
Error! Reference source not found.
Préparations pour nourrissons et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de la teneur en folates totaux par
extraction trienzymatique et chromatographie liquide à ultra
performance (CLUHP) couplée à une spectrométrie de masse en
tandem (SM/SM)
1 Domaine d'application
Le présent document spécifie une méthode de détermination de la teneur en folates totaux dans les
préparations pour nourrissons et produits nutritionnels pour adultes par extraction trienzymatique et
chromatographie liquide à ultra haute performance (CLUHP) couplée à une spectrométrie de masse en
tandem (SM/SM).
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse
https://www.iso.org/obphttps://www.iso.org/obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse
https://www.electropedia.org/https://www.electropedia.org/
3.1
produit nutritionnel pour adultes
aliment spécialement formulé, complet sur le plan nutritionnel, consommé sous forme liquide, qui peut
constituer la seule source d’alimentation, fabriqué à partir d’un mélange de lait, de soja, de riz, de
lactosérum, de protéine hydrolysée, d’amidon et d’acides aminés, avec et sans protéine intacte
3.2
préparation pour nourrissons
substitut du lait maternel spécialement fabriqué pour satisfaire à lui seul les besoins nutritionnels des
nourrissons pendant les premiers mois de leur vie, jusqu’à l’introduction d’une alimentation
complémentaire appropriée
[SOURCE: Codex Standard 72-1981]
2 Error! Reference source not found.
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4 Principe
Les folates, présents dans un échantillon sont extraits dans un tampon (pH = 6,0) contenant des étalons
internes, par des traitements à la protéase, à l’amylase et à la conjugase de plasma de rat (digestion
trienzymatique). L’extrait est purifié et concentré par extraction en phase solide (SPE) avec échangeur
d’anions faibles (WAX). Les formes polyglutamates des folates présents dans l’échantillon sont
déconjuguées en monoglutamat
...
Questions, Comments and Discussion
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