Milk and milk products -- Determination of nitrogen content

ISO 8968-4|IDF 20-4:2016 specifies a method for the direct and indirect determination of the protein nitrogen content of liquid, whole or skimmed milk.

Lait et produits laitiers -- Détermination de la teneur en azote

ISO 8968-4|FIL 20-4:2016 spécifie une méthode pour la détermination directe et indirecte de la teneur en azote protéique du lait liquide, entier ou écrémé.

General Information

Status
Published
Publication Date
03-Apr-2016
Current Stage
9020 - International Standard under periodical review
Start Date
15-Apr-2021
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ISO 8968-4:2016 - Milk and milk products -- Determination of nitrogen content
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ISO 8968-4:2016 - Lait et produits laitiers -- Détermination de la teneur en azote
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Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 8968-4
IDF
20-4
Second edition
2016-04-01
Milk and milk products —
Determination of nitrogen content —
Part 4:
Determination of protein and
non-protein nitrogen content and
true protein content calculation
(Reference method)
Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en azote —
Partie 4: Détermination de la teneur en azote protéique et non
protéique et calcul de la teneur en protéines vraies (Méthode de
référence)
Reference numbers
ISO 8968-4:2016(E)
IDF 20-4:2016(E)
ISO and IDF 2016
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8968-4:2016(E)
IDF 20-4:2016(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO and IDF 2016, Published in Switzerland

All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form

or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior

written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of

the requester.
ISO copyright office International Dairy Federation

Ch. de Blandonnet 8 • CP 401 Silver Building • Bd Auguste Reyers 70/B • B-1030 Brussels

CH-1214 Vernier, Geneva, Switzerland
Tel. +41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 325 67 40
Fax +41 22 749 09 47 Fax + 32 2 325 67 41
copyright@iso.org info@fil-idf.org
www.iso.org www.fil-idf.org
ii © ISO and IDF 2016 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 8968-4:2016(E)
IDF 20-4:2016(E)
Contents Page

Forewords .......................................................................................................................................................................................................................................v

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 1

4.1 Indirect protein nitrogen ............................................................................................................................................................... 1

4.2 Direct protein nitrogen .................................................................................................................................................................... 2

5 Reagents ........................................................................................................................................................................................................................ 2

5.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 2

5.2 Trichloroacetic acid (CCl COOH) solution ...................................................................................................................... 2

5.3 Hydrochloric acid standard volumetric solution ....................................................................................................... 2

6 Apparatus ..................................................................................................................................................................................................................... 2

7 Sampling ........................................................................................................................................................................................................................ 3

8 Preparation of test sample ......................................................................................................................................................................... 3

9 Procedure — Direct protein nitrogen approach ................................................................................................................. 3

9.1 Test portion ................................................................................................................................................................................................ 3

9.2 Determination ......................................................................................................................................................................................... 3

9.2.1 Precipitation and filtration ..................................................................................................................................... 3

9.2.2 Preparation of the precipitate .............................................................................................................................. 4

9.2.3 Digestion and distillation ......................................................................................................................................... 4

9.2.4 Titration................................................................................................................................................................................... 4

9.3 Blank test ..................................................................................................................................................................................................... 4

9.4 Calculation and expression of results.................................................................................................................................. 4

9.4.1 Calculation of protein nitrogen content ....................................................................................................... 4

9.4.2 Expression of results .................................................................................................................................................... 5

9.4.3 Calculation of true protein content .................................................................................................................. 5

9.4.4 Expression of the true protein content results ...................................................................................... 5

10 Procedure — Indirect protein nitrogen approach ............................................................................................................ 6

10.1 Nitrogen determination .................................................................................................................................................................. 6

10.2 Non-protein nitrogen determination ......... .......................................................................................................................... 6

10.2.1 Test portion .......................................................................................................................................................................... 6

10.2.2 Precipitation and filtration ..................................................................................................................................... 6

10.2.3 Preparation of the filtrate......................................................................................................................................... 6

10.2.4 Digestion and distillation ......................................................................................................................................... 6

10.2.5 Titration................................................................................................................................................................................... 6

10.3 Blank test ..................................................................................................................................................................................................... 6

10.4 Calculation and expression of results.................................................................................................................................. 7

10.4.1 Calculation of non-protein nitrogen content ........................................................................................... 7

10.4.2 Calculation of protein nitrogen content ....................................................................................................... 7

10.4.3 Expression of results .................................................................................................................................................... 8

10.4.4 Calculation of true protein content .................................................................................................................. 8

10.4.5 Expression of the true protein content results ...................................................................................... 8

11 Precision ....................................................................................................................................................................................................................... 8

11.1 Interlaboratory test............................................................................................................................................................................. 8

11.2 Repeatability ............................................................................................................................................................................................. 8

11.3 Reproducibility ....................................................................................................................................................................................... 8

12 Test report ................................................................................................................................................................................................................... 9

Annex A (informative) Results of a collaborative study — Estimation of precision data of

direct and indirect methods for the true protein determination ...................................................................10

© ISO and IDF 2016 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 8968-4:2016(E)
IDF 20-4:2016(E)

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................11

iv © ISO and IDF 2016 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 8968-4:2016(E)
IDF 20-4:2016(E)
Forewords

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity

assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical

Barriers to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information

The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and

milk products and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and IDF.

This second edition of ISO 8968-4|IDF 20-4 cancels and replaces ISO 8968-4|IDF 20-4:2001 and

ISO 8968-5|IDF 20-5:2001, which have been technically revised.

ISO 8968|IDF 20 consists of the following parts, under the general title Milk and milk products —

Determination of nitrogen content:
— Part 1: Kjeldahl principle and crude protein calculation
— Part 3: Block-digestion method (Semi-micro rapid routine method)

— Part 4: Determination of protein and non-protein nitrogen content and true protein content calculation

(Reference method)

1) It is intended that upon revision, the main element of the title of ISO 8968-3|IDF 20-3 (i.e. “Milk”) will be aligned

with the main element of the titles of ISO 8968-1|IDF 20-1 and ISO 8968-4|IDF 20-4.

© ISO and IDF 2016 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 8968-4:2016(E)
IDF 20-4:2016(E)

IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit private sector organization representing the

interests of various stakeholders in dairying at the global level. IDF members are organized in National

Committees, which are national associations composed of representatives of dairy-related national

interest groups including dairy farmers, dairy processing industry, dairy suppliers, academics and

governments/food control authorities.

ISO and IDF collaborate closely on all matters of standardization relating to methods of analysis

and sampling for milk and milk products. Since 2001, ISO and IDF jointly publish their International

Standards using the logos and reference numbers of both organizations.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute and endorsement

ISO 8968-4|IDF 20-4 was prepared by the IDF Standing Committee on Analytical methods for composition

and ISO Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products.

The work was carried out by the IDF/ISO Project Group (C13) of the Standing Committee on Analytical

methods for composition under the aegis of its project leaders, D. Barbano (US) and P. Trossat (FR).

This ISO|IDF International Standard cancels and replaces ISO 8968-4|IDF 20-4:2001 and

ISO 8968-5|IDF 20-5:2001, which have been technically revised.

ISO 8968|IDF 20 consists of the following parts, under the general title Milk and milk products —

Determination of nitrogen content:
— Part 1: Kjeldahl principle and crude protein calculation
— Part 3: Block-digestion method (Semi-micro rapid routine method)

— Part 4: Determination of protein and non-protein nitrogen content and true protein content calculation

(Reference method)
vi © ISO and IDF 2016 – All rights reserved
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 8968-4:2016(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 20-4:2016(E)
Milk and milk products — Determination of nitrogen
content —
Part 4:
Determination of protein and non-protein nitrogen content
and true protein content calculation (Reference method)

WARNING — The use of this part of ISO 8968|IDF 20 can involve the use of hazardous materials,

operations and equipment. This part of ISO 8968|IDF 20 does not purport to address all the

safety risks associated with its use. It is the responsibility of the user of this part of ISO 8968|IDF

20 to establish appropriate safety and healthy practices and determine the applicability of local

regulatory limitations prior to use.
1 Scope

This part of ISO 8968|IDF 20 specifies a method for the direct and indirect determination of the protein

nitrogen content of liquid, whole or skimmed milk.
2 Normative references

The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are

indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated

references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 8968-1|IDF 20-1, Milk and milk products — Determination of nitrogen content — Part 1: Kjeldahl

principle and crude protein calculation
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
non-protein nitrogen content
NPN
mass fraction of substances determined by the specified procedure

Note 1 to entry: The non-protein nitrogen content is expressed as a percentage by mass.

3.2
protein nitrogen content

mass fraction of substances determined by the specified procedure, directly or, alternatively, indirectly

Note 1 to entry: The protein nitrogen content is expressed as a percentage by mass.

4 Principle
4.1 Indirect protein nitrogen

Precipitation of protein from a test portion by addition of trichloroacetic acid solution such that the final

concentration of trichloroacetic acid in the mixture is approximately 12 %. Removal of the precipitated

© ISO and IDF 2016 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 8968-4:2016(E)
IDF 20-4:2016(E)

milk protein by filtration, with the remaining filtrate containing the non-protein nitrogen components.

Determination of the nitrogen content of the filtrate by the procedure described in ISO 8968-1|IDF 20-1.

Where the total nitrogen content of the milk sample has previously been determined, the true protein

nitrogen content may be calculated as the difference between the total nitrogen content and the non-

protein nitrogen content.
4.2 Direct protein nitrogen

Precipitation of protein from a test portion by addition of trichloroacetic acid solution such that the final

concentration of trichloroacetic acid in the mixture is approximately 12 %. Separation of the protein

precipitate by filtration. (The precipitate contains the protein nitrogen of the sample.) Determination of

the nitrogen content of the precipitate by the procedure described in ISO 8968-1|IDF 20-1.

5 Reagents
5.1 General

Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or

demineralized water or water of equivalent purity.

The reagents specified for the determination of total nitrogen by the method described in

ISO 8968-1 | IDF 20-1, together with the following, are required.
5.2 Trichloroacetic acid (CCl COOH) solution

Dissolve 15,0 g of trichloroacetic acid in water in a 100 ml one-mark volumetric flask. Dilute to the

mark with water. Do not use concentrations of trichloroacetic acid and volumes of solutions other than

those specified.

NOTE The performance of the method with respect to mean value and between-laboratory performance

characteristics will be different, if using other than specified concentrations of trichloroacetic acid and volumes

of solutions.
5.3 Hydrochloric acid standard volumetric solution

For the direct approach, the 0,1 mol/l hydrochloric acid solution is as described in ISO 8968-1| IDF 20-1.

For the indirect protein nitrogen approach, the following hydrochloric acid solution is required

c(HCl) = (0,01 ± 0,000 1) mol/l in addition to the 0,1 mol/l hydrochloric acid solution required as

described in ISO 8968-1|IDF 20-1.
6 Appar
...

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ISO/DIS 8968-4
ISO/TC 34/SC 5 Secretariat: NEN
������ ������ ��� ������ ���������� ���
2013-09-26 2014-02-26
Milk and milk products — Determination of nitrogen
content —
Part 4:
Determination of protein and non protein nitrogen content
and true protein content calculation (Reference method)
Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en azote —

Partie 4: Détermination de la teneur en azote protéique et non protéique et calcul des protéines vraies

(Méthode de référence)
[Revision of ����� edition (ISO �����������)]
���� ���������
ISO/CEN PARALLEL PROCESSING
This draft has been developed within the International Organization for
Standardization (ISO), and processed under the ISO lead mode of collaboration
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This draft is hereby submitted to the ISO member bodies and to the CEN member
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received, will be submitted to a parallel two-month approval vote in ISO and
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To expedite distribution, this document is circulated as received from the
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Reference number
�������� ������������
ISO/DIS 8968-4:2013(E)
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������������ �� ��� �������� ������
������ �� ����� ���� ��� ����� ��� ��
������� ���������� �������������� ISO 2013
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/DIS 8968-4:2013(E)
Copyright notice

���� ��� �������� �� � ����� ������������� �������� ��� �� ������������������� �� ���� ������ ��

permitted under the applicable laws of the user’s country, neither this ISO draft nor any extract

from it may be reproduced, stored in a retrieval system or transmitted in any form or by any means,

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---------------------- Page: 2 ----------------------
Contents Page

Foreword ............................................................................................................................................................. iv

Foreword .............................................................................................................................................................. v

1  Scope ...................................................................................................................................................... 1

2  Normative references ............................................................................................................................ 1

3  Term and definition ............................................................................................................................... 1

4  Principle .................................................................................................................................................. 1

5  Reagents ................................................................................................................................................. 2

6  Apparatus ............................................................................................................................................... 2

7  Sampling ................................................................................................................................................. 3

8  Preparation of test sample.................................................................................................................... 3

9  Procedure - Direct protein-nitrogen approach ................................................................................... 3

10  Procedure - Indirect protein-nitrogen approach ................................................................................ 5

11  Precision ................................................................................................................................................. 7

12  Test report .............................................................................................................................................. 8

Annex A (Informative) Results of a collaborative study ................................................................................ 9

Bibliography ...................................................................................................................................................... 10

iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/DIS 8968-4
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO

member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical

committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has

the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in

liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical

Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.

International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.

The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards adopted

by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an International

Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent rights.

ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.

ISO 8968-4 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food and food products, Subcommittee SC 5, Milk

and milk products and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and IDF.

The ISO 8968-4 | IDF 20-4:2013 cancels and replaces the editions ISO 8968-4 | IDF 20-4:2001 and ISO 8968-5 |

IDF 20-5:2001.

ISO 8968 | IDF 20 consists of the following parts, under the general title Milk — Determination of protein nitrogen

content and true protein calculation (Reference method):
 Part 1: Kjeldahl principle – to be published
 Part 3: Block digestion method (Semi micro rapid routine method ):2004;

 Part 4:Determination of protein and non-protein nitrogen content and true protein content calculation

(Reference method) – to be published
© ISO 2013 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
Foreword

IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit organization representing the dairy sector worldwide. IDF

membership comprises National Committees in every member country as well as regional dairy associations

having signed a formal agreement on cooperation with IDF. All members of IDF have the right to be represented at

the IDF Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in the development of

standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.

The main task of Standing Committees is to prepare International Standards. Draft International Standards adopted

by the Standing Committees are circulated to the National Committees for endorsement prior to publication as an

International Standard. Publication as an International Standard requires approval by at least 50% of IDF National

Committees casting a vote.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent rights.

IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Any trade name used in this document

is information given for the convenience of users and does not constitute an endorsement.

ISO 8968-4 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food and food products, Subcommittee SC 5, Milk

and milk products and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and IDF.

All work was carried out by Joint ISO-IDF Project Group (C13) of the Standing Committee on Analytical methods

for Composition (SCAMC) under the aegis of its project leaders, D. Barbano (US) and P. Trossat (FR).

The ISO 8968-4 | IDF 20-4:2013 cancels and replaces the editions ISO 8968-4 | IDF 20-4:2001 and ISO 8968-5 |

IDF 20-5:2001.

ISO 8968 | IDF 20 consists of the following parts, under the general title Milk — Determination of protein nitrogen

content and true protein calculation (Reference method):
 Part 1: Kjeldahl principle – to be published
 Part 3: Block digestion method (Semi micro rapid routine method ):2004;

 Part 4: Determination of protein and non-protein nitrogen content and true protein content calculation

(Reference method) – to be published
---------------------- Page: 5 ----------------------
Error! Reference source not found. ISO/DIS 8968-4
Milk — Determination of protein nitrogen content and true
protein calculation (Reference method)

WARNING — The use of this part of ISO 8968 | IDF 20 may involve the use of hazardous materials,

operations, and equipment. This part does not purport to address all the safety risks associated with

its use. It is the responsibility of the user of this part of ISO 8968 | IDF 20 to establish appropriate

safety and healthy practices and determine the applicability of local regulatory limitations prior to use.

1 Scope

This part of ISO 8968 | IDF 20 specifies a method for the direct and indirect determination of the protein-

nitrogen content of liquid, whole or skimmed milk.
2 Normative references

The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute

provisions of this International Standard.

ISO 8968-1 | IDF 20-1, Milk - Determination of nitrogen content. Part 1: Kjeldahl principle

3 Terms and definitions

For the purposes of this part of ISO 8968 | IDF 20 the following definitions apply.

3.1
Non-protein nitrogen content

Mass fraction of substances determined by the procedure specified in this part of ISO 8968 | IDF 20.

3.2
Protein nitrogen content

Mass fraction of substances determined by the procedure specified in this part of ISO 8968 | IDF 20, directly

or alternatively indirectly.

NOTE The non-protein and protein nitrogen content are expressed as a percentage by mass.

4 Principle
4.1 Indirect protein nitrogen

Precipitation of protein from a test portion by addition of trichloroacetic acid solution such that the final

concentration of trichloroacetic acid in the mixture is approximately 12 %. Removal of the precipitated milk

protein by filtration, the remaining filtrate containing the non-protein nitrogen components. Determination of

the nitrogen content of the filtrate by the procedure described in part 1 of ISO 8968 |

IDF 20.

Where the total nitrogen content of the milk sample has previously been determined, the true protein nitrogen

© ISO 2013 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO/DIS 8968-4

content can be calculated as the difference between the total nitrogen content and the non-protein nitrogen

content.
4.2 Direct protein nitrogen

Precipitation of protein from a test portion by addition of trichloroacetic acid solution such that the final

concentration of trichloroacetic acid in the mixture is approximately 12 %. Separation of the protein precipitate

by filtration. (The precipitate contains the protein nitrogen content of the sample.) Determination of the

nitrogen content of the precipitate by the procedure described in part 1 of ISO 8968 |

IDF 20.
5 Reagents
5.1 General

Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized

water or water of equivalent purity.

The reagents specified for the determination of total nitrogen by the method described in part 1 of ISO 8968 |

IDF 20, with the exception of 0,10 mol/l hydrochloric acid standard volumetric solution, together with the

following are required.

NOTE Depending on the laboratory's choice whether the determination of the nitrogen in the protein

precipitate should be carried out by the method described in part 1 of ISO 8968 | IDF 20, the reagents

described in that method are required too.
5.2 Trichloroacetic acid (CCl COOH) solution

Dissolve 15,0 g of trichloroacetic acid in water in a 100 ml one-mark volumetric flask. Dilute to the mark with

water. Do not use concentrations of trichloroacetic acid and volumes of solutions other than those specified.

NOTE The performance of the method with respect to mean value and between laboratory performance

characteristics will be different, if using other than specified concentrations of trichloroacetic acid and volumes of solutions.

5.3 Hydrochloric acid standard volumetric solution

For the direct approach the 0,1 mol/l hydrochloric acid is as described in part 1 of ISO 8968 | IDF 20.

For the indirect protein nitrogen approach the following hydrochloric acid is required c(HCl) = (0,01 ± 0,0001)

mol/l, in addition to the 0,1 mol/l hydrochloric acid required in part 1 of ISO 8968 | IDF 20.

NOTE: It is recommended to purchase this material pre-standardized by the manufacturer that meets, or exceeds, these

specifications. Many times the systematic errors (that can be avoided) introduced by an analyst diluting a concentrated

stock acid and then determining the molarity of the acid, cause poor reproducibility performance of the method in this part.

The analyst should not use a solution for titration that has a higher concentration than 0,1 mol/l, because this may reduce

the total titration volume per sample and the uncertainty in readability of the burette will become a larger percentage of the

value. This may have a negative impact on the method repeatability and reproducibility performance. If sulfuric acid is

substituted for hydrochloric acid the solution should have a concentration of 0,05 ± 0.0003 mol/l.

6 Apparatus
6.1 General

Usual laboratory apparatus and, those specified for the determination of total nitrogen described in part 1 of

ISO 8968 | IDF 20 and, in particular, the following.
2 © ISO 2013 – All rights reserved
---------------------- Page: 7 ----------------------

NOTE Depending on the laboratory's choice as mentioned in the note to 5.1, the apparatus described in the chosen

method is required.
6.2 Water bath, capable of maintaining a temperature of between 38 °C and 40 °C.
6.3 Conical flasks, of capacity 125 ml (indirect approach only)
6.4 Pipettes, of capacities 5 ml, 10 ml, and 20 ml.
6.5 Filter funnel, made of glass, of diameter 75 mm.

6.6 Filter paper, nitrogen free, of diameter 15 cm, e.g. Whatman No 1 or equivalent.

6.7 Automatic pipette, piston pump, capable of delivering 10 ml.
6.8 Beakers, of capacity 50 ml. (indirect approach only).
7 Sampling

Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method

is given in ISO 707 | IDF 50.

It is important that the laboratory receives a sample which is representative and has not been damaged or

changed during transport or storage.
8 Preparation of test sample
° °

Warm the test sample to between 38 C to 40 C in the water bath (6.2). Cool the sample to room temperature

while gently mixing the test sample immediately prior to weighing the test portion (9.1).

9 Procedure - Direct protein nitrogen approach
9.1 Test portion

Pipette 5,0 ml + 0,1 ml of the prepared test sample (8) either into a dry and clean Kjeldahl flask or digestion

tube. Either pre-weighed to the nearest 0,1 mg. Weigh the test sample to the nearest 0,1 mg. Immediately add

5,0 ml ± 0,1 ml of water to the flask or tube, rinsing any test sample on its neck into its bottom.

NOTE The use of either a Kjeldahl flask or digestion tube is depending the laboratory's choice as mentioned in the

note to 5.1.
9.2 Determination
9.2.1 Precipitation and filtration

Add 40 ml + 0,5 ml of trichloroacetic acid solution (5.2) to the Kjeldahl flask or digestion tube containing the

test portion (9.1) and swirl to mix the contents. Let the flask or tube stand for approximately 5 min to allow the

precipitate to settle. Pour the contents of the flask or tube through a filter paper (6.6) placed in a filter funnel

(6.5). Collect the filtrate in a clean conical flask. Some of the precipitate will remain in the Kjeldahl flask or

digestion tube and some will be collected on the filter paper. It is not necessary to remove all of the precipitat

...

NORME ISO
INTERNATIONALE 8968-4
FIL
20-4
Deuxième édition
2016-04-01
Lait et produits laitiers —
Détermination de la teneur en azote —
Partie 4:
Détermination de la teneur en azote
protéique et non protéique et calcul
de la teneur en protéines vraies
(Méthode de référence)
Milk and milk products — Determination of nitrogen content —
Part 4: Determination of protein and non-protein nitrogen content
and true protein content calculation (Reference method)
Numéros de référence
ISO 8968-4:2016(F)
FIL 20-4:2016(F)
ISO et FIL 2016
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ISO 8968-4:2016(F)
FIL 20-4:2016(F)
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sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur

l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à

l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office International Dairy Federation

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FIL 20-4:2016(F)
Sommaire Page

Avant-propos ................................................................................................................................................................................................................................v

1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 1

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 2

4.1 Détermination indirecte de la teneur en azote protéique ................................................................................. 2

4.2 Détermination directe de la teneur en azote protéique ...................................................................................... 2

5 Réactifs ........................................................................................................................................................................................................................... 2

5.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 2

5.2 Solution d’acide trichloroacétique (CCl COOH) ......................................................................................................... 2

5.3 Solution volumétrique standard d’acide chlorhydrique ..................................................................................... 2

6 Appareillage .............................................................................................................................................................................................................. 2

7 Échantillonnage ..................................................................................................................................................................................................... 3

8 Préparation de l’échantillon pour essai ....................................................................................................................................... 3

9 Mode opératoire — Détermination directe de la teneur en azote protéique........................................3

9.1 Prise d’essai ............................................................................................................................................................................................... 3

9.2 Détermination ......................................................................................................................................................................................... 3

9.2.1 Précipitation et filtration .......................................................................................................................................... 3

9.2.2 Préparation du précipité ........................................................................................................................................... 4

9.2.3 Minéralisation et distillation ................................................................................................................................. 4

9.2.4 Titrage ....................................................................................................................................................................................... 4

9.3 Essai à blanc .............................................................................................................................................................................................. 4

9.4 Calcul et expression des résultats .......................................................................................................................................... 4

9.4.1 Calcul de la teneur en azote protéique .......................................................................................................... 4

9.4.2 Expression des résultats ........................................................................................................................................... 5

9.4.3 Calcul de la teneur en protéines vraies ........................................................................................................ 5

9.4.4 Expression des résultats relatifs à la teneur en protéines vraies .......................................... 5

10 Mode opératoire — Détermination indirecte de la teneur en azote protéique ..................................6

10.1 Détermination de la teneur en azote ................................................................................................................................... 6

10.2 Détermination de la teneur en azote non protéique .............................................................................................. 6

10.2.1 Prise d’essai .......................................................................................................................................................................... 6

10.2.2 Précipitation et filtration .......................................................................................................................................... 6

10.2.3 Préparation du filtrat ................................................................................................................................................... 6

10.2.4 Minéralisation et distillation ................................................................................................................................. 6

10.2.5 Titrage ....................................................................................................................................................................................... 6

10.3 Essai à blanc .............................................................................................................................................................................................. 6

10.4 Calcul et expression des résultats .......................................................................................................................................... 7

10.4.1 Calcul de la teneur en azote non protéique .............................................................................................. 7

10.4.2 Calcul de la teneur en azote protéique .......................................................................................................... 7

10.4.3 Expression des résultats ........................................................................................................................................... 8

10.4.4 Calcul de la teneur en protéines vraies ........................................................................................................ 8

10.4.5 Expression des résultats relatifs à la teneur en protéines vraies .......................................... 8

11 Fidélité ............................................................................................................................................................................................................................ 8

11.1 Essai interlaboratoires ..................................................................................................................................................................... 8

11.2 Répétabilité ................................................................................................................................................................................................ 8

11.3 Reproductibilité ..................................................................................................................................................................................... 9

12 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................................... 9

Annexe A (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires — Estimation des données

de fidélité concernant les méthodes de détermination directe et indirecte de la
© ISO et FIL 2016 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 8968-4:2016(F)
FIL 20-4:2016(F)

teneur en protéines vraies ......................................................................................................................................................................10

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................11

iv © ISO et FIL 2016 – Tous droits réservés
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FIL 20-4:2016(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.

L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents

critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.

iso.org/directives).

L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à

l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes

de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos —

Informations supplémentaires.

Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité

SC 5, Lait et produits laitiers et la Fédération internationale du lait (FIL). Il est publié conjointement par

l’ISO et la FIL.

Cette deuxième édition de l’ISO 8968-4|FIL 20-4 annule et remplace l’ISO 8968-4|FIL 20-4:2001 et

l’ISO 8968-5|FIL 20-5:2001, qui ont fait l’objet d’une révision technique.

L’ISO 8968|FIL 20 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait et produits

laitiers — Détermination de la teneur en azote:
— Partie 1: Méthode Kjeldahl et calcul de la teneur en protéines brutes

— Partie 3: Méthode de minéralisation en bloc (méthode pratique semi-micro rapide)

— Partie 4: Détermination de la teneur en azote protéique et non protéique et calcul de la teneur en

protéines vraies (Méthode de référence)

1) Il est prévu, lors de la révision, d’aligner l’élément principal du titre de l’ISO 8968-3|FIL 20-3 (c’est-à-dire,

«Lait») avec l’élément principal des titres de l’ISO 8968-1|FIL 20-1 et de l’ISO 8968-4|FIL 20-4.

© ISO et FIL 2016 – Tous droits réservés v
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ISO 8968-4:2016(F)
FIL 20-4:2016(F)

La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation privée à but non lucratif qui représente

les intérêts des divers acteurs de la filière laitière au niveau international. Les membres de la FIL sont

organisés en comités nationaux, qui sont des associations nationales composées de représentants de

groupes d’intérêt nationaux dans le secteur des produits laitiers, incluant des producteurs laitiers, des

acteurs de l’industrie de transformation des produits laitiers, des fournisseurs de produits laitiers, des

universitaires et des représentants des gouvernements/autorités chargées du contrôle des aliments.

L’ISO et la FIL collaborent étroitement sur toutes les activités de normalisation concernant les méthodes

d’analyse et d’échantillonnage du lait et des produits laitiers. Depuis 2001, l’ISO et la FIL publient

conjointement leurs Normes internationales en utilisant les logos et les numéros de référence des deux

organisations.

L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

L’ISO 8968-4|FIL 20-4 a été élaborée par le Comité permanent de la FIL chargé des Méthodes d’analyse

de la composition et par le comité technique de ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait

et produits laitiers.

L’ensemble des travaux a été confié au groupe de projet mixte ISO/FIL (C13) du Comité permanent

chargé des Méthodes d’analyse de la composition, sous la direction de ses chefs de projet, D. Barbano (US)

et P. Trossat (FR).

La présente Norme internationale ISO|FIL annule et remplace l’ISO 8968-4|FIL 20-4:2001 et

l’ISO 8968-5|FIL 20-5:2001, qui ont fait l’objet d’une révision technique.

L’ISO 8968|FIL 20 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait et produits

laitiers — Détermination de la teneur en azote:
— Partie 1: Méthode Kjeldahl et calcul de la teneur en protéines brutes

— Partie 3: Méthode de minéralisation en bloc (méthode pratique semi-micro rapide)

— Partie 4: Détermination de la teneur en azote protéique et non protéique et calcul de la teneur en

protéines vraies (Méthode de référence)
vi © ISO et FIL 2016 – Tous droits réservés
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ISO 8968-4:2016(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 20-4:2016(F)
Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en
azote —
Partie 4:
Détermination de la teneur en azote protéique et non
protéique et calcul de la teneur en protéines vraies
(Méthode de référence)

AVERTISSEMENT — L’utilisation de la présente partie de l’ISO 8968|FIL 20 peut impliquer

l’utilisation de produits et la mise en œuvre de modes opératoires et d’appareillages à caractère

dangereux. La présente partie de l’ISO 8968|FIL 20 ne prétend pas aborder tous les risques liés à

son utilisation. Il incombe à l’utilisateur de la présente partie de l’ISO 8968|FIL 20 d’établir, avant

de l’utiliser, des pratiques d’hygiène et de sécurité appropriées et de déterminer l’applicabilité

des restrictions réglementaires locales.
1 Domaine d’application

La présente partie de l’ISO 8968|FIL 20 spécifie une méthode pour la détermination directe et indirecte

de la teneur en azote protéique du lait liquide, entier ou écrémé.
2 Références normatives

Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à

l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les

références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels

amendements).

ISO 8968-1|FIL 20-1, Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en azote — Partie 1: Méthode

Kjeldahl et calcul de la teneur en protéines brutes
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et les définitions suivants s’appliquent.

3.1
teneur en azote non protéique
rapport de masse des substances, déterminé par le mode opératoire spécifié

Note 1 à l’article: La teneur en azote non protéique est exprimée sous forme de pourcentage en masse.

3.2
teneur en azote protéique

rapport de masse des substances, déterminé par le mode opératoire spécifié, directement ou

indirectement

Note 1 à l’article: La teneur en azote protéique est exprimée sous forme de pourcentage en masse.

© ISO et FIL 2016 – Tous droits réservés 1
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ISO 8968-4:2016(F)
FIL 20-4:2016(F)
4 Principe
4.1 Détermination indirecte de la teneur en azote protéique

Précipitation des protéines d’une prise d’essai par addition de solution d’acide trichloroacétique, de

façon à ce que la concentration finale de l’acide trichloroacétique dans le mélange soit d’environ 12 %.

Extraction des protéines de lait précipitées par filtration, le filtrat résiduel contenant les composants

d’azote non protéique. Détermination de la teneur en azote du filtrat par le mode opératoire décrit dans

l’ISO 8968-1|FIL 20-1.

Lorsque la teneur totale en azote de l’échantillon de lait a été déterminée préalablement, il est possible

de calculer la teneur en azote protéique vrai comme étant la différence entre la teneur totale en azote et

la teneur en azote non protéique
4.2 Détermination directe de la teneur en azote protéique

Précipitation des protéines d’une prise d’essai par addition de solution d’acide trichloroacétique,

de façon à ce que la concentration finale de l’acide trichloroacétique dans le mélange soit d’environ

12 %. Séparation du précipité protéique par filtration. (Le précipité contient l’azote protéique de

l’échantillon). Détermination de la teneur en azote du précipité par le mode opératoire décrit dans

l’ISO 8968-1|FIL 20-1.
5 Réactifs
5.1 Généralités

Sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue ainsi que de

l’eau distillée ou déminéralisée, ou de l’eau de pureté équivalente.

Les réactifs spécifiés pour la détermination de la teneur en azote total selon la méthode décrite dans

l’ISO 8968-1|FIL 20-1, ainsi que les réactifs suivants, sont requis:
5.2 Solution d’acide trichloroacétique (CCl COOH)

Dans une fiole jaugée de 100 ml, dissoudre 15,0 g d’acide trichloroacétique dans de l’eau. Compléter

avec de l’eau jusqu’au trait. Ne pas utiliser de concentrations d’acide trichloroacétique et de volumes de

solutions différents de ceux spécifiés.

NOTE Les performances de la méthode en ce qui concerne la valeur moyenne et les caractéristiques

de performances interlaboratoires seront différentes en cas d’utilisation d’autres concentrations d’acide

trichloroacétique ou d’autres volumes de solutions.
5.3 Solution volumétrique standard d’acide chlorhydrique

Pour la détermination directe, la solution d’acide chlorhydrique à 0,1 mol/l est telle que décrite dans

l’ISO 8968-1|FIL 20-1.

Pour la détermination indirecte de la teneur en azote protéique, la solution d’acide chlorhydrique

suivante est nécessaire: c(HCl) = (0,01 ± 0,000 1) mol/l, en plus de la solution d’acide chlorhydrique à

0,1 mol/l requise telle que décrite dans l’ISO 8968-1|FIL 20-1.
6 Appareillage

Utiliser un matériel courant de laboratoire ainsi que le matériel spécifié pour la détermination de la

teneur en azote total dans l’ISO 8968-1|FIL 20-1 et, en particulier, le matériel suivant.

6.1 Bain d’eau, pouvant être maintenu à une température comprise entre 38 °C et 40 °C.

2 © ISO et FIL 2016 – Tous droits réservés
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ISO 8968-4:2016(F)
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6.2 Fioles coniques, d’une capacité de 125 ml (détermination indirecte uniquement).

6.3 Pipettes, d’une capacité de 5 ml, 10 ml et 20 ml.
6.4 Entonnoir de filtration, en verre, de 75 mm de diamètre.
6.5 Papier-filtre, exempt d’azote, de 15 cm de diamètre.
6.6 Pipette automatique, pompe à piston, capable d’injecter 10 ml.
6.7 Béchers, d’une capacité de 50 ml (détermination indirecte uniquement).
7 Échantillonnage

L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente partie de l’ISO 8968|FIL 20.

Une méthode d’échantillonnage recommandée est indiquée dans l’ISO 707|FIL 50.

Il convient qu’un échantillon représentatif ait été envoyé au laboratoire. Il convient qu’il n’ait été ni

endommagé ni modifié au cours du transport ou du stockage.
8 Préparation de l’échantillon pour essai

Chauffer l’échantillon pour essai dans le bain d’eau (6.1) à une température comprise entre 38 °C

et 40 °C. Laisser refroidir l’échantillon à température ambiante tout en le mélangeant doucement

immédiatement avant de peser la prise d’essai (9.1 ou 10.2.1).
9 Mode opératoire — Détermination directe de la teneur en azote protéique
9.1 Prise d’essai

Pipetter environ 5,0 ml ± 0,1 ml de l’échantillon pour essai préparé (voir l’Article 8) dans un ballon

de Kjeldahl ou dans un tube de minéralisation sec et propre, préalablement pesé à 0,1 mg près. Peser

l’échantillon pour essai à 0,1 mg près. Ajouter immédiatement 5,0 ml ± 0,1 ml d’eau dans le ballon ou

dans le tube, rincer l’échantillon pour essai présent sur son goulot ou en son fond.

NOTE L’utilisation d’un ballon de Kjeldahl ou d’un tube de minéralisation dépend du choix du laboratoire en

matière d’appareil de minéralisation.
9.2 Détermination
9.2.1 Précipitation et filtration

Ajouter 40 ml ± 0,5 ml de solution d’acide trichloroacétique (5.2) dans le ballon de Kjeldahl ou dans

le tube de minéralisation contenant la prise d’essai (9.1) et agiter par un mouvement de rotation pour

mélanger le contenu. Laisser reposer le ballon ou le tube pendant 5 min environ pour permettre au

précipité de se déposer. Verser le contenu du ballon ou du tube au travers d’un papier-filtre (6.5) placé

dans un entonnoir de filtration (6.4). Recueillir le filtrat dans une fiole conique propre. Une partie

du précipité restera dans le ballon de Kjeldahl ou dans le tube de minéralisation et une partie sera

recueillie sur le papier-filtre. Il n’est pas nécessaire d’éliminer tout le précipité du ballon ou du tube.

2) Whatman n° 1 est un exemple d’un produit approprié disponible dans le commerce. Cette information est

donnée à l’intention des utilisateurs de la présente partie de l’ISO 8968|FIL 20 et ne saurait constituer un engagement

de l’ISO ou de la FIL à l’égard de ce produit. Des produits équivalents peuvent être utilisés s’il est démontré qu’ils

conduisent aux mêmes résultats.
© ISO et FIL 2016 – Tous droits réservés 3
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ISO 8968-4:2016(F)
FIL 20-4:2016(F)

Immédiatement après avoir versé le mélange et pour éviter que le précipité ne sèche sur le goulot

du ballon ou du tube, ajouter, à l’aide d’une pipette automatique (6.6), 10 ml de la solution d’acide

trichloroacétique (5.2). Utiliser la solution pour rincer le précipité du goulot du ballon ou du tube

jusqu’en son fond. Agiter par un mouvement de rotation pour mélanger le contenu. Verser le contenu

ainsi obtenu du ballon ou du tube sur le même papier-filtre. Ajouter le filtrat à celui précédemment

recueilli dans la fiole conique. Rincer à nouveau immédiatement le goulot du ballon ou du tube avec

encore 10 ml de solution d’acide trichloroacétique et agiter par un mouvement de rotation pour

mélanger le contenu. Verser le contenu du ballon ou du tube pour la troisième fois sur le même papier-

filtre et ajouter le filtrat à celui recueilli précédemment dans la fiole conique.

Le filtrat obtenu doit être transparent et exempt de particules de matière. À ce stade, le filtrat n’est plus

nécessaire et peut être jeté de manière appropriée.

S’il faut effectuer des essais répétés du même échantillon pour essai, deux opérations distinctes de

précipitation et de filtration doivent être effectuées avec chaque échantillon pour essai.

9.2.2 Préparation du précipité

À l’aide de gants, retirer soigneusement le papier-filtre de l’entonnoir de filtration et plier le papier de

façon à retenir le précipité. Si une partie du précipité reste soit sur le bord interne ou externe du ballon

de Kjeldahl ou du tube de minéralisation, essuyer avec le filtre-papier afin que le précipité adhère au

papier puis placer le papier-filtre dans le ballon de Kjeldahl ou le tube de minéralisation.

9.2.3 Minéralisation et distillation

Ajouter la quantité appropriée de régulateurs d’ébullition (en option), de sulfate de potassium, de

solution catalytique à base de cuivre et d’acide sulfurique dans le ballon de Kjeldahl ou dans le tube de

minéralisation et poursuivre la minéralisation et la distillation selon le mode opératoire décrit dans

l’ISO 8968-1|FIL 20-1, paragraphe 9.1 ou 9.2, selon le type d’appareil Kjeldahl utilisé.

9.2.4 Titrage

Titrer l’ammoniac libéré selon le mode opératoire spécifié dans l’ISO 8968-1|FIL 20-1.

9.3 Essai à blanc

Effectuer un essai à blanc en prenant un papier-filtre (6.5) lavé avec une solution d’acide trichloroacétique

(5.2) au lieu de la prise d’essai décrite en 9.2.1 et poursuivre selon 9.2.3. Toujours titrer les prises d’essai

à blanc avec le même réactif et le même appareillage que pour les prises d’essai.

Consigner les valeurs à blanc. Si ces valeurs varient, identifier la cause de ce changement.

9.4 Calcul et expression des résultats
9.4.1 Calcul de la teneur en azote protéique
Calculer la teneur en azote protéique, w , à l’aide de la Formule (1):
1,4007×−VVsb ×M
w = (1)
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ISO 8968-4:2016(F)
FIL 20-4:2016(F)

w est la teneur en azote protéique de l’échantillon pour essai, exprimée sous forme de pour-

centage (fraction massique);

V est la valeur numérique du volume, en millilitres, de la solution volumétrique standard

d’acide chlorhydrique utilisée dans la détermination de l’ISO 8968-1|FIL 20-1, exprimée au

moins à 0,05 ml près;

V est la valeur numérique du volume, en millilitres, de la solution volumétrique standard

d’acide chlorhydrique utilisée dans l’essai à blanc de l’ISO 8968-1|FIL 20-1, exprimée au

moins à 0,05 ml près;

M est la valeur numérique de la molarité exacte de la solution volumétrique standard d’acide

chlorhydrique (5.3), exprimée à quatre décimales près. Si de l’acide sulfurique est utilisé à

la place de l’acide chlorhydrique, M est la molarité exacte de l’acide sulfurique multipliée

par un facteur 2, exprimée à quatre décimales près;

m est la valeur numérique de la masse, en grammes, de la prise d’essai (9.1), exprimée à

0,1 mg près.
9.4.2 Expression des résultats

Exprimer les résultats obtenus à quatre décimales près, si nécessaire pour des calculs ultérieurs. S’il

s’agit de résultats finaux, exprimer la teneur en azote à trois décimales près et la teneur en protéines à

deux décimales.
Il convient de ne pas arrondir les résultats avant l’utilisation finale
...

PROJET DE NORME INTERNATIONALE
ISO/DIS 8968-4
ISO/TC 34/SC 5 Secrétariat: NEN
Début de vote: Vote clos le:
2013-09-26 2014-02-26
Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en
azote —
Partie 4:
Détermination de la teneur en azote protéique et non
protéique et calcul des protéines vraies (Méthode de
référence)
Milk and milk products — Determination of nitrogen content —

Part 4: Determination of protein and non protein nitrogen content and true protein content calculation

(Reference method)

[Révision de la première édition (ISO 8968-4:2001) et la première édition ISO 8968-5:2001]

ICS: 67.100.10
TRAITEMENT PARRALLÈLE ISO/CEN

Le présent projet a été élaboré dans le cadre de l’Organisation internationale de

normalisation (ISO) et soumis selon le mode de collaboration sous la direction
de l’ISO, tel que défini dans l’Accord de Vienne.
Le projet est par conséquent soumis en parallèle aux comités membres de l’ISO et
aux comités membres du CEN pour enquête de cinq mois.

En cas d’acceptation de ce projet, un projet final, établi sur la base des observations

CE DOCUMENT EST UN PROJET DIFFUSÉ POUR

OBSERVATIONS ET APPROBATION. IL EST DONC reçues, sera soumis en parallèle à un vote d’approbation de deux mois au sein de

SUSCEPTIBLE DE MODIFICATION ET NE PEUT
l’ISO et à un vote formel au sein du CEN.
ÊTRE CITÉ COMME NORME INTERNATIONALE
AVANT SA PUBLICATION EN TANT QUE TELLE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
Pour accélérer la distribution, le présent document est distribué tel qu’il est
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES
FINS INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET
parvenu du secrétariat du comité. Le travail de rédaction et de composition de
COMMERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE
texte sera effectué au Secrétariat central de l’ISO au stade de publication.
DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE
CONSIDÉRÉS DU POINT DE VUE DE LEUR
POSSIBILITÉ DE DEVENIR DES NORMES
POUVANT SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA
RÉGLEMENTATION NATIONALE.
Numéro de référence
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET
ISO/DIS 8968-4:2013(F)
SONT INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS
OBSERVATIONS, NOTIFICATION DES DROITS
DE PROPRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT
ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE. ISO 2013
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ISO/DIS 8968-4:2013(F)
Notice de droit d’auteur

Ce document de l’ISO est un projet de Norme internationale qui est protégé par les droits d’auteur

de l’ISO. Sauf autorisé par les lois en matière de droits d’auteur du pays utilisateur, aucune partie de

ce projet ISO ne peut être reproduite, enregistrée dans un système d’extraction ou transmise sous

quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie,

les enregistrements ou autres, sans autorisation écrite préalable.

Les demandes d’autorisation de reproduction doivent être envoyées à l’ISO à l’adresse ci-après ou au

comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Toute reproduction est soumise au paiement de droits ou à un contrat de licence.
Les contrevenants pourront être poursuivis.
ii © ISO 2013 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 8968-4
Sommaire Page

Avant-propos ..................................................................................................................................................... iv

Avant-propos ...................................................................................................................................................... v

1 Domaine d’application .......................................................................................................................... 1

2 Références normatives ......................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ............................................................................................................................. 1

4 Principe ................................................................................................................................................... 1

5 Réactifs ................................................................................................................................................... 2

6 Appareillage ........................................................................................................................................... 2

7 Échantillonnage ..................................................................................................................................... 3

8 Préparation de l'échantillon pour essai............................................................................................... 3

9 Mode opératoire – Détermination directe de la teneur en azote protéique ..................................... 3

10 Mode opératoire – Détermination indirecte de la teneur en azote protéique .................................. 6

11 Fidélité .................................................................................................................................................... 8

12 Rapport d’essai ...................................................................................................................................... 9

Annexe A (informative) Résultats d'un essai interlaboratoires ..................................................................... 10

Bibliographie ..................................................................................................................................................... 12

© ISO 2013 – Tous droits réservés iii
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ISO/DIS 8968-4
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de

normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux

comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité

technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en

liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission

électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.

Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 2.

La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes

internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication

comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres votants.

L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de droits de

propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir

identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.

L'ISO 8968-4 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et

produits laitiers et par la fédération internationale du lait (FIL). Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL.

L’ISO 8968-4 | FIL 20-4:2013 annule et remplace les versions ISO 8968-4 | FIL 20-4:2001 et ISO 8968-5 |

FIL 20-5:2001.

L'ISO 8968 | FIL 20 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait — Détermination de la

teneur en azote protéique et non protéique et calcul de la teneur en protéine vraie (méthode de référence) :

⎯ Partie 1 : Méthode Kjeldahl – à publier

⎯ Partie 3 : Méthode de minéralisation en bloc (méthode pratique semi-micro rapide) : 2004

⎯ Partie 4 : Détermination de la teneur en azote protéique et non protéique et calcul de la teneur en protéine

vraie (méthode de référence) – à publier
iv © ISO 2013 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 8968-4
Avant-propos

La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation sans but lucratif représentant le secteur laitier

mondial. Les membres de la FIL se composent des comités nationaux dans chaque pays membre et des

associations laitières régionales avec lesquelles la FIL a signé des accords de coopération. Tout membre de la FIL

a le droit de faire partie des comités permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL

collabore avec l'ISO pour l’élaboration de méthodes normalisées d'analyse et d'échantillonnage du lait et des

produits laitiers.

La tâche principale des comités permanents est d'élaborer des Normes internationales. Les projets de Normes

internationales adoptés par les comités permanents sont soumis aux comités nationaux pour approbation avant

publication en tant que Norme internationale. La publication comme Norme internationale requiert l'approbation

de 50 % au moins des comités nationaux de la FIL votants.

L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de droits de

propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir

identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les appellations commerciales utilisées dans le

présent document sont des informations données par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne saurait

constituer un engagement.

L’ISO 8968-4 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et

produits laitiers et par la Fédération internationale du lait (FIL). Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL.

L’ensemble des travaux a été confié à l’équipe d’action mixte ISO-FIL (C13) du comité permanent chargé des

Méthodes d’analyse pour la composition (SCAMC), sous la direction de ses chefs de projet, D. Barbano (US) et

P. Trossat (FR).

L’ISO 8968-4 | FIL 20-4:2013 annule et remplace les versions ISO 8968-4 | FIL 20-4:2001 et ISO 8968-5 |

FIL 20-5:2001.

L'ISO 8968 | FIL 20 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait — Détermination de la

teneur en azote protéique et non protéique et calcul de la teneur en protéine vraie (méthode de référence) :

⎯ Partie 1 : Méthode Kjeldahl – à publier

⎯ Partie 3 : Méthode de minéralisation en bloc (méthode pratique semi-micro rapide) : 2004

⎯ Partie 4 : Partie 4 : Détermination de la teneur en azote protéique et non protéique et calcul de la teneur en

protéine vraie (méthode de référence) – à publier
© ISO 2013 – Tous droits réservés v
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PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 8968-4
Lait — Détermination de la teneur en azote protéique et non
protéique et calcul de la teneur en protéine vraie (méthode de
référence)

AVERTISSEMENT — L’utilisation de la présente partie de l’ISO 8968 | FIL 20 peut impliquer l’utilisation

de produits et la mise en œuvre de modes opératoires et d’appareillages à caractère dangereux. La

présente partie ne prétend pas aborder tous les risques liés à son utilisation. Il incombe à l’utilisateur

de la présente partie de l’ISO 8968 | FIL 20 d’établir, avant de l’utiliser, des pratiques d’hygiène et de

sécurité appropriées et de déterminer l’applicabilité des restrictions réglementaires locales.

1 Domaine d’application

La présente partie de l’ISO 8968 | FIL 20 spécifie une méthode pour la détermination directe et indirecte de la

teneur en azote protéique du lait liquide, entier ou écrémé.
2 Références normatives

Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,

constituent des dispositions valables pour la présente Norme internationale.

ISO 8968-1 | FIL 20-1, Lait - Détermination de la teneur en azote – Partie 1 : Méthode Kjeldahl

3 Termes et définitions

Pour les besoins de la présente partie de l’ISO 8968 | FIL 20, les définitions suivantes s'appliquent.

3.1
teneur en azote non protéique

rapport de masse des substances, déterminé par le mode opératoire décrit dans la présente partie de

l’ISO 8968 | FIL 20
3.2
teneur en azote protéique

rapport de masse des substances, déterminé par le mode opératoire décrit dans la présente partie de

l’ISO 8968 | FIL 20, directement ou indirectement

NOTE La teneur en azote protéique et non protéique est exprimée sous forme de pourcentage en masse.

4 Principe
4.1
détermination indirecte de la teneur en azote protéique

précipitation des protéines d'une prise d'essai par addition de solution d'acide trichloroacétique, de sorte que

la concentration finale de l'acide trichloroacétique dans le mélange soit d'environ 12 %. Extraction des

protéines de lait précipitées par filtration, le filtrat résiduel contenant les composants d'azote non protéique.

Détermination de la teneur en azote du filtrat par le mode opératoire décrit dans la partie 1 de l’ISO 8968 |

FIL 20.
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ISO/DIS 8968-4

Lorsque la teneur totale en azote de l'échantillon de lait a été déterminée préalablement, il est possible de

calculer la teneur en azote protéique vrai comme étant la différence entre la teneur totale en azote et la teneur

en azote non protéique
4.2
détermination directe de la teneur en azote protéique

précipitation des protéines d'une prise d'essai par addition de solution d'acide trichloroacétique, de sorte que

la concentration finale de l'acide trichloroacétique dans le mélange soit d'environ 12 %. Séparation du

précipité protéique par filtration. (Le précipité contient la teneur en azote protéique de l’échantillon).

Détermination de la teneur en azote du précipité par le mode opératoire décrit dans la partie 1 de l’ISO 8968 |

FIL 20.
5 Réactifs
5.1 Généralités

Sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue ainsi que de l'eau

distillée ou déminéralisée, ou de l'eau de pureté équivalente.

Les réactifs à utiliser sont ceux spécifiés pour la détermination de la teneur en azote total selon la méthode

décrite dans la partie 1 de l’ISO 8968 | FIL 20, à l’exception de la solution volumétrique standard d’acide

chlorhydrique à 0,10 mol/l, et le réactif suivant.

NOTE Si les laboratoires estiment qu'il convient d’utiliser la méthode décrite dans la partie 1 de l’ISO 8968 | FIL 20

pour déterminer la teneur en azote dans le précipité protéique, les réactifs décrits dans cette méthode sont également

nécessaires.
5.2 Solution d'acide trichloroacétique (CCl COOH)

Dans une fiole jaugée de 100 ml, dissoudre 15,0 g d’acide trichloroacétique dans de l'eau. Compléter avec de

l’eau jusqu’au trait. Ne pas utiliser de concentrations d'acide trichloroacétique et de volumes de solutions

différents de ceux spécifiés.

NOTE Les performances de la méthode en ce qui concerne la valeur moyenne et les caractéristiques de

performances interlaboratoires seront différentes en cas d'utilisation d'autres concentrations d’acide trichloroacétique ou

d’autres volumes de solutions.
5.3 Solution volumétrique standard d'acide chlorhydrique

Pour la détermination directe, l’acide chlorhydrique à 0,1 mol/l est tel que décrit dans la partie 1 de

l’ISO 8968 | FIL 20.

Pour la détermination indirecte de la teneur en azote protéique, l’acide chlorhydrique suivant est nécessaire :

c(HCl) = (0,01 ± 0,0001) mol/l, en plus de l’acide chlorhydrique à 0,1 mol/l requis dans la partie 1 de

l’ISO 8968 | FIL 20.

NOTE Il est recommandé d'acheter ce matériau déjà prénormalisé et répondant à ces spécifications. Souvent, les

erreurs systématiques (qui peuvent être évitées) introduites par un analyste qui dilue un acide concentré, puis détermine

la molarité de l’acide, peuvent diminuer la reproductibilité de la méthode de la présente partie. Il convient que l’analyste

n’utilise pas de solution de titrage de concentration supérieure à 0,1 mol/l car cela peut réduire le volume total de titrage

par échantillon, et l’incertitude de lecture de la burette représentera un pourcentage plus élevé de la valeur. Cela peut

avoir un impact négatif sur la répétabilité et la reproductibilité de la méthode. Si de l’acide sulfurique est utilisé à la place

de l’acide chlorhydrique, il convient que la solution présente une concentration de (0,05 ± 0,0003) mol/l.

6 Appareillage
6.1 Généralités

Utiliser un matériel courant de laboratoire ainsi que le matériel spécifié pour la détermination de la teneur en

azote total dans la partie 1 de l’ISO 8968 | FIL 20 et, en particulier, le matériel suivant.

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ISO/DIS 8968-4

NOTE Selon le choix du laboratoire indiqué dans la Note en 5.1, l’appareillage décrit dans la méthode choisie est

requis.

6.2 Bain d’eau, pouvant être maintenu une température comprise entre 38 °C et 40 °C.

6.3 Fioles coniques, d’une capacité de 125 ml (pour la détermination indirecte uniquement).

6.4 Pipettes, d'une capacité de 5 ml, 10 ml et 20 ml.
6.5 Entonnoir de filtration, en verre, de 75 mm de diamètre.

6.6 Papier-filtre, exempt d’azote, de 15 cm de diamètre, par exemple Whatman n° 1 ou équivalent.

6.7 Pipette automatique, pompe à piston, capable d’injecter 10 ml.
6.8 Béchers, d’une capacité de 50 ml (détermination indirecte uniquement).
7 Échantillonnage

L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une

méthode d’échantillonnage recommandée est indiquée dans l’ISO 707 | FIL 50.

Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon représentatif et n’ayant pas été endommagé ou

modifié durant le transport ou le stockage.
8 Préparation de l'échantillon pour essai

Chauffer l'échantillon pour essai dans le bain d'eau (6.2) à une température comprise entre 38 °C et 40 °C.

Laisser refroidir l’échantillon à température ambiante tout en le mélangeant doucement immédiatement avant

de peser la prise d'essai (9.1).
9 Mode opératoire – Détermination directe de la teneur en azote protéique
9.1 Prise d’essai

Pipetter environ 5,0 ml ± 0,1 ml de l'échantillon pour essai préparé (8) dans un ballon de Kjeldahl ou dans un

tube de minéralisation sec et propre. Peser préalablement à 0,1 mg près. Peser l'échantillon pour essai

à 0,1 mg près. Ajouter immédiatement 5,0 ml ± 0,1 ml d'eau dans le ballon ou dans le tube, rincer l'échantillon

pour essai présent sur son goulot ou en son fond.

NOTE L'utilisation d'un ballon de Kjeldahl ou d'un tube de minéralisation dépend du choix du laboratoire mentionné

dans la Note en 5.1.

Whatman est un exemple d’un produit approprié disponible dans le commerce. Cette information est donnée par

souci de commodité à l’intention des utilisateurs de la présente partie de l’ISO 8968 | FIL 20 et ne saurait constituer un

engagement de l’ISO à l’égard de ce produit.
© ISO 2013 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 8968-4
9.2 Détermination
9.2.1 Précipitation et filtration

Ajouter 40 ml ± 0,5 ml de solution d'acide trichloroacétique (5.2) dans le ballon de Kjeldahl ou dans le tube de

minéralisation contenant la prise d’essai (9.1) et agiter par un mouvement de rotation pour mélanger le

contenu. Laisser reposer le ballon ou le tube pendant 5 min environ pour permettre au précipité de se

déposer. Verser le contenu du ballon ou du tube au travers d'un papie
...

Questions, Comments and Discussion

Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.