SIST EN 17683:2023
(Main)Animal feeding stuffs - Methods of sampling and analysis - Determination of pyrrolizidine alkaloids in animal feeding stuff by LC-MS/MS
Animal feeding stuffs - Methods of sampling and analysis - Determination of pyrrolizidine alkaloids in animal feeding stuff by LC-MS/MS
This document describes a method for the quantitative determination of pyrrolizidine alkaloids (PA) in complete and supplementary feed and in forages by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) after solid phase extraction (SPE) clean-up.
The method has been successfully validated in a collaborative trial for the matrices complete feed for horses, supplementary feed for horses, supplementary feed for rodents, hay, alfalfa and grass silage. Validation was carried out for the PA and concentrations ranges listed in Table 1. It was demonstrated that the PA isomeric pairs senecivernine and senecionine as well as senecivernine-N-oxide and senecionine-N-oxide cannot be determined individually due to insufficient chromatographic separation. However, the sums of the individual PA of the isomeric pairs were quantified with sufficient reproducibility. Co-elution of other PA-isomers not included in the scope of the method shall be taken into account. A list of potentially co-eluting isomers is presented in Annex E.
Although the calibration range of the method protocol is specified from 10 μg/kg to 300 μg/kg, the results of the collaborative study showed, that the dilution of sample extracts with blank sample extracts enables for the quantitation of concentrations exceeding the calibration range. Satisfactory reproducibility was achieved when quantifying up to 1428 μg/kg for individual PA and up to 887 μg/kg for the sum of isomeric pairs.
NOTE 1 A second method was part of the method validation collaborative main trial. For this method PA-N-Oxides are reduced by adding zinc powder to the extract of the feed material. The following steps correspond to the first and main method. Quantitative results for each PA except the otonecine type PA senkirkine represent the sum of the free PA base and its corresponding N-oxide.
NOTE 2 Due to insufficient numbers of data for some analyte-matrix combinations statistical evaluation was not valid for standardization. Received data indicated the methods applicability in experienced laboratories with appropriate quality assurance measures. Therefore, the method description is included as an informative annex (Annex D).
Futtermittel - Probenahme- und Untersuchungsverfahren - Bestimmung von Pyrrolizidinalkaloiden in Futtermitteln mittels LC-MS/MS
Dieses Dokument beschreibt ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Pyrrolizidinalkaloiden (PA) in Allein- und Ergänzungsfuttermitteln sowie in Futtermitteln mittels Flüssigchromatographie mit Massen-spektrometrie-Kopplung (LC-MS/MS) nach Aufreinigung durch Festphasenextraktion (SPE).
Das Verfahren wurde in einem Ringversuch für die Matrices Alleinfuttermittel für Pferde, Ergänzungs-futtermittel für Pferde, Ergänzungsfuttermittel für Nagetiere, Heu, Alfalfa und Grassilage erfolgreich validiert. Die Validierung wurde für die in Tabelle 1 aufgeführten PA- und Konzentrationsbereiche durchgeführt. Es wurde gezeigt, dass die PA-Isomerenpaare Senecivernin und Senecionin sowie Senecivernin-N-Oxid und Senecionin-N-Oxid aufgrund unzureichender chromatographischer Trennung nicht einzeln bestimmt werden können. Die Summen der einzelnen PA der Isomerenpaare wurden jedoch mit ausreichender Vergleichpräzision quantifiziert. Die Ko-Elution von anderen PA-Isomeren, die nicht in den Anwendungsbereich des Verfahrens fallen, muss berücksichtigt werden. Eine Liste der potenziell ko-eluierenden Isomere ist in Anhang E enthalten.
Obwohl der Kalibrierbereich des Verfahrensprotokolls von 10 μg/kg bis 300 μg/kg festgelegt ist, zeigten die Ergebnisse des Ringversuchs, dass die Verdünnung von Probenextrakten mit Blindprobenextrakten die Quantifizierung von Konzentrationen ermöglicht, die den Kalibrierbereich überschreiten. Eine zufriedenstellende Vergleichpräzision wurde bei der Quantifizierung von bis zu 1 428 μg/kg für einzelne PA und bis zu 887 μg/kg für die Summe der Isomerenpaare erreicht.
ANMERKUNG 1 Ein zweites Verfahren war Teil des Haupt-Ringversuchs zur Verfahrensvalidierung. Bei diesem Verfahren werden PA-N-Oxide durch Zugabe von Zinkpulver zum Extrakt des Futtermittels reduziert. Die folgenden Schritte entsprechen dem ersten und wichtigsten Verfahren. Die quantitativen Ergebnisse für jedes PA mit Ausnahme des PA vom Otonecin-Typ Senkirkin stellen die Summe der freien PA-Base und ihres entsprechenden N-Oxids dar.
ANMERKUNG 2 Aufgrund einer unzureichenden Anzahl von Daten für einige Analyt-Matrix-Kombinationen war die statistische Auswertung für die Normung nicht gültig. Die erhaltenen Daten weisen auf die Anwendbarkeit des Verfahrens in erfahrenen Laboratorien mit entsprechenden Qualitätssicherungsmaßnahmen hin. Daher ist die Verfahrensbeschreibung als informativer Anhang (Anhang D) beigefügt.
Alimentation animale - Méthodes d’échantillonnage et d’analyse - Dosage des alcaloïdes pyrrolizidiniques dans l'alimentation animale par CL-SM/SM
Le présent document décrit une méthode de détermination quantitative des alcaloïdes pyrrolizidiniques (AP) dans les aliments pour animaux complets et complémentaires ainsi que dans les fourrages, par chromatographie liquide couplée à une spectrométrie de masse en tandem (CL-SM/SM) après purification par extraction en phase solide (SPE).
La méthode a été validée avec succès lors d’un essai interlaboratoires portant sur les matrices suivantes : aliments complets pour chevaux, aliments complémentaires pour chevaux, aliments complémentaires pour rongeurs, foin, luzerne et ensilage. La validation a été effectuée pour les AP à des gammes de concentrations indiqué dans le Tableau 1. Il a été démontré que les paires d’isomères d’AP (sénécivernine et sénécionine ainsi que sénécivernine N-oxyde et sénécionine N-oxyde) ne peuvent pas être déterminées individuellement en raison d’une séparation chromatographique insuffisante. Cependant, les sommes des AP individuels des paires d’isomères ont été quantifiées avec une reproductibilité acceptable. La co-élution des autres isomères d’AP non inclus dans le domaine d’application de la méthode doit être prise en compte. Une liste des isomères potentiellement co-éluants est donnée à l’Annexe E.
Bien que la gamme d’étalonnage du protocole de la méthode se situe entre 10 μg/kg et 300 μg/kg, les résultats de l’essai interlaboratoires ont montré que la dilution des extraits d’échantillon avec des extraits d’échantillon blanc permet de quantifier des concentrations supérieures à la gamme d’étalonnage. Une reproductibilité satisfaisante a été atteinte lors de la quantification jusqu’à 1 428 μg/kg pour les AP individuels et jusqu’à 887 μg/kg pour la somme des paires d’isomères.
NOTE 1 Une seconde méthode faisait partie de l’essai interlaboratoires principal de validation de la méthode. Pour cette méthode, les N-oxydes d‘AP sont réduits en ajoutant de la poudre de zinc à l’extrait d’aliment pour animaux. Les étapes suivantes correspondent à la première et principale méthode. Les résultats quantitatifs pour chaque AP, excepté l’AP senkirkine de type otonécine, représentent la somme de la base libre d’AP et de son N-oxyde correspondant.
NOTE 2 En raison du nombre insuffisant de données pour certaines combinaisons analyte-matrice, l’évaluation statistique n’était pas valide pour la normalisation. Les données reçues ont indiqué l’applicabilité des méthodes au sein de laboratoires expérimentés avec des mesures d’assurance qualité appropriées. Par conséquent, la description de la méthode est incluse à titre d’annexe informative (Annexe D).
Krma - Metode vzorčenja in analize - Določanje pirolizidinskih alkaloidov v krmi z LCMS/MS
Ta dokument opisuje metodo za kvantitativno določevanje pirolizidinskih alkaloidov (PA) v polnovredni in dopolnilni krmi s tandemsko masno spektrometrijo s tekočinsko kromatografijo (LC-MS/MS) po izpiranju z ekstrakcijo na trdni fazi (SPE).
Ta metoda je bila uspešno potrjena v primerjalnem preskusu za matrice s polnovredno krmo za konje, dopolnilno krmo za konje, dopolnilno krmo za glodavce, seno, lucerno in travno silažo. Potrditev je bila izvedena za pirolizidinske alkaloide (PA) in vrednosti koncentracije, navedene v tabeli 1. Dokazano je bilo, da izomerna para pirolizidinskih alkaloidov sineciverin in senecionin ter senecivernin-N-oksid in senecionin-N-oksid, ni mogoče določiti posamezno zaradi neustreznega kromatografskega ločevanja. Vseeno pa so bile vsote posameznih pirolizidinskih alkaloidov izomernih parov kvantificirane z ustrezno stopnjo ponovljivosti. Upoštevati je treba sočasno eluacijo drugih izomerov pirolizidinskih alkaloidov, ki niso zajeti v metodo. Seznam izomerov s potencialno sočasno eluacijo je podan v dodatku E.
Čeprav je kalibracijsko območje protokola metode določeno od 10 μg/kg do 300 μg/kg, so rezultati primerjalne študije pokazali, da redčenje ekstraktov vzorcev z ekstrakti slepih vzorcev omogoča kvantitativno določanje koncentracij, ki presegajo kalibracijsko območje. Zadovoljiva ponovljivost je vila dosežena pri kvantificiranju do 1428 μg/kg za posamezen pirolizidinski alkaloid in do 887 μg/kg za vsoto izomernih parov.
OPOMBA 1: Druga metoda je bila del primerjalnega glavnega preskusa potrjevanja metode. Pri tej metodi so bili PA-N-oksidi zmanjšani z dodajanjem cinkovega prahu ekstraktu krmnega material. Spodnji koraki ustrezajo prvi in glavni metodi. Kvantitativni rezultati za vsak pirolizidinski alkaloid razen pirolizidinskega alkaloida senkirkin vrste otenocin predstavljajo vsoto proste baze pirolizidinskih alkaloidov in njen ustrezen N-oksid.
OPOMBA 2: Zaradi nezadostnega števila podatkov za nekatere kombinacije analita in matrike statistična ocena za standardizacijo ni bila veljavna. Pridobljeni rezultati so kazali uporabnost metod v izkušenih laboratorijih z ustrezno kakovostjo ukrepov za zagotavljanje kakovosti. Za to je opis metode vključen kot informativni dodatek (dodatek D).
General Information
Standards Content (Sample)
SLOVENSKI STANDARD
SIST EN 17683:2023
01-maj-2023
Krma - Metode vzorčenja in analize - Določanje pirolizidinskih alkaloidov v krmi z
LCMS/MS
Animal feeding stuffs - Methods of sampling and analysis - Determination of pyrrolizidine
alkaloids in animal feeding stuff by LC-MS/MS
Futtermittel - Probenahme- und Untersuchungsverfahren - Bestimmung von
Pyrrolizidinalkaloiden in Futtermitteln mittels LC-MS/MS
Alimentation animale - Méthodes d’échantillonnage et d’analyse - Dosage des alcaloïdes
pyrrolizidiniques dans l'alimentation animale par CL-SM/SM
Ta slovenski standard je istoveten z: EN 17683:2023
ICS:
65.120 Krmila Animal feeding stuffs
SIST EN 17683:2023 en,fr,de
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
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SIST EN 17683:2023
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SIST EN 17683:2023
EN 17683
EUROPEAN STANDARD
NORME EUROPÉENNE
March 2023
EUROPÄISCHE NORM
ICS 65.120
English Version
Animal feeding stuffs - Methods of sampling and analysis -
Determination of pyrrolizidine alkaloids in animal feeding
stuff by LC-MS/MS
Alimentation animale - Méthodes d'échantillonnage et Futtermittel - Probenahme- und
d'analyse - Dosage des alcaloïdes pyrrolizidiniques Untersuchungsverfahren - Bestimmung von
dans l'alimentation animale par CL-SM/SM Pyrrolizidinalkaloiden in Futtermitteln mittels LC-
MS/MS
This European Standard was approved by CEN on 17 January 2023.
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COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION
EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG
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worldwide for CEN national Members.
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SIST EN 17683:2023
EN 17683:2023 (E)
Contents Page
European foreword . 4
Introduction . 5
1 Scope . 6
2 Normative references . 7
3 Terms and definitions . 7
4 Principle . 7
4.1 General. 7
4.2 Reagents . 7
4.3 Analytical standards . 7
4.4 Chemicals . 8
4.5 Solutions . 9
4.5.1 Extraction solution 0,05 mol/l aqueous sulphuric acid . 9
4.5.2 Aqueous ammoniacal solution (20/80
...
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