ISO 23275-1:2006
(Main)Animal and vegetable fats and oils — Cocoa butter equivalents in cocoa butter and plain chocolate — Part 1: Determination of the presence of cocoa butter equivalents
Animal and vegetable fats and oils — Cocoa butter equivalents in cocoa butter and plain chocolate — Part 1: Determination of the presence of cocoa butter equivalents
ISO 23275-1:2006 specifies a procedure for the detection of cocoa butter equivalents (CBEs) in cocoa butter and plain chocolate by high-resolution capillary gas liquid chromatography of triacylglycerols and subsequent data evaluation by regression analysis. The method is applicable for the detection of 2 % CBE admixture to cocoa butter, corresponding to about 0,6 % CBE in chocolate (i.e. the assumed fat content of chocolate is 30 %).
Corps gras d'origines animale et végétale — Équivalents au beurre de cacao dans le beurre de cacao et dans le chocolat de ménage — Partie 1: Détermination de la présence d'équivalents au beurre de cacao
L'ISO 23275-1:2006 spécifie un mode opératoire permettant la détection des équivalents au beurre de cacao (EBC) dans le beurre de cacao (BC) et le chocolat de ménage par analyse chromatographique en phase gazeuse/liquide capillaire haute résolution (HR-GC) des triacylglycérols, et l'évaluation ultérieure des données par analyse de régression. La méthode s'applique à la détection de 2 % d'EBC incorporés dans du beurre de cacao, proportion correspondant à environ 0,4 % d'EBC dans le chocolat (dans l'hypothèse d'un taux de matières grasses de ce dernier égal à 30 %).
General Information
Buy Standard
Standards Content (Sample)
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 23275-1
Первое издание
2006-11-01
Жиры и масла животные и
растительные. Эквиваленты масла
какао в масле какао и обыкновенном
шоколаде.
Часть 1.
Определение наличия эквивалентов
масла какао
Animal and vegetable fats and oils — Cocoa butter equivalents in cocoa
butter and plain chocolate —
Part 1: Determination of the presence of cocoa butter equivalents
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
ISO 23275-1:2006(R)
©
ISO 2006
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 23275-1:2006(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или вывести на экран, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на загрузку интегрированных шрифтов в компьютер, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO 2006
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO по соответствующему адресу, указанному ниже, или комитета-члена ISO в стране
регистрации пребывания.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2006 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 23275-1:2006(R)
Содержание Страница
Предисловие .iv
Введение .v
1 Область применения .1
2 Термины и определения .1
3 Принцип.1
4 Реагенты и материалы .1
5 Аппаратура.2
6 Отбор проб.3
7 Приготовление образца для испытания.3
7.1 Приготовление CRM масла какао для целей калибровки и проверки пригодности
системы.3
7.2 Приготовление образца шоколада .3
8 Процедура.3
8.1 Экстракция жира.3
8.2 Разделение индивидуальных триацилглицеринов методом HR-GC.3
8.3 Идентификация.4
9 Вычисление.4
9.1 Определение коэффициентов чувствительности.4
9.2 Вычисление процентного содержания триацилглицеринов.4
9.3 Решение, если образец является чистым маслом какао .5
10 Процедурные требования .5
10.1 Общие вопросы .5
10.2 Пригодность системы .5
11 Прецизионность.6
11.1 Межлабораторное испытание.6
11.2 Повторяемость .6
11.3 Воспроизводимостьy .6
12 Протокол испытания.6
Приложение А (информативное) Результаты межлабораторного испытания .7
Библиография.12
© ISO 2006 – Все права сохраняются iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 23275-1:2006(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в
этом комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие
связи с ISO, также принимают участие в работах. Что касается стандартизации в области
электротехники, ISO работает в тесном сотрудничестве с Международной электротехнической
комиссией (IEC).
Проекты международных стандартов разрабатываются по правилам, указанным в Директивах ISO/IEC,
Часть 2.
Главная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Обращается внимание на возможность патентования некоторых элементов данного международного
стандарта. ISO не несет ответственности за идентификацию какого-либо или всех таких патентных
прав.
ISO 23275-1 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом
SC 5, Молоко и молочные продукты.
ISO 23275 состоит из следующих частей под общим названием Жиры и масла животные и
растительные. Эквиваленты масла какао в масле какао и обыкновенном шоколаде:
⎯ Часть 1. Определение наличия эквивалентов масла какао
⎯ Part 2. Определение количества эквивалентов масла какао
iv © ISO 2006 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 23275-1:2006(R)
Введение
“Эквиваленты масла какао” – это общий термин для жиров, используемых для замены масла какао в
шоколаде. Они имеют очень близкое сходство по химическому составу и физическим свойствам с
маслом какао, что сильно затрудняет их количественное определение и в некоторых случаях даже их
обнаружение. В принципе, эквиваленты масло какао должны быть по определению жирами,
содержание которых является низким в лауриновой кислоте и высоким в симметричных
мононенасыщенных триацилглицеринах типа 1,3-дипалмитоил-2-олеоилглицерин, 1-палмитоил-2-
олеоил-3-стеароилглицерин и 1,3-дистеароил-2-олеилглицерин, которые смешаны с маслом какао и
получаются только очисткой и фракционированием.
В пределах Европейского союза следующие растительные жиры, полученные из перечисленных ниже
[1]
растений, можно использовать по отдельности или в смесях согласно Директиве 2000/36/EC :
⎯ орех бассия, борнейское сало или тенгкаванг (Shorea spp.),
⎯ пальмовое масло (Elaeis guineensis, Elaeis olifera),
⎯ сал (Shorea robusta),
⎯ масляное дерево (Butyrospermum parkii),
⎯ масло гарцинии индийской (Garcinia indica) и
⎯ косточка манго (Mangifera indica).
Настоящая часть ISO 23275 устанавливает процедуру для обнаружения этих жиров (ограничения
сделаны только для образцов чистого жира ореха бассия) в масле какао и обыкновенном шоколаде.
ISO 23275-2 устанавливает процедуру для количественного определения этих жиров при концентрации
[1]
5 % в соответствии с установленным пределом в Директиве 2000/36/EC Европарламента и Совета.
Для помощи в использовании обеих частей ISO 23275 был создан аналитический инструментарий под
названием “CoCal-1. “CoCal-1” содержит достоверные методы для обнаружения (часть 1) и
количественного определения (часть 2) CBEs в обыкновенном шоколаде, а также сертифицированный
эталонный материал масла какао (IRMM-801), применяемый для калибровки аналитических приборов,
и электронный оценочный бланк для Microsoft Excel®, чтобы вычислить окончательный результат.
Аналитику, работающему над обнаружением CBE и их количественным определением, придется
только калибровать газохроматографическую систему разделения с использованием IRMM-801,
разделять триглицеридовые фракции рассматриваемого образца и использовать электронный
оценочный бланк для последующей обработки данных в целях обнаружения и количественного
определения CBEs.
Информация о “CoCal-1” имеется на сайте Института эталонных материалов и измерений (Institute for
Reference Materials and Measurements): http://www.irmm.jrc.be.
© ISO 2006 – Все права сохраняются v
---------------------- Page: 5 ----------------------
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 23275-1:2006(R)
Жиры и масла животные и растительные. Эквиваленты
масла какао в масле какао и обыкновенном шоколаде.
Часть 1.
Определение наличия эквивалентов масла какао
1 Область применения
Эта часть ISO 23275 устанавливает процедуру для обнаружения эквивалентов масла какао (CBEs) в
масле какао (CB) и обыкновенном шоколаде методом высокоразрешающей капиллярной
газожидкостной хроматографии (HR-GC) триацилглицеринов и последующей оценки данных методом
регрессионного анализа.
Данный метод применим для обнаружения 2 % примеси CBE в масле какао, что соответствует
примерно 0,6 % CBE в шоколаде (т.е. предполагаемое содержание жира в шоколаде 30 %).
2 Термины и определения
Применительно к этому документу используются следующие термины и определения.
2.1
эквиваленты масла какао
cocoa butter equivalents
CBEs
жиры, обнаруженные в масле какао и обыкновенном шоколаде согласно процедуре, установленной в
этой части ISO 23275
ПРИМЕЧАНИЕ Результат выражается как качественный результат, т.е. CBEs присутствуют/CBEs не
присутствуют (ДА/НЕТ).
3 Принцип
Масло какао, или жир, полученный экстракцией растворителем из обыкновенного шоколада,
разделяют методом HR-GC на триацилглицериновые фракции соответственно их молекулярной массе
и степени ненасыщенности. Присутствие CBEs обнаруживают методом линейного регрессионного
анализа, применяемого к индивидуальным триацилглицериновым фракциям анализируемого жира.
4 Реагенты и материалы
Используют только реагенты признанной аналитической чистоты, если нет других указаний.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Обращается внимание на регламент, который устанавливает правила
обращения с опасными веществами. Должны соблюдаться технические, организационные и
индивидуальные меры безопасности.
© ISO 2006 – Все права сохраняются 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 23275-1:2006(R)
[2]
4.1 Сертифицированный эталонный материал масла какао (CRM) IRMM-801 , для целей
калибровки и проверки пригодности системы.
4.2 Растворитель жира, нехлорированные растворители (например, диэтиловый эфир, n-гептан,
изооктан).
5 Аппаратура
5.1 Аналитические весы, считываемость 0,1 мг.
5.2 Сушильный шкаф, поддерживаемый при 55 °C.
Можно использовать блок сухого подогревателя.
5.3 Пищевая терочная машина, т.е. кухонный блендер, конструкция которого характеризуется
1)
установкой двигателя над приемным контейнером для избежания расплавления образцов .
5.4 Роторный испаритель.
Можно использовать альтернативные процедуры испарения.
5.5 Пипетки, емкостью 1 мл.
5.6 Мерные колбы, емкостью 20 мл.
5.7 Микрошприц, с максимальным объемом 10 мкл, градуированный до 0,1 мкл, или
автоматический пробоотборник.
5.8 Газовый хроматограф (GC), оснащенный встроенной в колонку холодной инжекционной
системой и пламенно-ионизационным детектором (FID).
Можно использовать альтернативные инжекционные системы [например, щелевой инжектор,
испаритель с программируемой температурой (PTV) или инжектор с движущейся иглой], при условии
что получаются такие же результаты, как указано в 10.2.
Разделение и обнаружение будут удовлетворительными, если соблюдаются следующие
экспериментальные условия:
⎯ GC колонка: длина от 25 м до 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, кварцевое стекло, покрытое
термостойким 50-% фенилметилполисилоксаном с толщиной пленки от 0,1 мкм до 0,15 мкм.
⎯ программирование температуры: 100 °C (начальная температура), программируемая скорость
изменения 30 °C/мин до получения 340 °C (окончательная температура).
⎯ транспортирующий газ: гелий или водород (чистота W 99,999 %).
ПРИМЕЧАНИЕ Подходящие колонки и альтернативные экспериментальные условия, применяемые в
международном совместном исследовании, приведены в Приложении А. Рабочие условия можно изменять для
получения оптимального разделения триацилглицеринов в масле какао.
1) Philips HR2833 является примером подходящего оборудования, имеющегося в продаже.
Эта информация дается для удобства пользователей этой части ISO 23275 и не является рекомендацией ISO для
этого продукта.
2 © ISO 2006 – Все права сохраняются
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 23275-1:2006(R)
5.9 Хроматографическая система данных.
6 Отбор проб
В лабораторию должна быть отправлена представительная проба. Ее следует оберегать от
повреждений или изменений во время транспортировки или хранения.
Отбор проб не является частью метода, установленного в этой части ISO 23275. Рекомендованный
метод отбора проб дан в ISO 5555.
7 Приготовление образца для испытания
7.1 Приготовление CRM масла какао для целей калибровки и проверки пригодности
системы
Перед вскрытием и использованием CRM масла какао (4.1) ампулу следует нагревать в сушильном
шкафу (5.2), пока ее содержимое не будет расплавлено. Когда получен прозрачный раствор,
содержимое перемешивают, многократно переворачивая ампулу не менее чем 20 с. Затем открывают
ампулу и переводят содержимое в чистую бутылочку, которую можно герметически закрыть и хранить
в прохладном месте для будущего использования.
7.2 Приготовление образца шоколада
Охлаждают приблизительно. 200 г шоколада до затвердения и трут до мелкозернистого состояния,
используя механическое устройство (5.3). Тщательно перемешивают и хранят в закупоренной бутылке
в холодном месте.
8 Процедура
8.1 Экстракция жира
Выделяют жир из 10 г - 40 г тертого шоколада (как описано в 7.2) путем экстрагирования двумя или
тремя порциями растворителя жира по 100 мл (4.2). Центрифугируют и декантируют. Объединяют
экстракты и выпаривают большую часть растворителя жира (5.4), затем его окончательно высушивают
под струей азота.
Можно использовать альтернативные процедуры экстракции (например, экстрактор Сокслета,
сверхкритический углекислый газ или микроволны), при условии что будут получены такие же
результаты.
8.2 Разделение индивидуальных триацилглицеринов методом HR-GC
Испытуемые образцы [масло какао, жир, экстрагированный из шоколада, CRM масла какао (4.1)]
нагревают в сушильном шкафу (5.2) до полного расплавления. Если жидкий образец содержит осадок,
образец фильтруют в шкафу до получения прозрачного фильтрата. Пипетки (или аналогичные
приборы), используемые для переноса образца во время операций взвешивания, должны быть
доведены до температуры приблизительно 55 °C в сушильном шкафу (5.2), для того чтобы избежать
частичного фракционирования жира.
Отвешивают приблизительно 0,2 г в мерную колбу емкостью 20 мл (5.6) и разбавляют до метки
подходящим растворителем жира (4.2). Пипеткой (5.5) переносят 1 мл полученного раствора в другую
мерную колбу емкостью 20 мл и разбавляют до метки таким же растворителем.
Инжектируют от 0,5 мкл до 1,0 мкл окончательного испытательного раствора (ρ = 0,5 мг/мл) в HR-GC
fat
систему, используя холодную встроенную инжекционную систему.
© ISO 2006 – Все права сохраняются 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 23275-1:2006(R)
Можно использовать альтернативные размеры образцов и инжекторы, при условии, что применяемая
система инжектирования дает линейную ответную реакцию и критерии пригодности (10.2)
удовлетворяются.
8.3 Идентификация
Идентификацию пяти крупных фракций триацилглицерина [1,3-дипалмитоил-2-олеоилглицеринl (РОР), 1-
палмитоил-2-олеоил-3-стеароилглицерин (POS), 1-палмитоил-2,3-диолеилглицерин(POO), 1,3-дистеароил-2-
олеоилглицерин (SOS) и 1-стеаороил-2,3- диолеоилглицерин (SOO)] выполняют путем сравнения времени
удержания испытуемых образцов с временем удержания CRM масла какао (4.1). В общем, триацилглицерины
появляются в порядке возрастания числа атомов углерода и увеличения ненасыщенности для одного и того же
числа атомов углерода. Порядок элюирования триацилглицеринов для CRM масла какао показан в приведенной
для примера хроматограмме (Рисунок A.1).
9 Вычисление
9.1 Определение коэффициентов чувствительности
Коэффициенты чувствительности для триацилглицеринов POP,
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 23275-1
First edition
2006-11-01
Animal and vegetable fats and oils —
Cocoa butter equivalents in cocoa butter
and plain chocolate —
Part 1:
Determination of the presence of cocoa
butter equivalents
Corps gras d'origines animale et végétale — Équivalents au beurre de
cacao dans le beurre de cacao et dans le chocolat de ménage —
Partie 1: Détermination de la présence d'équivalents au beurre de
cacao
Reference number
ISO 23275-1:2006(E)
©
ISO 2006
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 23275-1:2006(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.
© ISO 2006
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2006 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 23275-1:2006(E)
Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope .1
2 Terms and definitions .1
3 Principle.1
4 Reagents and materials .1
5 Apparatus .2
6 Sampling.2
7 Preparation of test sample.3
7.1 Preparation of cocoa butter CRM for calibration purposes and system suitability check.3
7.2 Preparation of chocolate sample .3
8 Procedure .3
8.1 Fat extraction .3
8.2 Separation of individual triacylglycerols by HR-GC .3
8.3 Identification.3
9 Calculation.4
9.1 Determination of response factors .4
9.2 Calculation of percentages of triacylglycerols.4
9.3 Decision if sample is pure cocoa butter.4
10 Procedural requirements .5
10.1 General considerations.5
10.2 System suitability .5
11 Precision.5
11.1 Interlaboratory test .5
11.2 Repeatability.6
11.3 Reproducibility.6
12 Test report .6
Annex A (informative) Results of interlaboratory test.7
Bibliography .12
© ISO 2006 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 23275-1:2006(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 23275-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
ISO 23275 consists of the following parts, under the general title Animal and vegetable fats and oils — Cocoa
butter equivalents in cocoa butter and plain chocolate:
⎯ Part 1: Determination of the presence of cocoa butter equivalents
⎯ Part 2: Quantification of cocoa butter equivalents
iv © ISO 2006 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 23275-1:2006(E)
Introduction
“Cocoa butter equivalents” is the general term for fats used to replace cocoa butter in chocolate. They
resemble the chemical composition and physical properties of cocoa butter very closely, making them
therefore extremely difficult to quantify and even in some cases to detect. In principle, cocoa butter
equivalents must by definition be fats low in lauric acid, rich in symmetrical mono-unsaturated triacylglycerols
of the type 1,3-dipalmitoyl-2-oleoylglycerol, 1-palmitoyl-2-oleoyl-3-stearoylglycerol and 1,3-distearoyl-2-
oleoylglycerol, miscible with cocoa butter, and obtained only by refining and fractionation.
Within the European Union, the following vegetable fats, obtained from the plants listed below, may be used
[1]
singly or in blends, according to Directive 2000/36/EC :
⎯ illipé, Borneo tallow or tengkawang (Shorea spp.),
⎯ palm oil (Elaeis guineensis, Elaeis olifera),
⎯ sal (Shorea robusta),
⎯ shea (Butyrospermum parkii),
⎯ kokum gurgi (Garcinia indica), and
⎯ mango kernel (Mangifera indica).
This part of ISO 23275 specifies a procedure for the detection of these fats (restrictions are only made for
pure illipé fat samples) in cocoa butter and plain chocolate. ISO 23275-2 specifies a procedure allowing a
reliable quantification of these fats at the level of 5 %, complying with the statutory limit laid down in Directive
[1]
2000/36/EC of the European Parliament and the Council.
To facilitate the usage of both parts of ISO 23275, an analytical toolbox named “CoCal-1” has been
established. “CoCal-1” contains the validated methods for detection (part 1) and quantification (part 2) of
CBEs in plain chocolate, and also a certified cocoa butter reference material (IRMM-801) to calibrate the
analyst’s instruments and an electronic evaluation sheet for Microsoft Excel® to calculate the final result. An
analyst working on CBE detection and quantification has only to calibrate the gas chromatographic separation
system using IRMM-801, separate the triglyceride fractions of the sample in question, and use the electronic
evaluation sheet for subsequent data treatment to detect and quantify CBEs.
Information on “CoCal-1” is available on the website of the Institute for Reference Materials and
Measurements: http://www.irmm.jrc.be.
© ISO 2006 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 23275-1:2006(E)
Animal and vegetable fats and oils — Cocoa butter equivalents
in cocoa butter and plain chocolate —
Part 1:
Determination of the presence of cocoa butter equivalents
1 Scope
This part of ISO 23275 specifies a procedure for the detection of cocoa butter equivalents (CBEs) in cocoa
butter (CB) and plain chocolate by high-resolution capillary gas liquid chromatography (HR-GC) of
triacylglycerols and subsequent data evaluation by regression analysis.
The method is applicable for the detection of 2 % CBE admixture to cocoa butter, corresponding to about
0,6 % CBE in chocolate (i.e. the assumed fat content of chocolate is 30 %).
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
cocoa butter equivalents
CBEs
fats detected in cocoa butter and plain chocolate according the procedure specified in this part of ISO 23275
NOTE The result is expressed as a qualitative result, i.e. CBEs present/CBEs not present (YES/NO).
3 Principle
Cocoa butter, or the fat obtained by solvent extraction from plain chocolate, is separated by HR-GC into
triacylglycerol fractions according to their molecular mass and degree of unsaturation. The presence of CBEs
is detected by linear regression analysis applied to individual triacylglycerol fractions of the fat analysed.
4 Reagents and materials
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise stated.
WARNING — Attention is drawn to the regulations which specify the handling of dangerous matter.
Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
[2]
4.1 Cocoa butter Certified Reference Material (CRM) IRMM-801 , for calibration purposes and system
suitability check.
4.2 Fat solvent, non-chlorinated solvents (e.g. diethyl ether, n-heptane, iso-octane).
© ISO 2006 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 23275-1:2006(E)
5 Apparatus
5.1 Analytical balance, with a readability of 0,1 mg.
5.2 Drying oven, maintained at 55 °C.
A dry heater block may be used.
5.3 Food grater, i.e. a kitchen blender with a design featuring the motor above the receiving container to
1)
avoid melting the samples .
5.4 Rotary evaporator.
Alternative evaporation procedures may be used.
5.5 Pipettes, of capacity 1 ml.
5.6 Volumetric flasks, of capacity 20 ml.
5.7 Microsyringe, with maximum volume 10 µl, graduated to 0,1 µl, or automatic sampler.
5.8 Gas chromatograph (GC), fitted with a cold on-column injection system and a flame ionization detector
(FID).
Alternative injection systems [e.g. a split injector, a programmed-temperature vaporizer (PTV) or a moving-
needle injector] may be used provided the same results are obtained as indicated in 10.2.
The separation and detection have been found to be satisfactory if the following experimental conditions are
followed:
⎯ GC column: 25 m to 30 m length, with 0,25 mm i.d., fused silica coated with thermostable 50 %
phenylmethylpolysiloxane to a film thickness of 0,1 µm to 0,15 µm.
⎯ temperature programme: 100 °C (initial temperature), programme rate 30 °C/min to 340 °C (final
temperature).
⎯ carrier gas: helium or hydrogen (purity W 99,999 %).
NOTE Suitable columns and alternative experimental conditions, used in an international collaborative study, are
listed in Annex A. Operating conditions may be changed to obtain optimum separation of cocoa butter triacylglycerols.
5.9 Chromatographic data system.
6 Sampling
A representative sample should have been sent to the laboratory. It should not have been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this part of ISO 23275. A recommended sampling method is
given in ISO 5555.
1) Philips HR2833 is an example of suitable equipment available commercially.
This information is given for the convenience of the users of this part of ISO 23275 and does not constitute an
endorsement by ISO of this product.
2 © ISO 2006 – All rights reserved
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 23275-1:2006(E)
7 Preparation of test sample
7.1 Preparation of cocoa butter CRM for calibration purposes and system suitability check
Before opening and using the cocoa butter CRM (4.1), the ampoule shall be warmed in a drying oven (5.2)
until the contents have melted. When a clear solution is obtained, mix the contents by repeated inversion for
not less than 20 s. Then open and transfer the contents to a clean vial, which can be tightly sealed and
preserved in a cool place for future usage.
7.2 Preparation of chocolate sample
Chill approx. 200 g of chocolate until hard, and grate to fine granular condition using a mechanical device (5.3).
Mix thoroughly and preserve in tightly stoppered bottle in a cool place.
8 Procedure
8.1 Fat extraction
Separate the fat from 10 g to 40 g of grated chocolate (as described in 7.2) by extracting with two or three
100 ml portions of a fat solvent (4.2). Centrifuge and decant. Combine the extracts and evaporate most of the
fat solvent (5.4) then finally dry it under a stream of nitrogen.
Alternative extraction procedures may be used (e.g. by Soxhlet, by supercritical carbon dioxide or by using
microwaves) provided that the same results are obtained.
8.2 Separation of individual triacylglycerols by HR-GC
The test samples [cocoa butter, fat extracted from chocolate, cocoa butter CRM (4.1)] shall be warmed in a
drying oven (5.2) until completely melted. If the liquid sample contains sediment, filter the sample inside the
oven to obtain a clear filtrate. Pipettes (or similar equipment) used for transferring the sample during weighing
operations should be brought to a temperature of ca. 55 °C in a drying oven (5.2) in order to avoid partial fat
fractionation.
Weigh ca. 0,2 g of test sample in a 20 ml volumetric flask (5.6) and dilute to the mark with a suitable fat
solvent (4.2). Pipette (5.5) 1 ml of the resulting solution into another 20 ml volumetric flask and dilute to the
mark with the same solvent.
Inject 0,5 µl to 1,0 µl of the final test solution (ρ = 0,5 mg/ml) into the HR-GC system using the cold on-
fat
column injection system.
Alternative sample amounts and injectors may be used provided that the detection system employed gives a
linear response and the system suitability criteria (10.2) are met.
8.3 Identification
Identification of the five major triacylglycerol fractions [1,3-dipalmitoyl-2-oleoylglycerol (POP), 1-palmitoyl-2-
oleoyl-3-stearoylglycerol (POS), 1-palmitoyl-2,3-dioleoylglycerol (POO), 1,3-distearoyl-2-oleoylglycerol (SOS),
and 1-stearoyl-2,3-dioleoylglycerol (SOO)] is made by comparison of the retention times of the test samples
with those of the cocoa butter CRM (4.1). In general, triacylglycerols appear in order of increasing number of
carbon atoms and of increasing unsaturation for the same number of carbon atoms. The elution order of the
triacylglycerols of the cocoa butter CRM is given in the example chromatogram (Figure A.1).
© ISO 2006 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 23275-1:2006(E)
9 Calculation
9.1 Determination of response factors
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 23275-1
Première édition
2006-11-01
Corps gras d'origines animale et
végétale — Équivalents au beurre de
cacao dans le beurre de cacao et dans le
chocolat de ménage —
Partie 1:
Détermination de la présence
d'équivalents au beurre de cacao
Animal and vegetable fats and oils — Cocoa butter equivalents in cocoa
butter and plain chocolate —
Part 1: Determination of the presence of cocoa butter equivalents
Numéro de référence
ISO 23275-1:2006(F)
©
ISO 2006
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 23275-1:2006(F)
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.
© ISO 2006
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax. + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2006 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 23275-1:2006(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Termes et définitions. 1
3 Principe. 1
4 Réactifs et matériaux. 1
5 Appareillage . 2
6 Échantillonnage . 3
7 Préparation de l’échantillon pour essai. 3
7.1 Préparation du MRC beurre de cacao pour étalonnage et vérification de l’aptitude du
système. 3
7.2 Préparation de l’échantillon de chocolat. 3
8 Mode opératoire . 3
8.1 Extraction de la matière grasse. 3
8.2 Séparation des triacylglycérols individuels par HR-GC . 3
8.3 Identification. 4
9 Calculs . 4
9.1 Détermination des facteurs de réponse . 4
9.2 Calcul des pourcentages des triacylglycérols . 4
9.3 Décision relative à la pureté en beurre de cacao de l’échantillon. 5
10 Exigences du mode opératoire . 5
10.1 Considérations générales. 5
10.2 Aptitude du système. 5
11 Fidélité . 6
11.1 Essai interlaboratoires . 6
11.2 Répétabilité. 6
11.3 Reproductibilité. 6
12 Rapport d’essai . 6
Annexe A (informative) Résultats d'un essai interlaboratoires. 7
Bibliographie . 13
© ISO 2006 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 23275-1:2006(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 23275-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d'origines animale et végétale.
L'ISO 23275 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Corps gras d'origines animale et
végétale — Équivalents au beurre de cacao dans le beurre de cacao et dans le chocolat de ménage:
⎯ Partie 1: Détermination de la présence d'équivalents au beurre de cacao
⎯ Partie 2: Quantification des équivalents au beurre de cacao
iv © ISO 2006 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 23275-1:2006(F)
Introduction
L’expression «équivalents au beurre de cacao» est l’expression générale désignant les matières grasses
employées pour remplacer le beurre de cacao dans le chocolat. Leur composition chimique et leurs propriétés
physiques ressemblent très fortement à celles du beurre de cacao, ce qui les rend extrêmement difficiles à
quantifier et même, dans certains cas, à détecter. En principe, les équivalents au beurre de cacao doivent par
définition être des matières grasses pauvres en acide laurique, riches en triacylglycérols monoinsaturés
symétriques de type 1,3-dipalmitoyl-2-oléoyl-glycérol, 1-palmitoyl-2-oléoyl-3-stéaroyl-glycérol et
1,3-distéaroyl-2-oléoyl-glycérol, miscibles avec le beurre de cacao, et obtenues uniquement par raffinage et
fractionnement.
Dans l’Union Européenne, les matières grasses végétales suivantes, obtenues à partir des plantes
énumérées ci-dessous, peuvent être utilisées isolément ou en mélanges, conformément à la
[1]
Directive 2000/36/CE :
⎯ illipé, suif de Bornéo ou tengkawang (Shorea spp.),
⎯ huile de palme (Elaeis guineensis, Elaeis olifera),
⎯ sal (Shorea robusta),
⎯ karité (Butyrospermum parkii),
⎯ kokum gurgi (Garcinia indica), et
⎯ noyaux de mangue (Mangifera indica).
La présente partie de l'ISO 23275 spécifie un mode opératoire pour la détection de ces matières grasses
(seules existent des restrictions pour les échantillons de graisse d’illipé pure) dans le beurre de cacao et dans
le chocolat de ménage. L'ISO 23275-2 spécifie un mode opératoire permettant de réaliser une quantification
fiable de ces matières grasses au taux de 5 %, valeur conforme à la limite statutaire fixée par la
[1]
Directive 2000/36/CE du Parlement européen et du Conseil.
Pour faciliter l’utilisation de ces deux parties de l'ISO 23275, une boîte à outils d’analyse, nommée «CoCal-1»,
a été créée. «CoCal-1» contient, en tête des méthodes validées de détection (partie 1) et de quantification
(partie 2) des équivalents au beurre de cacao dans le chocolat de ménage, un matériau de référence certifié
de beurre de cacao (IRMM-801) permettant d’étalonner les instruments, et une fiche d’évaluation électronique
Microsoft Excel® permettant de calculer le résultat final. L’analyste chargé de la détection et de la
quantification des équivalents au beurre de cacao n’a plus qu’à étalonner le système de séparation par
chromatographie en phase gazeuse à l’aide du matériau de référence certifié IRMM-801, séparer les fractions
de triglycéride de l’échantillon en question, et utiliser la fiche d’évaluation électronique pour le traitement des
données afin de détecter et de quantifier les équivalents au beurre de cacao.
Des informations sur le «CoCal-1» peuvent être trouvées sur le site Internet de l’Institute for Reference
Materials and Measurements: http://www.irmm.jrc.be.
© ISO 2006 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 23275-1:2006(F)
Corps gras d'origines animale et végétale — Équivalents au
beurre de cacao dans le beurre de cacao et dans le chocolat de
ménage —
Partie 1:
Détermination de la présence d'équivalents au beurre de cacao
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 23275 spécifie un mode opératoire permettant la détection des équivalents au
beurre de cacao (EBC) dans le beurre de cacao (BC) et le chocolat de ménage par analyse
chromatographique en phase gazeuse/liquide capillaire haute résolution (HR-GC) des triacylglycérols, et
l’évaluation ultérieure des données par analyse de régression.
La méthode s’applique à la détection de 2 % d’EBC incorporés dans du beurre de cacao, proportion
correspondant à environ 0,4 % d’EBC dans le chocolat (dans l’hypothèse d’un taux de matières grasses de ce
dernier égal à 30 %).
2 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les termes et définitions suivants s'appliquent.
2.1
équivalents au beurre de cacao
EBC
matières grasses détectées dans le beurre de cacao et le chocolat de ménage conformément au mode
opératoire recommandé dans la présente partie de l'ISO 23275
NOTE Le résultat est exprimé sous forme qualitative, à savoir EBC présents/EBC absents (OUI/NON).
3 Principe
Le beurre de cacao, ou la matière grasse obtenue au moyen d’une extraction par solvant à partir de chocolat
de ménage, est séparé en fractions de triacylglycérols par HR-GC en fonction de la masse moléculaire et du
degré d’insaturation de ceux-ci. La présence d’EBC est détectée par une analyse de régression linéaire
effectuée sur les fractions de triacylglycérols individuels issus de la matière grasse analysée.
4 Réactifs et matériaux
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue, sauf indication contraire.
AVERTISSEMENT — L’attention des lecteurs est attirée sur les règles qui régissent la manipulation
des produits dangereux. Les mesures de sécurité sur les plans technique, organisationnel et
personnel doivent être suivies.
© ISO 2006 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 23275-1:2006(F)
[2]
4.1 Matériau de Référence Certifié (MRC) beurre de cacao IRMM-801 , pour étalonnage et vérification
de l'aptitude du système.
4.2 Solvant d'extraction, solvants non chlorés, par exemple éther diéthylique, n-heptane, iso-octane.
5 Appareillage
5.1 Balance d’analyse, avec une précision de lecture de 0,1 mg.
5.2 Étuve à dessiccation, maintenue à 55 °C
Il est possible d’utiliser un bloc chauffant à chaleur sèche.
5.3 Robot ménager, c'est-à-dire un appareil de cuisine dont le moteur est situé au-dessus du récipient
1)
collecteur afin d’éviter de faire fondre les échantillons .
5.4 Évaporateur rotatif
D’autres méthodes d’évaporation peuvent être employées.
5.5 Pipettes, de 1 ml de capacité.
5.6 Fioles jaugées, de 20 ml de capacité.
5.7 Microseringue, volume maximal de 10 µl avec graduations de 0,1 µl, ou échantillonneur
automatique.
5.8 Chromatographe en phase gazeuse (GC), équipé d’un système d’injection à froid sur colonne et d’un
détecteur à ionisation de flamme (FID).
D’autres systèmes d’injection, par exemple un injecteur à débit divisé, un vaporisateur à température
programmée (VTP), ou un injecteur à aiguille mobile, peuvent être employés à condition que soient obtenus
les mêmes résultats que ceux indiqués en 10.2.
La séparation et la détection se sont avérées satisfaisantes en suivant les conditions expérimentales
ci-dessous:
⎯ colonne GC: 25 m à 30 m de longueur, avec un diamètre intérieur de 0,25 mm, en silice fondue revêtue
de poly(phénylméthylsiloxane) 50 % thermostable, sous forme d’un film d’épaisseur 0,1 µm à 0,15 µm;
⎯ programmation de température: 30 °C/min de 100 °C (température initiale) à 340 °C (température finale);
⎯ gaz vecteur: hélium ou hydrogène (pureté W 99,999 %).
NOTE Des types de colonnes appropriés ainsi que d’autres conditions expérimentales, utilisés lors d’une étude
comparative interlaboratoires internationale, sont énumérés dans l’Annexe A. Il est possible de modifier les conditions de
fonctionnement en vue d’obtenir une séparation optimale des triacylglycérols du beurre de cacao.
5.9 Système de traitement des données chromatographiques.
1) Philips HR 2833 est un exemple de produit disponible sur le marché.
Cette information est donnée par souci de commodité à l’intention des utilisateurs de la présente partie de l'ISO 23275 et
ne saurait constituer un engagement de l’ISO à l’égard de ce produit
2 © ISO 2006 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 23275-1:2006(F)
6 Échantillonnage
Il convient qu’un échantillon représentatif ait été envoyé au laboratoire et qu’il n’ait pas été endommagé ou
modifié au cours du transport ou du stockage.
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode indiquée dans la présente partie de l'ISO 23275. Une
méthode d’échantillonnage recommandée est indiquée dans l’ISO 5555.
7 Préparation de l’échantillon pour essai
7.1 Préparation du MRC beurre de cacao pour étalonnage et vérification de l’aptitude du
système
Avant d’ouvrir et d’utiliser le MRC beurre de cacao (4.1), l’ampoule doit être chauffée dans une étuve à
dessiccation (5.2) jusqu’à ce que son contenu ait fondu. À l’obtention d’une solution limpide, mélanger le
contenu de l’ampoule par retournements successifs pendant au moins 20 s, l’ouvrir et en verser le contenu
dans un flacon propre pouvant être hermétiquement fermé et conservé au froid en vue d’une utilisation
ultérieure.
7.2 Préparation de l’échantillon de chocolat
Réfrigérer environ 200 g de chocolat jusqu’à ce qu’il soit dur, puis le réduire en fins copeaux à l’aide d’un
dispositif mécanique (5.3). Bien mélanger et conserver au froid dans un flacon soigneusement fermé par un
bouchon.
8 Mode opératoire
8.1 Extraction de la matière grasse
Séparer la matière grasse à partir de 10 g à 40 g de chocolat râpé (de la façon décrite en 7.2) par extraction à
l’aide de deux ou trois portions de 100 ml d’un solvant d'extraction (4.2). Centrifuger et laisser décanter.
Réunir les extraits, évaporer (5.4) l’essentiel du solvant d'extraction, puis sécher le résidu sous courant
d’azote.
D’autres méthodes d’extraction peuvent être employées, en utilisant par exemple un extracteur de Soxhlet, le
dioxyde de carbone supercritique ou les micro-ondes, à condition que les mêmes résultats soient obtenus.
8.2 Séparation des triacylglycérols individuels par HR-GC
Les échantillons d’essai [beurre de cacao, matière grasse extraite du chocolat, MRC beurre de cacao (4.1)]
doivent être chauffés dans une étuve à dessiccation (5.2) jusqu’à ce qu’ils aient complètement fondu. Si
l’échantillon liquide contient des sédiments, filtrer l’échantillon à l’intérieur de l’étuve afin d’obtenir un filtrat
limpide. Il convient que les pipettes (ou tout instrument du même type) servant à transférer l’échantillon lors
des opérations de pesée soient amenées à une température d’environ 55 °C dans une étuve à
dessiccation (5.2) afin d’éviter un fractionnement partiel des matières grasses.
Peser environ 0,2 g d’échantillon d’essai dans une fiole jaugée de 20 ml (5.6) et compléter au volume avec un
solvant d'extraction approprié (4.2). Transférer à la pipette (5.5) 1 ml de la solution résultante dans une autre
fiole jaugée de 20 ml et compléter au volume avec le même solvant.
Injecter 0,5 µl à 1,0 µl de la solution d’essai finale (ρ = 0,5 mg/ml) dans le système HR-GC à l’aide du
mg
dispositif d’injection à froid sur colonne.
D’autres quantités d’échantillon et injecteurs peuvent être employés à condition que le système de détection
utilisé fournisse une réponse linéaire et que les critères d’aptitude du système (10.2) soient remplis.
© ISO 2006 – Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 23275-1:2006(F)
8.3 Identification
L’identification des cinq fractions principales de triacylglycérols [le 1,3-dipalmitoyl-2-oléoylglycérol (POP),
le 1-palmitoyl-2-oléoyl-3-stéaroylglycérol (POS), le 1-palmitoyl-2,3-dioléoyl-glycérol (POO), le 1,3-distéaroyl-
2-oléoylglycérol (SOS), et le 1-stéaroyl-2,3-dioléoyl-glycérol (SOO)] se fait en comparant les temps de
rétention des échantillons d’essai avec ceux du MRC beurre de cacao (4.1). En général, l’ordre d’apparition
des triacylglycérols suit un nombre d’atomes de carbone croissant et, pour un même nombre d’atomes de
carbone, un degré d’insaturation croissant. L’ordre d’élution des triacylglycérols du MR
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.