ISO 23293:2020

Milk-based infant formula powders — Quantification of whey protein content by sodium dodecyl sulfate-capillary gel electrophoresis (SDS-CGE)

This document specifies a method for the determination of the whey to casein protein ratio, ranging from 20:80 to 80:20 in cow milk-based infant formula powders. This method does not apply to the analysis of infant formulas containing hydrolysed protein or proteins from other sources (e.g. plants or milk from other mammals).

Formules infantiles en poudre à base de lait — Quantification de la teneur en protéine de lactosérum par électrophorèse capillaire sur gel contenant du dodécylsulfate de sodium (SDS-CGE)

Le présent document spécifie une méthode de détermination du rapport protéine de lactosérum/caséine allant de 20:80 à 80:20 dans les formules infantiles en poudre à base de lait de vache. Cette méthode ne s'applique pas à l'analyse des formules infantiles contenant une protéine hydrolysée ou des protéines provenant d'autres sources (par exemple plantes ou lait d'autres mammifères).

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 11-Feb-2020
• ICS: 67.100.01 - Milk and milk products in general
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 12-Feb-2020
• Due Date: 08-Sep-2019
• Completion Date: 12-Feb-2020

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 23293
IDF 247
First edition
2020-02
Milk-based infant formula powders —
Quantification of whey protein content
by sodium dodecyl sulfate-capillary
gel electrophoresis (SDS-CGE)
Formules infantiles en poudre à base de lait — Quantification de la
teneur en protéine de lactosérum par électrophorèse capillaire sur gel
contenant du dodécylsulfate de sodium (SDS-CGE)
Reference numbers
ISO 23293:2020(E)
IDF 247:2020(E)
©
ISO and IDF 2020

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IDF 247:2020(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO and IDF 2020
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
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IDF 247:2020(E)
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents and materials . 1
6 Apparatus . 2
7 Procedure. 3
7.1 Sample preparation . 3
7.2 CGE analysis . 3
7.3 Electropherogram processing . 4
7.3.1 Electropherogram integration . 4
7.3.2 Identification of the casein region . 4
8 System suitability. 4
9 Calculations and expression of results . 5
9.1 Calculation of whey protein content . 5
9.2 Expression of results . 5
10 Precision . 5
10.1 Interlaboratory tests . 5
10.2 Infant formulas with a whey protein content of 40 % or more . 6
10.2.1 Repeatability . 6
10.2.2 Reproducibility . 6
10.3 Infant formulas with a whey protein content below 40 % . 6
10.3.1 Repeatability . 6
10.3.2 Reproducibility . 6
11 Test report . 6
Annex A (informative) Example of a CGE analysis . 7
Annex B (informative) Precision data .10
Bibliography .11
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IDF 247:2020(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national
standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally
carried out through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented on that committee.
International organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part
in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all
matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC
INTERNATIONAL. It is being published jointly by ISO and IDF, and separately by AOAC INTERNATIONAL.
The method described in this document is equivalent to the AOAC Official Method AOAC 2016.15:
Quantification of Whey Protein Content in Milk-Based Infant Formula Powders by Sodium Dodecyl Sulfate-
Capillary Gel Electrophoresis (SDS-CGE), First Action 2016, Final Action 2018.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
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IDF 247:2020(E)
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit private sector organization representing the
interests of various stakeholders in dairying at the global level. IDF members are organized in National
Committees, which are national associations composed of representatives of dairy-related national
interest groups including dairy farmers, dairy processing industry, dairy suppliers, academics and
governments/food control authorities.
ISO and IDF collaborate closely on all matters of standardization relating to methods of analysis
and sampling for milk and milk products. Since 2001, ISO and IDF jointly publish their International
Standards using the logos and reference numbers of both organizations.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
This document was prepared by the IDF Standing Committee on Analytical Methods for Composition
and ISO Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products, in
collaboration with AOAC INTERNATIONAL. It is being published jointly by ISO and IDF, and separately
by AOAC INTERNATIONAL. The method described in this document is equivalent to the AOAC Official
Method AOAC 2016.15: Quantification of Whey Protein Content in Milk-Based Infant Formula Powders by
Sodium Dodecyl Sulfate-Capillary Gel Electrophoresis (SDS-CGE), First Action 2016, Final Action 2018.
The work was carried out by the IDF/ISO Action Team (C31) of the Standing Committee on Analytical
Methods for Composition under the aegis of its project leader Mr E. Konings (CH).
© ISO and IDF 2020 – All rights reserved v

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ISO 23293:2020(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 247:2020(E)
Milk-based infant formula powders — Quantification of
whey protein content by sodium dodecyl sulfate-capillary
gel electrophoresis (SDS-CGE)
1 Scope
This document specifies a method for the determination of the whey to casein protein ratio, ranging
from 20:80 to 80:20 in cow milk-based infant formula powders.
This method does not apply to the analysis of infant formulas containing hydrolysed protein or proteins
from other sources (e.g. plants or milk from other mammals).
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
3.1
infant formula
breast-milk substitute specially manufactured to satisfy, by itself, the nutritional requirements of
infants during the first months of life up to the introduction of appropriate complementary feeding
[SOURCE: Codex Standard 72-1981]
4 Principle
In sodium dodecyl sulfate-capillary gel electrophoresis (SDS-CGE), proteins in infant formula samples
are denatured by the anionic surfactant SDS and reduced by β-mercaptoethanol. The SDS-bonded,
electrically charged proteins migrate in an electrical field filled with a separation gel and are detected
by UV at 220 nm. Caseins and whey proteins are separated as two distinct, non-overlapping groups of
peaks where the ratio can be established based on integrated areas without the need for a calibration
curve. In the calculation of whey protein content, 1,4 was used as the mass-to-area correction factor for
whey proteins versus caseins.
5 Reagents and materials
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
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Data from the multi-laboratory study was obtained with chemicals from the SDS-MW kit 390953 from
1)
Beckman Coulter/Sciex . The SDS-MW gel separation buffer recipe described below (5.1) was tested in
a separate study and found to be equivalent to the commercial SDS-MW gel separation buffer included in
the kit. One laboratory used home-made reagents (5.2 to 5.5). All laboratories used the 10 kDa internal
protein standard (5.6) and the SDS-MW size standard (5.7) from the kit. Use of equivalent standards
requires prior verification.
5.1 SDS-MW gel separation buffer, tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris), boric acid, SDS, EDTA,
1)
glycerol and dextran 2000 .
Dissolve 0,726 6 g Tris base and 0,371 0 g boric acid in 9 ml water. Add 20 mg SDS, 1 g dextran
2000, 14,6 mg EDTA, and 1 ml glycerol. Mix thoroughly. Leave overnight to allow complete dextran
solubilization.
NOTE Dextran 2000 has an average molecular weight of 2 000 000 Da.
5.2 SDS-MW sample buffer, 100 mmol/l Tris, pH 9,0, 1 % SDS.
Dissolve 109,4 mg of Tris base, 15,2 mg of Tris hydrocholoride and 0,1 g of SDS in 10 ml water.
5.3 Acidic wash solution, hydrochloric acid, substance concentration c = 0,1 mol/l.
5.4 Basic wash solution, sodium hydroxide, c = 0,1 mol/l.
5.5 β-mercaptoethanol.
5.6 10 kDa internal protein standard, mass concentration ρ = 5 mg/ml.
5.7 SDS-MW size standard, 10 to 225 kDa, ρ = 16 mg/ml.
5.8 Sample running pre-solution.
Mix the SDS-MW sample buffer (5.2) with the 10 kDa internal protein standard (5.6) using an 84:1
ratio. Prepare a sufficient volume based on the total number of samples to be analysed in the sample set
(90 μl of sample running pre-solution is needed per sample).
6 Apparatus
Usual laboratory glassware and equipment and, in particular, the following.
6.1 Capillary electrophoresis instrument, equipped with UV detector set at 220 nm and capable of
maintaining the capillary and sample tray at 25 °C ± 2 °C.
Suitable software should be available for peak integration.
6.2 Bare, fused-silica capillaries, of 50 μm internal diameter × 30 cm, with effective length of 20 cm.
6.3 Temperature controlled water bath or heating block, capable of maintaining a temperature of
95 °C ± 5 °C.
6.4 Micro centrifuge, with adaptors for 1,5 ml centrifuge vials.
1) This is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience
of users of this document and does not constitute an endorsement by either ISO or IDF of the product named.
Equivalent products may be used if they can be shown to lead to the same results.
2 © ISO and IDF 2020 – All rights reserved

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ISO 23293:2020(E)
IDF 247:2020(E)
6.5 Vortex.
6.6 Adjustable pipettes and tips, volume of 20 μl, 100 μl and 1 000 μl.
6.7 Safe-lock micro-centrifuge vials, volu
...

ISO/TC 34/SC 5
Deleted: 12
Date: 2020-01
ISO 23293 | FIL 247:2020(F) Deleted: /PRF
ISO/TC 34/SC 5
Secrétariat: NEN
Formules infantiles en poudre à base de lait — Quantification de la teneur en
protéine de lactosérum par électrophorèse capillaire sur gel contenant du
dodécylsulfate de sodium (SDS-CGE)
Milk-based infant formula powders — Quantification of whey protein content by
sodium dodecyl sulfate-capillary gel electrophoresis (SDS-CGE)
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FIL 247:2020(F)
© ISO et FIL 2020
Deleted: 2019
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre,
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reproduction
aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit
et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, ou la diffusion sur
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l’internet ou un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut être demandée à
Deleted: exigence
l’ISO à l’adresse ci‐après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
Deleted: l’affichage
ISO copyright office International Dairy Federation
Deleted: sur
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Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8 Silver Building • Bd Auguste Reyers 70/B
d’autorisation peuvent
CH‐1214 Vernier, Genève B‐1030 Brussels Deleted: adressées
Deleted: ISO Copyright Office¶
Tél.: [phone] Tél.: + 32 2 325 67 40
CP
Deleted: Geneva
Fax: [phone] Fax: + 32 2 325 67 41
E‐mail: [e-mail] E‐mail: info@fil‐idf.org
Deleted: Email: ¶
Site web:
Web: www.iso.org Web: www.fil‐idf.org
Publié en Suisse
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ISO 23293:2020(F)
FIL 247:2020(F)
Sommaire Page
Avant-propos . iv
1  Domaine d’application . 1
2  Références normatives . 1
3  Termes et définitions . 1
4  Principe. 1
5  Réactifs et matériaux . 2
6  Appareillage . 3
7  Mode opératoire . 3
7.1  Préparation des échantillons . 3
7.2  Analyse par CGE . 4
7.3  Traitement de l’électrophérogramme . 4
7.3.1  Intégration de l’électrophérogramme . 4
7.3.2  Identification du domaine de la caséine . 5
8  Aptitude du système . 5
9  Calcul et expression des résultats . 5
9.1  Calcul de la teneur en protéine de lactosérum . 5
9.2  Expression des résultats . 6
10  Fidélité . 6
10.1  Essais interlaboratoires . 6
10.2  Formules infantiles avec une teneur en protéine de lactosérum de 40 % ou plus . 6
10.2.1  Répétabilité. 6
10.2.2  Reproductibilité . 7
10.3  Formules infantiles avec une teneur en protéine de lactosérum inférieure à 40 % . 7
10.3.1  Répétabilité. 7
10.3.2  Reproductibilité . 7
11  Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Exemple d’analyse CGE . 8
Annexe B (informative) Données de fidélité . 12
Bibliographie . 14
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ISO 23293:2020(F)
FIL 247:2020(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en
général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit
de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et
non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation
électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de
l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant‐propos.
Deleted: le lien suivant:
Deleted: iso/fr/
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous‐comité
Deleted: .html
SC 5, Lait et produits laitiers et la Fédération internationale du lait (FIL) en collaboration avec l’AOAC
INTERNATIONAL. Il est publié conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par l’AOAC
INTERNATIONAL. La méthode décrite dans le présent document est équivalente à la méthode officielle de
l’AOAC 2016.15: Quantification de la teneur en protéine de lactosérum dans les formules infantiles en poudre
à base de lait par électrophorèse capillaire sur gel contenant du dodécylsulfate de sodium (SDS-CGE),
Première action 2016, Action finale 2018.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
© ISO et FIL 2020 – Tous droits réservés iv

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ISO 23293:2020(F)
FIL 247:2020(F)
La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation privée à but non lucratif qui représente
les intérêts des divers acteurs de la filière laitière au niveau international. Les membres de la FIL sont
organisés en comités nationaux, qui sont des associations nationales composées de représentants de
groupes d’intérêt nationaux dans le secteur des produits laitiers, incluant des producteurs laitiers, des
acteurs de l’industrie de transformation des produits laitiers, des fournisseurs de produits laitiers, des
universitaires et des représentants des gouvernements/autorités chargées du contrôle des aliments.
L’ISO et la FIL collaborent étroitement sur toutes les activités de normalisation concernant les méthodes
Deleted: à
d’analyse et d’échantillonnage du lait et des produits laitiers. Depuis 2001, l’ISO et la FIL publient
conjointement leurs Normes internationales en utilisant les logos et les numéros de référence des deux
organisations.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
Deleted: attirée
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Deleted: ).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
Deleted: ,
engagement.
Le présent document a été élaboré par le Comité permanent chargé des Méthodes d’analyse pour la
composition (SCAMC) de la Fédération internationale du lait (FIL) et le comité technique ISO/TC 34,
Produits alimentaires, sous‐comité SC 5, Lait et produits laitiers, en collaboration avec l’AOAC
INTERNATIONAL. Il est publié conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par l’AOAC
INTERNATIONAL. La méthode décrite dans le présent document est équivalente à la méthode officielle de
l’AOAC 2016.15: Quantification de la teneur en protéine de lactosérum dans les formules infantiles en poudre
à base de lait par électrophorèse capillaire sur gel contenant du dodécylsulfate de sodium (SDS-CGE),
Première action 2016, Action finale 2018.
L’ensemble des travaux a été confié à l’équipe d’action mixte ISO/FIL (C31) du Comité permanent chargé
des Méthodes d’analyse pour la composition, sous la conduite de son chef de projet, monsieur E. Konings
(CH).
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FIL 247:2020(F)
Formules infantiles en poudre à base de lait — Quantification de la
teneur en protéine de lactosérum par électrophorèse capillaire sur gel
contenant du dodécylsulfate de sodium (SDS-CGE)
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination du rapport protéine de
lactosérum/caséine allant de 20:80 à 80:20 dans les formules infantiles en poudre à base de lait de
vache.
Cette méthode ne s’applique pas à l’analyse des formules infantiles contenant une protéine
hydrolysée ou des protéines provenant d’autres sources (par exemple plantes ou lait d’autres
mammifères).
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https://www.iso.org/obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http://www.electropedia.org/
3.1
formule infantile
substitut du lait maternel spécialement fabriqué pour satisfaire, par lui‐même, les besoins
nutritionnels des nourrissons pendant les premiers mois de la vie jusqu’à l’introduction d’une
alimentation complémentaire appropriée
[SOURCE: Norme Codex 72‐1981]
4 Principe
En électrophorèse capillaire sur gel contenant du dodécylsulfate de sodium (SDS‐CGE), les protéines
dans les échantillons de formule infantile sont dénaturées par le tensioactif anionique SDS et
réduites par le β‐mercaptoéthanol. Les protéines liées au SDS et électriquement chargées migrent
dans un champ électrique rempli d’un gel de séparation et sont détectées par UV à 220 nm. Les
caséines et les protéines de lactosérum sont séparées en deux groupes de pics distincts qui ne se
chevauchent pas, dont le rapport peut être établi par intégration des surfaces sans avoir recours à
une courbe d’étalonnage. Dans le calcul de la teneur en protéine de lactosérum, une valeur de 1,4 a
été utilisée pour le facteur de correction de la masse par rapport à la surface pour les protéines de
lactosérum par rapport aux caséines.
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FIL 247:2020(F)
5 Réactifs et matériaux
Au cours de l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité
analytique reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau de pureté équivalente.
Les données de l’étude interlaboratoires ont été obtenues avec des produits chimiques provenant
1
du kit SDS‐MW 390953 de Beckman Coulter/Sciex. La recette du tampon de séparation SDS‐MW
décrit ci‐dessous (5.1) a été soumise à l’essai lors d’une étude séparée et a été jugée équivalente au
tampon de séparation SDS‐MW du commerce inclus dans le kit. Un laboratoire a utilisé des réactifs
(5.2 à 5.5) «maison». Tous les laboratoires ont utilisé l’étalon interne de protéine 10 kDa (5.6) et
l’étalon de taille SDS‐MW (5.7) provenant du kit. Avant d’utiliser des étalons équivalents, une
vérification est nécessaire.
5.1 Tampon de séparation SDS-MW, tris(hydroxyméthyl)aminométhane (Tris), acide borique,
1)
SDS, EDTA, glycérol et dextran 2000 .
Dissoudre 0,726 6 g de base Tris et 0,371 0 g d’acide borique dans 9 ml d’eau. Ajouter 20 mg de SDS,
1 g de dextran 2000, 14,6 mg d’EDTA et 1 ml de glycérol. Bien mélanger. Laisser reposer une nuit
pour permettre la solubilisation complète du dextran.
NOTE Le dextran 2000 a un poids moléculaire moyen de 2 000 000 Da.
5.2 Tampon d’échantillon SDS-MW, 100 mmol/l de Tris, pH 9,0, 1 % de SDS.
Dissoudre 109,4 mg de base Tris, 15,2 mg de chlorhydrate de Tris et 0,1 g de SDS dans 10 ml d’eau.
5.3 Solution de lavage acide, acide chlorhydrique, concentration en substance c = 0,1 mol/l.
5.4 Solution de lavage basique, hydroxyde de sodium, c = 0,1 mol/l.
5.5 β-mercaptoéthanol.
5.6 Étalon interne de protéine 10 kDa, concentration massique ρ = 5 mg/ml.
5.7 Étalon de taille SDS-MW, 10 à 225 kDa, ρ = 16 mg/ml.
5.8 Pré-solution avant passage de l’échantillon.
Mélanger le tampon d’échantillon SDS‐MW (5.2) avec l’étalon interne de protéine 10 kDa (5.6) selon
un rapport de 84:1. Préparer un volume suffisant basé sur le nombre total d’échantillons à analyser
dans le lot d’échantillons (90 μl de pré‐solution avant le passage de l’échantillon sont nécessaires
pour chaque échantillon).

1
Ceci est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée pour des
raisons pratiques aux utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l’ISO ou la FIL approuve
ou recommande ce produit. Des produits équivalents peuvent être utilisés s’il est démontré qu’ils conduisent
aux mêmes résultats.
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6 Appareillage
Verrerie et matériel courants de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Instrument d’électrophorèse capillaire, muni d’un détecteur UV réglé à 220 nm et pouvant
maintenir le capillaire et le passeur d’échantillons à 25 °C ± 2 °C.
Il convient qu’un logiciel adapté soit disponible pour l’intégration des pics.
6.2 Capillaires nus en silice fondue, de 50 μm de diamètre intérieur × 30 cm, avec une longueur
utile de 20 cm.
6.3 Bain-marie thermostaté ou bloc chauffant, pouvant maintenir une température de
95 °C ± 5 °C.
6.4 Micro-centrifugeuse, avec des adaptateurs pour flacons de centrifugeuse de 1,5 ml.
6.5 Agitateur vortex.
6.6 Pipettes et embouts ajustables, d’un volume de 20 μl, 100 μl et 1 000 μl.
6.7 Flacons de micro-centrifugeuse à verrou de sureté, d’un volume de 1,5 ml ou de 2,0 ml.
6.8 Tubes à centrifuger à fond rond, d’un volume de 10 ml.
6.9 Balance analytique, réalisant des pesées à quatre décimales près.
7 Mode opératoire
7.1 Préparation des échantillons
7.1.1 Peser 500 mg ± 20 mg de formule infantile en poudre dans un tube à centrifuger de 10 ml.
Un échantillon de poudre de lait écrémé (SMP) est utilisé comme référence pour aligner les
domaines des protéines de lactosérum et des caséines dans les échantillons de formules infantiles.
Préparer la SMP en utilisant une masse d’échantillon de 135 mg ± 5 mg.
7.1.2 Disperser l’échantil
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 23293
FIL 247
Première édition
2020-02
Formules infantiles en poudre à
base de lait — Quantification de la
teneur en protéine de lactosérum
par électrophorèse capillaire sur
gel contenant du dodécylsulfate de
sodium (SDS-CGE)
Milk-based infant formula powders — Quantification of
whey protein content by sodium dodecyl sulfate-capillary gel
electrophoresis (SDS-CGE)
Numéros de référence
ISO 23293:2020(F)
FIL 247:2020(F)
©
ISO et FIL 2020

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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs et matériaux . 2
6 Appareillage . 2
7 Mode opératoire. 3
7.1 Préparation des échantillons . 3
7.2 Analyse par CGE . 3
7.3 Traitement de l’électrophérogramme . 4
7.3.1 Intégration de l’électrophérogramme . 4
7.3.2 Identification du domaine de la caséine . 4
8 Aptitude du système . 4
9 Calcul et expression des résultats . 5
9.1 Calcul de la teneur en protéine de lactosérum . 5
9.2 Expression des résultats . 6
10 Fidélité . 6
10.1 Essais interlaboratoires . . 6
10.2 Formules infantiles avec une teneur en protéine de lactosérum de 40 % ou plus. 6
10.2.1 Répétabilité . 6
10.2.2 Reproductibilité . 6
10.3 Formules infantiles avec une teneur en protéine de lactosérum inférieure à 40 % . 6
10.3.1 Répétabilité . 6
10.3.2 Reproductibilité . 6
11 Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Exemple d’analyse CGE . 8
Annexe B (informative) Données de fidélité .11
Bibliographie .12
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Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 5, Lait et produits laitiers et la Fédération internationale du lait (FIL) en collaboration avec
l’AOAC INTERNATIONAL. Il est publié conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par l’AOAC
INTERNATIONAL. La méthode décrite dans le présent document est équivalente à la méthode officielle
de l’AOAC 2016.15: Quantification de la teneur en protéine de lactosérum dans les formules infantiles en
poudre à base de lait par électrophorèse capillaire sur gel contenant du dodécylsulfate de sodium (SDS-
CGE), Première action 2016, Action finale 2018.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
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La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation privée à but non lucratif qui représente
les intérêts des divers acteurs de la filière laitière au niveau international. Les membres de la FIL sont
organisés en comités nationaux, qui sont des associations nationales composées de représentants de
groupes d’intérêt nationaux dans le secteur des produits laitiers, incluant des producteurs laitiers, des
acteurs de l’industrie de transformation des produits laitiers, des fournisseurs de produits laitiers, des
universitaires et des représentants des gouvernements/autorités chargées du contrôle des aliments.
L’ISO et la FIL collaborent étroitement sur toutes les activités de normalisation concernant les méthodes
d’analyse et d’échantillonnage du lait et des produits laitiers. Depuis 2001, l’ISO et la FIL publient
conjointement leurs Normes internationales en utilisant les logos et les numéros de référence des deux
organisations.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Le présent document a été élaboré par le Comité permanent chargé des Méthodes d’analyse pour
la composition (SCAMC) de la Fédération internationale du lait (FIL) et le comité technique
ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, en collaboration avec
l’AOAC INTERNATIONAL. Il est publié conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par l’AOAC
INTERNATIONAL. La méthode décrite dans le présent document est équivalente à la méthode officielle
de l’AOAC 2016.15: Quantification de la teneur en protéine de lactosérum dans les formules infantiles en
poudre à base de lait par électrophorèse capillaire sur gel contenant du dodécylsulfate de sodium (SDS-
CGE), Première action 2016, Action finale 2018.
L’ensemble des travaux a été confié à l’équipe d’action mixte ISO/FIL (C31) du Comité permanent chargé des
Méthodes d’analyse pour la composition, sous la conduite de son chef de projet, monsieur E. Konings (CH).
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NORME INTERNATIONALE
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Formules infantiles en poudre à base de lait —
Quantification de la teneur en protéine de lactosérum
par électrophorèse capillaire sur gel contenant du
dodécylsulfate de sodium (SDS-CGE)
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination du rapport protéine de lactosérum/
caséine allant de 20:80 à 80:20 dans les formules infantiles en poudre à base de lait de vache.
Cette méthode ne s’applique pas à l’analyse des formules infantiles contenant une protéine hydrolysée
ou des protéines provenant d’autres sources (par exemple plantes ou lait d’autres mammifères).
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
3.1
formule infantile
substitut du lait maternel spécialement fabriqué pour satisfaire, par lui-même, les besoins nutritionnels
des nourrissons pendant les premiers mois de la vie jusqu’à l’introduction d’une alimentation
complémentaire appropriée
[SOURCE: Norme Codex 72-1981]
4 Principe
En électrophorèse capillaire sur gel contenant du dodécylsulfate de sodium (SDS-CGE), les protéines
dans les échantillons de formule infantile sont dénaturées par le tensioactif anionique SDS et réduites
par le β-mercaptoéthanol. Les protéines liées au SDS et électriquement chargées migrent dans un
champ électrique rempli d’un gel de séparation et sont détectées par UV à 220 nm. Les caséines et les
protéines de lactosérum sont séparées en deux groupes de pics distincts qui ne se chevauchent pas, dont
le rapport peut être établi par intégration des surfaces sans avoir recours à une courbe d’étalonnage.
Dans le calcul de la teneur en protéine de lactosérum, une valeur de 1,4 a été utilisée pour le facteur
de correction de la masse par rapport à la surface pour les protéines de lactosérum par rapport aux
caséines.
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5 Réactifs et matériaux
Au cours de l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau de pureté équivalente.
Les données de l’étude interlaboratoires ont été obtenues avec des produits chimiques provenant du
1)
kit SDS-MW 390953 de Beckman Coulter/Sciex . La recette du tampon de séparation SDS-MW décrit
ci-dessous (5.1) a été soumise à l’essai lors d’une étude séparée et a été jugée équivalente au tampon
de séparation SDS-MW du commerce inclus dans le kit. Un laboratoire a utilisé des réactifs (5.2 à 5.5)
«maison». Tous les laboratoires ont utilisé l’étalon interne de protéine 10 kDa (5.6) et l’étalon de taille
SDS-MW (5.7) provenant du kit. Avant d’utiliser des étalons équivalents, une vérification est nécessaire.
5.1 Tampon de séparation SDS-MW, tris(hydroxyméthyl)aminométhane (Tris), acide borique, SDS,
1)
EDTA, glycérol et dextran 2000 .
Dissoudre 0,726 6 g de base Tris et 0,371 0 g d’acide borique dans 9 ml d’eau. Ajouter 20 mg de SDS,
1 g de dextran 2000, 14,6 mg d’EDTA et 1 ml de glycérol. Bien mélanger. Laisser reposer une nuit pour
permettre la solubilisation complète du dextran.
NOTE Le dextran 2000 a un poids moléculaire moyen de 2 000 000 Da.
5.2 Tampon d’échantillon SDS-MW, 100 mmol/l de Tris, pH 9,0, 1 % de SDS.
Dissoudre 109,4 mg de base Tris, 15,2 mg de chlorhydrate de Tris et 0,1 g de SDS dans 10 ml d’eau.
5.3 Solution de lavage acide, acide chlorhydrique, concentration en substance c = 0,1 mol/l.
5.4 Solution de lavage basique, hydroxyde de sodium, c = 0,1 mol/l.
5.5 β-mercaptoéthanol.
5.6 Étalon interne de protéine 10 kDa, concentration massique ρ = 5 mg/ml.
5.7 Étalon de taille SDS-MW, 10 à 225 kDa, ρ = 16 mg/ml.
5.8 Pré-solution avant passage de l’échantillon.
Mélanger le tampon d’échantillon SDS-MW (5.2) avec l’étalon interne de protéine 10 kDa (5.6) selon un
rapport de 84:1. Préparer un volume suffisant basé sur le nombre total d’échantillons à analyser dans le
lot d’échantillons (90 μl de pré-solution avant le passage de l’échantillon sont nécessaires pour chaque
échantillon).
6 Appareillage
Verrerie et matériel courants de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Instrument d’électrophorèse capillaire, muni d’un détecteur UV réglé à 220 nm et pouvant
maintenir le capillaire et le passeur d’échantillons à 25 °C ± 2 °C.
Il convient qu’un logiciel adapté soit disponible pour l’intégration des pics.
1) Ceci est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée pour des
raisons pratiques aux utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l’ISO ou la FIL approuve ou
recommande ce produit. Des produits équivalents peuvent être utilisés s’il est démontré qu’ils conduisent aux
mêmes résultats.
2 © ISO et FIL 2020 – Tous droits réservés

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ISO 23293:2020(F)
FIL 247:2020(F)
6.2 Capillaires nus en silice fondue, de 50 μm de diamètre intérieur × 30 cm, avec une longueur utile
de 20 cm.
6.3 Bain-marie thermostaté ou bloc chauffant, pouvant maintenir une température de 95 °C ± 5 °C.
6.4 Micro-centrifugeuse, avec des adaptateurs pour flacons de centrifugeuse de 1,5 ml.
6.5 Agitateur vortex.
6.6 Pipettes et embouts ajustables, d’un volume de 20 μl, 100 μl et 1 000 μl.
6.7 Flacons de micro-centrifugeuse à verrou de sureté, d’un volume de 1,5 ml ou de 2,0 ml.
6.8 Tubes à centrifuger à fond rond, d’un volume de 10 ml.
6.9 Balance analytique, réalisant des pesées à quatre décimales près.
7 Mode opératoire
7.1 Préparation des échantillons
7.1.1 Peser 500 mg ± 20 mg de formule infantile en poudre dans un tube à centrifuger de 10 ml. Un
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