ISO 18363-3:2024
(Main)Animal and vegetable fats and oils — Determination of fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS — Part 3: Method using acid transesterification and measurement for 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol
Animal and vegetable fats and oils — Determination of fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS — Part 3: Method using acid transesterification and measurement for 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol
This document specifies a procedure for the simultaneous determination of 2-MCPD esters (bound 2-MCPD), 3‐MCPD esters (bound 3‐MCPD) and glycidyl esters (bound glycidol) in a single assay, based on acid catalysed ester cleavage and derivatization of cleaved (free) analytes with phenylboronic acid (PBA) prior to GC/MS analysis. This document is applicable to solid and liquid fats and oils. For all three analytes the limit of quantification (LOQ) is 0,1 mg/kg and the limit of detection (LOD) is 0,03 mg/kg.
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination des esters de chloropropanediols (MCPD) et d'acides gras et des esters de glycidol et d'acides gras par CPG/SM — Partie 3: Méthode par transestérification acide et mesure du 2-MCPD, du 3-MCPD et du glycidol
Le présent document spécifie un mode opératoire permettant la détermination simultanée des esters de 2-MCPD (2-MCPD lié), des esters de 3-MCPD (3-MCPD lié) et des esters de glycidol (glycidol lié) en un seul essai, basé sur le clivage des esters par catalyse acide et la dérivatisation des analytes clivés (libres) à l’acide phénylboronique (PBA) avant analyse par CPG/SM. Le présent document est applicable aux corps gras solides et liquides. Pour l’ensemble des trois analytes, la limite de quantification (LOQ) est de 0,1 mg/kg et la limite de détection (LOD) est de 0,03 mg/kg.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
International
Standard
ISO 18363-3
Second edition
Animal and vegetable fats and
2024-06
oils — Determination of fatty-acid-
bound chloropropanediols (MCPDs)
and glycidol by GC/MS —
Part 3:
Method using acid
transesterification and
measurement for 2-MCPD, 3-MCPD
and glycidol
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination des
esters de chloropropanediols (MCPD) et d'acides gras et des
esters de glycidol et d'acides gras par CPG/SM —
Partie 3: Méthode par transestérification acide et mesure du
2-MCPD, du 3-MCPD et du glycidol
Reference number
© ISO 2024
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Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
5.1 Standard and reference compounds .2
5.2 Standard solutions .3
5.2.1 General .3
5.2.2 Stock solutions (1 mg/ml) .3
5.2.3 Working solutions .3
5.3 Other reagents .4
5.4 Reagent solutions .4
6 Apparatus . 5
7 Sample . 5
7.1 Sampling .5
7.2 Preparation of the test sample .5
8 Procedure . 6
8.1 Test sample preparation .6
8.2 Preparation of the calibration curve .7
8.3 Gas chromatography/mass spectrometry references .7
9 Expression of results . 8
9.1 Quantification of 3-MCPD esters .8
9.2 Quantification of 2-MCPD esters .8
9.3 Quantification of glycidyl esters .9
10 Precision . 10
10.1 General .10
10.2 Repeatability .10
10.3 Between-day reproducibility . .10
11 Test report . 10
Annex A (informative) Construction of the calibration curves .11
Annex B (informative) Results of the interlaboratory test .15
Bibliography . 17
iii
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee
has been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types
of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the
ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received notice of (a)
patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that
this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN)
Technical Committee CEN/TC 307, Oilseeds, vegetable and animal fats and oils and their by-products – Methods
of sampling and analysis, in accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and CEN
(Vienna Agreement).
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 18363-3:2017), of which it constitutes a minor
revision.
The main changes are as follows:
— the text of the Introduction has been revised to be consistent with ISO 18363-4:2021.
A list of all parts in the ISO 18363 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
Introduction
[1]
The ISO 18363 series can be used for the determination of ester-bound MCPD and glycidol. This
introduction describes the methods specified in the different parts so that the analyst can decide which
methods are suitable for application. The detailed application of each method is contained within the scope
of each individual method.
[2]
ISO 18363-1 is a differential method equivalent to DGF standard C-VI 18 (10) and identical to AOCS Official
[3]
Method Cd 29c-13 . In brief, it is based on a fast alkaline catalysed release of 3-MCPD and glycidol from the
ester derivatives. Glycidol is subsequently converted into induced 3-MCPD. It consists of two parts. The first
part (A) allows the determination of the sum of ester-bound 3-MCPD and ester-bound glycidol, whereas the
second part (B) determines ester-bound 3-MCPD only. Both assays are based on the release of the target
analytes 3-MCPD and glycidol from the ester-bound form by an alkaline catalysed alcoholysis carried
out at room temperature. In part A, an acidified sodium chloride solution is used to stop the reaction and
subsequently convert the glycidol into induced 3-MCPD. Thus, 3-MCPD and glycidol become indistinguishable
in part A. In part B, the reaction stop is achieved by the addition of an acidified chloride-free salt solution
which also prevents the conversion of glycidol into induced MCPD. Consequently, part B allows the
determination of the genuine 3-MCPD content. Finally, the glycidol content of the sample is proportional to
the difference of both assays (A – B) and can be calculated when the transformation ratio from glycidol to
3-MCPD has been determined. ISO 18363-1 is applicable to the fast determination of ester-bound 3-MCPD
and glycidol in refined and non-refined vegetable oils and fats. ISO 18363-1 can also apply to animal fats and
used frying oils and fats, but a validation study must be undertaken before the analysis of these matrices.
Any free analytes within the sample would be included in the results, but the document does not allow the
distinction between free and bound analytes. However, as of publication of this document, research has not
shown any evidence of a free analyte content as high as the esterified analyte content in refined vegetable
oils and fats. In principle, ISO 18363-1 can also be modified in such a way that the determination of 2-MCPD
is feasible, but again, a validation study must be undertaken before the analysis of this analyte.
[4]
ISO 18363-2 represents AOCS Official Method Cd 29b-13 . In brief, it is based on a slow alkaline release of
MCPD and glycidol from the ester derivatives. Glycidol is subsequently converted into 3-MBPD. ISO 18363-2
consists of two sample preparations that differ in the use of internal standards. Both preparations are used
for the determination of ester-bound 2-MCPD and 3-MCPD. In part A, a preliminary result for ester-bound
glycidol is determined. Because the 3-MCPD present in the sample is converted to some minor extent into
induced glycidol by the sample preparation, part B serves to quantify this amount of induced glycidol that is
subsequently subtracted from the preliminary glycidol result of part A. By the use of isotopically labelled free
MCPD isomers in assay A and isotopically labelled ester-bound 2-MCPD and 3-MCPD in part B, the efficiency
of ester cleavage can be monitored. Both assays A and B are based on the release of the target analytes
2-MCPD, 3-MCPD and glycidol from the ester-bound form by a slow alkaline catalysed alcoholysis in the cold.
In both sample preparations, the reaction is stopped by the addition of an acidified concentrated sodium
bromide solution so as to convert the unstable and volatile glycidol into 3-MBPD which shows comparable
properties to 3-MCPD with regard to its stability and chromatographic performance. Moreover, the major
excess of bromide ions prevents the undesired formation of 3-MCPD from glycidol in the case of samples
which contain naturally occurring amounts of chloride. ISO 18363-2 is applicable to the determination of
ester-bound 3-MCPD, 2-MCPD and glycidol in refined and unrefined vegetable oils and fats. It also applies
to animal fats and used frying oils and fats, but a validation study must be undertaken before the analysis
of these matrices. Any free analytes within the sample are included in the results, but the document does
not allow the distinction between free and bound analytes. However, as of publication of this document,
research has not shown any evidence of a free analyte content as high as the esterified analyte content in
refined vegetable oils and fats.
[5]
This document (i.e. ISO 18363-3) represents AOCS Official Method Cd 29a-13 . In brief, it is based on the
conversion of glycidyl esters into 3-MBPD esters and a slow acid catalysed release of MCPD and MBPD from
the ester derivatives. This document is based on a single sample preparation in which glycidyl esters are
converted into MBPD monoesters, and subsequently, the free analytes 2-MCPD, 3-MCPD and 3-MBPD are
released by a slow acid catalysed alcoholysis. The 3-MBPD represents the genuine content of bound glycidol.
This document is applicable to the determination of ester-bound 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol in refined
and non-refined vegetable oils and fats. It also applies to animal fats and used frying oils and fats, but a
validation study must be undertaken before the analysis of these matrices. The method is suited for the
analysis of bound (esterified) analytes, but if required this document can also be performed without the
v
initial conversion of glycidyl esters. In such a setup, both free and bound 2-MCPD and 3-MCPD forms are
included in the results and the amount of free analytes can be calculated as the difference between two
determinations performed in both setups. However, as of publication of this document, research has not
shown any evidence of a free analyte content as high as the esterified analyte content in refined vegetable
oils and fats.
ISO 18363-4 specifies a rapid procedure based on fast alkaline cleavage of the MCPD and glycidyl esters.
The released glycidol is subsequently converted into 3-MBPD. The pH of the fast alkaline cleavage generally
causes the released MCPD to partially convert to glycidol during the cleavage of the esters, leading to
overestimation of the glycidyl ester content of the sample. By adding two distinct isotopically labelled ester-
bound 3-MCPD and glycidol internal standards, it is possible to quantify the amount of labelled glycidol
resulting from the degradation of the released internal standard. This information can be used to correct
for overestimation of the glycidyl ester induced glycidol by 3-MCPD induced glycidol. The same two internal
standards are used for quantification of the bound MCPD and glycidol, requiring a single sample preparation
to quantify bound 2-MCPD-, 3-MCPD- and glycidol esters. In analogue with ISO 18363-1, ISO 18363-2
and this document, the released MCPDs and 3-MBPD are derivatized with phenylboronic acid before GC-
MS/MS analysis. In contrast to the other parts of the ISO 18363 series, ISO 18363-4 requires GC-MS/MS
instrumentation to unambiguously detect each of the (isotopically labelled) MBPDs required for correct
quantification of the glycidyl ester induced glycidol. ISO 18363-4 is applicable to the determination of ester-
bound 3-MCPD, 2-MCPD and glycidol in refined and unrefined vegetable oils and fats. It also applies to
animal fats and used frying oils and fats, but a validation study must be undertaken before analysis of these
matrices. Any free analytes within the sample are included in the results, but ISO 18363-4 will not allow the
distinction between free and bound analytes. However, as of publication of this document, research has not
shown any evidence of a free analyte content as high as the esterified analyte content in refined vegetable
oils and fats.
vi
International Standard ISO 18363-3:2024(en)
Animal and vegetable fats and oils — Determination of
fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol
by GC/MS —
Part 3:
Method using acid transesterification and measurement for
2-MCPD, 3-MCPD and glycidol
1 Scope
This document specifies a procedure for the simultaneous determination of 2-MCPD esters (bound 2-MCPD),
3-MCPD esters (bound 3-MCPD) and glycidyl esters (bound glycidol) in a single assay, based on acid catalysed
ester cleavage and derivatization of cleaved (free) analytes with phenylboronic acid (PBA) prior to GC/MS
analysis.
This document is applicable to solid and liquid fats and oils. For all three analytes the limit of quantification
(LOQ) is 0,1 mg/kg and the limit of detection (LOD) is 0,03 mg/kg.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content constitutes
requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references,
the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
bound 2-MCPD
amount of 2-MCPD cleaved from its esterified (bound) forms by acid catalysed transesterification according
to the reference method
Note 1 to entry: The content of 2-MCPD is calculated and reported as a mass fraction, in milligrams per kilogram (mg/kg).
3.2
bound 3-MCPD
amount of 3-MCPD cleaved from its esterified (bound) forms by acid catalysed transesterification according
to the reference method
Note 1 to entry: The content of 3-MCPD is calculated and reported as a mass fraction, in milligrams per kilogram (mg/kg).
3.3
bound glycidol
amount of glycidol cleaved from its esterified (bound) forms by acid catalysed transesterification according
to the reference method
Note 1 to entry: The content of glycidol is calculated and reported as a mass fraction, in milligrams per kilogram (mg/kg).
4 Principle
The oil/fat sample is dissolved in tetrahydrofuran, and the internal standards (pentadeuterated 3-MCPD
diester and pentadeuterated glycidyl ester) are added. During the first step of sample preparation, glycidyl
esters are converted into 3-MBPD monoesters by the addition of an acidified solution of sodium bromide.
Upon completion of the reaction, the organic phase, containing 2- and 3-MCPD esters and 3-MBPD esters,
is separated and evaporated to dryness. In the second step the residue is dissolved in tetrahydrofuran
and the acid transesterification is initiated by the addition of an acid alcoholic solution. After 16 h
incubation at 40 °C, the sample mixture is neutralized and the fatty acid methyl esters generated during
the transesterification are removed. Finally, the purified sample [containing cleaved (free) analytes] is
derivatized with phenylboronic acid prior to GC/MS analysis.
The quantification of 2- and 3-MCPD esters (expressed as bound 2- and 3-MCPD) is based on the 2-MCPD/3-
MCPD-d5 and 3-MCPD/3-MCPD-d5 signal ratio, respectively. The quantification of glycidyl esters (expressed
as bound glycidol) is based on the 3-MBPD/3-MBPD-d5 signal ratio.
This method allows the simultaneous quantification of all three analytes in a single assay.
5 Reagents
WARNING — This document requires handling of hazardous substances. Technical, organizational
and personal safety measures shall be followed.
Unless otherwise stated, analytically pure reagents shall be used. Water shall conform to grade 3 of ISO 3696.
5.1 Standard and reference compounds
5.1.1 1,2-Dipalmitoyl-3-chloropropanediol (PP-3-MCPD), purity ≥ 95 % (e.g. from a supplier or
synthesized from 3-MCPD and palmitoyl chloride as described by Reference [6]).
NOTE 1,2-Dipalmitoyl-3-chloropropanediol can be substituted by 1,2-dioleyl-3-chloropropanediol or other
fatty acid diesters of 3-MCPD with similar chain length (C16-C18 are preferred as they are the most abundant in the
majority of oils/fats).
5.1.2 1,3-Dipalmitoyl-2-chloropropanediol (PP-2-MCPD), purity ≥ 95 % (e.g. synthesized from 2-MCPD
and palmitoyl chloride as described by Reference [6]).
NOTE In analogy with the recommendations given for PP-3-MCPD, 1,3-dipalmitoyl-2-chloropropanediol can be
substituted by other fatty acid diesters of 2-MCPD with similar chain length (C16-C18 are preferred as they are the
most abundant in the majority of oils/fats).
5.1.3 Pentadeuterated 1,2-dipalmitoyl-3-chloropropanediol (PP-3-MCPD-d5), purity ≥ 95 %.
NOTE The same consideration applied to 1,2-dipalmitoyl-3-chloropropanediol is valid also for its pentadeuterated
analogue, see the note in 5.1.1.
5.1.4 Glycidyl palmitate (Gly-P), purity ≥ 98 %.
NOTE Glycidyl palmitate can be substituted by glycidyl oleate or other fatty acid esters of glycidol with similar
chain length (C16-C18 are preferred as they are the most abundant in the majority of oils/fats).
5.1.5 Pentadeuterated glycidyl palmitate (Gly-P-d5), purity ≥ 98 %.
NOTE The same consideration applied to glycidyl palmitate is valid also for its pentadeuterated analogue, see the
note in 5.1.4.
5.2 Standard solutions
5.2.1 General
All standard solutions can be prepared with either toluene (5.3.5) or tetrahydrofuran (5.3.1). Toluene is
preferred for standard solutions containing glycidyl esters.
5.2.2 Stock solutions (1 mg/ml)
a) Weigh 10 mg of PP-3-MCPD (5.1.1) in a 10 ml volumetric flask. Fill up to the mark, making sure that the
standard is completely dissolved in the solvent.
b) Weigh 10 mg of PP-2-MCPD (5.1.2) in a 10 ml volumetric flask. Fill up to the mark, making sure that the
standard is completely dissolved in the solvent.
c) Weigh 10 mg of PP-3-MCPD-d5 (5.1.3) in a 10 ml volumetric flask. Fill up to the mark, making sure that
the standard is completely dissolved in the solvent.
d) Weigh 10 mg of Gly-P (5.1.4) in a 10 ml volumetric flask. Fill up to the mark, making sure that the
standard is completely dissolved in the solvent.
e) Weigh 10 mg of Gly-P-d5 (5.1.5) in a 10 ml volumetric flask. Fill up to the mark, making sure that the
standard is completely dissolved in the solvent.
NOTE Stock solutions are stable for at lea
...
Norme
internationale
ISO 18363-3
Deuxième édition
Corps gras d'origines animale et
2024-06
végétale — Détermination des
esters de chloropropanediols
(MCPD) et d'acides gras et des
esters de glycidol et d'acides gras
par CPG/SM —
Partie 3:
Méthode par transestérification
acide et mesure du 2-MCPD, du
3-MCPD et du glycidol
Animal and vegetable fats and oils — Determination of fatty-acid-
bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS —
Part 3: Method using acid transesterification and measurement
for 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol
Numéro de référence
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y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 2
5 Réactifs . 2
5.1 Composés étalons et composés de référence .2
5.2 Solutions étalons .3
5.2.1 Généralités .3
5.2.2 Solutions mères (1 mg/ml) .3
5.2.3 Solutions de travail .3
5.3 Autres réactifs.4
5.4 Solutions de réactifs .4
6 Appareillage . 5
7 Échantillon . 6
7.1 Échantillonnage .6
7.2 Préparation de l’échantillon pour essai .6
8 Mode opératoire . 6
8.1 Préparation de l’échantillon pour essai .6
8.2 Préparation de la droite d’étalonnage .7
8.3 Références relatives à la chromatographie en phase gazeuse/spectrométrie de masse
(CPG/SM) .7
9 Expression des résultats . 8
9.1 Quantification des esters de 3-MCPD .8
9.2 Quantification des esters de 2-MCPD .9
9.3 Quantification des esters de glycidol .10
10 Fidélité .11
10.1 Généralités .11
10.2 Répétabilité .11
10.3 Reproductibilité entre jours .11
11 Rapport d’essai .11
Annexe A (informative) Construction des droites d’étalonnage .12
Annexe B (informative) Résultats de l’essai interlaboratoires .16
Bibliographie .18
iii
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l’adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de
tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de
l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 307,
Oléagineux, corps gras d’origines végétale et animale et leurs co-produits — Méthodes d’échantillonnage et
d’analyse, du Comité européen de normalisation (CEN) conformément à l’Accord de coopération technique
entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 18363-3:2017), dont elle constitue une
révision mineure.
Les modifications principales sont les suivantes:
— révision du texte de l’Introduction pour qu’il soit en cohérence avec l’ISO 18363-4:2021.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 18363 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv
Introduction
[1]
La série ISO 18363 peut être utilisée pour la détermination des esters de MCPD et de glycidol. La présente
introduction décrit les méthodes spécifiées dans les différentes parties afin de permettre à l’analyste de
décider des méthodes appropriées en fonction de son application. L’application détaillée de chaque méthode
figure dans le domaine d’application de chaque méthode concernée.
[2]
L’ISO 18363-1 est une méthode différentielle équivalente à la norme C-VI 18 (10) de la DGF et identique
[3]
à la méthode officielle Cd 29c-13 de l’AOCS. En résumé, elle repose sur la libération rapide par catalyse
alcaline de 3-MCPD et de glycidol à partir de leurs dérivés esters. Le glycidol est par la suite converti en
3-MCPD. Elle comprend deux parties. La première partie (A) permet de déterminer la somme des esters de
3-MCPD et des esters de glycidol, tandis que la seconde partie (B) ne détermine que les esters de 3-MCPD.
Les deux analyses reposent sur la libération des analytes cibles, le 3-MCPD et le glycidol, à partir des esters
par alcoolyse en présence d’un catalyseur alcalin à température ambiante. Dans la partie A, une solution
acidifiée de chlorure de sodium est utilisée pour interrompre la réaction qui induit par la suite la conversion
du glycidol en 3-MCPD. Il n’est par conséquent plus possible de faire la distinction entre le 3-MCPD et le
glycidol dans la partie A. Dans la partie B, la réaction est interrompue par ajout d’une solution saline
acidifiée exempte de chlorure qui évite aussi la conversion du glycidol en MCPD. La partie B permet ainsi de
déterminer la véritable teneur en 3-MCPD. Enfin, la teneur en glycidol de l’échantillon est proportionnelle
à la différence entre les deux analyses (A – B) et peut être calculée lorsque le coefficient de transformation
du glycidol en 3-MCPD a été déterminé. L’ISO 18363-1 est applicable à la détermination rapide des esters
de 3-MCPD et de glycidol dans les corps gras d’origine végétale raffinés et non raffinés. L’ISO 18363-1 peut
également s’appliquer aux graisses animales et aux huiles de friture usagées, mais une étude de validation
doit être menée avant de procéder à l’analyse de ces matrices. Les analytes libres éventuellement contenus
dans l’échantillon sont habituellement inclus dans les résultats, mais le document ne permet pas de faire
la distinction entre les analytes libres et les analytes liés. Néanmoins, les études disponibles au moment
de la publication du présent document ne révèlent aucune teneur en analytes libres aussi élevée que la
teneur en analytes estérifiés dans les corps gras d’origine végétale raffinés. En principe, l’ISO 18363-1 peut
également être modifiée de façon à permettre la détermination du 2-MCPD, mais une fois encore, une étude
de validation doit être menée avant d’analyser cet analyte.
[4]
L’ISO 18363-2 correspond à la méthode officielle Cd 29b-13 de l’AOCS. En résumé, elle repose sur une
libération alcaline lente de MCPD et de glycidol à partir des formes esters. Le glycidol est par la suite converti
en 3-MBPD. L’ISO 18363-2 comprend deux préparations d’échantillons qui se distinguent par l’utilisation
d’étalons internes. Les deux préparations sont utilisées pour la détermination des esters de 2-MCPD et de
3-MCPD. Un résultat préliminaire pour les esters de glycidol est déterminé dans la partie A. Comme le 3-MCPD
présent dans l’échantillon est partiellement converti en glycidol lors de la préparation de l’échantillon, la
partie B sert à quantifier la teneur en glycidol issue de cette transformation qui est ensuite soustraite du
résultat préliminaire obtenu pour le glycidol dans la partie A. L’utilisation d’isomères isotopiques de MCPD
libres dans l’analyse A et de formes isotopiques d’esters de 2-MCPD et de 3-MCPD dans la partie B permet de
surveiller le rendement du clivage des esters. Les analyses A et B reposent toutes les deux sur la libération
des analytes cibles, 2-MCPD, 3-MCPD et glycidol à partir des esters dans le cadre d’une alcoolyse lente en
présence d’un catalyseur alcalin dans le froid. Dans les deux préparations d’échantillons, la réaction est
interrompue par l’ajout d’une solution acidifiée et concentrée de bromure de sodium de façon à transformer
le glycidol instable et volatil en 3-MBPD qui présente des propriétés comparables au 3-MCPD en matière
de stabilité et de performances chromatographiques. De plus, l’excès important d’ions bromure empêche
la formation non souhaitée de 3-MCPD à partir du glycidol dans les échantillons contenant naturellement
des quantités de chlorure. L’ISO 18363-2 est applicable à la détermination des esters de 3-MCPD, de 2-MCPD
et de glycidol dans les corps gras d’origine végétale raffinés et non raffinés. Elle s’applique également aux
graisses animales et aux huiles de friture usagées, mais une étude de validation doit être menée avant de
procéder à l’analyse de ces matrices. Les analytes libres éventuellement contenus dans l’échantillon sont
inclus dans les résultats, mais le document ne permet pas de faire la distinction entre les analytes libres et
les analytes liés. Néanmoins, les études disponibles au moment de la publication du présent document ne
révèlent aucune teneur en analytes libres aussi élevée que la teneur en analytes estérifiés dans les corps
gras d’origine végétale raffinés.
[5]
Le présent document (à savoir, l’ISO 18363-3) correspond à la méthode officielle Cd 29a-13 de l’AOCS.
En résumé, elle repose sur la transformation des esters de glycidol en esters de 3-MBPD et une libération
lente par catalyse acide du MCPD et du MBPD à partir des formes esters. Le présent document repose sur la
v
préparation d’un échantillon unique dans lequel les esters de glycidol sont transformés en monoesters de
MBPD puis les analytes libres 2-MCPD, 3-MCPD et 3-MBPD sont libérés par alcoolyse lente en présence d’un
catalyseur acide. Le 3-MBPD représente la véritable teneur en glycidol issu des formes esters. Le présent
document est applicable à la détermination des esters de 2-MCPD, de 3-MCPD et de glycidol dans les corps
gras d’origine végétale raffinés et non raffinés. Il s’applique également aux graisses animales et aux huiles de
friture usagées, mais une étude de validation doit être menée avant de procéder à l’analyse de ces matrices.
La méthode est adaptée à l’analyse d’analytes liés (estérifiés), mais si cela est exigé, le présent document peut
également être mis en œuvre sans la transformation initiale des esters de glycidol. Dans cette configuration,
les formes libres et liées du 2-MCPD et du 3-MCPD sont toutes deux incluses dans les résultats et la teneur
en analytes libres peut être calculée comme la différence entre deux déterminations réalisées dans les deux
configurations. Néanmoins, les études disponibles au moment de la publication du présent document ne
révèlent aucune teneur en analytes libres aussi élevée que la teneur en analytes estérifiés dans les corps
gras d’origine végétale raffinés.
L’ISO 18363-4 spécifie un mode opératoire rapide reposant sur un clivage alcalin rapide des esters de MCPD
et de glycidol. Le glycidol libéré est par la suite converti en 3-MBPD. Le pH du clivage alcalin rapide entraîne
généralement la transformation partielle des MCPD libérés en glycidol au cours du clivage des esters,
conduisant à une surestimation de la teneur en esters de glycidol de l’échantillon. En ajoutant deux étalons
internes distincts d’ester de 3-MCPD et d’ester de glycidol marqués aux isotopes, il est possible de quantifier
la quantité de glycidol marqué résultant de la dégradation de l’étalon interne libéré. Cette information peut
être utilisée pour corriger la surestimation du glycidol issu des esters de glycidol par le glycidol issu du
3-MCPD. Les deux mêmes étalons internes sont utilisés pour la quantification des esters de MCPD et des
esters de glycidol, nécessitant la préparation d’un seul échantillon pour quantifier les esters de 2-MCPD,
3-MCPD et de glycidol. De même que dans l’ISO 18363-1, l’ISO 18363-2 et le présent document, les MCPD et
3-MBPD libérés sont dérivés avec de l’acide phénylboronique avant l’analyse par CPG-SM/SM. Au contraire
des autres parties de la série ISO 18363, l’ISO 18363-4 exige un appareil de type CPG-SM/SM pour détecter
sans ambiguïté chaque MBPD (marqué aux isotopes) requis pour une quantification exacte du glycidol issu
des esters de glycidol. L’ISO 18363-4 est applicable à la détermination des esters de 3-MCPD, de 2-MCPD
et de glycidol dans les corps gras d’origine végétale raffinés et non raffinés. Elle s’applique également aux
graisses animales et aux huiles de friture usagées, mais une étude de validation doit être menée avant de
procéder à l’analyse de ces matrices. Les analytes libres éventuellement contenus dans l’échantillon sont
inclus dans les résultats, mais l’ISO 18363-4 ne permettra pas de faire la distinction entre les analytes libres
et les analytes liés. Néanmoins, les études disponibles au moment de la publication du présent document ne
révèlent aucune teneur en analytes libres aussi élevée que la teneur en analytes estérifiés dans les corps
gras d’origine végétale raffinés.
vi
Norme internationale ISO 18363-3:2024(fr)
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination
des esters de chloropropanediols (MCPD) et d'acides gras et
des esters de glycidol et d'acides gras par CPG/SM —
Partie 3:
Méthode par transestérification acide et mesure du 2-MCPD,
du 3-MCPD et du glycidol
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie un mode opératoire permettant la détermination simultanée des esters de
2-MCPD (2-MCPD lié), des esters de 3-MCPD (3-MCPD lié) et des esters de glycidol (glycidol lié) en un seul
essai, basé sur le clivage des esters par catalyse acide et la dérivatisation des analytes clivés (libres) à l’acide
phénylboronique (PBA) avant analyse par CPG/SM.
Le présent document est applicable aux corps gras solides et liquides. Pour l’ensemble des trois analytes,
la limite de quantification (LOQ) est de 0,1 mg/kg et la limite de détection (LOD) est de 0,03 mg/kg.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour
les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d’essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en normalisation,
consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
2-MCPD lié
quantité de 2-MCPD clivé à partir de ses formes estérifiées (liées) par transestérification en présence d’un
catalyseur acide conformément à la méthode de référence
Note 1 à l'article: La teneur en 2-MCPD est calculée et consignée sous forme de fraction massique, exprimée en
milligrammes par kilogramme (mg/kg).
3.2
3-MCPD lié
quantité de 3-MCPD clivé à partir de ses formes estérifiées (liées) par transestérification en présence d’un
catalyseur acide conformément à la méthode de référence
Note 1 à l'article: La teneur en 3-MCPD est calculée et consignée sous forme de fraction massique, exprimée en
milligrammes par kilogramme (mg/kg).
3.3
glycidol lié
quantité de glycidol clivé à partir de ses formes estérifiées (liées) par transestérification en présence d’un
catalyseur acide conformément à la méthode de référence
Note 1 à l'article: La teneur en glycidol est calculée et consignée sous forme de fraction massique, exprimée en
milligrammes par kilogramme (mg/kg).
4 Principe
L’échantillon de corps gras est dissout dans du tétrahydrofurane et les étalons internes (diester de 3-MCPD
pentadeutéré et ester de glycidol pentadeutéré) sont ajoutés. Durant la première étape de préparation
de l’échantillon, les esters de glycidol sont transformés en monoesters de 3-MBPD par l’addition d’une
solution acidifiée de bromure de sodium. À la fin de la réaction, la phase organique, contenant les esters
de 2-MCPD et de 3-MCPD et les esters de 3-MBPD, est séparée et évaporée à sec. Dans la deuxième étape,
le résidu est dissous dans du tétrahydrofurane et la transestérification acide est initiée par l’ajout d’une
solution alcoolique acide. Après 16 h d’incubation à 40 °C, le mélange d’échantillon est neutralisé et les esters
méthyliques d’acides gras générés durant la transestérification sont éliminés. Enfin, l’échantillon purifié
(contenant les analytes clivés [libres]) est soumis à une dérivatisation avec de l’acide phénylboronique avant
analyse par CPG/SM.
La quantification des esters de 2- et 3-MCPD (exprimés sous forme de 2- et 3-MCPD liés) est basée
respectivement sur le rapport des signaux 2-MCPD/3-MCPD-d5 et 3-MCPD/3-MCPD-d5. La quantification
des esters de glycidol (exprimés sous forme de glycidol lié) est basée sur le rapport de signaux 3-MBPD/3-
MBPD-d5.
Cette méthode permet la quantification simultanée des trois analytes en un seul essai.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — Le présent document nécessite la manipulation de substances dangereuses.
Les mesures de sécurité sur les plans technique, organisationnel et du personnel doivent être suivies.
Sauf indication contraire, des réactifs analytiquement purs doivent être utilisés. L’eau doit être de qualité 3
conformément à l’ISO 3696.
5.1 Composés étalons et composés de référence
5.1.1 1,2-Dipalmitoyl-3-chloropropanediol (PP-3-MCPD), pureté ≥ 95 % (par exemple, obtenu auprès
d’un fournisseur ou synthétisé à partir de 3-MCPD et de chlorure de palmitoyle comme décrit par la
Référence [6]).
NOTE Le 1,2-dipalmitoyl-3-chloropropanediol peut être remplacé par le 1,2-dioléyl-3-chloropropanediol ou
d’autres diesters d’acide gras du 3-MCPD de longueur de chaîne similaire (les C16-C18 sont préférés car ils sont les
plus abondants dans la plupart des corps gras).
5.1.2 1,3-Dipalmitoyl-2-chloropropanediol (PP-2-MCPD), pureté ≥ 95 % (par exemple, synthétisé à
partir de 2-MCPD et de chlorure de palmitoyle comme décrit par la Référence [6]).
NOTE Par analogie avec les recommandations fournies pour le PP-3-MCPD, le 1,3-dipalmitoyl-2-chloropropanediol
peut être remplacé par d’autres diesters d’acide gras du 2-MCPD de longueur de chaîne similaire (les C16-C18 sont
préférés car ils sont les plus abondants dans la plupart des huiles/graisses).
5.1.3 1,2-Dipalmitoyl-3-chloropropanediol pentadeutéré (PP-3-MCPD-d5), pureté ≥ 95 %.
NOTE La même considération que celle appliquée au 1,2-dipalmitoyl-3-chloropropanediol est également valable
pour son analogue pentadeutéré, voir note en 5.1.1.
5.1.4 Palmitate de glycidyle (Gly-P), pureté ≥ 98 %.
NOTE Le palmitate de glycidyle peut être remplacé par l’oléate de glycidyle ou d’autres esters d’acide gras du
glycidol de longueur de chaîne similaire (les C16-C18 sont préférés car ils sont les plus abondants dans la plupart des
huiles/graisses).
5.1.5 Palmitate de glycidyle pentadeutéré (Gly-P-d5), pureté ≥ 98 %.
NOTE La même considération que celle appliquée au palmitate de glycidyle est également valable pour son
analogue pentadeutéré, voir note en 5.1.4.
5.2 Solutions étalons
5.2.1 Généralités
Toutes les solutions étalons peuvent être préparées avec du toluène (5.3.5) ou du tétrahydrofurane (5.3.1).
Le toluène est préféré pour les solutions étalons contenant des esters de glycidol.
5.2.2 Solutions mères (1 mg/ml)
a) Peser 10 mg de PP-3-MCPD (5.1.1) dans une fiole jaugée de 10 ml. Compléter jusqu’au trait, en s’assurant
que l’étalon est totalement dissout dans le solvant.
b) Peser 10 mg de PP-2-MCPD (5.1.2) dans une fiole jaugée de 10 ml. Compléter jusqu’au trait, en s’assurant
que l’étalon est totalement dissout dans le solvant.
c) Peser 10 mg de PP-3-MCPD-d5 (5.1.3) dans une fiole jaugée de 10 ml. Compléter jusqu’au trait,
en s’assurant que l’étalon est totalement dissout dans le solvant.
d) Peser 10 mg de Gly-P (5.1.4) dans une fiole jaugée de 10 ml. Compléter jusqu’au trait, en s’assurant que
l’étalon est totalement dissout dans le solvant.
e) Peser 10 mg de Gly-P-d5 (5.1.5) dans une fiole jaugée de 10 ml. Compléter jusqu’au trait, en s’assurant
que l’étalon est totalement dissout dans le solvant.
NOTE Les solutions mères sont stables pendant au moins trois mois lorsqu’elles sont conservées
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.
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