ISO/TS 23942:2020

Determination of hydroxytyrosol and tyrosol content in extra virgin olive oils — Reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC)

This document specifies a method for the quantitative determination of hydroxytyrosol and tyrosol content in extra virgin olive oils using reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) with spectrophotometric detection. The method is also applicable to all other olive oils of a different commercial category.

Détermination de la teneur en hydroxytyrosol et tyrosol dans les huiles d'olive vierges extra — Chromatographie liquide à haute performance en phase inverse (CLHP-RP)

Le présent document spécifie une méthode de détermination quantitative de la teneur en hydroxytyrosol et tyrosol dans les huiles d'olive vierges extra par chromatographie liquide à haute performance en phase inverse (CLHP-RP) couplée à la détection spectrophotométrique. La méthode est également applicable à toutes les autres huiles d'olive de catégorie commerciale différente.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 21-Jul-2020
• ICS: 67.200.10 - Animal and vegetable fats and oils
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 11 - Animal and vegetable fats and oils
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 02-Nov-2022

Relations

• Revised: ISO 23942:2022 - Determination of hydroxytyrosol and tyrosol content in extra virgin olive oils — Reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) method
• Effective Date: 06-Jun-2022

Standards Content (Sample)

TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 23942
First edition
2020-07
Determination of hydroxytyrosol
and tyrosol content in extra virgin
olive oils — Reverse phase high
performance liquid chromatography
(RP-HPLC)
Détermination de la teneur en hydroxytyrosol et tyrosol dans les
huiles d'olive vierges extra — Chromatographie liquide à haute
performance en phase inverse (CLHP-RP)
Reference number
ISO/TS 23942:2020(E)
©
ISO 2020

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ISO/TS 23942:2020(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2020
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
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Published in Switzerland
ii © ISO 2020 – All rights reserved

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ISO/TS 23942:2020(E)

Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 1
6 Apparatus . 2
7 Sampling . 3
8 Procedure. 3
8.1 Sample preparation . 3
8.2 HPLC analysis . 3
8.2.1 General. 3
8.2.2 HPLC conditions . 3
8.2.3 Peak identification . 4
9 Expression of results . 5
10 Precision . 6
10.1 Validation study. 6
10.2 Repeatability, r . 6
10.3 Reproducibility, R . 6
11 Test report . 6
Annex A (informative) Chromatogram 280 nm . 7
Annex B (normative) Limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) .8
Annex C (informative) Validation study . 9
Bibliography .10
© ISO 2020 – All rights reserved iii

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ISO/TS 23942:2020(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
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ISO/TS 23942:2020(E)

Introduction
Biophenolic compounds of a secoiridoid nature and typical of extra virgin olive oil (Olea europaea L.),
are derived from oleuropein and ligstroside and are correlated to different beneficial health effects for
human beings other than particular sensorial characteristics. The biophenolic compounds contain, in
an esterified form, two aromatic alcohols, namely hydroxytyrosol and tyrosol. The method given in this
document is based on an extraction of the biophenolic fraction with a methanol/water solution and a
[1][2]
subsequent hydrolysis reaction to produce free tyrosol and hydroxytyrosol .
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TECHNICAL SPECIFICATION ISO/TS 23942:2020(E)
Determination of hydroxytyrosol and tyrosol content in
extra virgin olive oils — Reverse phase high performance
liquid chromatography (RP-HPLC)
1 Scope
This document specifies a method for the quantitative determination of hydroxytyrosol and tyrosol
content in extra virgin olive oils using reverse phase high performance liquid chromatography (RP-
HPLC) with spectrophotometric detection. The method is also applicable to all other olive oils of a
different commercial category.
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
3.1
hydroxytyrosol and tyrosol
aromatic alcohols present in extra virgin olive oil typical of Olea europaea L. species as free or bound form
4 Principle
Hydroxytyrosol and tyrosol, present in free and esterified forms, are extracted from the oil with
a methanol/water solution and then submitted to hydrolysis reaction with a 10 % of sulphuric acid
ethanolic solution. The components are identified by means of HPLC and a spectrophotometric detector
at 280 nm. The amount of free aromatic alcohols is calculated with the use of an external standard.
5 Reagents
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade.
5.1 Ortho-phosphoric acid, a volume fraction of 85 %.
5.2 Methanol chromatographic grade.
5.3 Acetonitrile chromatographic grade.
5.4 Water chromatographic grade.
5.5 Ethanol, a volume fraction of 96 %.
© ISO 2020 – All rights reserved 1

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ISO/TS 23942:2020(E)

5.6 Sulphuric acid, a volume fraction of 96 %.
5.7 Methanol/water solution, 80/20 v/v.
5.8 Reference sample: hydroxytyrosol or 2-(3,4-Dihydroxyphenyl)ethanol, e.g. Extrasynthese,
1)
(Cedex, France) .
1)
5.9 Reference sample: tyrosol, e.g. Sigma Aldrich (Germany) .
5.10 Standard calibration solution of hydroxytyrosol and tyrosol.
Prepare the external standard calibration solution of hydroxytyrosol and tyrosol as follows.
Weigh accurately, to the nearest 0,1 mg, about 25 mg of hydroxytyrosol (5.8) and tyrosol (5.9) in a
graduated 50 ml flask (6.2) and make to volume with a solution of methanol/water 80/20 v/v (5.7).
Transfer 1 ml of this solution in another 10 ml flask and fill to volume with the same solution of
methanol/water 80/20 v/v (5.7). The final concentration will be 50 mg/l of each external standard.
Inject 20 μl of this solution in the HPLC system. The solution is stable for at least six months at –20 °C.
5.11 Hydrolysis solution, consisting of ethanol/water/sulphuric acid 50/40/10 v/v/v.
6 Apparatus
Usual laboratory glassware and the following.
6.1 Analytical balance suitable for weighing to an accuracy of within ±0,1 mg.
6.2 10 ml and 50 ml calibrated flasks, class A.
6.3 1 000 μl and 5 000 μl electronic pipette or manual pipette.
6.4 10 ml test tube, with a screw cap.
6.5 Mixer, typ
...

DRAFT INTERNATIONAL STANDARD
ISO/DIS 23942
ISO/TC 34/SC 11 Secretariat: BSI
Voting begins on: Voting terminates on:
2019-12-17 2020-03-10
Determination of hydroxytyrosol and tyrosol content in
extra virgin olive oils — HPLC method
ICS: 67.200.10
THIS DOCUMENT IS A DRAFT CIRCULATED
FOR COMMENT AND APPROVAL. IT IS
THEREFORE SUBJECT TO CHANGE AND MAY
NOT BE REFERRED TO AS AN INTERNATIONAL
STANDARD UNTIL PUBLISHED AS SUCH.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL,
This document is circulated as received from the committee secretariat.
TECHNOLOGICAL, COMMERCIAL AND
USER PURPOSES, DRAFT INTERNATIONAL
STANDARDS MAY ON OCCASION HAVE TO
BE CONSIDERED IN THE LIGHT OF THEIR
POTENTIAL TO BECOME STANDARDS TO
WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
Reference number
NATIONAL REGULATIONS.
ISO/DIS 23942:2019(E)
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED
TO SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS,
NOTIFICATION OF ANY RELEVANT PATENT
RIGHTS OF WHICH THEY ARE AWARE AND TO
©
PROVIDE SUPPORTING DOCUMENTATION. ISO 2019

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ISO/DIS 23942:2019(E)

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ISO/DIS 23942:2019(E)

Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 1
6 Apparatus . 2
7 Sampling . 3
8 Procedure. 3
8.1 Sample preparation . 3
8.2 HPLC Analysis . 3
9 Expression of results . 4
10 Precision . 5
10.1 Validation Study . 5
10.2 Repeatability, r .5
10.3 Reproducibility, R .5
11 Test report . 5
Annex A (informative) Chromatograms . 6
Annex B (normative) Limit of Detection (LOD) and of Quantification (LOQ) .7
Annex C (informative) Italian validation study. 8
Annex D (informative) Additional International validation data or other validation data .9
Bibliography .10
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ISO/DIS 23942:2019(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following
URL: www .iso .org/ iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee /TC 34 Food Products Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils.
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ISO/DIS 23942:2019(E)

Introduction
The biophenolic compounds of secoiridoid nature and peculiar of extra virgin olive oil (Olea europaea
L.) are derived from oleuropein and ligstroside and are correlated to different beneficial health effects
on human being other than particular sensorial characteristics. The biophenolic compounds contain
as esterified form two aromatic alcohols, namely hydroxytyrosol and tyrosol. The method is based
on extraction of the biophenolic fraction with a methanol/water solution and a subsequent hydrolysis
[1][2]
reaction to produce free tyrosol and hydroxytyrosol .
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DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 23942:2019(E)
Determination of hydroxytyrosol and tyrosol content in
extra virgin olive oils — HPLC method
1 Scope
This International Standard specifies a method for the quantitative determination of hydroxytyrosol
and tyrosol content in extra virgin olive oils using reverse phase (RP) HPLC with spectrophotometric
detectotion. The method is also applicable to all other olive oils of different commercial category.
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
— ISO Online browsing platform: available at http:// www .iso .org/ obp
3.1
Hydroxytyrosol and tyrosol
total content expressed as sum of mg/kg of hydroxytyrosol and tyrosol in extra virgin olive oils after
extraction from the oil and hydrolysis reaction to the free form.
4 Principle
Hydroxytyrosol and tyrosol, present in free and esterified forms, are extracted from the oil with a
methanol/water solution and then submitted to hydrolysis reaction with a 10% of sulphuric acid
ethanolic solution. The components are identified by means of HPLC and spectrophotometric detector
at 280 nm and the amount of free aromatic alcohols is calculated with the use of an external standard.
5 Reagents
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade.
5.1 Ortophosphoric acid 85 % v/v
5.2 Methanol chromatographic grade
5.3 Acetonitrile chromatographic grade
5.4 Water chromatographic grade
5.5 Ethanol 96 % v/v
5.6 Sulphuric acid 96 % v/v
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ISO/DIS 23942:2019(E)

5.7 Methanol/Water solution 80/20 v/v
5.8 Reference sample: hydroxytyrosol or 2-(3,4-Dihydroxyphenyl)ethanol e.g. Extrasynthese
1)
Cedex France and Tyrosol e.g. Sigma Aldrich Germany
5.9 Reference sample Tyrosol e.g. Sigma Aldrich Germany
5.9.1 External standard calibration solution of hydroxytyrosol and tyrosol preparation
Weigh exactly 25 mg of hydroxytyrosol (5.7) and tyrosol (5.8) in a graduated 50 ml flask (6.2) and take
to volume with a solution of methanol/water 80/20 v/v (5.7). Transfer 1 ml (5.3) in another 10 ml flask
and fill to volume with the same solution (5.7). The final concentration will be 50 mg/l of each external
standard. Inject 20 μl of this solution in the HPLC system. The solution is stable for 6 months at least
at – 20°C.
5.10 Hydrolysis solution constituted by ethanol/water/sulphuric acid 50/40/10 v/v/v.
6 Apparatus
Usual laboratory glassware
6.1 Analytical balance suitable to perform weighing to an accuracy of within +/- 0,1 mg
6.2 10 and 50 ml calibrated flasks class A
6.3 1000 μl and 5000 μl electronic pipette or manual pipette
6.4 10
...

SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 23942
Première édition
2020-07
Détermination de la teneur en
hydroxytyrosol et tyrosol dans
les huiles d'olive vierges extra —
Chromatographie liquide à haute
performance en phase inverse
(CLHP-RP)
Determination of hydroxytyrosol and tyrosol content in extra virgin
olive oils — Reverse phase high performance liquid chromatography
(RP-HPLC)
Numéro de référence
ISO/TS 23942:2020(F)
©
ISO 2020

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ISO/TS 23942:2020(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2020
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: [phone]
E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2020 – Tous droits réservés

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ISO/TS 23942:2020(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs . 1
6 Appareillage . 2
7 Échantillonnage . 3
8 Mode opératoire. 3
8.1 Préparation de l’échantillon . 3
8.2 Analyse CLHP. 3
8.2.1 Généralités . 3
8.2.2 Conditions de CLHP . 3
8.2.3 Identification des pics . 4
9 Expression des résultats. 5
10 Fidélité . 6
10.1 Étude de validation. 6
10.2 Répétabilité, r .6
10.3 Reproductibilité, R .6
11 Rapport d’essai . 6
Annexe A (Informative) Chromatogramme 280 nm . 7
Annexe B (normative) Limite de détection (LOD) et de quantification (LOQ) .8
Annexe C (informative) Étude de validation . 9
Bibliographie .10
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ISO/TS 23942:2020(F)

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2020 – Tous droits réservés

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ISO/TS 23942:2020(F)

Introduction
Les composés biophénoliques de nature sécoiridoïde et spécifiques de l’huile d’olive vierge extra (Olea
europaea L.), sont issus de l’oleuropéine et du ligstroside et, outre leurs caractéristiques sensorielles
particulières, sont associés à différents effets bénéfiques pour la santé humaine. Les composés
biophénoliques contiennent deux alcools aromatiques sous forme estérifiée, à savoir l’hydroxytyrosol
et le tyrosol. La méthode décrite dans le présent document repose sur une extraction de la fraction
biophénolique avec une solution méthanol/eau et sur une réaction d’hydrolyse ultérieure pour produire
[1][2]
du tyrosol libre et de l’hydroxytyrosol libre .
© ISO 2020 – Tous droits réservés v

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SPÉCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 23942:2020(F)
Détermination de la teneur en hydroxytyrosol et tyrosol
dans les huiles d'olive vierges extra — Chromatographie
liquide à haute performance en phase inverse (CLHP-RP)
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination quantitative de la teneur en hydroxytyrosol
et tyrosol dans les huiles d’olive vierges extra par chromatographie liquide à haute performance en
phase inverse (CLHP-RP) couplée à la détection spectrophotométrique. La méthode est également
applicable à toutes les autres huiles d’olive de catégorie commerciale différente.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
3.1
hydroxytyrosol et tyrosol
alcools aromatiques présents sous forme libre ou liée dans l’huile d’olive vierge extra, spécifiques de
l’espèce Olea europaea L.
4 Principe
L’hydroxytyrosol et le tyrosol, présents sous forme libre et sous forme estérifiée, sont extraits de l’huile
avec une solution méthanol/eau puis soumis à une réaction d’hydrolyse avec une solution éthanolique
à 10 % d’acide sulfurique. Les composés sont identifiés par CLHP et par détection spectrophotométrique
à 280 nm. La quantité d’alcools aromatiques libres est calculée par étalonnage externe.
5 Réactifs
Pendant l’analyse, sauf mention contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue.
5.1 Acide orthophosphorique, d’une fraction volumique de 85 %.
5.2 Méthanol de qualité chromatographique.
5.3 Acétonitrile de qualité chromatographique.
5.4 Eau de qualité chromatographique.
© ISO 2020 – Tous droits réservés 1

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ISO/TS 23942:2020(F)

5.5 Éthanol, d’une fraction volumique de 96 %.
5.6 Acide sulfurique, d’une fraction volumique de 96 %.
5.7 Solution méthanol/eau, 80/20 V/V.
5.8 Échantillon de référence: hydroxytyrosol ou 2-(3,4-Dihydroxyphényl)éthanol, par exemple
1)
Extrasynthese, (Cedex, France) .
1)
5.9 Échantillon de référence: tyrosol, par exemple Sigma Aldrich (Allemagne) .
5.10 Solution d’étalonnage externe d’hydroxytyrosol et de tyrosol
Préparer la solution d’étalonnage externe d’hydroxytyrosol et de tyrosol comme suit.
Peser exactement, à 0,1 mg près, environ 25 mg d’hydroxytyrosol (5.8) et de tyrosol (5.9) dans une
fiole jaugée de 50 ml (6.2) et compléter au volume avec une solution méthanol/eau 80/20 V/V (5.7).
Transvaser 1 ml de cette solution dans une autre fiole de 10 ml et compléter au volume avec la même
solution méthanol/eau 80/20 V/V (5.7). La concentration finale sera de 50 mg/l pour chaque étalon
externe. Injecter 20 μl de cette solution dans le système CLHP. La solution est stable pendant au moins
six mois à –20 °C.
5.11 Solution d’hydrolyse, constituée d’éthanol/eau/acide sulfurique 50/40/10 V/V/V.
6 Appareillage
Verrerie de laboratoire habituelle et éléments suivants.
6.1 Balance analytique précise à ± 0,1 mg.
6.2 Fioles jaugées de 10 ml et 50 ml, de classe A.
6.3 Pipette électronique de 1 000 μl et 5 000 μl ou pipette manuelle.
6.4 Tube à essai de 10 ml, avec bouchon à vis.
6.5 Mélangeur, de type Vortex.
6.6 Bain d’extraction à ultrasons.
6.7 Filtres seringues en PVDF (polyfluorure de vinylidène), 0,45 μm, 13 mm.
6.8 Centrifugeuse pouvant tourner à 5 000 r/min.
6.9 Seringue en plastique de 5 ml.
6.10 Bain thermostatique.
1) Extrasynthese (Cedex, France) et Sigma Al
...

PROJET DE NORME INTERNATIONALE
ISO/DIS 23942
ISO/TC 34/SC 11 Secrétariat: BSI
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2019-12-17 2020-03-10
Détermination de la teneur en hydroxytyrosol et tyrosol
dans les huiles d'olive vierges extra — Méthode CLHP
Determination of hydroxytyrosol and tyrosol content in extra virgin olive oils — HPLC method
ICS: 67.200.10
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Le présent document est distribué tel qu’il est parvenu du secrétariat du comité.
DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE
CONSIDÉRÉS DU POINT DE VUE DE LEUR
POSSIBILITÉ DE DEVENIR DES NORMES
POUVANT SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA
RÉGLEMENTATION NATIONALE.
Numéro de référence
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET
ISO/DIS 23942:2019(F)
SONT INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS
OBSERVATIONS, NOTIFICATION DES DROITS
DE PROPRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT
ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
©
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE. ISO 2019

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ISO/DIS 23942:2019(F)
ISO/DIS 23942:2019(F)

Sommaire Page
Avant-propos . iv
Introduction . v
1 Domaine d’application .1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions .1
4 Principe .1
5 Réactifs .1
6 Appareillage .2
7 Échantillonnage .3
8 Mode opératoire.3
8.1 Préparation de l’échantillon .3
8.2 Analyse CLHP .3
9 Expression des résultats .5
10 Fidélité .6
10.1 Étude de validation .6
10.2 Répétabilité, r.6
10.3 Reproductibilité, R .6
11 Rapport d’essai .6
Annexe A (informative) Chromatogrammes .7
Annexe B (normative) Limite de détection (LOD) et de quantification (LOQ) .8
Annexe C (informative) Étude de validation italienne .9
Annexe D (informative) Données de validation internationale supplémentaires ou autres
données de validation . 10
Bibliographie . 11

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© ISO 2019
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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
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Publié en Suisse
© ISO 2019 – Tous droits réservés iii
ii © ISO 2019 – Tous droits réservés

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ISO/DIS 23942:2019(F)
Sommaire Page
Avant-propos . iv
Introduction . v
1 Domaine d’application .1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions .1
4 Principe .1
5 Réactifs .1
6 Appareillage .2
7 Échantillonnage .3
8 Mode opératoire.3
8.1 Préparation de l’échantillon .3
8.2 Analyse CLHP .3
9 Expression des résultats .5
10 Fidélité .6
10.1 Étude de validation .6
10.2 Répétabilité, r.6
10.3 Reproductibilité, R .6
11 Rapport d’essai .6
Annexe A (informative) Chromatogrammes .7
Annexe B (normative) Limite de détection (LOD) et de quantification (LOQ) .8
Annexe C (informative) Étude de validation italienne .9
Annexe D (informative) Données de validation internationale supplémentaires ou autres
données de validation . 10
Bibliographie . 11

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ISO/DIS 23942:2019(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le
droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, de la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute autre information au sujet de
l’adhésion de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les
obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant : www.iso.org/iso/fr/avant-propos.html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
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ISO/DIS 23942:2019(F)
Introduction
Les composés biophénoliques de nature sécoiridoïde et propres à l’huile d’olive vierge extra (Olea
europaea L.) sont issus de l’oleuropéine et du ligstroside et, outre leurs caractéristiques sensorielles
particulières, sont associés à différents effets bénéfiques pour la santé humaine. Les composés
biophénoliques contiennent deux alcools aromatiques sous forme estérifiée, à savoir l’hydroxytyrosol et
le tyrosol. La méthode repose sur l’extraction de la fraction biophénolique avec une solution
méthanol/eau et sur une réaction d’hydrolyse ultérieure pour produire du tyrosol libre et de
[1][2]
l’hydroxytyrosol libre .

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PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 23942

Détermination de la teneur en hydroxytyrosol et tyrosol dans les
huiles d'olive vierges extra — Méthode CLHP
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de détermination quantitative de la teneur en
hydroxytyrosol et tyrosol dans les huiles d’olive vierges extra par CLHP en phase inverse (RP) couplée à
la détection spectrophotométrique. La méthode est également applicable à toutes les autres huiles
d’olive de différentes catégories commerciales.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes :
— IEC Electropedia : disponible à l’adresse http://www.electropedia.org/
— ISO Online Browsing Platform (OBP) : disponible à l’adresse http://www.iso.org/obp
3.1
hydroxytyrosol et tyrosol
teneur totale exprimée en milligrammes d’hydroxytyrosol et de tyrosol par kilogramme d’huile d’olive
vierge extra après extraction de l’huile et réaction d’hydrolyse jusqu’à la forme libre
4 Principe
L’hydroxytyrosol et le tyrosol, présents sous forme libre et sous forme estérifiée, sont extraits de l’huile
avec une solution méthanol/eau puis soumis à une réaction d’hydrolyse avec une solution éthanolique à
10 % d’acide sulfurique. Les composés sont identifiés par CLHP et par détection spectrophotométrique
à 280 nm et la quantité d’alcools aromatiques libres est calculée par étalonnage externe.
5 Réactifs
Pendant l’analyse, sauf mention contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue.
5.1 Acide orthophosphorique à 85 % V/V
5.2 Méthanol de qualité chromatographique
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ISO/DIS 23942:2019(F)
5.3 Acétonitrile de qualité chromatographique
5.4 Eau de qualité chromatographique
5.5 Éthanol à 96 % V/V
5.6 Acide sulfurique à 96 % V/V
5.7 Solution méthanol/eau 80/20 V/V
5.8 Échantillon de référence : hydroxytyrosol ou 2-(3,4-Dihydroxyphényl)éthanol, p
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