ISO 6732:1985
(Main)Milk and milk products — Determination of iron content — Spectrometric method (Reference method)
Milk and milk products — Determination of iron content — Spectrometric method (Reference method)
Is applicable to milk, skimmed milk, whey, buttermilk, plain and skimmed yogurt, evaporated milk, sweetened condensed milk, dried whole and skimmed milk, dried whey and dried buttermilk, cream and butter, butterfat, ice-cream, cheese of various ages and processed cheese, caseins, caseinates and coprecipitates. The principle of determination consists in digesting the organic material with a mixture of nitric and sulfuric acids.
Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en fer — Méthode spectrométrique (Méthode de référence)
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATlON.MEIKjjYHAPOflHAR OPrAHM3AUMR l-l0 CTAHL1APTM3ALU4M~ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Milk and milk products - Determination of iron
content - Spectrometric method (Reference method)
Lait et prod&s laitiers - Dhtermina tion de la teneur en fer - M&hode spectrom&rigue (M&hode de rt+f&rence)
First edition - ‘1985-07-01
Ref. No. IS0 6732-1985 (E)
UDC 627.113: 543.42: 546.72
determination of content, iron, spectrophotometric analysis.
Descriptors : dairy products, milk, chemical analysis,
Price based on 6 pages
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Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 6732 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products.
NOTE - The method specified in this International Standard has been developed jointly with the
International Dairy Federation (IDF) and the Association of Official Analytical Chemists (AOAC)
and will also be published by these organizations.
0 International Organization for Standardization, 1985
Printed in Switzerland
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INTERNATIONAL STANDARD
IS0 6732-1985 (E)
Milk and milk products - Determination of iron
Spectrometric method (Reference method)
content -
1 Scope and field of application 2 Reference
IS0 707, Milk and milk products - Methods of sampling.
This International Standard specifies a spectrometric reference
method for the determination of the iron content of milk and
milk products.
3 Definition
This method is applicable to
For the purpose of this International Standard, the following
-
milk, skimmed milk, whey and buttermilk
definition applies.
-
plain yogurt and skimmed yogurt
iron content (of a milk or milk product): The whole of the
substances determined by the procedure specified in this Inter-
-
evaporated milk and sweetened condensed milk
national Standard.
-
dried whey and dried
dried whole and skimmed milk,
The iron content is usually reported as a mass fraction, and is
buttermilk
then conventionally expressed in milligrams per kilogram of
sample.
-
cream and butter
- butterfat’)
4 Principle
-
ice-cream
Digestion of the organic material with a mixture of nitric and
sulfuric acids, preceded, in the case of cream and butterfat, by
-
cheese of various ages, and processed cheese
removal of the fat. In the case of butter, separation and diges-
tion of the serum.
-
caseins, caseinates and coprecipitates.
Complexing the iron ions, obtained by reduction of iron(lll)
NOTE - The method demands experience in trace analysis and careful
ions, by means of bathophenanthroline. Extraction of the
execution. During the procedure, special consideration should be given
iron( I I ) compound with isoamyl alcohol. Spectrometric
to the problem of contamination, which will affect the accuracy and
measurement at a wavelength of 533 nm of the absorbance of
repeatability of the method.
the red solution thus obtained.
It is therefore recommended
-
to keep reagents, glassware and the laboratory environment as
clean as possible (contamination by rust is a particular hazard) 5 Reagents
-
that each laboratory identifies and controls its own sources of
All reagents shall be of very pure analytical grade and, with the
contamination
exception of the iron standard solutions (5.13 and 5.14), shall
-
that the difference between two blank values is kept as low as
be free from iron. The water used shall comply with the re-
possible (generally, this difference should not exceed 0,004 absor-
quirements of IS0 3696,*)grade 2.
bance unit)
-
that the performance of the method be checked by analysing NOTE - The use of Aristar, Suprapur or Ultrex reagents, or products
milk powder (or another milk product) of known or certified iron of equivalent purity, is strongly recommended for reagents 5.5, 5.6, 5.7
content. and 5.8. See also the note to 8.4.
1) The designation “butterfat” covers all the products described in IDF Standard 68 A, Anhydrous milkfat, anhydrous butteroii or anhydrous
butter-fiat, butteroil or butterfat, ghee (compositional standards).
2) IS0 3696, Water for laboratory use - Specifications. (At present at the stage of draft.)
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IS0 6732-1985 (El
NOTES
5.1 Ethanol, about 96 % (VW).
Generally five extractions are sufficient.
Distil, if necessary, in an iron-free distillation unit.
2 If the solution was prepared more than 24 h before use, it is ad-
repeat the extraction with the bathophenanthroline.
visable to
5.2 Diethyl ether.
3 Instead of the hydroxylammonium chloride solution, a freshly
prepared solution of ascorbic acid can be used as a reducing agent.
Distil, if necessary, in an iron-free distillation unit.
This ascorbic acid solution can be made by dissolving 10 g of ascorbic
acid in 100 ml of water. The solution should be extracted with the
bathophenanthroline solution in exactly the same way as described for
5.3 Light petroleum, boiling range 40 to 60 OC.
the hydroxylammonium chloride solution. It should be stored in a
refrigerator. Instead of 3 ml of the hydroxylammonium chloride sol-
Distil, if necessary, in an iron-free distillation unit.
ution 3 ml of this ascorbic acid solution can be used in 5.6, 5.8 and
8.1.3.4.
5.4 Nitric acid, concentrated, ezo = I,42 g/ml.
5.10 lsoamyl alcohol (3-methyl-1-butanol).
Distil in an iron-free distillation unit. Discard the first 50 ml of
distillate. Do not store the nitric acid in a brown glass bottle.
Distil, if necessary, in an iron-free distillation unit.
5.5 Sulfuric acid, concentrated, ~2~ = 1,84 g/ml. 5. I I Bathophenanthroline, solution.
Dissolve 83,1 mg of bathophenanthroline [4,7-diphenyl-
. Potassium sulfate, solution in sulfuric acid.
56
l,lO-phenanthroline (C2,H16N2)1 in 100 ml of the isoamyl
alcohol (5.10).
Dissolve 25 g of dry potassium sulfate (K2S04) in the sulfuric
acid (5.5) and make up to 100 ml with the same sulfuric acid.
Potassium permanganate, solution.
5.12
Filter the solution, without suction, through an all glass, iron-
free, filter crucible, of porosity grade P 100 (pore diameter 40 to
Dissolve 100 mg of potassium permanganate (KMn04) in 50 ml
100 pm).
of water.
NOTE - If the potassium sulfate available is not iron-free purify it as
follows.
5.13 Iron, standard solution corresponding to 1 000 mg of
Dissolve 40 g of potassium sulfate in 500 ml of water and add 3 ml of iron per litre.
the hydroxylammonium chloride solution (5.9). Extract the solution
with 10 ml of the bathophenanthroline solution (5.11). Remove the
Dissolve 7,022 g of ammonium iron sulfate hexahydrate
upper layer. Repeat these two operations until the upper layer remains
[(NH&2Fe(S04)2~6H201 in 250 ml of water. Add 8 ml of the
colourless. Evaporate the water in a clean oven.
sulfuric acid (5.5) and cool to room temperature. Dilute to
1 000 ml with water.
5.7 Hydrogen peroxide, solution, g20 = 1,099 to
1 ml of this standard solution contains 1 mg of Fe.
1,103 g/ml.
NOTE - Preparations which contain exactly 1 000 mg of iron may be
Store in a refrigerator.
used instead of the ammonium iron sulfate hexahydrate. Such
preparations are available commercially.
58 . Sodium acetate, saturated solution.
5.14 Iron, standard solution corresponding to 1 mg of iron
per litre.
Dissolve 232,5 g of anhydrous sodium acetate (CH$OONa) in
500 ml of water.
On the day of use, pipette 1 ml of the standard iron solution
(5.13) into 250 ml of water. Add 1 ml of the sulfuric acid (5.5)
NOTE - If the sodium acetate available is not iron-free, purify it as
follows.
and dilute to 1 000 ml with water.
Dissolve 232,5 g of sodium acetate in 500 ml of water. Filter through a 1 ml of this standard solution contains 1 pg of Fe.
filter paper. Add 3 ml of the hydroxylammonium chloride solution
(5.9). Extract the solution with 10 ml of the bathophenanthroline sol-
ution (5.11). Remove the upper layer. Repeat these two operations un-
6 Apparatus
til the upper layer remains colourless.
Keep the clean glassware, including the glass beads (6.8), in
10 % (m/m) nitric acid solution. Rinse three times before use
. Hydroxylammonium chloride, solution.
59
with distilled water and then three times with double-distilled
water. If necessary, dry by successively rinsing with ethanol
Dissolve 20 g of hydroxylammonium chloride (HONH&I) in
and diethyl ether.
water and make up to 100 ml. Filter through a filter paper.
Extract the solution with 5 ml of the bathophenanthroline sol-
Usual laboratory equipment, and in particular
ution (5.11). Allow the layers to separate properly. Remove the
upper layer. Repeat these two operations until the upper layer
remains colourless. 61 . Analytical balance.
2
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IS0 6732-1985 E)
6.2 Centrifuge, capable of producing a radial acceleration of If, in the case of milk, the fat is not evenly dispersed, heat the
2 SOOg, with tubes of capacity at least 150 ml. sample slowly to 40 OC, mix gently by inversion only, and cool
quickly to 20 + 2 OC.
6.3 Grinding device, appropriate to the nature of the
sample.
8.1.2 Buttermilk
6.4 Sieve, of aperture size O,5 mm, made of iron-free If necessary, remove butter granules. Bring the sample to
material. 20 + 2 OC and mix carefully, immediately before weighing
(8.2.1).
6.5 Water-baths.
8.1.3 Plain yogurt and skimmed yogurt
6.6 Micro- burners which do not emit iron-containing
I
particles.
Bring the sample to 20 + 2 OC and mix carefully. If serum
separates, stir vigorously, immediately before weighing (8.2.1).
NOTE - The use of electric heaters is also permitted.
8.1.4 Cream
6.7 Digestion flasks (Kjeldahl), of capacity approximately
70 ml, with ground glass stoppers, calibrated on the lower part
Bring the sample to 20 + 2 OC. Mix or stir thoroughly, but not
of the neck at 50 ml.
so vigorously as to cause frothing or churning.
6.8 Beads, made of glass or preferably quartz, which do not
If the cream is very thick, or if the fat is not evenly dispersed,
release iron during the digestion procedure (8.3. 1). warm slowly to 40 OC to facilitate mixing.
Cool the sample quickly to 20 + 2 OC. Stir the sample in the
6.9 Graduated cylinders, of capacities 5; 10; and 25 ml.
container thoroughly. Mix until the whole mass is
homogeneous. Close the container.
6.10 Graduated pipettes, of capacities 1; 2; and 5 ml,
graduated in divisions of 0,l ml, complying with the re-
NOTE - Correct results cannot be expected if adequate mixing of the
quirements of IS0 835.
sample is not achieved or if the sample shows any evidence of churning
or any other signs of abnormality.
6.11 One-mark pipettes, delivering 1; 2; 3; 4; 5; 10; and
25 ml, complying with the requirements of IS0 648, class A.
8.1.5 Evaporated milk
Shake the container thoroughly with frequent inversion. Open
6.12 Spectrometer, suitable for measuring absorbance at
this container and pour the milk slowly into another container
533 nm, equipped with cells of optical path length 10 mm.
made of glass, provided with an airtight lid, taking care to in-
corporate in the sample any fat or other constituents adhering
to the wall of the original container. Stir vigorously and close
7 Sampling
the container.
NOTE - Avoid contamination by iron.
Heat the closed container in a water-bath at 40 to 60 OC.
Remove and shake the container vigorously every 15 min. After
2 h, remove the container and cool to 20 + 2 OC. Remove the
7.1 See IS0 707.
lid and mix thoroughly by stirring the sample with a spoon or
spatula.
Store glass sampling jars in 10 % (m/m) nitric acid solution.
NOTE - If the fat separates, correct results cannot be expected.
Rinse them thoroughly and dry before use.
7.2 Store the sample in such a way that deterioration and
8.1.6 Sweetened condensed milk
change in composition are prevented.
Open the container and thoroughly mix the milk with a spoon
or spatula, using an up and down rotary movement in such a
way that the top and bottom layers are moved and mixed. Take
8 Procedure
care to incorporate in the sample any milk adhering to the wall
and ends of the container.
NOTE - Avoid contamination by iron.
Transfer the sample as completely as possible to a second con-
8.1 Preparation of the test sample
tainer made of glass, provided with an airtight lid, and close this
container. Heat the closed container in a water-bath at 30 to
40 OC. Cool to 20 + 2 OC. Stir the sample in the container
8.1.1 Milk, skimmed milk and whey
thoroughly. Mix until the whole mass is h
...
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.MEIKKC\YHAPOfiHAR OPrAHM3Al&lR ll0 CTAH~APTbl3Al.WWORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Lait et produits laitiers - Détermination de la teneur
- Méthode spectrométrique (Méthode de
en fer
référence)
Milk and mifk products - De termina tion of iron content - Spectrometric method (Reference method)
Première édition - 1985-07-01
CDU 627.113 : 543.42 : 546.72 Réf. no : ISO 6732-1985 (FI
Descripteurs : produit laitier, lait, analyse chimique, dosage, fer, méthode spectrophotométrique.
Prix basé sur 6 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
- L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
. La Norme internationale ISO 6732 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
NOTE - La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée conjointe-
ment avec la FIL (Fédération internationale de laiterie) et I’AOAC (Association des chimistes
analytiques officiels, U.S.A.) et sera également publiée par ces organisations.
Organisation internationale de normalisation, 1985
0
Imprimé en Suisse
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ISO 6732-1985 (FI
NORME INTERNATIONALE
Lait et produits laitiers - Détermination de la teneur
en fer - Méthode spectrométrique (Méthode de
référence)
- que la différence entre deux valeurs d’essai à blanc soit aussi
1 Objet et domaine d’application
faible que possible (généralement, cette différence ne devrait pas
La présente Norme internationale spécifie une méthode spec- dépasser 0,004 unité d’absorbance) ;
trométrique de référence pour la détermination de la teneur en
- de contrôler la performance de la méthode en analysant une
fer du lait et des produits laitiers.
poudre de lait (ou un autre produit laitier) dont la teneur en fer est
connue ou certifiée.
La méthode est applicable aux produits suivants:
- lait, lait écrémé, lactosérum et babeurre;
2 Référence
- yogourt nature et yogourt écrémé;
ISO 707, Lait et produits laitiers - M&hode d’échan-
tillonnage.
- lait concentré non sucré et lait concentré sucré;
- poudre de lait entier, de lait écrémé, lactosérum et
3 Définition
babeurre secs;
Dans le cadre de la présente Norme internationale, la définition
-
crème et beurre;
suivante est applicable :
-
matières grasses butyriques; l)
teneur en fer (du lait ou d’un produit laitier): Fraction mas-
sique des substances déterminées selon la méthode spécifiée
-
crème glacée;
dans la présente Norme internationale. La teneur en fer est
habituellement indiquée en fraction massique et est conven-
- fromages de différents âges, et fromages fondus;
tionnellement exprimée en milligrammes par kilogramme de
l’échantillon.
-
caséines, caséinates et coprécipités.
NOTE - La méthode requiert une certaine expérience en analyse de
4 Principe
traces et demande d’opérer avec précaution. Durant tout le mode opé-
ratoire, il faut tenir compte particuliérement du probléme de la conta-
Minéralisation de la matière organique à l’aide d’un mélange
mination qui affecte la précision et la répétabilité de la méthode.
d’acide nitrique et d’acide sulfurique, aprés élimination de la
matiére grasse, dans le cas de la creme et des matieres grasses
En conséquence, il est recommandé
butyriques. Dans le cas du beurre, séparation et minéralisation
du sérum.
- de garder les réactifs, la verrerie et l’environnement dans le
laboratoire aussi propres que possible (la contamination par la
Complexion des ions fer(U), obtenue par réduction des ions
rouille est un risque particulier) ;
fer(lll), au moyen de la bathophénanthroline. Extraction du
fer( II) combiné à l’alcool isoamylique. Mesurage spectrometri-
- que chaque laboratoire identifie et contrôle ses propres sour-
que de I’absorbance à une longueur d’onde de 533 nm, de la
ces de contamination ;
solution rouge ainsi obtenue.
1) La désignation (( matière grasse butyrique )) s’applique à tous les produits décrits dans la norme FIL 68 A, Matière grasse de /ait anhydre, butteroi/
anhydre ou matière grasse butyrique anhydre, butteroil et matière grasse butyrique, ghee (normes de composition).
1
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ISO 67324985 (F)
Dissoudre 232,5 g d’acétate de sodium dans 500 ml d’eau. Filtrer à tra-
5 Réactifs
vers un papier-filtre. Ajouter 3 ml de la solution de chlorure d’hydroxy-
lammonium (5.9). Ajouter 10 ml de la solution de bathophénanthroline
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique très pure et
(5. II ). Agiter. Extraire la solution surnageante. Répéter ces deux opé-
exempts de fer, à l’exception des solutions étalons de fer (5.13
rations jusqu’à ce que la couche supérieure reste incolore.
et 5.14). L’eau utilisée doit satisfaire aux exigences de I’ISO
3696,‘) qualité 2.
5.9 Chlorure d’hydroxylammonium, solution.
NOTE - L’utilisation de réactifs Aristar, Suprapur ou Ultrex, ou de
produits de pureté équivalente, est fortement recommandée pour les
Dissoudre 20 g de chlorure d’hydroxylammonium (HONH&I)
réactifs 5.5, 5.6, 5.7 et 5.8. Voir également la note en 8.4.
dans de l’eau et compléter à 100 ml. Filtrer à travers un papier-
filtre. Ajouter 5 ml de la solution de bathophénanthroline
5.1 Éthanol, à environ 96 % WV).
(5.11). Agiter. Extraire la solution surnageante. Répéter ces
deux opérations jusqu’à ce que la couche supérieure reste inco-
Distiller, si nécessaire, dans un appareil exempt de fer.
lore.
NOTES
. 5.2 Oxyde diéthylique.
1 En général, cinq extractions sont suffisantes.
Distiller, si nécessaire, dans un appareil exempt de fer.
2 Si la solution n’a pas été préparée dans les 24 h avant l’emploi, il est
conseillé de répéter la purification avec une solution de bathophé-
5.3 Éther de pétrole, intervalle de distillation entre 40 et
nanthroline (5.11).
60 OC.
3 À la place de la solution de chlorure d’hydroxylammonium, une
Distiller, si nécessaire, dans un appareil exempt de fer. solution fraîchement préparée d’acide ascorbique peut être utilisée
comme agent réducteur. Cette solution d’acide ascorbique peut être
préparée en dissolvant 10 g d’acide ascorbique dans 100 ml d’eau. La
5.4 Acide nitrique, concentré, ~2~ = 1,42 g/ml.
solution doit être extraite avec la solution de bathophénanthroline
exactement de la même facon que celle décrite pour la solution de
Distiller dans un appareil exempt de fer en rejetant les premiers
chlorure d’hydroxylammonium. Elle doit être conservée au réfrigéra-
50 ml de distillat. Ne pas conserver l’acide nitrique dans un fla- teur. À la place de 3 ml de solution de chlorure d’hydroxylammonium,
3 ml de cette solution d’acide ascorbique peuvent être utilisés en 5.6,
_ con de verre brun.
5.8 et 8.3.1.4.
5.5 Acide sulfurique, concentré, e20 = 1,84 g/ml.
5.10 Alcool koamylique (méthyl-3 butanol-l).
. Sulfate de potassium, solution dans l’acide sulfurique.
56
Distiller, si nécessaire, dans un appareil exempt de fer.
Dissoudre 25 g de sulfate de potassium sec (K2S0,) dans
l’acide sulfurique (5.5) et compléter à 100 ml avec cet acide. Fil- 5.11 Bathophénanthroline, solution.
trer la solution sans procéder à une aspiration à travers un creu-
set filtrant entièrement en verre, exempt de fer et de porosité Dissoudre 83,1 mg de bathophénanthroline [diphényl-4,7
P 100 (diamètre des pores compris entre 40 et 100 pm). phénanthroline-1,lO &aH,,N$l dans 100 ml d’alcool koamyli-
que (5.10).
NOTE - Si on ne dispose pas de sulfate de potassium exempt de fer, il
faut le purifier de la facon suivante.
5.12 Permanganate de potassium, solution.
Dissoudre 40 g de sulfate de potassium dans 500 ml d’eau et ajouter
3 ml de la solution de chlorure d’hydroxylammonium (5.9). Ajouter
Dissoudre 100 mg de permanganate de potassium (KMn04)
10 ml de la solution de bathophénanthroline (5.11). Agiter. Extraire la
dans 50 ml d’eau.
solution surnageante. Répéter ces deux opérations jusqu’à ce que la
couche supérieure reste incolore. Placer la solution purifiée dans une
étuve propre pour faire évaporer l’eau.
5.13 Fer, solution étalon correspondant à 1 000 mg de Fe
par litre.
5.7 Peroxyde d’hydrogène, solution, e20 = 1,099 à
1,103 g/ml. Dissoudre 7,022 g de sulfate d’ammonium de fer(ll) hexahy-
draté [(NH,l,Fe(S04)2.6H201 dans 250 ml d’eau. Ajouter 8 ml
Conserver au réfrigérateur.
d’acide sulfurique (5.5) et refroidir à la température ambiante.
Diluer à 1 000 ml avec de l’eau.
58 . Acétate de sodium, solution saturée.
1 ml de cette solution étalon contient 1 mg de Fe.
Dissoudre 232,5 g d’acétate de sodium anhydre (CH$OONa)
NOTE
- Des préparations contenant exactement 1 000 mg de fer par
dans 500 ml d’eau.
litre peuvent être utilisées à la place de sulfate d’ammonium de fer(H)
haxahydraté. De telles préparations sont disponibles dans le com-
NOTE - Si on ne dispose pas d’acétate de sodium exempt de fer, il
merce.
faut le purifier de la facon suivante.
1) ISO 3696, Eau à usage de laboratoire - Spécifications. (Actuellement au stade de projet. 1
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 67324985 (FI
Fer, solution étalon correspondant à 1 mg de Fe par 7 Échantillonnage
5.14
litre.
NOTE - Éviter toute contamination par le fer.
Préparer cette solution le jour de l’emploi. Verser à l’aide d’une
pipette 1 ml de la solution étalon de fer (5.13) dans 250 ml
7.1 Voir ISO 707.
d’eau. Ajouter 1 ml d’acide sulfurique (5.5) et diluer avec de
l’eau jusqu’à 1 000 ml.
Conserver les récipients en verre pour l’échantillonnage dans la
solution d’acide nitrique à 10 % (mlm). Les rincer soigneuse-
1 ml de cette solution étalon contient 1 pg de Fe. .
ment et les sécher avant l’emploi.
7.2 Conserver l’échantillon de facon à éviter toute détériora-
tion et modification de sa composition.
6 Appareillage
Conserver la verrerie propre, y compris les billes en verre (6.8),
8 Mode opératoire
dans la solution d’acide nitrique à 10 % (mlm). Avant emploi,
rincer trois fois avec de l’eau distillée et trois fois avec de l’eau
NOTE - Éviter toute contamination par le fer.
bidistillée. Sécher, si nécessaire, en rincant successivement
avec de I’éthanol et de l’oxyde diéthylique.
8.1 Préparation de l’échantillon pour essai
Matériel courant de laboratoire, et notamment
8.1.1 Lait, lait écrémé et lactosérum
6.1 Balance analytique.
Porter l’échantillon à 20 + 2 OC et mélanger avec soin. Si dans
le cas du lait, la matière grasse n’est pas dispersée de facon
6.2 Centrifugeuse, capable de produire une accélération
homogène, chauffer lentement l’échantillon à 40 OC, mélanger
radiale de 2 5OOg, avec des tubes d’au moins 150 ml de capa-
doucement uniquement par retournements et refroidir rapide-
cité.
ment à 20 $I 2 OC.
6.3 Appareil de broyage, approprié à la nature de I’échantil-
8.1.2 Babeurre
Ion.
Si nécessaire, éliminer les grains de beurre. Porter l’échantillon
à 20 + 2 OC et mélanger avec soin juste avant de peser (8.2.1).
ouverture de maille de 0,5 en matériau
6.4 Tamis, à
mm,
exempt de fer.
8.1.3 Yogourt nature et yogourt écrémé
6.5 Bains d’eau.
Porter l’échantillon à 20 + 2 OC et mélanger avec soin. Si le
sérum est séparé, agiter vigoureusement juste avant de peser
6.6 Microbrûleurs à gaz, qui ne dégagent pas de particules (8.2.1).
contenant du fer.
8.1.4 Crème
NOTE - L’utilisation d’appareils à chauffage électrique est également
permise.
Si la crème est trés épaisse, ou si la matiére grasse n’est pas dis-
persée uniformément, chauffer lentement à 40 OC pour faciliter
le mélange.
68 Billes en verre, de préférence en qua rtz, ne nt pas
de fer processus de minéral isation (8.3.1)
durant le
6.9 Éprouvettes graduées, de 5, 10 et 25 ml de capacité.
NOTE - On ne peut pas espérer obtenir des résultats corrects si l’on
6.10 Pipettes graduées, de 1, 2 et 5 ml de capacité, gra-
ne réalise pas un mélange convenable de l’échantillon ou si I’échantil-
duées en 0,l ml, conformes aux spécifications de I’ISO 835.
Ion présente des signes manifestes de barattage ou d’autres anomalies.
8.1.5 Lait concentré non sucré
6.11 Pipettes à un trait, de 1,2,3,4,5, 10 et 25 ml de capa-
cité, conformes aux spécifications de I’ISO 648, classe A.
Bien agiter le récipient en le retournant fréquemment. Ouvrir le
récipient. Verser le lait lentement dans un autre récipient en
6.12 Spectromètre, permettant de faire des lectures à verre, pourvu d’un couvercle étanche, en prenant soin d’incor-
porer à l’échantillon la matiére grasse ou les autres constituants
533 n m, équipé de cuves de 10 mm de parcours optique.
3
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ISO 67324985 (F)
pouvant adhérer à la paroi du premier récipient . Agiter vigou-
8.1 .lO Crème glacée
le récipient.
reusement et fermer
Pour des échantillons en petits emballages, enlever l’emballage
Chauffer le récipient clos dans un bain d’eau entre 40 et 60 OC.
et mettre l’échantillon dans un récipient pourvu d’un couvercle
Toutes les 15 min, sortir le récipient du bain et l’agiter forte-
étanche.
ment. Au bout de 2 h, retirer le récipient et le refroidir à
20 - + 2 OC. Enlever le couvercle et bien mélanger en remuant
Pour des échantillons prélevés dans de grands emballages ou
l’échantillon avec une cuillère ou une spatule.
dans de la marchandise en vrac, les conserver dans leurs réci-
pients pour échantillonnage. Dans les deux cas, faire fondre
NOTE - Si la matière grasse se sépare, on ne peut pas espérer obtenir
l’échantillon en placant le récipient pour échantillon fermé dans
des résultats corrects.
un bain d’eau à 45 + 1 OC durant le temps juste nécessaire
pour le fluidifier. Mélanger l’échantillon par agitation. Refroidir
8.1.6 Lait concentré sucré
à 20 + 2 OC en continuant de mélanger jusqu’à refroidisse-
ment complet.
Ouvrir le récipient et bien mélanger le lait avec une cuillère ou
. une spatule, en appliquant un mouvement de rotation verticale
de telle sorte que les couches supérieure et inférieure soient
8.1.11 Fromage ou fromage fondu
agitées et mélangées. Prendre soin d’incorporer à l’échantillon
le lait adhérant aux parois et au fond du récipient.
Enlever la croûte ou la couche superficielle de moisissures du
...
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.MEIKKC\YHAPOfiHAR OPrAHM3Al&lR ll0 CTAH~APTbl3Al.WWORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Lait et produits laitiers - Détermination de la teneur
- Méthode spectrométrique (Méthode de
en fer
référence)
Milk and mifk products - De termina tion of iron content - Spectrometric method (Reference method)
Première édition - 1985-07-01
CDU 627.113 : 543.42 : 546.72 Réf. no : ISO 6732-1985 (FI
Descripteurs : produit laitier, lait, analyse chimique, dosage, fer, méthode spectrophotométrique.
Prix basé sur 6 pages
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Avant-propos
- L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
. La Norme internationale ISO 6732 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
NOTE - La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée conjointe-
ment avec la FIL (Fédération internationale de laiterie) et I’AOAC (Association des chimistes
analytiques officiels, U.S.A.) et sera également publiée par ces organisations.
Organisation internationale de normalisation, 1985
0
Imprimé en Suisse
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ISO 6732-1985 (FI
NORME INTERNATIONALE
Lait et produits laitiers - Détermination de la teneur
en fer - Méthode spectrométrique (Méthode de
référence)
- que la différence entre deux valeurs d’essai à blanc soit aussi
1 Objet et domaine d’application
faible que possible (généralement, cette différence ne devrait pas
La présente Norme internationale spécifie une méthode spec- dépasser 0,004 unité d’absorbance) ;
trométrique de référence pour la détermination de la teneur en
- de contrôler la performance de la méthode en analysant une
fer du lait et des produits laitiers.
poudre de lait (ou un autre produit laitier) dont la teneur en fer est
connue ou certifiée.
La méthode est applicable aux produits suivants:
- lait, lait écrémé, lactosérum et babeurre;
2 Référence
- yogourt nature et yogourt écrémé;
ISO 707, Lait et produits laitiers - M&hode d’échan-
tillonnage.
- lait concentré non sucré et lait concentré sucré;
- poudre de lait entier, de lait écrémé, lactosérum et
3 Définition
babeurre secs;
Dans le cadre de la présente Norme internationale, la définition
-
crème et beurre;
suivante est applicable :
-
matières grasses butyriques; l)
teneur en fer (du lait ou d’un produit laitier): Fraction mas-
sique des substances déterminées selon la méthode spécifiée
-
crème glacée;
dans la présente Norme internationale. La teneur en fer est
habituellement indiquée en fraction massique et est conven-
- fromages de différents âges, et fromages fondus;
tionnellement exprimée en milligrammes par kilogramme de
l’échantillon.
-
caséines, caséinates et coprécipités.
NOTE - La méthode requiert une certaine expérience en analyse de
4 Principe
traces et demande d’opérer avec précaution. Durant tout le mode opé-
ratoire, il faut tenir compte particuliérement du probléme de la conta-
Minéralisation de la matière organique à l’aide d’un mélange
mination qui affecte la précision et la répétabilité de la méthode.
d’acide nitrique et d’acide sulfurique, aprés élimination de la
matiére grasse, dans le cas de la creme et des matieres grasses
En conséquence, il est recommandé
butyriques. Dans le cas du beurre, séparation et minéralisation
du sérum.
- de garder les réactifs, la verrerie et l’environnement dans le
laboratoire aussi propres que possible (la contamination par la
Complexion des ions fer(U), obtenue par réduction des ions
rouille est un risque particulier) ;
fer(lll), au moyen de la bathophénanthroline. Extraction du
fer( II) combiné à l’alcool isoamylique. Mesurage spectrometri-
- que chaque laboratoire identifie et contrôle ses propres sour-
que de I’absorbance à une longueur d’onde de 533 nm, de la
ces de contamination ;
solution rouge ainsi obtenue.
1) La désignation (( matière grasse butyrique )) s’applique à tous les produits décrits dans la norme FIL 68 A, Matière grasse de /ait anhydre, butteroi/
anhydre ou matière grasse butyrique anhydre, butteroil et matière grasse butyrique, ghee (normes de composition).
1
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ISO 67324985 (F)
Dissoudre 232,5 g d’acétate de sodium dans 500 ml d’eau. Filtrer à tra-
5 Réactifs
vers un papier-filtre. Ajouter 3 ml de la solution de chlorure d’hydroxy-
lammonium (5.9). Ajouter 10 ml de la solution de bathophénanthroline
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique très pure et
(5. II ). Agiter. Extraire la solution surnageante. Répéter ces deux opé-
exempts de fer, à l’exception des solutions étalons de fer (5.13
rations jusqu’à ce que la couche supérieure reste incolore.
et 5.14). L’eau utilisée doit satisfaire aux exigences de I’ISO
3696,‘) qualité 2.
5.9 Chlorure d’hydroxylammonium, solution.
NOTE - L’utilisation de réactifs Aristar, Suprapur ou Ultrex, ou de
produits de pureté équivalente, est fortement recommandée pour les
Dissoudre 20 g de chlorure d’hydroxylammonium (HONH&I)
réactifs 5.5, 5.6, 5.7 et 5.8. Voir également la note en 8.4.
dans de l’eau et compléter à 100 ml. Filtrer à travers un papier-
filtre. Ajouter 5 ml de la solution de bathophénanthroline
5.1 Éthanol, à environ 96 % WV).
(5.11). Agiter. Extraire la solution surnageante. Répéter ces
deux opérations jusqu’à ce que la couche supérieure reste inco-
Distiller, si nécessaire, dans un appareil exempt de fer.
lore.
NOTES
. 5.2 Oxyde diéthylique.
1 En général, cinq extractions sont suffisantes.
Distiller, si nécessaire, dans un appareil exempt de fer.
2 Si la solution n’a pas été préparée dans les 24 h avant l’emploi, il est
conseillé de répéter la purification avec une solution de bathophé-
5.3 Éther de pétrole, intervalle de distillation entre 40 et
nanthroline (5.11).
60 OC.
3 À la place de la solution de chlorure d’hydroxylammonium, une
Distiller, si nécessaire, dans un appareil exempt de fer. solution fraîchement préparée d’acide ascorbique peut être utilisée
comme agent réducteur. Cette solution d’acide ascorbique peut être
préparée en dissolvant 10 g d’acide ascorbique dans 100 ml d’eau. La
5.4 Acide nitrique, concentré, ~2~ = 1,42 g/ml.
solution doit être extraite avec la solution de bathophénanthroline
exactement de la même facon que celle décrite pour la solution de
Distiller dans un appareil exempt de fer en rejetant les premiers
chlorure d’hydroxylammonium. Elle doit être conservée au réfrigéra-
50 ml de distillat. Ne pas conserver l’acide nitrique dans un fla- teur. À la place de 3 ml de solution de chlorure d’hydroxylammonium,
3 ml de cette solution d’acide ascorbique peuvent être utilisés en 5.6,
_ con de verre brun.
5.8 et 8.3.1.4.
5.5 Acide sulfurique, concentré, e20 = 1,84 g/ml.
5.10 Alcool koamylique (méthyl-3 butanol-l).
. Sulfate de potassium, solution dans l’acide sulfurique.
56
Distiller, si nécessaire, dans un appareil exempt de fer.
Dissoudre 25 g de sulfate de potassium sec (K2S0,) dans
l’acide sulfurique (5.5) et compléter à 100 ml avec cet acide. Fil- 5.11 Bathophénanthroline, solution.
trer la solution sans procéder à une aspiration à travers un creu-
set filtrant entièrement en verre, exempt de fer et de porosité Dissoudre 83,1 mg de bathophénanthroline [diphényl-4,7
P 100 (diamètre des pores compris entre 40 et 100 pm). phénanthroline-1,lO &aH,,N$l dans 100 ml d’alcool koamyli-
que (5.10).
NOTE - Si on ne dispose pas de sulfate de potassium exempt de fer, il
faut le purifier de la facon suivante.
5.12 Permanganate de potassium, solution.
Dissoudre 40 g de sulfate de potassium dans 500 ml d’eau et ajouter
3 ml de la solution de chlorure d’hydroxylammonium (5.9). Ajouter
Dissoudre 100 mg de permanganate de potassium (KMn04)
10 ml de la solution de bathophénanthroline (5.11). Agiter. Extraire la
dans 50 ml d’eau.
solution surnageante. Répéter ces deux opérations jusqu’à ce que la
couche supérieure reste incolore. Placer la solution purifiée dans une
étuve propre pour faire évaporer l’eau.
5.13 Fer, solution étalon correspondant à 1 000 mg de Fe
par litre.
5.7 Peroxyde d’hydrogène, solution, e20 = 1,099 à
1,103 g/ml. Dissoudre 7,022 g de sulfate d’ammonium de fer(ll) hexahy-
draté [(NH,l,Fe(S04)2.6H201 dans 250 ml d’eau. Ajouter 8 ml
Conserver au réfrigérateur.
d’acide sulfurique (5.5) et refroidir à la température ambiante.
Diluer à 1 000 ml avec de l’eau.
58 . Acétate de sodium, solution saturée.
1 ml de cette solution étalon contient 1 mg de Fe.
Dissoudre 232,5 g d’acétate de sodium anhydre (CH$OONa)
NOTE
- Des préparations contenant exactement 1 000 mg de fer par
dans 500 ml d’eau.
litre peuvent être utilisées à la place de sulfate d’ammonium de fer(H)
haxahydraté. De telles préparations sont disponibles dans le com-
NOTE - Si on ne dispose pas d’acétate de sodium exempt de fer, il
merce.
faut le purifier de la facon suivante.
1) ISO 3696, Eau à usage de laboratoire - Spécifications. (Actuellement au stade de projet. 1
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 67324985 (FI
Fer, solution étalon correspondant à 1 mg de Fe par 7 Échantillonnage
5.14
litre.
NOTE - Éviter toute contamination par le fer.
Préparer cette solution le jour de l’emploi. Verser à l’aide d’une
pipette 1 ml de la solution étalon de fer (5.13) dans 250 ml
7.1 Voir ISO 707.
d’eau. Ajouter 1 ml d’acide sulfurique (5.5) et diluer avec de
l’eau jusqu’à 1 000 ml.
Conserver les récipients en verre pour l’échantillonnage dans la
solution d’acide nitrique à 10 % (mlm). Les rincer soigneuse-
1 ml de cette solution étalon contient 1 pg de Fe. .
ment et les sécher avant l’emploi.
7.2 Conserver l’échantillon de facon à éviter toute détériora-
tion et modification de sa composition.
6 Appareillage
Conserver la verrerie propre, y compris les billes en verre (6.8),
8 Mode opératoire
dans la solution d’acide nitrique à 10 % (mlm). Avant emploi,
rincer trois fois avec de l’eau distillée et trois fois avec de l’eau
NOTE - Éviter toute contamination par le fer.
bidistillée. Sécher, si nécessaire, en rincant successivement
avec de I’éthanol et de l’oxyde diéthylique.
8.1 Préparation de l’échantillon pour essai
Matériel courant de laboratoire, et notamment
8.1.1 Lait, lait écrémé et lactosérum
6.1 Balance analytique.
Porter l’échantillon à 20 + 2 OC et mélanger avec soin. Si dans
le cas du lait, la matière grasse n’est pas dispersée de facon
6.2 Centrifugeuse, capable de produire une accélération
homogène, chauffer lentement l’échantillon à 40 OC, mélanger
radiale de 2 5OOg, avec des tubes d’au moins 150 ml de capa-
doucement uniquement par retournements et refroidir rapide-
cité.
ment à 20 $I 2 OC.
6.3 Appareil de broyage, approprié à la nature de I’échantil-
8.1.2 Babeurre
Ion.
Si nécessaire, éliminer les grains de beurre. Porter l’échantillon
à 20 + 2 OC et mélanger avec soin juste avant de peser (8.2.1).
ouverture de maille de 0,5 en matériau
6.4 Tamis, à
mm,
exempt de fer.
8.1.3 Yogourt nature et yogourt écrémé
6.5 Bains d’eau.
Porter l’échantillon à 20 + 2 OC et mélanger avec soin. Si le
sérum est séparé, agiter vigoureusement juste avant de peser
6.6 Microbrûleurs à gaz, qui ne dégagent pas de particules (8.2.1).
contenant du fer.
8.1.4 Crème
NOTE - L’utilisation d’appareils à chauffage électrique est également
permise.
Si la crème est trés épaisse, ou si la matiére grasse n’est pas dis-
persée uniformément, chauffer lentement à 40 OC pour faciliter
le mélange.
68 Billes en verre, de préférence en qua rtz, ne nt pas
de fer processus de minéral isation (8.3.1)
durant le
6.9 Éprouvettes graduées, de 5, 10 et 25 ml de capacité.
NOTE - On ne peut pas espérer obtenir des résultats corrects si l’on
6.10 Pipettes graduées, de 1, 2 et 5 ml de capacité, gra-
ne réalise pas un mélange convenable de l’échantillon ou si I’échantil-
duées en 0,l ml, conformes aux spécifications de I’ISO 835.
Ion présente des signes manifestes de barattage ou d’autres anomalies.
8.1.5 Lait concentré non sucré
6.11 Pipettes à un trait, de 1,2,3,4,5, 10 et 25 ml de capa-
cité, conformes aux spécifications de I’ISO 648, classe A.
Bien agiter le récipient en le retournant fréquemment. Ouvrir le
récipient. Verser le lait lentement dans un autre récipient en
6.12 Spectromètre, permettant de faire des lectures à verre, pourvu d’un couvercle étanche, en prenant soin d’incor-
porer à l’échantillon la matiére grasse ou les autres constituants
533 n m, équipé de cuves de 10 mm de parcours optique.
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ISO 67324985 (F)
pouvant adhérer à la paroi du premier récipient . Agiter vigou-
8.1 .lO Crème glacée
le récipient.
reusement et fermer
Pour des échantillons en petits emballages, enlever l’emballage
Chauffer le récipient clos dans un bain d’eau entre 40 et 60 OC.
et mettre l’échantillon dans un récipient pourvu d’un couvercle
Toutes les 15 min, sortir le récipient du bain et l’agiter forte-
étanche.
ment. Au bout de 2 h, retirer le récipient et le refroidir à
20 - + 2 OC. Enlever le couvercle et bien mélanger en remuant
Pour des échantillons prélevés dans de grands emballages ou
l’échantillon avec une cuillère ou une spatule.
dans de la marchandise en vrac, les conserver dans leurs réci-
pients pour échantillonnage. Dans les deux cas, faire fondre
NOTE - Si la matière grasse se sépare, on ne peut pas espérer obtenir
l’échantillon en placant le récipient pour échantillon fermé dans
des résultats corrects.
un bain d’eau à 45 + 1 OC durant le temps juste nécessaire
pour le fluidifier. Mélanger l’échantillon par agitation. Refroidir
8.1.6 Lait concentré sucré
à 20 + 2 OC en continuant de mélanger jusqu’à refroidisse-
ment complet.
Ouvrir le récipient et bien mélanger le lait avec une cuillère ou
. une spatule, en appliquant un mouvement de rotation verticale
de telle sorte que les couches supérieure et inférieure soient
8.1.11 Fromage ou fromage fondu
agitées et mélangées. Prendre soin d’incorporer à l’échantillon
le lait adhérant aux parois et au fond du récipient.
Enlever la croûte ou la couche superficielle de moisissures du
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Questions, Comments and Discussion
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