ISO 8553:2004

Milk — Enumeration of microorganisms — Plate-loop technique at 30 degrees C

ISO 8553|IDF 131:2004 specifies a method for the enumeration of microorganisms in raw milk by using the plate loop technique at 30 °C.

Lait — Dénombrement des micro-organismes — Méthode de l'anse calibrée en boîtes de Petri à 30 degrés C

L'ISO 8553|FIL 131:2004 spécifie une méthode d'estimation des micro-organismes dans le lait cru par la méthode de l'anse calibrée en boîtes de Petri à 30 °C.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 25-Apr-2004
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 21-Feb-2020

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 8553
IDF
131
First edition
2004-05-01


Milk — Enumeration of
microorganisms — Plate-loop technique
at 30 °C
Lait — Dénombrement des micro-organismes — Méthode de l'anse sur
boîtes de Petri à 30 °C




Reference numbers
ISO 8553:2004(E)
IDF 131:2004(E)
©
ISO and IDF 2004

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ISO 8553:2004(E)
IDF 131:2004(E)
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IDF 131:2004(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 8553|IDF 131 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC International.
It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.

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ISO 8553:2004(E)
IDF 131:2004(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National
Committee in every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF
Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO and AOAC International in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of
IDF National Committees casting a vote.
ISO 8553|IDF 131 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC International.
It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
All work was carried out by the Joint ISO/IDF/AOAC Action Team on Microbiological harmonization, of the
Standing Committee on Microbiological methods of analysis, under the aegis of its project leader, Dr J. Floor
(ZA).

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ISO 8553:2004(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 131:2004(E)

Milk — Enumeration of microorganisms — Plate-loop technique at
30 °C
1 Scope
This International Standard specifies a method for the enumeration of microorganisms in raw milk by using the
plate-loop technique at 30 °C.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 4833, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of
microorganisms — Colony count technique at 30 °C
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations
ISO 8261|IDF 122, Milk and milk products — General guidance for the preparation of test samples, initial
suspensions and decimal dilutions for microbiological examination
ISO/TS 11133-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production
of culture media — Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the
laboratory
ISO/TS 11133-2, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production
of culture media — Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
microorganisms
bacteria, yeasts and moulds forming countable colonies under the conditions specified in this International
Standard
4 Principle
4.1 A poured plate is prepared using a specified culture medium and a specified quantity of the test sample
taken by means of a calibrated wire loop.
4.2 The plate is aerobically incubated at 30 °C for 72 h.
4.3 The number of microorganisms per millilitre of test sample is calculated from the number of colonies
obtained on the plate (see Clause 10).
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ISO 8553:2004(E)
IDF 131:2004(E)
5 Diluents, culture medium and reagent
5.1 General
See ISO 7218 and ISO/TS 11133-1.
5.2 Diluents
See ISO 8261|IDF 122.
5.3 Culture medium — Plate count milk agar
5.3.1 Composition
Yeast extract 2,5 g
Enzymatic digestion of casein 5,0 g

a
Skimmed milk powder 1,0 g
Glucose, anhydrous (C H O ) 1,0 g
6 12 6
b
Agar
9 g to 18 g
Water 1 000 ml
a
The skimmed milk powder shall be free from inhibitory substances.
b
Depending on the gel strength of the agar.

5.3.2 Preparation
5.3.2.1 Preparation from commercial dehydrated medium
Follow the manufacturer's instructions but, in all cases, add the skimmed milk powder even if the
manufacturer considers such an addition unnecessary. Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it
is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
5.3.2.2 Preparation from dehydrated basic components
Dissolve and disperse in the water, in the following order, the yeast extract, the enzymatic digestion of casein,
the glucose and, finally, the skimmed milk powder. Heating the water will assist this procedure. Add the agar
and heat to boiling while stirring frequently until the agar is completely dissolved.
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
5.3.2.3 Distribution, sterilization and storage
Dispense the medium into test tubes (6.8), in quantities of 12 ml to 15 ml per tube, or into flasks or bottles
(6.9) of capacity not greater than 500 ml. Sterilize for 15 min in an autoclave (6.11) set at 121 °C.
If the medium is to be used immediately, cool it in a water bath (6.6) to between 44 °C and 47 °C before use.
If not, store it in the dark at 3 °C ± 2 °C for no longer than three months under conditions which do not allow
any change in its composition and properties. Before commencing the microbiological examination and in
order to avoid any delay when pouring the medium, completely melt the stored medium, then cool it in a water
bath (6.6) to between 44 °C and 47 °C before use (see 9.2.4).
With regard to a temperature check of the medium and other requirements, see ISO 7218.
2 © ISO and IDF 2004 – All rights reserved

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IDF 131:2004(E)
5.3.3 Performance testing for the quality assurance of the culture medium
Test the performance of the medium according to ISO/TS 11133-2.
5.4 Disinfecting solution
Use a sodium hypochlorite solution containing 50 mg/l to 100 mg/l of active chlorine or a 1:1 mixture of
ethanol (96 %) and acetone. Prepare a fresh disinfecting solution daily.
6 Apparatus and glassware
Usual microbiological laboratory equipment (see ISO 7218) and, in particular, the following.
6.1 Glassware
Disposable glassware is an acceptable alternative to re-usable glassware if it has suitable specifications.
Re-usable glassware shall be capable of undergoing repeated sterilization and shall be chemically inert.
6.2 Loop inoculation equipment
6.2.1 Components
The total equipment assembly cannot be purchased as a unit, but may be made up from the components
listed in 6.2.1.1 to 6.2.1.3. Automatic equipment may also be used.
6.2.1.1 Platinum inoculating loop, calibrated to hold 0,001 ml, soldered to a Luer-lock hypodermic
needle. Make a 30° bend about 3 mm to 4 mm from the loop, with the loop opening towards the hub.
NOTE Suitable platinum inoculating loops are available from Gerber Instruments K. Schneider & Co. AG,
1)
Switzerland .
Alternatively, use a loop, calibrated to hold 0,001 ml, made of platinum, platinum-rhodium or platinum-iridium
wire of diameter 0,4 mm to 0,5 mm, attached to a wire of length 60 mm to 70 mm. Make a 30° bend about
3 mm to 4 mm from the loop. Kink the opposite end of the wire in several places. Insert the kinked end of the
wire in a Luer-lock hypodermic needle, 13 gauge, sawn off 24 mm to 26 mm from the point where the barrel
enters the hub,
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 8553
FIL
131
Première édition
2004-05-01


Lait — Dénombrement des micro-
organismes — Méthode de l'anse calibrée
en boîtes de Petri à 30 °C
Milk — Enumeration of microorganisms — Plate-loop technique at
30 °C




Numéros de référence
ISO 8553:2004(F)
FIL 131:2004(F)
©
ISO et FIL 2004

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FIL 131:2004(F)
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Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
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surviendrait un problème d'utilisation, veuillez en informer le Secrétariat central de l'ISO à l'adresse donnée ci-dessous.


©  ISO et FIL 2004
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
soit de l'ISO soit de la FIL, à l'une ou l'autre des adresses ci-après.
ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
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Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Version française parue en 2006
Publié en Suisse

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ISO 8553:2004(F)
FIL 131:2004(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 8553⎪FIL 131 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration avec l'AOAC
International. Elle est publiée conjointement par l'ISO et la FIL et séparément par l'AOAC International.

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ISO 8553:2004(F)
FIL 131:2004(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l'ISO pour
l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et d'échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux de la FIL votants.
L'ISO 8553⎪FIL 131 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration avec l'AOAC
International. Elle est publiée conjointement par l'ISO et la FIL et séparément par l'AOAC International.
Tous les travaux ont été effectués par le groupe tripartite ISO/FIL/AOAC sur l'Harmonization microbiologique,
du Comité Permanent chargé des Méthodes d'analyse microbiologiques, sous l'égide de son chef de projet,
Dr J. Floor (ZA).

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ISO 8553:2004(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 131:2004(F)

Lait — Dénombrement des micro-organismes — Méthode de
l'anse calibrée en boîtes de Petri à 30 °C
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode d'estimation des micro-organismes dans le lait cru
par la méthode de l'anse calibrée en boîtes de Petri à 30 °C.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 4833, Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement des micro-
organismes — Technique de comptage des colonies à 30 degrés C
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques
ISO 8261⎪FIL 122, Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation des échantillons
pour essai, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
ISO/TS 11133-1, Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 1: Guide général pour l'assurance de la qualité pour la préparation des milieux de culture en
laboratoire
ISO/TS 11133-2, Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 2: Guide général pour les essais de performance des milieux de culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
micro-organismes
bactéries, levures et moisissures formant des colonies dénombrables dans les conditions spécifiées dans la
présente Norme internationale
4 Principe
4.1 Une prise d'essai est prélevée à l'aide d'une anse métallique en utilisant un milieu de culture spécifique
d'échantillon et une quantité d'échantillon définie.
4.2 Incubation de ces boîtes en aérobiose pendant 72 h à 30 °C.
4.3 Calcul du nombre de micro-organismes par millilitre d'échantillon, à partir du nombre de colonies
obtenues sur les boîtes (voir Article 10).
© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés 1

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ISO 8553:2004(F)
FIL 131:2004(F)
5 Diluants, milieu de culture et réactifs
5.1 Généralités
Voir l'ISO 7218 et l'ISO/TS 11133-1.
5.2 Diluants
Voir l'ISO 8261⎪FIL 122.
5.3 Milieu de culture — Agar au lait pour comptage
5.3.1 Composition
Extrait de levure 2,5 g
Digestat enzymatique de caséine 5,0 g

a
Poudre de lait écrémé 1,0 g
Glucose anhydre (C H O) 1,0 g
6 12 6
b
Agar 9 g à 18 g
Eau 1 000 ml
a
La poudre de lait écrémé doit être exempte de substances inhibitrices.
b
Selon les propriétés gélifiantes de l'agar utilisé.

5.3.2 Préparation
5.3.2.1 Préparation à partir d'un milieu déshydraté disponible dans le commerce
Suivre les instructions du fabricant, mais, dans tous les cas, ajouter la poudre de lait écrémé, même si le
fabricant considère que cela n'est pas nécessaire. Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu'après stérilisation,
il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
5.3.2.2 Préparation à partir des composants de base déshydratés
Dissoudre et mélanger dans l'eau, dans l'ordre suivant, l'extrait de levure, le digestat enzymatique de caséine,
le glucose et ensuite la poudre de lait écrémé. Le chauffage de l'eau facilite cette opération. Ajouter l'agar et
porter à ébullition en remuant fréquemment jusqu'à ce que l'agar soit complètement fondu.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu'après stérilisation, il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
5.3.2.3 Répartition, stérilisation et conservation
Répartir le milieu dans des tubes à essai (6.8) par quantités de 12 ml à 15 ml par tube, ou dans des fioles ou
des flacons (6.9) d'une capacité non supérieure à 500 ml. Stériliser à l'autoclave (6.11) réglé à 121 °C.
Si le milieu est utilisé immédiatement, le refroidir dans un bain d'eau (6.6) à une température comprise
entre 44 °C et 47 °C avant utilisation.
Sinon, le conserver à l'abri de la lumière à 3 °C ± 2 °C pendant trois mois tout au plus dans des conditions ne
provocant aucun changement de sa composition et de ses propriétés. Avant de commencer l'examen
microbiologique, pour éviter tout délai au moment de couler le milieu, faire fondre complètement le milieu
dans un bain d'eau (6.6) à une température comprise entre 44 °C et 47 °C avant utilisation (voir 9.2.4).
Afin de contrôler la température du milieu et les autres exigences, voir l'ISO 7218.
2 © ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés

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ISO 8553:2004(F)
FIL 131:2004(F)
5.3.3 Essai de performance pour l'assurance qualité du milieu de culture
Tester la performance du milieu selon l'ISO/TS 11133-2.
5.4 Solution désinfectante
Utiliser une solution d'hypochlorite de sodium contenant 50 mg/l à 100 mg/l de chlore actif ou un mélange
1:1 d'éthanol à 96 % et d'acétone. Préparer une solution désinfectante quotidienne.
6 Appareillage et verrerie
Utiliser l'équipement usuel de microbiologie (voir l'ISO 7218) et en particulier ce qui suit.
6.1 Verrerie
La verrerie jetable est une alternative à la verrerie réutilisable si elle a des spécifications appropriées. La
verrerie réutilisable doit être capable de subir des stérilisations répétées et doit être inerte chimiquement.
6.2 Matériel d'ensemencement
6.2.1 Composants
Cet assemblage d'équipements ne peut être acheté tel quel, mais il est possible de le constituer à partir des
composants listés de 6.2.1.1 à 6.2.1.3. Un équipement automatique peut être également utilisé.
6.2.1.1 Anse calibrée en fil de platine, étalonnée pour prélever 0,001 ml, soudée à une aiguille de
seringue Luer-lock. Couder le fil à 30° à environ 3 mm ou 4 mm de l'anse, l'anse s'ouvrant en direction du
raccord.
NOTE Des anses d'ensemencement en fil de platine appropriées sont disponibles auprès de Gerber Instruments
1)
K. Schneider & Co. AG, Suisse .
À défaut, utiliser une anse, étalonnée à 0,001 ml, en fil de platine, de platine rhodié ou de platine iridié, d'un
diamètre compris entre 0,4 mm et 0,5 mm, fixée à un fil d'une longueur de 60 mm à 70 mm. Couder le fil à 30°
à environ 3 mm ou 4 mm de l'anse. Vriller l'extrémité opposée du fil à plusieurs endroits. Insérer l'extrémité
vrillée dans une seringue Luer-lock de calibre 13, sectionnée à environ 24 mm à 26 mm du point où le corps
de la seringue pénètre dans le raccord, jusqu'à ce que la courbure se trouve à environ de 12 mm à 14 mm de
l'extrémité du corps.
Vérifier régulièrement l'étalonnage de l'anse et ainsi la justesse de la méthode en procédant à l'analyse de
25 échantillons en double, à la fois par la méthode normalisée de dénombrement sur gélose (voir l'ISO 4833)
et par la méthode de l'anse en boîtes de Petri.
Il c
...