ISO 6647-1:2007
(Main)Rice — Determination of amylose content — Part 1: Reference method
Rice — Determination of amylose content — Part 1: Reference method
ISO 6647-1:2007 specifies a reference method for the determination of the amylose content of milled rice, non-parboiled. The method is applicable to rice with an amylose mass fraction higher than 5 %. ISO 6647-1:2007 can also be used for husked rice, maize, millet and other cereals if the extension of this scope has been validated by the user.
Riz — Détermination de la teneur en amylose — Partie 1: Méthode de référence
L'ISO 6647-1:2007 spécifie une méthode de référence pour la détermination de la teneur en amylose du riz usiné, non étuvé. La méthode s'applique à du riz dont la teneur en amylose est supérieure à 5 % (fraction massique). L'ISO 6647-1:2007 peut également être utilisée pour le riz décortiqué, le maïs, le millet et d'autres céréales, si l'extension de ce domaine d'application a été validée par l'utilisateur.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6647-1
First edition
2007-09-01
Rice — Determination of amylose
content —
Part 1:
Reference method
Riz — Détermination de la teneur en amylose —
Partie 1: Méthode de référence
Reference number
ISO 6647-1:2007(E)
©
ISO 2007
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 6647-1:2007(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2007
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2007 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 6647-1:2007(E)
Contents Page
Foreword. iv
1 Scope .1
2 Normative references .1
3 Terms and definitions .1
4 Principle.2
5 Reagents.2
6 Apparatus .3
7 Sampling.4
8 Procedure .4
8.1 Preparation of test sample.4
8.2 Test portion and preparation of the test solution .4
8.3 Preparation of the blank solution.4
8.4 Preparation of the calibration graph.4
8.5 Determination.5
9 Expression of results .5
10 Precision.6
10.1 Interlaboratory test .6
10.2 Repeatability.6
10.3 Reproducibility.6
11 Test report .6
Annex A (informative) Determination of the quality of the potato amylose standard.7
Annex B (informative) Example of a flow injection analyser (FIA) for the determination of amylose.9
Annex C (informative) Results of an interlaboratory test.10
Bibliography .12
© ISO 2007 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 6647-1:2007(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 6647-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 4, Cereals
and pulses.
This edition of ISO 6647-1, together with ISO 6647-2:2007, cancels and replaces ISO 6647:1987, which has
been technically revised.
ISO 6647 consists of the following parts, under the general title Rice — Determination of amylose content:
⎯ Part 1: Reference method
⎯ Part 2: Routine methods
iv © ISO 2007 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 6647-1:2007(E)
Rice — Determination of amylose content —
Part 1:
Reference method
1 Scope
This part of ISO 6647 specifies a reference method for the determination of the amylose content of milled rice,
non-parboiled. The method is applicable to rice with an amylose mass fraction higher than 5 %.
This part of ISO 6647 can also be used for husked rice, maize, millet and other cereals if the extension of this
scope has been validated by the user.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 712, Cereals and cereal products — Determination of moisture content — Routine reference method
ISO 7301, Rice — Specification
ISO 8466-1, Water quality — Calibration and evaluation of analytical methods and estimation of performance
characteristics — Part 1: Statistical evaluation of the linear calibration function
ISO 15914, Animal feeding stuffs — Enzymatic determination of total starch content
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 7301 and the following apply.
3.1
amylose
polysaccharide constituent of starch, the macromolecules of which have glucose units linked in a
predominantly linear structure
3.2
amylopectin
polysaccharide constituent of starch, the macromolecules of which have glucose units linked in a branched
structure
© ISO 2007 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 6647-1:2007(E)
4 Principle
Rice is ground to a very fine flour to break up the endosperm structure in order to aid complete dispersion and
gelatinization; the flour is then defatted. A test portion is dispersed in a sodium hydroxide solution, to an
aliquot portion of which an iodine solution is added. The absorbance, at 720 nm, of the colour complex formed
is then determined using a spectrophotometer.
The amylose mass fraction of the sample is then read from a calibration graph, which is prepared using
mixtures of potato amylose and amylopectin to make allowance for the effect of amylopectin on the colour of
the amylose–iodine complex of the test solution.
NOTE The method actually determines the affinity of amylose for iodine. The determination is made at 720 nm to
minimize interfering effects of amylopectin.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized
water or water of equivalent purity.
5.1 Methanol, a volume fraction of 85 %.
5.2 Ethanol, a volume fraction of 95 %.
5.3 Sodium hydroxide dispersal solutions.
5.3.1 Sodium hydroxide, 1 mol/l solution.
5.3.2 Sodium hydroxide, 0,09 mol/l solution.
5.4 Deproteination solutions
5.4.1 Detergent solution
Dissolve sodium dodecylbenzene sulfonate corresponding to a concentration of 20 g/l. Just before use, add
sodium sulfite to a final concentration of 2 g/l.
5.4.2 Sodium hydroxide, for protein removal, 3 g/l solution.
5.5 Acetic acid, 1 mol/l solution.
5.6 lodine solution.
Weigh, to the nearest 5 mg, 2,000 g of potassium iodide in a weighing bottle fitted with a stopper. Add
sufficient water to form a saturated solution. Add 0,200 g of iodine, weighed to the nearest 1 mg. When all the
iodine has dissolved, transfer the solution quantitatively to a 100 ml volumetric flask (6.6), make up to volume
with water and mix.
Prepare a fresh solution on each day of use and protect it from light.
5.7 Standard potato amylose suspension, free of amylopectin, 1 g/l.
5.7.1 Defat the potato amylose by refluxing with methanol (5.1) for 4 h to 6 h in an extractor at a rate of 5 to
6 droplets per second.
The potato amylose should be pure and should be tested by amperometric or potentiometric titration. Some
commercial preparations are impure and would give erroneously high results for the amylose mass fraction of
rice samples. Pure amylose should bind 19 % to 20 % of its own mass of iodine. For checking the purity of
amylose, see Annex A.
2 © ISO 2007 – All rights reserved
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 6647-1:2007(E)
5.7.2 Spread the defatted potato amylose on a tray and leave for 2 days to allow evaporation of residual
methanol and for moisture content equilibrium to be reached.
Treat the amylopectin (5.8) and the test samples (8.1) in the same way.
5.7.3 Weigh (6.9) 100 mg ± 0,5 mg of the defatted and conditioned potato amylose into a 100 ml conical
flask (6.8). Carefully add 1 ml of ethanol (5.2), rinsing down any potato amylose adhering to the walls of the
flask. Add 9,0 ml of 1 mol/l sodium hydroxide solution (5.3.1) and mix. Then heat the mixture on a boiling
water bath (6.7) for 10 min to disperse the potato amylose. Allow to cool to room temperature and transfer into
a 100 ml volumetric flask (6.6).
Make up to volume with water and mix vigorously.
1 ml of this standard suspension contains 1 mg of potato amylose.
When the test samples, the amylose and the amylopectin are conditioned in the same environment, no
correction for moisture content is necessary and the results are obtained on a dry milled rice basis. If the test
samples and the standards are not prepared under the same conditions, the moisture content of both the
samples and the standards has to be determined as specified in ISO 712 and the results should be corrected
accordingly.
5.8 Standard amylopectin suspension, 1 g/l.
Prepare from milled glutinous (waxy) rice with a starch content known to consist of at least 99 % by mass of
amylopectin. Steep the milled glutinous rice and blend in a suitable laboratory blender (6.1) to a finely divided
state. Remove protein by exhaustive extraction with detergent solution (5.4.1), or, alternatively, with sodium
hydroxide solution (5.4.2), wash and then defat by refluxing with methanol (5.1) as described in 5.7.1. Spread
the deproteinated and defatted amylopectin on a tray and leave for 2 days to allow evaporation of residual
methanol and for moisture content equilibrium to be reached.
Carry out the procedure given in 5.7.3, but with amylopectin instead of amylose.
1 ml of this standard suspension contains 1 mg of amylopectin.
The iodine binding capacity of amylopectin should be less than 0,2 % (see Annex A).
6 Apparatus
The usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
6.1 Laboratory blender.
6.2 Grinder, capable of reducing uncooked milled rice to flour which will pass through a 150 µm to 180 µm
(100 mesh to 8
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 6647-1
Première édition
2007-09-01
Riz — Détermination de la teneur en
amylose —
Partie 1:
Méthode de référence
Rice — Determination of amylose content —
Part 1: Reference method
Numéro de référence
ISO 6647-1:2007(F)
©
ISO 2007
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 6647-1:2007(F)
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2007
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax. + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2007 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 6647-1:2007(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
1 Domaine d'application.1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions.1
4 Principe.2
5 Réactifs .2
6 Appareillage .3
7 Échantillonnage .4
8 Procédure .4
8.1 Préparation de l’échantillon pour essai .4
8.2 Prise d’essai et préparation de la solution d’essai .4
8.3 Préparation de la solution témoin.4
8.4 Préparation du graphique d’étalonnage.4
8.5 Détermination.5
9 Expression des résultats .5
10 Fidélité .6
10.1 Essai interlaboratoires .6
10.2 Répétabilité.6
10.3 Reproductibilité.6
11 Rapport d’essai.6
Annexe A (informative) Détermination de la qualité de l’étalon d’amylose de pomme de terre.7
Annexe B (informative) Exemple d’un analyseur FIA pour la détermination d’amylose .9
Annexe C (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires.10
Bibliographie .12
© ISO 2007 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 6647-1:2007(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 6647-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 4,
Céréales et légumineuses.
La présente édition de l'ISO 6647-1, ainsi que l'ISO 6647-2, annule et remplace l'ISO 6647:1987, qui a fait
l'objet d'une révision technique.
L'ISO 6647 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Riz — Détermination de la teneur
en amylose:
⎯ Partie 1: Méthode de référence
⎯ Partie 2: Méthodes de routine
iv © ISO 2007 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 6647-1:2007(F)
Riz — Détermination de la teneur en amylose —
Partie 1:
Méthode de référence
1 Domaine d'application
La présente partie de l’ISO 6647 spécifie une méthode de référence pour la détermination de la teneur en
amylose du riz usiné, non étuvé. La méthode s’applique à du riz dont la teneur en amylose est supérieure à
5 % (fraction massique).
La présente partie de l’ISO 6647 peut également être utilisée pour le riz décortiqué, le maïs, le millet et
d’autres céréales, si l’extension de ce domaine d’application a été validée par l’utilisateur.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 712, Céréales et produits céréaliers — Détermination de la teneur en eau — Méthode de référence
pratique
ISO 7301, Riz — Spécifications
ISO 8466-1, Qualité de l'eau — Étalonnage et évaluation des méthodes d'analyse et estimation des
caractères de performance — Partie 1: Évaluation statistique de la fonction linéaire d'étalonnage
ISO 15914, Aliments des animaux — Détermination enzymatique de la teneur totale en amidon
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions donnés dans l’ISO 7301 ainsi que les
suivants s'appliquent.
3.1
amylose
constituant polysaccharide de l’amidon formé d’unités de glucose reliées les unes aux autres selon une
structure principalement linéaire
3.2
amylopectine
constituant polysaccharide de l’amidon formé d’unités de glucose reliées les unes aux autres selon une
structure ramifiée
© ISO 2007 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 6647-1:2007(F)
4 Principe
Broyage du riz en une farine très fine pour rompre la structure de l’endosperme afin de faciliter la dispersion
complète et la gélatinisation, suivi d’un dégraissage de la farine. Dispersion d’une prise d’essai dans une
solution d’hydroxyde de sodium, puis ajout d’une solution iodée à une portion aliquote. Détermination
spectrométrique de l’absorbance, à 720 nm, du complexe coloré formé.
Lecture de la teneur (fraction massique) en amylose de l’échantillon à partir d’un graphique d’étalonnage,
construit grâce à des mélanges d’amylose et d’amylopectine de pomme de terre afin de prendre en
considération l’effet de l’amylopectine sur la couleur du complexe amylose-iode de la solution d’essai.
NOTE En réalité, la méthode détermine l’affinité de l’amylose pour l’iode. La détermination est réalisée à 720 nm en
vue de réduire le plus possible les effets perturbateurs de l’amylopectine.
5 Réactifs
N’utiliser que des réactifs de qualité analytique reconnue, sauf mention contraire, ainsi que de l’eau distillée
ou déminéralisée, ou une eau de pureté équivalente.
5.1 Méthanol, 85 % (fraction volumique).
5.2 Éthanol, 95 % (fraction volumique).
5.3 Solutions d’hydroxyde de sodium de dispertion.
5.3.1 Hydroxyde de sodium, solution à 1 mol/l.
5.3.2 Hydroxyde de sodium, solution à 0,09 mol/l.
5.4 Solutions de déprotéinisation
5.4.1 Solution détergente
Dissoudre du dodécylbenzène-sulfonate de sodium correspondant à une concentration de 20 g/l. Juste avant
utilisation, ajouter du sulfite de sodium à une concentration finale de 2 g/l.
5.4.2 Hydroxyde de sodium, pour élimination des protéines, solution à 3 g/l.
5.5 Acide acétique, solution à 1 mol/l.
5.6 Solution iodée
Peser, à 5 mg près, 2,000 g d’iodure de potassium dans un flacon à tare équipé d’un bouchon. Ajouter
suffisamment d’eau pour que se forme une solution saturée. Ajouter 0,200 g d’iode, à 1 mg près. Transférer la
solution quantitativement dans une fiole jaugée de 100 ml (6.6) lorsque l’iode se sera dissoute, puis compléter
au trait avec de l’eau et mélanger.
Préparer une solution fraîche pour chaque jour d’utilisation et la conserver à l’abri de la lumière.
5.7 Suspension normalisée d’amylose de pomme de terre, exempte d’amylopectine, 1 g/l.
5.7.1 Dégraisser l’amylose de pomme de terre avec du méthanol (5.1) sous reflux pendant 4 h à 6 h dans
un extracteur à un débit de 5 à 6 gouttes par seconde.
Il convient que l’amylose de pomme de terre soit pure et testée par titrage ampérométrique ou
potentiométrique. Certains produits commerciaux sont impurs et donneraient des résultats faussement élevés
pour la fraction massique en amylose des échantillons de riz. Il convient que l’amylose pure complexe lie
19 % à 20 % de sa propre masse d’iode. Pour vérifier la pureté de l’amylose, voir l’Annexe A.
2 © ISO 2007 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 6647-1:2007(F)
5.7.2 Étaler l’amylose de pomme de terre dégraissée sur un plateau et laisser reposer pendant 2 jours en
vue de permettre l’évaporation du méthanol résiduel et d’atteindre l’équilibre de la teneur en eau.
Suivre la même procédure avec l’amylopectine (5.8) ainsi qu’avec les échantillons pour essai (8.1).
5.7.3 Peser 100 mg ± 0,5 mg d’amylose de pomme de terre dégraissée et conditionnée dans une fiole
conique de 100 ml (6.8). Ajouter précautionneusement 1 ml d’éthanol (5.2) en rinçant l’amylose de pomme de
terre qui adhérerait aux parois de la fiole. Ajouter 9,0 ml de solution d’hydroxyde de sodium à 1 mol/l (5.3.1) et
mélanger. Puis faire chauffer le mélange au bain-marie (6.7) pendant 10 min en vue de disperser l’amylose de
pomme de terre. Laisser refroidir à température ambiante et transvaser dans une fiole jaugée de 100 ml (6.6).
Compléter au trait avec de l’eau et mélanger vigoureusement.
1 ml de cette suspension normalisée contient 1 mg d’amylose de pomme de terre.
Lorsque les échantillons pour essai, l’amylose et l’amylopectine sont conditionnés dans le même
environnement, aucune correction de la teneur en eau n’est nécessaire et les résultats sont obtenus sur la
base d’un riz usiné sec. Si les échantillons pour essai et les étalons ne sont pas préparés dans les mêmes
conditions, la teneur en eau des échantillons et des étalons doit être déterminée comme spécifié dans
l’ISO 712 et il convient que les résultats soient corrigés en conséquence.
5.8 Suspension normalisée de l’amylopectine, 1 g/l.
Réaliser la préparation à partir de riz usiné glutineux (cireux) dont l’amidon est réputé contenir au moins 99 %
(par masse) d’amylopectine. Faire tremper le riz blanchi glutineux et mélanger dans un mélangeur de
laboratoire adapté (6.1) jusqu’à obtenir un produit finement divisé. Retirer les protéines par extraction
exhaustive à l’aide d’une solution détergente (5.4.1) ou avec une solution d’hydroxyde de sodium (5.4.2). Le
laver puis le dégraisser avec du méthanol (5.1) sous reflux comme décrit en 5.7.1. Étaler l’amylopectine
déprotéinée et dégraissée sur un plateau et laisser reposer pendant 2 jours en vue de permettre l’évaporation
du méthanol résiduel et d’atteindre l’équilibre de la teneur en eau.
Suivre la procédure indiquée en 5.7.3, mais remplacer l’amylose par l’amylopectine.
1 ml de cette suspension normalisée contient 1 mg d’amylopectine.
Il convient que le pouvoir de fixation d’iode de l’amylopectine soit inférieur à 0,2 % (voir l’Annexe A).
6 Appareillage
Appareillage de laboratoire habituel et, en particulier, les éléments suivants.
6.1 Mélangeur de laboratoire.
6.2 Broyeur, capable de réduire le riz usiné non cuit en farine qui passera à travers un tamis de 150 µm à
180 µm (100 mesh à 80 mesh). L’utilisation d’un filtre cyclone avec un tamis de 0,5 mm est recommandée.
6.3 Tamis, taille 150 µm à 180 µm (100 mesh à 80 mes
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.