ISO 6730:1992
(Main)Milk — Enumeration of colony-forming units of psychrotrophic micro-organisms — Colony-count technique at 6,5 degrees C
Milk — Enumeration of colony-forming units of psychrotrophic micro-organisms — Colony-count technique at 6,5 degrees C
Specifies the principle, the diluents and culture medium, the apparatus and glassware, the sampling and procedure, the expression of results, the repeatability and the test report.
Lait — Dénombrement des unités formant colonie de micro-organismes psychrotrophes — Technique par comptage des colonies à 6,5 degrés C
General Information
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IS0
INTERNATIONAL
STANDARD - 6730
First edition
1992-02-o 1
Milk - Enumeration of colony-forming units of
psychrotrophic micro-organisms - Colony-count
technique at 63 OC
Lait - Dknombrement des unit& formant colonie de micro-organismes
psychrotrophes - Technique par comptage des colonies 2 6,5 “C
Reference number
IS0 6730: 1992(E)
---------------------- Page: 1 ----------------------
IS0 6730:1992(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the
work. IS0 collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an Inter-
national Standard requires approval by at least 75 % of the member
bodies casting a vote.
International Standard IS0 6730 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Sub-Committee SC 5, Milk and
milk products, in collaboration with the International Dairy Federation
(IDF) and the Association of Official Analytical Chemists (AOAC), and
will also be published by these organizations.
Annex A of this International Standard is for information only.
6 IS0 1992
All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without
permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-121 1 Geneve 20 l Switzerl and
Printed in Switzerland
ii
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INTERNATIONAL STANDARD IS0 6730:1992(E)
Milk - Enumeration of colony-forming units of psychrotrophic
micro-organisms - Colony-count technique at 6,5 “C
der the conditions specified in this International
1 Scope
Standard.
This International Standard specifies a method for
the enumeration of colony-forming units (CFU) of
psychrotrophic micro-organisms in raw and heat- 4 Principle
treated milk by means of the colony-count technique
at 6,5OC.
4.1 Preparation of poured plates using a specified
culture medium and a specified quantity of the test
sample; Preparation of other plates, under the same
conditions, using decimal dilutions of the test sam-
ple.
2 Normative references
4.2 Aerobic incubation of the plates at 65 ‘C for
The following standards contain provisions which, 10 days.
through reference in this text, constitute provisions
of this International Standard. At the time of publi-
4.3 Calculation of the number of colony-forming
cation, the editions indicated were valid. All stan-
units (CFU) of micro-organisms per millilitre of
dards are subject to revision, and parties to
sample from the number of colonies obtained on
agreements based on this International Standard
plates chosen at dilution levels so as to give a sig-
are encouraged to investigate the possibility of ap-
nificant result.
plying the most recent editions of the standards in-
dicated below. Members of IEC and IS0 maintain
registers of currently valid International Standards.
5 Diluent and culture medium
IS0 7218:1985, ANcrobiology - General guidance for
microbiological examinations.
5.1 General
IS0 8261:1989, Milk and milk products - Preparation
of test samples and dilutions for microbiological ex- IS0 7218.
For general guidance, see
amination.
5.2 Basic materials
See IS0 8261.
3 Definition
5.3 Diluents for general use
See IS0 8261.
For the purposes of this International Standard, the
following definition applies.
5.4 Distribution, sterilization and storage
3.1 psychrotrophic micro-organisms:
Bacteria,
yeasts and moulds forming countable colonies un- See IS0 8261.
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IS0 6730:1992(E)
cool it to 45 “C in the water-bath (6.5). If not, before
5.5 Culture medium
beginning the microbiological examination, in order
to avoid any delay when pouring the medium, com-
55.1 Components
pletely melt the medium in a hot water-bath (6.6)
then cool it to 45 “C in the water-bath (6.5). (See
also 8.4.4.)
lryptone
590 g
Store the medium in the dark at a temperature be-
Yeast extract
295 g
tween 0 “C and + 5 “C for no longer than 3 months
Glucose monohydrate
after preparation.
to g
wYW&i-H,O)
Skimmed milk powder-l)
190 g NOTE 3 It is recommended, in order to check the tem-
perature of the agar, to place a thermometer into a por-
Agar IO g to 15 g 2)
tion of 15 g/l agar solution in a separate container
1 000 ml
Water identical to that used for the medium. This temperature
control solution should be exposed to the same heating
and cooling operations as the medium itself.
1) The skimmed milk powder shall be free from
inhibitory substances. This should be proved by
6 Apparatus and glassware
comparative tests using skimmed milk powder
known to be free from such substances.
CAUTION - Sterilize ail apparatus that will come
2) According to the gel strength of the agar.
into contact with the test sample, the diluent, the di-
lutions or the culture medium in accordance with
IS0 8261:1989, 6.1.
5.5.2 Preparation
NOTE 4 Disposable apparatus is an acceptable alterna-
5.5.2.1 Preparation from commercial dehydrated
tive to reusable glassware if it has suitable specifications.
complete medium
Usual microbiological laboratory equipment, the ap-
Follow the manufacturer’s instructions but, in all
paratus required for the preparation of test samples
cases, add the skimmed milk powder, even if the
and dilutions as specified in IS0 8261 and, in partic-
manufacturer considers such an addition unneces-
ular, the following.
sary.
6.1 Apparatus for dry sterilization (oven) or wet
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization
sterilization (autoclave).
it is 7,0 at 25 “C.
See IS0 7218.
5.5.2.2 Preparation from dehydrated basic compou
nents
6.2 incubator, capable of operating at
6,5 “C + 0,5 “C.
Dissolve and disperse in the water, in the following -
order, the yeast extract, the tryptone, the glucose
and, finally, the skimmed milk powder.
6.3 Petri dishes, made of glass or plastic, of
90 mm to 100 mm diameter.
Heating the water will assist in this procedure.
NOTE I
6.4 Graduated pipettes, plugged with cotton wool,
Add the agar and heat to boiling, stirring frequently
calibrated to deliver 1 ml + 0,02 ml or
until the agar is completely dissolved, or steam for
10 ml + 0,2 ml or 11 ml + 0,2 ml.-
-
-
about 30 min.
6.5 Water-bath, capable of operating at
NOTE 2 If the solution is not clear, filter through filter
45 “C + 1 “C.
paper.
-
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization
6.6 Water-bath, capable of operating at more than
it is 7,0 at 25 OC.
100 OC.
5.5.2.3 Distribution, sterilization and storage
6.7 Colony-counting equipment, consisting of an ii-
luminated base with a dark background, fitted with
Dispense the medium into test tubes (6.9), in quan-
a magnifying lens to be used at a magnification of
tities of 12 ml to 15 ml per tube, or into flasks or
x 1,5 and a mechanical or electronic digital counter.
bottles (6.9), in quantities of 100 ml to 150 ml.
Sterilize in an autoclave (6.1) at 121 “C + 1 “C for 6.8 Temperature-compensated pti-meter, accurate
to + 0,l pH units at 25 “C.
15 min. If the medium is to be used immediately,
-
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
IS0 6730:1992(E)
8.4.2 Take two further-sterile Petri dishes. Transfer
6.9 Test tubes, of approximately 20 ml capacity (or
to each dish, by means of another sterile pipette,
flasks or bottles of suitable capacity), and flasks or
1 ml of the IO-’ dilution of the test sample.
bottles of 150 ml
...
NORME
INTERNATIONALE 6730
Première édition
1992-02-01
Lait - Dénombrement des unités formant
colonie de micro-organismes psychrotrophes -
Technique par comptage des colonies à 63 “C
Milk - Enumeration of colony-forming units of psychrotrophic
micro-organisms - Colony-Count technique at 6,5 “C
-- --=
Numéro de référence
ISO 6730: 1992(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 6730:1992(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comites techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 6730 a été élaborée par le comité techni-
que ISCYTC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 5, Lait
et produits laitiers, en collaboration avec la Fédération internationale
de laiterie (FIL) et l’Association des chimistes analytiques (AOAC) et
sera également publiée par ces organisations.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’information.
0 ISO 1992
Droits de reproduction riservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous que que forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internaticnale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 6730:1992(F)
- Dénombrement des unités formant colonie de
Lait
micro-organismes psychrotrophes - Technique par comptage
des colonies à 63 OC
3 Domaine d’application 4 Principe
La présente Norme internationale prescrit une mé-
4.1 Ensemencement en profondeur d’un milieu de
thode de dénombrement des unités formant colonie
culture défini, coulé dans des boîtes de Petri avec
de micro-organismes psychrotrophes dans le lait
une quantité spécifiée d’échantillon pour essai. En-
cru et le lait traité thermiquement par la technique
semencement d’autres boîtes, dans les mêmes
de comptage de colonies à 6,s OC.
conditions, en utilisant des dilutions décimales de
l’échantillon pour essai.
2 Références normatives
4.2 Incubation des boîtes en aérobiose à 6,5 OC
pendant 10 jours.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite,
constituent des dispositions valables pour la pré-
4.3 Calcul du nombre d’unités formant colonie
sente Norme internationale. Au moment de la pu-
(UFC) de micro-organismes par millilitre d’échan-
blication, les éditions indiquées étaient en vigueur.
tillon à partir du nombre de colonies obtenues sur
Toute norme est sujette à révision et les parties
des boîtes choisies à des niveaux de dilution per-
prenantes des accords fondés sur la présente
mettant d’obtenir un résultat significatif.
Norme internationale sont invitées à rechercher la
possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes
des normes indiquées ci-après. Les membres de la
CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes 5 Diluant et milieu de culture
internationales en vigueur à un moment donné.
ISO 7218: 1985, Microbiologie - Directives générales 5.1 Généralités
pour /es examens microbiologiques.
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir
ISO 7218.
ISO 8261:1989, Lait et produits laitiers - Préparation
des échantillons pour essai et des dilutions en vue
de l’examen microbiologique.
5.2 Composant de base
Voir ISO 8261.
3 Définition
5.3 Diluants d’emploi général
Pour les besoins de la présente Norme internatio-
nale, la définition suivante s’applique.
Voir ISO 8261.
3.1 micro-organismes psychrotrophes: Bactéries,
levures et moisissures formant des colonies dé-
5.4 Répartition, stérilisation et conservation
nombrables dans tes conditions spécifiees dans la
Voir ISO 8261.
présente Norme internationale.
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 6730:1992(F)
Stériliser à l’autoclave (6.1) à 121 “C + 1 “C pen-
5.5 Milieu de culture
dant 15 min. Si le milieu doit être utilisé immédia-
tement, le refroidir à 45 OC au bain d’eau (6.5). Dans
5.51 Composants
le cas contraire, avant de commencer l’examen mi-
crobiologique, et afin d’éviter toute attente au mo-
ment de couler la gélose, faire fondre complètement
Tryptone
590 g
le milieu au bain d’eau bouillante (6.6), puis le re-
froidir à 45 OC au bain d’eau (6.5). (Voir également
Extrait de levure
2s g
8.4.4.)
Monohydrate de glucose
1,o g
G3H,,06*~*0)
Conserver le milieu à l’obscurité à une température
Poudre de lait écrémé’) située entre 0 “C et + 5 “C pendant une durée
190 g
maximale de 3 mois après la préparation.
10 g to 15 g 2)
Agar-agar
Eau 1 000 ml
NOTE 3 Afin de contrôler la température de I’agar-agar,
il est recommandé de placer un thermomètre dans un
volume de solution d’agar-agar à 15 g/l contenu dans un
1) La poudre de lait écrémé doit être exempte
autre récipient identique à celui utilisé pour le milieu.
de substances inhibitrices. Ceci devrait être vé-
Cette solution de contr6le de la température devra subir
rifie par des essais comparatifs utilisant de la
les mêmes opérations de chauffage et de refroidissement
poudre de lait écrémé connue pour être exempte
que le milieu lui-même.
de telles substances.
2) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
6 Appareillage et verrerie
ATTENTION - Le matériel destiné à entrer en
5.5.2 Préparation contact avec l’échantillon pour essai, le diluant, les
dilutions ou le milieu de culture doit être stérilisé
conformément à I’ISO 826W989, 6.1.
5.5.2.1 Préparation à partir du milieu complet dés-
hydraté du commerce
NOTE 4 La matériel à usage unique est acceptable au
même titre que la verrerie réutilisable, si les spécifica-
Suivre les prescriptions du fabricant mais, dans tous
tions sont similaires.
les cas, ajouter de la poudre de lait écrémé, même
si le fabricant considère cette adjonction comme
Matériel courant de laboratoire de microbiologie,
superflue.
matériel nécessaire à la préparation des échan-
tillons pour essais et aux dilutions, comme spécifié
Si nécessaire, ajuster le pH de facon qu’aprés sté-
dans I’ISO 8261, et notamment
rilisation, il soit de 7,0 à 25 OC.
6.1 Appareils pour la stérilisation en chaleur sèche
55.2.2 Préparation à partir des composants de
(four) ou en chaleur humide (autoclave).
base déshydratés
Voir ISO 7218.
Dissoudre et disperser dans l’eau, dans l’ordre sui-
vant, l’extrait de levure, la tryptone, le glucose et,
en dernier lieu, la poudre de lait écrémé.
6.2 Étuve, réglable à 6,5 “C + 0,5 OC.
-
NOTE 1 Le chauffage de l’eau facilite cette opération.
6.3 Baltes de Petri, en verre ou en plastique, de
90 mm à 100 mm de diamètre.
Ajouter ensuite I’agar-agar et porter à ébullition, en
agitant fréquemment jusqu’à ce que I’agar-agar soit
6.4 Pipettes graduées, bouchées avec du coton,
complètement fondu, ou chauffer à la vapeur pen-
étalonnées pour délivrer i ml + 0,02 ml ou
dant environ 30 min.
10 ml + 0,2 ml ou 11 ml + 0,2 ml. -
- -
NOTE 2 Si la solution n’est pas claire, filtrer sur papier
filtre.
6.5 Bain d’eau, réglable à 45 “C + 1 “C.
-
Si nécessaire, ajuster le pH de facon qu’après sté-
6.6 Bain d’eau, réglable à une température supé-
rilisation, il soit de 7,0 à 25 “C. ’
rieure à 100 “C.
5.5.2.3 Répartition, stérilisation et conservation
6.7 Appareil de comptage des colonies, comportant
un système d’éclairage avec fond noir équipé d’une
Répartir le milieu dans des tubes à essais (6.9) à
loupe d’un grossissement de x 15 et d’un compteur
raison de 12 ml à 15 ml par tube ou dans des flacons
numérique mécanique ou électronique.
ou bouteilles (6.9) à raison de 100 ml à 150 ml.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 6730:1992(F)
6.8 pH-métre à compensation de température, pré-
8.4 Ensemencement et incubation
cis à + 0,l unité de pH à 25 “C.
-
8.4.1 Prendre deux boîtes de Petri stériles (6.3).
Transférer dans chacune des boîtes, 1 ml de
6.9 Tubes à essais, d’une capacité d’environ 20 ml
l’échantillon pour essai a l’aide d’une pipette stérile
(ou fioles ou flacons d’une capacité appropriée), et
(6.4).
fioles ou flaco
...
NORME
INTERNATIONALE 6730
Première édition
1992-02-01
Lait - Dénombrement des unités formant
colonie de micro-organismes psychrotrophes -
Technique par comptage des colonies à 63 “C
Milk - Enumeration of colony-forming units of psychrotrophic
micro-organisms - Colony-Count technique at 6,5 “C
-- --=
Numéro de référence
ISO 6730: 1992(F)
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ISO 6730:1992(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comites techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 6730 a été élaborée par le comité techni-
que ISCYTC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 5, Lait
et produits laitiers, en collaboration avec la Fédération internationale
de laiterie (FIL) et l’Association des chimistes analytiques (AOAC) et
sera également publiée par ces organisations.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’information.
0 ISO 1992
Droits de reproduction riservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous que que forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internaticnale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
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NORME INTERNATIONALE ISO 6730:1992(F)
- Dénombrement des unités formant colonie de
Lait
micro-organismes psychrotrophes - Technique par comptage
des colonies à 63 OC
3 Domaine d’application 4 Principe
La présente Norme internationale prescrit une mé-
4.1 Ensemencement en profondeur d’un milieu de
thode de dénombrement des unités formant colonie
culture défini, coulé dans des boîtes de Petri avec
de micro-organismes psychrotrophes dans le lait
une quantité spécifiée d’échantillon pour essai. En-
cru et le lait traité thermiquement par la technique
semencement d’autres boîtes, dans les mêmes
de comptage de colonies à 6,s OC.
conditions, en utilisant des dilutions décimales de
l’échantillon pour essai.
2 Références normatives
4.2 Incubation des boîtes en aérobiose à 6,5 OC
pendant 10 jours.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite,
constituent des dispositions valables pour la pré-
4.3 Calcul du nombre d’unités formant colonie
sente Norme internationale. Au moment de la pu-
(UFC) de micro-organismes par millilitre d’échan-
blication, les éditions indiquées étaient en vigueur.
tillon à partir du nombre de colonies obtenues sur
Toute norme est sujette à révision et les parties
des boîtes choisies à des niveaux de dilution per-
prenantes des accords fondés sur la présente
mettant d’obtenir un résultat significatif.
Norme internationale sont invitées à rechercher la
possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes
des normes indiquées ci-après. Les membres de la
CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes 5 Diluant et milieu de culture
internationales en vigueur à un moment donné.
ISO 7218: 1985, Microbiologie - Directives générales 5.1 Généralités
pour /es examens microbiologiques.
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir
ISO 7218.
ISO 8261:1989, Lait et produits laitiers - Préparation
des échantillons pour essai et des dilutions en vue
de l’examen microbiologique.
5.2 Composant de base
Voir ISO 8261.
3 Définition
5.3 Diluants d’emploi général
Pour les besoins de la présente Norme internatio-
nale, la définition suivante s’applique.
Voir ISO 8261.
3.1 micro-organismes psychrotrophes: Bactéries,
levures et moisissures formant des colonies dé-
5.4 Répartition, stérilisation et conservation
nombrables dans tes conditions spécifiees dans la
Voir ISO 8261.
présente Norme internationale.
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ISO 6730:1992(F)
Stériliser à l’autoclave (6.1) à 121 “C + 1 “C pen-
5.5 Milieu de culture
dant 15 min. Si le milieu doit être utilisé immédia-
tement, le refroidir à 45 OC au bain d’eau (6.5). Dans
5.51 Composants
le cas contraire, avant de commencer l’examen mi-
crobiologique, et afin d’éviter toute attente au mo-
ment de couler la gélose, faire fondre complètement
Tryptone
590 g
le milieu au bain d’eau bouillante (6.6), puis le re-
froidir à 45 OC au bain d’eau (6.5). (Voir également
Extrait de levure
2s g
8.4.4.)
Monohydrate de glucose
1,o g
G3H,,06*~*0)
Conserver le milieu à l’obscurité à une température
Poudre de lait écrémé’) située entre 0 “C et + 5 “C pendant une durée
190 g
maximale de 3 mois après la préparation.
10 g to 15 g 2)
Agar-agar
Eau 1 000 ml
NOTE 3 Afin de contrôler la température de I’agar-agar,
il est recommandé de placer un thermomètre dans un
volume de solution d’agar-agar à 15 g/l contenu dans un
1) La poudre de lait écrémé doit être exempte
autre récipient identique à celui utilisé pour le milieu.
de substances inhibitrices. Ceci devrait être vé-
Cette solution de contr6le de la température devra subir
rifie par des essais comparatifs utilisant de la
les mêmes opérations de chauffage et de refroidissement
poudre de lait écrémé connue pour être exempte
que le milieu lui-même.
de telles substances.
2) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
6 Appareillage et verrerie
ATTENTION - Le matériel destiné à entrer en
5.5.2 Préparation contact avec l’échantillon pour essai, le diluant, les
dilutions ou le milieu de culture doit être stérilisé
conformément à I’ISO 826W989, 6.1.
5.5.2.1 Préparation à partir du milieu complet dés-
hydraté du commerce
NOTE 4 La matériel à usage unique est acceptable au
même titre que la verrerie réutilisable, si les spécifica-
Suivre les prescriptions du fabricant mais, dans tous
tions sont similaires.
les cas, ajouter de la poudre de lait écrémé, même
si le fabricant considère cette adjonction comme
Matériel courant de laboratoire de microbiologie,
superflue.
matériel nécessaire à la préparation des échan-
tillons pour essais et aux dilutions, comme spécifié
Si nécessaire, ajuster le pH de facon qu’aprés sté-
dans I’ISO 8261, et notamment
rilisation, il soit de 7,0 à 25 OC.
6.1 Appareils pour la stérilisation en chaleur sèche
55.2.2 Préparation à partir des composants de
(four) ou en chaleur humide (autoclave).
base déshydratés
Voir ISO 7218.
Dissoudre et disperser dans l’eau, dans l’ordre sui-
vant, l’extrait de levure, la tryptone, le glucose et,
en dernier lieu, la poudre de lait écrémé.
6.2 Étuve, réglable à 6,5 “C + 0,5 OC.
-
NOTE 1 Le chauffage de l’eau facilite cette opération.
6.3 Baltes de Petri, en verre ou en plastique, de
90 mm à 100 mm de diamètre.
Ajouter ensuite I’agar-agar et porter à ébullition, en
agitant fréquemment jusqu’à ce que I’agar-agar soit
6.4 Pipettes graduées, bouchées avec du coton,
complètement fondu, ou chauffer à la vapeur pen-
étalonnées pour délivrer i ml + 0,02 ml ou
dant environ 30 min.
10 ml + 0,2 ml ou 11 ml + 0,2 ml. -
- -
NOTE 2 Si la solution n’est pas claire, filtrer sur papier
filtre.
6.5 Bain d’eau, réglable à 45 “C + 1 “C.
-
Si nécessaire, ajuster le pH de facon qu’après sté-
6.6 Bain d’eau, réglable à une température supé-
rilisation, il soit de 7,0 à 25 “C. ’
rieure à 100 “C.
5.5.2.3 Répartition, stérilisation et conservation
6.7 Appareil de comptage des colonies, comportant
un système d’éclairage avec fond noir équipé d’une
Répartir le milieu dans des tubes à essais (6.9) à
loupe d’un grossissement de x 15 et d’un compteur
raison de 12 ml à 15 ml par tube ou dans des flacons
numérique mécanique ou électronique.
ou bouteilles (6.9) à raison de 100 ml à 150 ml.
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ISO 6730:1992(F)
6.8 pH-métre à compensation de température, pré-
8.4 Ensemencement et incubation
cis à + 0,l unité de pH à 25 “C.
-
8.4.1 Prendre deux boîtes de Petri stériles (6.3).
Transférer dans chacune des boîtes, 1 ml de
6.9 Tubes à essais, d’une capacité d’environ 20 ml
l’échantillon pour essai a l’aide d’une pipette stérile
(ou fioles ou flacons d’une capacité appropriée), et
(6.4).
fioles ou flaco
...
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