SIST ISO 6639-4:1997
(Main)Cereals and pulses -- Determination of hidden insect infestation -- Part 4: Rapid methods
Cereals and pulses -- Determination of hidden insect infestation -- Part 4: Rapid methods
Céréales et légumineuses -- Détermination de l'infestation cachée par les insectes -- Partie 4: Méthodes rapides
Žito in stročnice - Določanje prikritega napada insektov - 4. del: Hitre metode
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
IS0
INTERNATIONAL STANDARD
6639-4
First edition
1987-02-O 1
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEXflYHAPOaHAR OPTAHM3A~MR IlO CTAHAAPTM3A~MM
Determination of hidden
Cereals and pulses -
insect infestation -
Part 4:
Rapid methods
D6 termina tion de l’infesta tion cacMe par /es inset tes -
C&&ales et lhgumineuses -
Partie 4: Mthodes rapides
Reference number
---------------------- Page: 1 ----------------------
Foreword
IS0 (the international Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies.). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 6639-4 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products.
Section five cancels and replaces IS0 1162-1975. .
Users should note that all International Standards undergo revision from time to time
and that any reference made herein to any other International Standard implies its
latest edition, unless otherwise stated.
0 International Organization for Standardization, 1987
Printed in Switzerland
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IS0 6639-4: 1987 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Determination of hidden
Cereals and pulses -
insect infestation -
Part 4:
Rapid methods
Section two: Ninhydrin method (clauses 10 to 16)
0 Introduction
The method is applicable to any dry grain prone to internal
This International Standard describes methods of determining
hidden insect infestation in cereals and pulses. It consists of the insect infestation, particularly wheat, sorghum, rice and similar
sized grains. Large grains, such as maize, have to be partially
following parts :
broken (kibbled) before they can be tested. This treatment of
Part 7 : General principles. large grains can cause some insects to be lost or fragmented,
thus rendering the interpretation of results unreliable. Numbers
Part 2: Sampling.
of eggs and young larvae may be underestimated, but, in this
Part 3: Reference method. respect, the method is no less efficient than any other.
Part 4: Rapid methods.
Section three: Whole grain flotation method
(clauses 17 to 24)
1 Scope and field of application
The method is suitable for detecting hidden infestation in most
This part of IS0 6639 specifies five rapid methods for
cereals and pulses but only on a qualitative basis.
estimating the degree of, or detecting the presence of, hidden
insect infestation in a sample of a cereal or pulse.
.
Section four: Acoustic method (clauses 25 to 31)
NOTE - The characteristics leading to the choice of rapid method are
The method is suitable for detecting living insect adults and
summarized in the table in IS0 6639/l.
larvae feeding inside grains. It does not permit dead adults and
larvae or living eggs and pupae (non-feeding stages) to be
Section one : Method by determination of carbon dioxide
detected.
production (clauses 3 to 9)
Section five: X-ray method (clauses 32 to 36)
The method is primarily intended for testing whole grains. It is
not applicable for testing
The method is suitable for detecting living and dead larvae and
adults within grains. Insects which have been recently killed
a) finely ground grain products, as there is a risk that par-
(for example by fumigation) may be difficult to distinguish from
ticles of material will be sucked up with air samples; or
those still living.
b) grain products with moisture contents greater than
15 % (m/m), because of the risk of carbon dioxide produced
by the products themselves and by micro-organisms in-
terfering with the results. 2 References
In addition, the method is not applicable to the rapid testing of
IS0 520, Cereals and pulses - Determination of the mass of
grain products on to which carbon dioxide has already been 7 CKX) grains.
adsorbed in large quantities, for example grain stored in a con-
fined atmosphere or when there are clear external indications of IS0 565, Test sieves - Woven metal wire clo tb, perforated
heavy infestation.
plate and electroformed sheet - Nominal sizes of openings.
The method can be used for coarsely milled or kibbled grain IS0 712, Cereals and cereal products - Determination of
products, provided that they have been sieved before testing to moisture con tent (Routine reference method).
remove fine particles and loose insects.
IS0 950, Cereals - Sampling (as grain).
The method does not permit the presence of dead adults,
pupae, larvae or eggs to be detected. IS0 951, Pulses in bags - Sampling.
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IS0 6639-4 : 1987 (E)
Section one: Method by determination of carbon dioxide production
4.4.3 Airtight sample containers, of capacity not ex-
3 Principle
ceeding 750 ml. These containers comprise a cylinder made of
gasproof material, approximately 100 mm in diameter, sealed at
Incubation of a test portion of the material at a standard
the bottom and accommodating a removable lid with an airtight
temperature, and estimation, by a gasometric method or an
closure at the top (see 4.3.11, having two orifices with nozzles
infra-red method, of the amount of carbon dioxide generated
during a standard period as a measure of the total metabolism permitting air to be introduced into the lower part of the
cylinder after connection to the purified air line (see figure 2)
of the material.
and to be expelled at the top.
NOTE - This method is based on work in which it was shown that
respiration could be used to detect insects in produce and that the
4.4.4 Supply of compressed dry air (air pressure line, com-
volume of airspace is approximately constant in bulk grain packed
pressed air cylinder or diaphragm pump) with a pressure-
tight. The metabolic rate of dry grain, or a grain product, is very low.
reducing valve. A flow-regulating valve and a flowmeter are
That of insects is so much higher that the generation of carbon dioxide
necessary in the circuit.
in dry grain or grain product can be regarded as a sign of infestation,
provided that care has been taken to avoid contamination with this gas
and to ensure that adsorption by the grain is minimized. 4.4.5 Three-way valves, manually or electrically controlled.
4.4.6 Air washing and drying tubes, installed in the circuit
before the sample container. The washer comprises a flask to
4 Apparatus
allow the air to be bubbled through 10 % (W/IV) sodium
hydroxide solution. The desiccator contains desiccant, for
example anhydrous calcium chloride.
4.1 Sieve, of suitable aperture size such that fine particles
and insects can pass but the material under test is retained (see
IS0 565). 4.4.7 Moisture indicator, placed between the sample con-
tainer and the analyser (silica gel with saturation indicator).
4.2 Balance, accurate to 0,l g.
5 Sampling
Apparatus for gasometric analysis (see figure ‘l).
4.3
Use samples obtained as described in IS0 6639/2.
4.3.1 Airtight sample containers, of capacity not ex-
ceeding 750 ml. Each container shall be closed with a rubber
6 Procedure
septum.
6.1 Preparation of test sample
4.3.2 Syringes and needles, for withdrawing samples of in-
terstitial air. The syringes shall be completely airtight and shall Use the sieve (4.1) to remove any fine particles and insects from
be of sufficient capacity for the analysis. All-glass syringes of the sample. If required, the insects may be identified and the
capacity 20 ml are suitable. number of adults, pupae and larvae recorded separately for
each species.
4.3.3 Incubator or climatic chamber, capable of being
In order to bring the sample to a suitable condition for testing,
maintained at 25 + 1 OC (see 4.4.1).
keep it for 24 h in the incubator (4.3.31, controlled at 25 OC, or
in the controlled climate room (4.4.1) in a close-woven cloth
itable for measuring car- bag, or a wide-mouthed jar, tray or open tin, suitably covered
4.3.4 Gas analysis apparatus, su
bon dioxide concentrations to within +0,2 % WVL to prevent the entry or escape of free-living insects, while
allowing exchange of air (see IS0 6639/3, subclause 5.4).
4.4 Apparatus for infra-red gas analysis (see figure 2). Before preparing the airtight sample container (6.21, re-sieve
the sample to remove any insects which may have emerged
during the preparatory period.
4.4.1 Controlled climate room.
Spread the sample thinly on a tray or other suitable flat surface,
The analytical apparatus should be housed in a room having
and leave exposed to air for 15 to 30 min (to permit adsorbed
controlled temperature and relative humidity, preferably at
carbon dioxide to escape). Airing is less important for infra-red
25 - + 1 OC and a relative humidity of 70 + 5 %.
analysis, but, if this is not done, the test report (clause 9) shall
mention the fact.
4.4.2 Infra-red gas analyser, with two interchangeable
Immediately before filling the airtight sample container, deter-
measurement ranges for carbon dioxide (0 to 50 PI/I and 0 to
mine the moisture content of the sample by the method
500 PI/I), capable of operating with dry air as the carrier gas
described in IS0 712, using test portions obtained in accord-
supplied by a compressed air cylinder, an air pressure line or a
leakproof diaphragm pump at a flow rate of 2 000 ml/min. ance with IS0 950 or IS0 951.
2
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Iso 6639-4 : 1987 E)
F- .
I
/
G
7
I
I
/
H
J
-
-
__-
._._
K
/
-
-
-
A Airtight container for the test portion
B Hypodermic syringe
C Air intake
D Three-way stopcock
E 4 ml bulb (volume to “0” graduation on tube F)
F Narrow-bore tube graduated in divisions of 0,Ol ml from 0 to 1,00 ml
G 1,5 ml bulb
H Graduation mark
J Mercury reservoir (provided with means for adjusting level in tube F)
K U-tube containing potassium hydroxide solution
L Soda-lime tube, to protect contents of tube K from atmospheric carbon dioxide
Figure 1 - Apparatus for gasometric analysis
3
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IS0 6639-4 : 1987 (El
A Dry air supply (cylinder or air pressure line)
A’ Leakproof diaphragm air pump
B Pressure regulator
C Air washer [bubbler with 10 % (VI/~) sodium hydroxide (NaOH) solution1
D Air desiccator [anhydrous calcium chloride (CaCl$l
E Three-way valves (manual or electric)
F Airtight connections
G Sample container
H Moisture indicator (silica gel with saturation indicator)
J Flowmeter with flow-regulating needle-valve
K Infra-red analyser
M Potentiometric recorder (optional)
N Air outlet
Diagram of apparatus for infra-red gas analysis with operating accessories
Figure 2 -
4
---------------------- Page: 6 ----------------------
. IS0 6639-4: 1987 (E)
integration system is required to measure the area of the successive
6.2 Preparation of container and of test portion
peaks and for accurately determining the production of carbon dioxide
in the sample.
Leave the sample container (4.3.1 or 4.4.3) open to allow water
and/or carbon dioxide to escape and then weigh it to the
With analysers having a non-linear scale, the value obtained
nearest 0,l g.
should be converted into microlitres per litre using the analyser
calibration curve.
Pour approximately 300 g of the test sample into the container.
Tap the container to shake the sample down, and add more of
the test sample until the container is completely full.
65 . Number of determinations
Weigh the container containing the test portio n to the nearest
Carry out two determinations on the same test portion.
nd deduce the mass of the test portion
OJ g a
NOTE - Constancv of filling and packing of the sample container is
7 Expression of results
not essential if the infra -red method is used.
7.1 Gasometric method
Seal the container hermetically by means of its airtight closure
(see 4.3.1 or 4.4.3).
7.1 .I Calculation and formula
Return the prepared sample container to the incubator or
The concentration, expressed as a percentage by volume, of
climatic chamber (4.3.3) and leave for 24 h if the carbon dioxide
carbon dioxide in the intergranular air of 1 kg of grain after 24 h
is to be measured by the gasometric method. If the infra-red
incubation at 25 OC is given by the formula
method is to be used, the prepared sample container may be
connected to the gas analyser immediately.
G+C2 loo0
2 Xmo
63 . Determination by the gasometric method
Expel all air from the syringe (4.3.21, insert the needle through
C1 and C2 are the results of the two measurements of the
the rubber septum on the sample container and move the
carbon dioxide concentration, as percentages by volume,
piston of the syringe backwards and forwards several times so
measured on each test portion;
as to mix the air in the needle thoroughly with the atmosphere
is the mass, in grams, of the test portion.
in the container. Draw about 10 ml of the atmosphere in the
m0
container into the syringe and withdraw the needle from the
Take as the result the arithmetic mean of the values obtained
septum.
in the two determinations, if the repeatability conditions
(see 7.1.2) are met.
Promptly transfer a suitable quantity of the gas sample from the
syringe to the gas analysis apparatus (4.3.4). (If the gas sample
cannot be transferred promptly, insert the needle into a rubber
7.1.2 Repeatability
bung.) Determine the concentration of carbon dioxide in the
gas sample, expressing it as a percentage by volume. Repeat
The difference between the results of two determinations
the analysis on the same test portion.
carried out one after the other by the same analyst should not
exceed 0,2 % ( I/l VI.
. Determination by the infra-red method
64
7.2 Infra-red method
Position the valves (4.4.5) so as to isolate the circuit near the
container containing the test portion. After 5 min of scanning
7.2.1 Calculation and formula
with purified air at a rate of 1 Vmin, set the analyser to zero and
to the most sensitive scale (measuring range 0 to 50 pl/ I). The concentration, expressed in microlitres per litre, of carbon
dioxide produced in 1 min in the intergranular air in 1 kg of
Connect the sample container nozzles to the air inlet pipe and
grain is given by the formula
to the analyser (see figure 2).
1000
cx-
Direct the flow of air through the sample by operating the
*0
three-way valves, with the analyser now set on the least sen-
where
sitive scale (measuring range 0 to 500 PI/I). Circulate the
purified air at a rate of 1 l/min through the sample for 15 min.
C is the concentration, in microlitres per litre, of carbon ’
Then switch the analyser to the most sensitive scale (measuring
dioxide produced in 1 min in the intergranular air of the test
range 0 to 50 pi/l). Take the reading, in microlitres per litre per
portion ;
minute, of the emission of carbon dioxide in the sample directly
is the mass, in grams, of the test portion.
from the analyser screen or from the recorder.
Take as the result the arithmetic mean of the values obtained
NOTE - The automatic operation of the valves and sensitivity scales
in the two determinations, if the repeatability conditions
may be performed by an electronic programmer and electric control
valves. The measurement may also be carried out cyclicallv, but an (see 7.2.2) are met.
5
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Table 3 - Interpretation of results obtained by the
7.2.2 Repeatability
gasometric method
The difference between the results of two determinations,
Production of
carried out one after the other by the same analyst, should not
carbon dioxide,
exceed 2 ~l/Wmin).
% co;1 WV), Interpretation
for 1 kg after
24 h incubation
8 Interpretation of results
Probably no infestation present. Repeat
less than 0,2
test on another sample to confirm.
I I I
Possible light infestation. Repeat test on
8.1 Gasometric method
For wheat, peas, split peas, haricot beans, butter beans,
polished rice, small yellow maize, and similar small huskless
Grain unsuitable for storage longer than
hard grains, tested by the gasometric method, the interpret-
ation given in table 1 applies.
Moderate to heavy infestation. Grain
0,6 to 0,9
should be fumigated immediately.
I I I
-- _~----
I -~ _____I- I_____ -- ----
NOTE - For other grains, it is necessary to make a correction for the
Heavy infestation. Grain in dangerous
characteristic volume of interstitial air and the observed carbon dioxide I,0 and higher
condition and highly unsuitable for storage.
I I I
concentration should be multiplied by the correction factor. Some cor-
rection factors are :
-
linseed : 0,89
Table 2 - Interpretation of results obtained by the
infra-red method
- large white maize : 1 ,I8
- barley: I,25
Rate of
-
carbon dioxide
oats : I,39
production, Interpretation
lA/(l. min),
for 1 kg of grain
8.2 Infra-red method
Probably no infestation present. Persistent
The interpretation given in table 2 applies.
small peaks could indicate a very light
less than I,0
infestation, Repeat test on another sample
to confirm.
___-__ . --.---- -~--- - - --- --
9 Test report Possible light infestation. Repeat test on
I,0 to I,9
another sample to confirm.
~_---- - - --- -- ---
The test report shall show the method used, the number of
Light to moderate infestation. Grain
determinations carried out, and the results obtained. It shall
2,o to 3,9 unsuitable for storage longer than
also mention any operating details not specified in this part of 2 months without treatment.
-_-.--------- -~ .---.
IS0 6639, or regarded as optional, together with details of any
Moderate to heavy infestation. Grain
4,0 to 5,9
incidents likely to have influenced the results.
should be fumigated immediately.
I I
Heavy infestation. Grain in dangerous
The test report shall include all the information necessary for 6,0 and higher
condition and highly unsuitable for storage.
I I I
the complete identification of the sample.
6
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IS0 6639-4 : 1987 (E)
Section two: Ninhydrin method
10 Principle 13 Procedure
Crushing a test portion, from which any visible living insects
13.1 Preparation of test sample and test portion
have been removed, against white paper impregnated with
ninhydrin.
Use the sieve (11.1) to remove all foreign matter and free
insects from the sample. If required, the free insects may be
When an infested dry grain is crushed, the amino acids in the
identified and counted according to species and stage.
body fluid of insects react with the ninhydrin in the paper to
give a purple spot, but the amino acids of the grain are not
Weigh the sifted sample and divide it, using the grain sample
released and do not react.
divider (11.31, to obtain the test portions required (see 13.3 and
clause 15). Each test portion should contain at least
- Grain with a high moisture content may cause a reaction itself
NOTE
1 000 grains (see IS0 520). Test portions of large grains should
after 2 or 3 days.
be kibbled and resifted before testing.
Counting of the purple spots on the paper. The number of
Weigh a test portion and/or count the number of grains in it.
spots is taken to indicate the level of hidden infestation in the
Prepare the infestation detector (11.4) and pass the test portion
sample.
through it in accordance with the manufacturer’s instructions.
13.2 Determination
11 Apparatus
Remove the paper strip corresponding to the test from the
detector, taking care to handle only the ends of the strip as
11.1 Sieve (see 4.1). amino acids on the skin of the fingers also react with ninhydrin
to give purple stains (this may be obviated by wearing of
surgical gloves or using tweezers), and allow time for purple
11.2 Kibbling device, if required, to partially break large spots to develop. At 20 OC and at higher ambient tempera-
grains. tures, purple spots develop within 1 h, although they can take
up to 24 h to reach maximum intensity. At lower temperatures,
or if more rapid development is required, the paper can be
11.3 Grain sample divider (see IS0 950).
heated in an oven maintained at 50 OC, or it can be passed
cautiously (to prevent burning) over a spirit-lamp flame or elec-
tric light bulb.
11.4 Infestation detector, manually or electrically
operated, which consists essentially of two rough surfaced When purple spots have developed, mark the boundary of each
steel rolls 0,75 mm apart, between which passes a continuous with a pencil line, taking care to distinguish spots which may be
strip of ninhydrin-treated paper (see figure 3). so close as almost to merge.
NOTE - The Ashman Simon apparatus is suitable. Ignore any spots on the paper which are not purple in colour.
Count the number of marked spots.
11.5 Ninhydrin-treated paper
13.3 Number of determinations
Use a roll of white paper 57 mm wide and 50 m long, already
impregnated with ninhydrin, or prepare as follows.
Carry out two determinations on the same test sample. (See
also clause 15.)
Pass the untreated paper through a 10 g/l solution of ninhydrin
in industrial denaturated alcohol. Roll the paper up and leave it
to dry at 20 to 25 OC and 40 to 60 % relative humidity, in a dark
place for at least 3 days. Wrap the dry treated roll in metal foil
14 Expression of results
and store away from light, if possible at 20 to 25 OC and 40 to
60 % relative humidity. Under these conditions, the ninhydrin-
Express the infestation as the number of hidden insects per
treated paper will remain stable for 2 to 3 years.
kilogram or per 100 grains, and take as the result the arithmetic
mean of the two determinations.
11.6 Balance, accurate to 0,l g.
15 interpretation of results
If no insects are detected in the first pair of test portions, the
12 Sampling
test should be repeated with up to a total of 10 test portions
before it can be reasonably concluded that the grain is free
Use samples obtained as described in IS0 6639/2.
7
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IS0 6639-4 : 1987 (E)
immediate treatment. However, before taking any action, it
from infestation. Even then, it should be remembered that eggs
should be determined whether the grain has already been effec-
and small larvae can escape detection by the method. There-
tively treated, and how recently. This is because dead insects
fore, if it is desired and practical, apparently infestation-free
continue to give positive results by the method until their body
grain should be tested again after 2 to 4 weeks.
fluids have dried up. A large dead insect can take several weeks
to dry out.
The efficiency of the method also varies according to the
species of insect and size and type of grain under test. It is
doubtful whether a correction coefficient valid for different
16 Test report
grain types and different insect species can, or should, be
recommended or whether it is necessary in commercial
The test report shall show the method used, the number of
practice.
determinations carried out, and the results obtained. It shall
In general, a positive result should be taken to indicate that the also mention any operating details not specified in this part of
IS0 6699, or regarded as optional, together with details of any
grain is unsafe for storage. One purple spot represents one
insect in the test portion, and relatively few purple spots incidents likely to have influenced the results.
occurring irregularly on the paper, if followed by similar results
The test report shall include all the informa tion necessary for
from several test portions, indicate a light to moderate infes-
the complete identification of the sample.
tation. Many purple spots indicate a heavy infestation requiring
8
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IS0 6639-4 : 1987 (El
*.
.
Pu rple spots
*: 0
on
paper
0
0
x
z
n
0
0
.._
0
0
5
A-\
~-, Grain sample
Roll of ninhydrin-
/-treated paper
Steel rolls k
J Used paper exit
L Crushed grain
Figure 3 -
Apparatus for ninhydrin detection of hidden insect infestation
9
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IS0 6639-4: 1987 (E)
Section three: Whole grain flotation method
17 Principle 21 Procedure
Hidden insect infestation reduces the mass of grain. When a 21.1 Preparation of test sample and test portion
mixture of sound and infested grains is immersed in a test
Use the sieve (18.3) to remove all foreign matter from the
solution in which sound grains just sink, infested grains float to
sample. Weigh the sifted sample and divide it, using the grain
the surface. The separation is usually imperfect because grains
sample divider (18.5), into test portions, each containing about
containing early instar larvae tend to sink, and un-infested
500 grains. Count the grains in a test portion.
grains with air pockets under the testa or some other defect
may float. Floating grains are dissected, to confirm the
presence or absence of insects.
21.2 Determination
Place the test portion in the beaker (18.6) containing the test
solution. Mix thoroughly and allow to stand for 10 min, stirring
18 Apparatus
briefly at 1 min intervals to release air bubbles trapped by the
grains. When the grains have settled for the last time, use the
18.1 Hydrometer floats, to measure relative densities in the skimmer (18.7) to remove all floating grains. Sort out and count
all grains bearing visible evidence of insect infestation
range 1,100 to 1,300.
‘ (“windows” in the testa or tunnels visible through it). Cut open
the remaining grains with a suitable instrument, and count
18.2 Measuring cylinder, of capacity 500 ml.
those found to contain insect larvae, pupae or adults.
18.3 Sieve (see 4.1).
21.3 Number of determinations
18.4 Balance, accurate to 0,Ol g.
Carry out two determinations on the same test sample.
Grain sample divider (see IS0 950).
18.5
22 Expression of results
18.6 Beaker, of capacity 1 000 ml.
22.1 Calculation
Skimmer, for removing floating grains. Express the infestation as a percentage of grains which are in-
18.7
fested and take as the result the arithmetic mean of the two
determinations.
19 Sampling
22.2 Repeatability
Use samples obtained as described in IS0 6639/2.
The difference between the result of either determination and
the mean shall not exceed the limit indicated in figure 5. If this
limit of repeatability is exceeded, repeat the determination on
other test portions until the requirement is satisfied.
20 Test solution
A suitable test solution can be prepared by dissolving sodium
silicate, ammonium nitrate or glycerol in water. The quantity of 23 interpretation of results
solute required to make 1 000 ml of test solution of approxi-
In view of the limitations referred to in clause 17, the method is
mately the correct relative density can be calculated by
most likely to produce an underestimate of the level of infes-
reference to figure 4. Check the relative density of the solution
tation present. Therefore, results are of qualitative, rather than
by using a suitable hydrometer float (18.1) and the measuring
quantitative, value. One of the more accurate methods should
cylinder (18.2). If necessary, add small amounts of solute or
be used if quantitative results are important.
water until the relative density is within +0,005 of that
required.
NOTE - As grain densities vary according to type, variety and other 24 Test report
factors, the required relative densities of test solutions also vary.
Where practical, the required relative density should be determined by
The test report shall show the method used, the number of
experiment. The following values for relative densities of test solutions
determinations carried out, and the results obtained. It shall
are intended only as a guide:
also mention any operating details not specified in this part of
-
wheat: 1,15 IS0 6639, or regarded as optional, together with details of any
incidents likely to have influenced the results.
-
maize and sorghum : I,19
-
milled rice : I,27
The test report shall include all the information necessary for
-
the complete identification of the sample.
peas : I,27
10
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- ISO6639-4: 1987(E)
- r 600
E
5
.-
5
E
8
s
0 500
400
30(
200
IOC
I I-
I I I I I I
I I I
13
12
ll I
8 a
Relative density at 21 OC
Figure 4 - Guide to the preparation of test solutions of given relative densities
11
---------------------- Page: 13 ----------------------
IS0 6639-4 : 1987 (E)
Accept result
20(80)
Repeat test
I
- +I* a 0 2 2,0 230 I _+'4,0 2 5,0
Difference between observed percentage and mean percentage of grains infested
Figure 5 - Limits of repeatability for the grain flotation method
(the curve represents the 95 % confidence limits of repeatability for representative samples of about 500 grains)
12
---------------------- Page: 14 ----------------------
IS0 6639-d : 1987 (El
Section four: Acoustic method
vibration sensor, with a pass band of 600 to 4 000 Hz and a
25 Principle
signal to background noise ratio of at lea
...
SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 6639-4:1997
01-maj-1997
äLWRLQVWURþQLFH'RORþDQMHSULNULWHJDQDSDGDLQVHNWRYGHO +LWUHPHWRGH
Cereals and pulses -- Determination of hidden insect infestation -- Part 4: Rapid methods
Céréales et légumineuses -- Détermination de l'infestation cachée par les insectes --
Partie 4: Méthodes rapides
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 6639-4:1987
ICS:
67.060 äLWDVWURþQLFHLQSURL]YRGLL] Cereals, pulses and derived
QMLK products
SIST ISO 6639-4:1997 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
---------------------- Page: 1 ----------------------
SIST ISO 6639-4:1997
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SIST ISO 6639-4:1997
IS0
INTERNATIONAL STANDARD
6639-4
First edition
1987-02-O 1
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEXflYHAPOaHAR OPTAHM3A~MR IlO CTAHAAPTM3A~MM
Determination of hidden
Cereals and pulses -
insect infestation -
Part 4:
Rapid methods
D6 termina tion de l’infesta tion cacMe par /es inset tes -
C&&ales et lhgumineuses -
Partie 4: Mthodes rapides
Reference number
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SIST ISO 6639-4:1997
Foreword
IS0 (the international Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies.). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 6639-4 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products.
Section five cancels and replaces IS0 1162-1975. .
Users should note that all International Standards undergo revision from time to time
and that any reference made herein to any other International Standard implies its
latest edition, unless otherwise stated.
0 International Organization for Standardization, 1987
Printed in Switzerland
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SIST ISO 6639-4:1997
IS0 6639-4: 1987 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Determination of hidden
Cereals and pulses -
insect infestation -
Part 4:
Rapid methods
Section two: Ninhydrin method (clauses 10 to 16)
0 Introduction
The method is applicable to any dry grain prone to internal
This International Standard describes methods of determining
hidden insect infestation in cereals and pulses. It consists of the insect infestation, particularly wheat, sorghum, rice and similar
sized grains. Large grains, such as maize, have to be partially
following parts :
broken (kibbled) before they can be tested. This treatment of
Part 7 : General principles. large grains can cause some insects to be lost or fragmented,
thus rendering the interpretation of results unreliable. Numbers
Part 2: Sampling.
of eggs and young larvae may be underestimated, but, in this
Part 3: Reference method. respect, the method is no less efficient than any other.
Part 4: Rapid methods.
Section three: Whole grain flotation method
(clauses 17 to 24)
1 Scope and field of application
The method is suitable for detecting hidden infestation in most
This part of IS0 6639 specifies five rapid methods for
cereals and pulses but only on a qualitative basis.
estimating the degree of, or detecting the presence of, hidden
insect infestation in a sample of a cereal or pulse.
.
Section four: Acoustic method (clauses 25 to 31)
NOTE - The characteristics leading to the choice of rapid method are
The method is suitable for detecting living insect adults and
summarized in the table in IS0 6639/l.
larvae feeding inside grains. It does not permit dead adults and
larvae or living eggs and pupae (non-feeding stages) to be
Section one : Method by determination of carbon dioxide
detected.
production (clauses 3 to 9)
Section five: X-ray method (clauses 32 to 36)
The method is primarily intended for testing whole grains. It is
not applicable for testing
The method is suitable for detecting living and dead larvae and
adults within grains. Insects which have been recently killed
a) finely ground grain products, as there is a risk that par-
(for example by fumigation) may be difficult to distinguish from
ticles of material will be sucked up with air samples; or
those still living.
b) grain products with moisture contents greater than
15 % (m/m), because of the risk of carbon dioxide produced
by the products themselves and by micro-organisms in-
terfering with the results. 2 References
In addition, the method is not applicable to the rapid testing of
IS0 520, Cereals and pulses - Determination of the mass of
grain products on to which carbon dioxide has already been 7 CKX) grains.
adsorbed in large quantities, for example grain stored in a con-
fined atmosphere or when there are clear external indications of IS0 565, Test sieves - Woven metal wire clo tb, perforated
heavy infestation.
plate and electroformed sheet - Nominal sizes of openings.
The method can be used for coarsely milled or kibbled grain IS0 712, Cereals and cereal products - Determination of
products, provided that they have been sieved before testing to moisture con tent (Routine reference method).
remove fine particles and loose insects.
IS0 950, Cereals - Sampling (as grain).
The method does not permit the presence of dead adults,
pupae, larvae or eggs to be detected. IS0 951, Pulses in bags - Sampling.
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SIST ISO 6639-4:1997
IS0 6639-4 : 1987 (E)
Section one: Method by determination of carbon dioxide production
4.4.3 Airtight sample containers, of capacity not ex-
3 Principle
ceeding 750 ml. These containers comprise a cylinder made of
gasproof material, approximately 100 mm in diameter, sealed at
Incubation of a test portion of the material at a standard
the bottom and accommodating a removable lid with an airtight
temperature, and estimation, by a gasometric method or an
closure at the top (see 4.3.11, having two orifices with nozzles
infra-red method, of the amount of carbon dioxide generated
during a standard period as a measure of the total metabolism permitting air to be introduced into the lower part of the
cylinder after connection to the purified air line (see figure 2)
of the material.
and to be expelled at the top.
NOTE - This method is based on work in which it was shown that
respiration could be used to detect insects in produce and that the
4.4.4 Supply of compressed dry air (air pressure line, com-
volume of airspace is approximately constant in bulk grain packed
pressed air cylinder or diaphragm pump) with a pressure-
tight. The metabolic rate of dry grain, or a grain product, is very low.
reducing valve. A flow-regulating valve and a flowmeter are
That of insects is so much higher that the generation of carbon dioxide
necessary in the circuit.
in dry grain or grain product can be regarded as a sign of infestation,
provided that care has been taken to avoid contamination with this gas
and to ensure that adsorption by the grain is minimized. 4.4.5 Three-way valves, manually or electrically controlled.
4.4.6 Air washing and drying tubes, installed in the circuit
before the sample container. The washer comprises a flask to
4 Apparatus
allow the air to be bubbled through 10 % (W/IV) sodium
hydroxide solution. The desiccator contains desiccant, for
example anhydrous calcium chloride.
4.1 Sieve, of suitable aperture size such that fine particles
and insects can pass but the material under test is retained (see
IS0 565). 4.4.7 Moisture indicator, placed between the sample con-
tainer and the analyser (silica gel with saturation indicator).
4.2 Balance, accurate to 0,l g.
5 Sampling
Apparatus for gasometric analysis (see figure ‘l).
4.3
Use samples obtained as described in IS0 6639/2.
4.3.1 Airtight sample containers, of capacity not ex-
ceeding 750 ml. Each container shall be closed with a rubber
6 Procedure
septum.
6.1 Preparation of test sample
4.3.2 Syringes and needles, for withdrawing samples of in-
terstitial air. The syringes shall be completely airtight and shall Use the sieve (4.1) to remove any fine particles and insects from
be of sufficient capacity for the analysis. All-glass syringes of the sample. If required, the insects may be identified and the
capacity 20 ml are suitable. number of adults, pupae and larvae recorded separately for
each species.
4.3.3 Incubator or climatic chamber, capable of being
In order to bring the sample to a suitable condition for testing,
maintained at 25 + 1 OC (see 4.4.1).
keep it for 24 h in the incubator (4.3.31, controlled at 25 OC, or
in the controlled climate room (4.4.1) in a close-woven cloth
itable for measuring car- bag, or a wide-mouthed jar, tray or open tin, suitably covered
4.3.4 Gas analysis apparatus, su
bon dioxide concentrations to within +0,2 % WVL to prevent the entry or escape of free-living insects, while
allowing exchange of air (see IS0 6639/3, subclause 5.4).
4.4 Apparatus for infra-red gas analysis (see figure 2). Before preparing the airtight sample container (6.21, re-sieve
the sample to remove any insects which may have emerged
during the preparatory period.
4.4.1 Controlled climate room.
Spread the sample thinly on a tray or other suitable flat surface,
The analytical apparatus should be housed in a room having
and leave exposed to air for 15 to 30 min (to permit adsorbed
controlled temperature and relative humidity, preferably at
carbon dioxide to escape). Airing is less important for infra-red
25 - + 1 OC and a relative humidity of 70 + 5 %.
analysis, but, if this is not done, the test report (clause 9) shall
mention the fact.
4.4.2 Infra-red gas analyser, with two interchangeable
Immediately before filling the airtight sample container, deter-
measurement ranges for carbon dioxide (0 to 50 PI/I and 0 to
mine the moisture content of the sample by the method
500 PI/I), capable of operating with dry air as the carrier gas
described in IS0 712, using test portions obtained in accord-
supplied by a compressed air cylinder, an air pressure line or a
leakproof diaphragm pump at a flow rate of 2 000 ml/min. ance with IS0 950 or IS0 951.
2
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SIST ISO 6639-4:1997
Iso 6639-4 : 1987 E)
F- .
I
/
G
7
I
I
/
H
J
-
-
__-
._._
K
/
-
-
-
A Airtight container for the test portion
B Hypodermic syringe
C Air intake
D Three-way stopcock
E 4 ml bulb (volume to “0” graduation on tube F)
F Narrow-bore tube graduated in divisions of 0,Ol ml from 0 to 1,00 ml
G 1,5 ml bulb
H Graduation mark
J Mercury reservoir (provided with means for adjusting level in tube F)
K U-tube containing potassium hydroxide solution
L Soda-lime tube, to protect contents of tube K from atmospheric carbon dioxide
Figure 1 - Apparatus for gasometric analysis
3
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SIST ISO 6639-4:1997
IS0 6639-4 : 1987 (El
A Dry air supply (cylinder or air pressure line)
A’ Leakproof diaphragm air pump
B Pressure regulator
C Air washer [bubbler with 10 % (VI/~) sodium hydroxide (NaOH) solution1
D Air desiccator [anhydrous calcium chloride (CaCl$l
E Three-way valves (manual or electric)
F Airtight connections
G Sample container
H Moisture indicator (silica gel with saturation indicator)
J Flowmeter with flow-regulating needle-valve
K Infra-red analyser
M Potentiometric recorder (optional)
N Air outlet
Diagram of apparatus for infra-red gas analysis with operating accessories
Figure 2 -
4
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SIST ISO 6639-4:1997
. IS0 6639-4: 1987 (E)
integration system is required to measure the area of the successive
6.2 Preparation of container and of test portion
peaks and for accurately determining the production of carbon dioxide
in the sample.
Leave the sample container (4.3.1 or 4.4.3) open to allow water
and/or carbon dioxide to escape and then weigh it to the
With analysers having a non-linear scale, the value obtained
nearest 0,l g.
should be converted into microlitres per litre using the analyser
calibration curve.
Pour approximately 300 g of the test sample into the container.
Tap the container to shake the sample down, and add more of
the test sample until the container is completely full.
65 . Number of determinations
Weigh the container containing the test portio n to the nearest
Carry out two determinations on the same test portion.
nd deduce the mass of the test portion
OJ g a
NOTE - Constancv of filling and packing of the sample container is
7 Expression of results
not essential if the infra -red method is used.
7.1 Gasometric method
Seal the container hermetically by means of its airtight closure
(see 4.3.1 or 4.4.3).
7.1 .I Calculation and formula
Return the prepared sample container to the incubator or
The concentration, expressed as a percentage by volume, of
climatic chamber (4.3.3) and leave for 24 h if the carbon dioxide
carbon dioxide in the intergranular air of 1 kg of grain after 24 h
is to be measured by the gasometric method. If the infra-red
incubation at 25 OC is given by the formula
method is to be used, the prepared sample container may be
connected to the gas analyser immediately.
G+C2 loo0
2 Xmo
63 . Determination by the gasometric method
Expel all air from the syringe (4.3.21, insert the needle through
C1 and C2 are the results of the two measurements of the
the rubber septum on the sample container and move the
carbon dioxide concentration, as percentages by volume,
piston of the syringe backwards and forwards several times so
measured on each test portion;
as to mix the air in the needle thoroughly with the atmosphere
is the mass, in grams, of the test portion.
in the container. Draw about 10 ml of the atmosphere in the
m0
container into the syringe and withdraw the needle from the
Take as the result the arithmetic mean of the values obtained
septum.
in the two determinations, if the repeatability conditions
(see 7.1.2) are met.
Promptly transfer a suitable quantity of the gas sample from the
syringe to the gas analysis apparatus (4.3.4). (If the gas sample
cannot be transferred promptly, insert the needle into a rubber
7.1.2 Repeatability
bung.) Determine the concentration of carbon dioxide in the
gas sample, expressing it as a percentage by volume. Repeat
The difference between the results of two determinations
the analysis on the same test portion.
carried out one after the other by the same analyst should not
exceed 0,2 % ( I/l VI.
. Determination by the infra-red method
64
7.2 Infra-red method
Position the valves (4.4.5) so as to isolate the circuit near the
container containing the test portion. After 5 min of scanning
7.2.1 Calculation and formula
with purified air at a rate of 1 Vmin, set the analyser to zero and
to the most sensitive scale (measuring range 0 to 50 pl/ I). The concentration, expressed in microlitres per litre, of carbon
dioxide produced in 1 min in the intergranular air in 1 kg of
Connect the sample container nozzles to the air inlet pipe and
grain is given by the formula
to the analyser (see figure 2).
1000
cx-
Direct the flow of air through the sample by operating the
*0
three-way valves, with the analyser now set on the least sen-
where
sitive scale (measuring range 0 to 500 PI/I). Circulate the
purified air at a rate of 1 l/min through the sample for 15 min.
C is the concentration, in microlitres per litre, of carbon ’
Then switch the analyser to the most sensitive scale (measuring
dioxide produced in 1 min in the intergranular air of the test
range 0 to 50 pi/l). Take the reading, in microlitres per litre per
portion ;
minute, of the emission of carbon dioxide in the sample directly
is the mass, in grams, of the test portion.
from the analyser screen or from the recorder.
Take as the result the arithmetic mean of the values obtained
NOTE - The automatic operation of the valves and sensitivity scales
in the two determinations, if the repeatability conditions
may be performed by an electronic programmer and electric control
valves. The measurement may also be carried out cyclicallv, but an (see 7.2.2) are met.
5
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SIST ISO 6639-4:1997
Table 3 - Interpretation of results obtained by the
7.2.2 Repeatability
gasometric method
The difference between the results of two determinations,
Production of
carried out one after the other by the same analyst, should not
carbon dioxide,
exceed 2 ~l/Wmin).
% co;1 WV), Interpretation
for 1 kg after
24 h incubation
8 Interpretation of results
Probably no infestation present. Repeat
less than 0,2
test on another sample to confirm.
I I I
Possible light infestation. Repeat test on
8.1 Gasometric method
For wheat, peas, split peas, haricot beans, butter beans,
polished rice, small yellow maize, and similar small huskless
Grain unsuitable for storage longer than
hard grains, tested by the gasometric method, the interpret-
ation given in table 1 applies.
Moderate to heavy infestation. Grain
0,6 to 0,9
should be fumigated immediately.
I I I
-- _~----
I -~ _____I- I_____ -- ----
NOTE - For other grains, it is necessary to make a correction for the
Heavy infestation. Grain in dangerous
characteristic volume of interstitial air and the observed carbon dioxide I,0 and higher
condition and highly unsuitable for storage.
I I I
concentration should be multiplied by the correction factor. Some cor-
rection factors are :
-
linseed : 0,89
Table 2 - Interpretation of results obtained by the
infra-red method
- large white maize : 1 ,I8
- barley: I,25
Rate of
-
carbon dioxide
oats : I,39
production, Interpretation
lA/(l. min),
for 1 kg of grain
8.2 Infra-red method
Probably no infestation present. Persistent
The interpretation given in table 2 applies.
small peaks could indicate a very light
less than I,0
infestation, Repeat test on another sample
to confirm.
___-__ . --.---- -~--- - - --- --
9 Test report Possible light infestation. Repeat test on
I,0 to I,9
another sample to confirm.
~_---- - - --- -- ---
The test report shall show the method used, the number of
Light to moderate infestation. Grain
determinations carried out, and the results obtained. It shall
2,o to 3,9 unsuitable for storage longer than
also mention any operating details not specified in this part of 2 months without treatment.
-_-.--------- -~ .---.
IS0 6639, or regarded as optional, together with details of any
Moderate to heavy infestation. Grain
4,0 to 5,9
incidents likely to have influenced the results.
should be fumigated immediately.
I I
Heavy infestation. Grain in dangerous
The test report shall include all the information necessary for 6,0 and higher
condition and highly unsuitable for storage.
I I I
the complete identification of the sample.
6
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SIST ISO 6639-4:1997
IS0 6639-4 : 1987 (E)
Section two: Ninhydrin method
10 Principle 13 Procedure
Crushing a test portion, from which any visible living insects
13.1 Preparation of test sample and test portion
have been removed, against white paper impregnated with
ninhydrin.
Use the sieve (11.1) to remove all foreign matter and free
insects from the sample. If required, the free insects may be
When an infested dry grain is crushed, the amino acids in the
identified and counted according to species and stage.
body fluid of insects react with the ninhydrin in the paper to
give a purple spot, but the amino acids of the grain are not
Weigh the sifted sample and divide it, using the grain sample
released and do not react.
divider (11.31, to obtain the test portions required (see 13.3 and
clause 15). Each test portion should contain at least
- Grain with a high moisture content may cause a reaction itself
NOTE
1 000 grains (see IS0 520). Test portions of large grains should
after 2 or 3 days.
be kibbled and resifted before testing.
Counting of the purple spots on the paper. The number of
Weigh a test portion and/or count the number of grains in it.
spots is taken to indicate the level of hidden infestation in the
Prepare the infestation detector (11.4) and pass the test portion
sample.
through it in accordance with the manufacturer’s instructions.
13.2 Determination
11 Apparatus
Remove the paper strip corresponding to the test from the
detector, taking care to handle only the ends of the strip as
11.1 Sieve (see 4.1). amino acids on the skin of the fingers also react with ninhydrin
to give purple stains (this may be obviated by wearing of
surgical gloves or using tweezers), and allow time for purple
11.2 Kibbling device, if required, to partially break large spots to develop. At 20 OC and at higher ambient tempera-
grains. tures, purple spots develop within 1 h, although they can take
up to 24 h to reach maximum intensity. At lower temperatures,
or if more rapid development is required, the paper can be
11.3 Grain sample divider (see IS0 950).
heated in an oven maintained at 50 OC, or it can be passed
cautiously (to prevent burning) over a spirit-lamp flame or elec-
tric light bulb.
11.4 Infestation detector, manually or electrically
operated, which consists essentially of two rough surfaced When purple spots have developed, mark the boundary of each
steel rolls 0,75 mm apart, between which passes a continuous with a pencil line, taking care to distinguish spots which may be
strip of ninhydrin-treated paper (see figure 3). so close as almost to merge.
NOTE - The Ashman Simon apparatus is suitable. Ignore any spots on the paper which are not purple in colour.
Count the number of marked spots.
11.5 Ninhydrin-treated paper
13.3 Number of determinations
Use a roll of white paper 57 mm wide and 50 m long, already
impregnated with ninhydrin, or prepare as follows.
Carry out two determinations on the same test sample. (See
also clause 15.)
Pass the untreated paper through a 10 g/l solution of ninhydrin
in industrial denaturated alcohol. Roll the paper up and leave it
to dry at 20 to 25 OC and 40 to 60 % relative humidity, in a dark
place for at least 3 days. Wrap the dry treated roll in metal foil
14 Expression of results
and store away from light, if possible at 20 to 25 OC and 40 to
60 % relative humidity. Under these conditions, the ninhydrin-
Express the infestation as the number of hidden insects per
treated paper will remain stable for 2 to 3 years.
kilogram or per 100 grains, and take as the result the arithmetic
mean of the two determinations.
11.6 Balance, accurate to 0,l g.
15 interpretation of results
If no insects are detected in the first pair of test portions, the
12 Sampling
test should be repeated with up to a total of 10 test portions
before it can be reasonably concluded that the grain is free
Use samples obtained as described in IS0 6639/2.
7
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SIST ISO 6639-4:1997
IS0 6639-4 : 1987 (E)
immediate treatment. However, before taking any action, it
from infestation. Even then, it should be remembered that eggs
should be determined whether the grain has already been effec-
and small larvae can escape detection by the method. There-
tively treated, and how recently. This is because dead insects
fore, if it is desired and practical, apparently infestation-free
continue to give positive results by the method until their body
grain should be tested again after 2 to 4 weeks.
fluids have dried up. A large dead insect can take several weeks
to dry out.
The efficiency of the method also varies according to the
species of insect and size and type of grain under test. It is
doubtful whether a correction coefficient valid for different
16 Test report
grain types and different insect species can, or should, be
recommended or whether it is necessary in commercial
The test report shall show the method used, the number of
practice.
determinations carried out, and the results obtained. It shall
In general, a positive result should be taken to indicate that the also mention any operating details not specified in this part of
IS0 6699, or regarded as optional, together with details of any
grain is unsafe for storage. One purple spot represents one
insect in the test portion, and relatively few purple spots incidents likely to have influenced the results.
occurring irregularly on the paper, if followed by similar results
The test report shall include all the informa tion necessary for
from several test portions, indicate a light to moderate infes-
the complete identification of the sample.
tation. Many purple spots indicate a heavy infestation requiring
8
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SIST ISO 6639-4:1997
IS0 6639-4 : 1987 (El
*.
.
Pu rple spots
*: 0
on
paper
0
0
x
z
n
0
0
.._
0
0
5
A-\
~-, Grain sample
Roll of ninhydrin-
/-treated paper
Steel rolls k
J Used paper exit
L Crushed grain
Figure 3 -
Apparatus for ninhydrin detection of hidden insect infestation
9
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SIST ISO 6639-4:1997
IS0 6639-4: 1987 (E)
Section three: Whole grain flotation method
17 Principle 21 Procedure
Hidden insect infestation reduces the mass of grain. When a 21.1 Preparation of test sample and test portion
mixture of sound and infested grains is immersed in a test
Use the sieve (18.3) to remove all foreign matter from the
solution in which sound grains just sink, infested grains float to
sample. Weigh the sifted sample and divide it, using the grain
the surface. The separation is usually imperfect because grains
sample divider (18.5), into test portions, each containing about
containing early instar larvae tend to sink, and un-infested
500 grains. Count the grains in a test portion.
grains with air pockets under the testa or some other defect
may float. Floating grains are dissected, to confirm the
presence or absence of insects.
21.2 Determination
Place the test portion in the beaker (18.6) containing the test
solution. Mix thoroughly and allow to stand for 10 min, stirring
18 Apparatus
briefly at 1 min intervals to release air bubbles trapped by the
grains. When the grains have settled for the last time, use the
18.1 Hydrometer floats, to measure relative densities in the skimmer (18.7) to remove all floating grains. Sort out and count
all grains bearing visible evidence of insect infestation
range 1,100 to 1,300.
‘ (“windows” in the testa or tunnels visible through it). Cut open
the remaining grains with a suitable instrument, and count
18.2 Measuring cylinder, of capacity 500 ml.
those found to contain insect larvae, pupae or adults.
18.3 Sieve (see 4.1).
21.3 Number of determinations
18.4 Balance, accurate to 0,Ol g.
Carry out two determinations on the same test sample.
Grain sample divider (see IS0 950).
18.5
22 Expression of results
18.6 Beaker, of capacity 1 000 ml.
22.1 Calculation
Skimmer, for removing floating grains. Express the infestation as a percentage of grains which are in-
18.7
fested and take as the result the arithmetic mean of the two
determinations.
19 Sampling
22.2 Repeatability
Use samples obtained as described in IS0 6639/2.
The difference between the result of either determination and
the mean shall not exceed the limit indicated in figure 5. If this
limit of repeatability is exceeded, repeat the determination on
other test portions until the requirement is satisfied.
20 Test solution
A suitable test solution can be prepared by dissolving sodium
silicate, ammonium nitrate or glycerol in water. The quantity of 23 interpretation of results
solute required to make 1 000 ml of test solution of approxi-
In view of the limitations referred to in clause 17, the method is
mately the correct relative density can be calculated by
most likely to produce an underestimate of the level of infes-
reference to figure 4. Check the relative density of the solution
tation present. Therefore, results are of qualitative, rather than
by using a suitable hydrometer float (18.1) and the measuring
quantitative, value. One of the more accurate methods should
cylinder (18.2). If necessary, add small amounts of solute or
be used if quantitative results are important.
water until the relative density is within +0,005 of that
required.
NOTE - As grain densities vary according to type, variety and other 24 Test report
factors, the required relative densities of test solutions also vary.
Where practical, the required relative density should be determined by
The test report shall show the method used, the number of
experiment. The following values for relative densities of test solutions
determinations carried out, and the results obtained. It shall
are intended only as a guide:
also mention any operating details not specified in this part of
-
wheat: 1,15 IS0 6639, or regarded as optional, together with details of any
incidents likely to have influenced the results.
-
maize and sorghum : I,19
-
milled rice : I,27
The test report shall include all the information
...
ISO
6639-4
NORME INTERNATIONALE
Première édition
1987-02-01
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEXflYHAPOAHAFl OPrAHM3A~MR Il0 CTAH)JAPTM3A~MM
Céréales et légumineuses - Détermination de
I’infestation cachée par les insectes -
Partie 4:
Méthodes rapides
Determination of hidden insect infesta tion -
Cereals and pulses -
Part 4: Rapid methods
Numéro de référence
ISO 6639-4: 1987 (F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est normalement confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comite membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique cr& à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 6639-4 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles ahmen taires.
La section cinq annule et remplace la Norme internationale ISO 1162-1975.
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la dernière édition.
0 Organisation internationale de normalisation, 1987
0
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 6639-4 : 1987 (F)
NORME INTERNATIONALE
Céréales et légumineuses - Détermination de
I’infestation cachée par les insectes -
Partie 4:
Méthodes rapides
0 Introduction
Section deux : Méthode à la ninhydrine (chapitres 10 à 16)
La présente Norme internationale décrit des méthodes de
La méthode est applicable à tout grain sec favorable à une’
détermination de I’infestation cachée par les insectes, dans les
infestation interne, tel que le blé, le sorgho, le riz et les grains
céréales et les légumineuses. Elle comprend les parties
de taille similaire. Les gros grains comme le maïs doivent être
suivantes :
partiellement concassés avant l’analyse. Ce traitement mécani-
que des gros grains peut libérer ou détruire une partie des
Partie 1: Principes généraux.
insectes, ce qui rend l’interprétation des résultats peu fidèle. Le
nombre d’oeufs et des premiers stades larvaires peut être sous-
Partie 2: Échantillonnage.
estimé mais, sur ce point, la méthode n’est pas moins efficace
Partie 3: Méthode de référence.
que les autres.
Partie 4: Méthodes rapides.
Section trois: Mbthode par flottation des grains entiers
(chapitres 17 à 24)
1’ Objet et domaine d’application
La méthode convient pour détecter I’infestation cachée dans la
La présente partie de I’ISO 6639 spécifie cinq méthodes rapides
plupart des céréales et des légumineuses, mais seulement de
d’estimation du degré d’infestation cachée ou de detection de
façon qualitative.
la présence d’insectes dans un échantillon de céréales ou de
légumineuses.
Section quatre : Méthode acoustique (chapitres 25 à 31)
NOTE - Les caractéristiques guidant le choix d’une méthode rapide
La méthode convient pour détecter les insectes vivants et les
sont résumées dans le tableau de I’ISO 6639/1.
larves se nourrissant à l’intérieur des grains. Elle ne permet pas
de détecter les larves ou les adultes morts, ni les oeufs ou les
Section un: MAthode par détermination du dbgagement
nymphes (stades inactifs).
de dioxyde de carbone (chapitres 3 à 9)
La méthode est initialement destinée aux grains entiers. Elle
Section cinq : MÉithode aux rayons X (chapitres 32 à 36)
n’est pas applicable
La méthode convient pour détecter les larves et les adultes,
a) aux produits dérivés de grains finement broyés, car il
vivants ou morts, à l’intérieur des grains. Les insectes récem-
existe un risque d’aspiration de particules du produit avec
ment tués (par exemple, par une fumigation) peuvent être diffi-
les échantillons d’air, ou
ciles à distinguer de ceux qui sont encore en vie.
b) aux grains et à leurs produits, quand ils ont une teneur
en eau superieure à 15 % (mlm) à cause du risque d’interfé-
2 Références
rence avec les résultats de la mesure du dioxyde de carbone
produit par les grains et les micro-organismes.
ISO 520, C&&ales et legumineuses - Détermination de la
masse de I m grains.
De plus, la méthode ne peut être utilisée pour mesurer rapide-
ment la production de dioxyde de carbone des grains sur les-
ISO 565, Tamis de contrôle -
TISSUS métalliques, tôles perfo-
quels le gaz est déjà adsorbé en grande quantité, par exemple
rees et feuilles électroformées - Dimensions nominales des
pour les grains stockés en atmosphère confinée, ou lorsqu’il
ouvertures.
existe des signes extérieurs évidents de forte infestation.
I SO 712, Céréales et produits cerealiers - Determina tion de la
La méthode peut être utilisée pour le grain broyé grossiére-
teneur en eau (Methode de référence pratique).
ment, pourvu que le produit ait été tamisé avant l’analyse pour
éliminer les particules fines et les insectes libres.
ISO 950, Céréales - khan tillonnage (des grains J.
La méthode ne permet pas de détecter la présence d’insectes
ISO 951, Légumineuses en sacs - Échantillonnage.
morts à tous les stades de leur développement.
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 6639-4: 1987 (F)
Section un: Méthode par détermination du dégagement de
dioxyde de carbone
4.4.2 Analyseur de gaz à infrarouge, avec deux étendues
3 Principe
de mesure pour le dioxyde de carbone, commutables (0 à
50 @A et 0 à 500 pl/l) et pouvant fonctionner avec de l’air sec
Incubation d’une prise d’essai du produit à température fixe
déterminée dans un récipient étanche au gaz, et estimation, par en tant que gaz vecteur obtenu à partir de bouteilles d’air com-
un procédé gazométrique ou infrarouge, de la quantité de primé, d’une conduite d’air sous pression ou d’une pompe à
membrane étanche, permettant d’atteindre un débit de
dioxyde de carbone produit pendant un intervalle de temps
déterminé, assimilée au métabolisme respiratoire du produit. 2 000 ml/min.
NOTE - Cette méthode est basée sur un travail de recherche qui a
4.4.3 Récipients à échantillons étanches, n’excédant pas
montré que la respiration peut être utilisée pour détecter les insectes
750 ml de capacité. Ces récipients sont constitués par un cylin-
présents dans les produits, et que le volume d’air intergranulaire du
dre réalisé dans un matériau étanche aux gaz, de 100 mm de
grain en vrac tassé est approximativement constant. La respiration
diamètre environ, obturé à la partie inférieure et pouvant rece-
naturelle du grain sec ou d’un produit du grain, est très faible. Celle des
voir un couvercle amovible à fermeture étanche à la partie supé-
insectes est beaucoup plus élevée et le dégagement de dioxyde de car-
rieure (voir 4.3.1). Le cylindre est muni de deux orifices avec
bone dans du grain sec ou dans un produit dérivé est un signe d’infes-
ajutage pour l’introduction de l’air à la partie inférieure après
tation si toutes les précautions ont été prises pour éviter toute pollution
raccordement à la canalisation d’air purifié et l’expulsion à la
extérieure et pour s’assurer que I’adsorption du dioxyde de carbone par
le grain est réduite au minimum.
partie supérieure (voir figure 2).
4.4.4 Source d’air comprimé (canalisation d’air sous pres-
sion, bouteille d’air liquide, pompe à membrane) avec un déten-
4 Appareillage
deur. Une vanne de réglage du débit et un débitmètre sont
incorporés au circuit d’air pour la régulation.
4.1 Tamis, à ouverture de maille laissant passer les fines par-
4.4.5 Vannes à trois voies, à commande manuelle ou élec-
ticules et les insectes, mais retenant le produit à analyser (voir
trique.
ISO 565).
4.4.6 Épurateur et dessiccateur d’air, installés sur le circuit
4.2 Balance, précise à 0,l g près.
en amont du récipient à échantillons. L’épurateur est constitué
par un flacon laveur à solution d’hydroxyde de sodium à 10 %
(mlm). Le dessiccateur contient un agent déshydratant, par
4.3 Appareillage pour l’analyse gazométrique (voir
exemple du chlorure de calcium.
figure 1).
4.4.7 Indicateur d’air humide, placé entre le récipient à
4.3.1 Récipients à échantillons étanches, ne dépassant
échantillons et l’analyseur (gel de silice avec indicateur de satu-
pas 750 ml de capacité. Chaque récipient doit être fermé avec
ration).
un bouchon étanche muni d’un septum en caoutchouc.
4.3.2 Seringues et aiguilles, pour prélever des échantillons
5 Échantillonnage
de l’air intergranulaire. La seringue doit être complètement
étanche et doit avoir une capacité suffisante pour l’analyse.
Utiliser un échantillon obtenu comme décrit dans I’ISO 6639/2.
Toutes les seringues en verre, de 20 ml de capacité, con-
viennent.
4.3.3 Incubateur ou enceinte climatique, susceptible de
6 Mode opératoire
maintenir une température de 25 k 1 OC (voir 4.4.1).
6.1 Préparation de l’échantillon pour essai
Utiliser le tamis (4.1) pour éliminer les particules fines et les
insectes libres de l’échantillon. Si nécessaire, identifier les
insectes et compter le nombre d’adultes, de nymphes et de lar-
ves pour chaque espèce.
4.4 Appareillage pour l’analyse par infrarouge (voir
figure 2).
Pour parvenir progressivement aux conditions d’analyse, placer
l’échantillon pendant 24 h dans l’incubateur (4.3.3) ou la cham-
bre climatisée (4.4.1) à 25 OC, dans un sac en tissu à maille ser-
4.4.1 Enceinte climatique
rée ou un bocal à large ouverture, grillagé ou à couvercle
ouvert, recouvert par un dispositif étanche aux insectes, mais
L’appareillage d’analyse doit être installé dans une pièce à
température et humidité relative contrôlées, de préférence à permettant les échanges gazeux (voir ISO 6639/3, para-
25 - + 1 OC et 70 $s 5 % d’humidité relative. graphe 5.4).
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
. Is06639-4: 1SW)
F-
I
/
G
/
H
-
-
me-
-
.-
-
-
-
-
--
-.-
k
I
A Récipient étanche pour la prise d’essai
B Seringue hypodermique
Tube d’admission de l’air
C
D Robinet à trois voies
E
Réservoir d’air de 4 ml (volume mesuré à la graduation ((0 N du tube FI
F Tube capillaire gradué en 100 parties égales de 0 à 1,00 ml
G
Bulbe de 1,5 ml
H Graduation repére
J Réservoir à mercure (raccordé avec un systéme permettant d’ajuster le niveau du mercure dans le tube F)
K Tube en U contenant une solution d’hydroxyde de potassium
L Tube à cristaux de soude pour protéger le contenu du tube K du dioxvde de carbone atmosphérique
Figure 1
- Exemple d’appareil d’analyse gazométrique
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 6639-4 : 1987 (FI
-
-
-
K
E E
t 1 1
1
.N
,H] 'L
.
A Source d’air sec (bouteille ou ligne d’air sous pression)
A’ Pompe à membrane étanche aux gaz
B Détendeur de pression
Épurateur d’air [flacon laveur avec une solution d’hydroxyde de sodium (NaOH) à 10 % Ww)l
C
D Dessiccateur d’air [chlorure de calcium 1 CaCl$, anhydrel
Vannes à trois voies (manuelles ou électriques)
E
F Raccords rapides étanches
G Récipient pour la prise d’essai
H Indicateur d’air humide (gel de silice avec indicateur de saturation)
J Débitmètre avec vanne à pointeau de réglage
K Analyseur à infrarouge
M Enregistreur potentiométrique (facultatif)
N Sortie d’air
Figure 2 - Schéma de l’appareillage pour l’analyse du dégagement de dioxyde de carbone par infrarouge
avec ses accessoires
4
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 6639-4 : 1987 (FI
l’analyseur après 5 min de purge des conduits avec de l’air puri-
Avant de préparer le récipient étanche (6.21, tamiser I’échantil-
fié au débit de 1 I/min, l’appareil étant placé sur l’échelle de
Ion pour enlever les insectes adultes libres.
plus grande sensibilité (étendue de mesure de 0 à 50 @/II.
Étaler l’échantillon en couche mince sur un plateau ou sur une
Relier les ajutages du récipient contenant la prise d’essai à la
autre surface plane appropriée et le laisser exposé à l’air pen-
dant 15 à 30 min (pour permettre au dioxyde de carbone conduite d’arrivée d’a ir et à l’analyseur (voir figure a.
adsorbe de s’échapper). L’aération est moins importante pour
le procédé à infrarouge mais, si elle n’est pas réalisée, le procès- Diriger le flux d’air à travers la prise d’essai en manoeuvrant les
verbal d’essai (chapitre 9) doit le mentionner. vannes à trois voies, avec l’analyseur placé sur l’échelle de sen-
sibilité la plus faible (étendue de mesure de 0 à 500 pl/l); faire
Immédiatement avant de remplir le récipient étanche, détermi- circuler l’air purifié du débit de 1 I/min à travers la prise d’essai
pendant 15 min. Commuter ensuite l’analyseur sur I’echelle de
ner la teneur en eau de l’échantillon par la méthode de I’ISO 712
sur des échantillons prélevés conformément aux indications de grande sensibilite (étendue de mesure de 0 à 50 @/II. Effectuer
la lecture du dégagement permanent de dioxyde de carbone
I’ISO 950 ou de I’ISO 951.
dans la prise d’essai directement sur le cadran de l’analyseur, en
microlitres par litre par minute, ou sur l’enregistreur.
6.2 Préparation du récipient et de la prise d’essai
NOTE - L’automatisation des différentes opérations peut être réalisée
par un programmateur électronique et des électro-vannes. La mesure
Laisser le récipient à échantillons (4.3.1 ou 4.4.3) ouvert pour
peut également s’effectuer par séquences mais cela nécessite un
permettre l’élimination de l’eau et/ou du dioxyde de carbone,
système d’intégration des surfaces des pics successifs pour déterminer
puis le peser à 0,l g près.
avec précision le dégagement de dioxyde de carbone dans la prise
d’essai.
Verser approximativement 300 g d’échantillon pour essai dans
le récipient. Secouer le récipient pour tasser le produit par
Avec les appareils à échelle non linéaire, la valeur lue au cadran
vibration et ajouter à nouveau une fraction supplémentaire de
est transformée en microlitres par litre, en utilisant la courbe
I’echantillon pour essai jusqu’au remplissage complet.
d’étalonnage de l’analyseur.
Peser le récipient renfermant la prise d’ essai à 0,l g prés, et en
I
.
déduire la masse de la prise d’essai. 65 Nombre de déterminations
Effectuer deux déterminations sur le même échantillon pour
NOTE - L’homogénéité du remplissage et du tassement du produit
dans le récipient n’est pas essentielle quand la méthode d’analyse par essai.
infrarouge est utilisée.
Fermer hermétiquement le récipient avec le dispositif
Expression des résultats
prévu pour chaque procédé (voir 4.3.1 ou 4. 4.3).
Placer le récipient contenant la prise d’essai dans l’incubateur
7.1 Procédé gazométrique
ou la chambre climatisée (4.3.3) pendant 24 h pour l’analyse
par le procédé gazométrique. Avec le procédé à infrarouge, le
récipient est relié directement à l’appareillage d’analyse.
7.1.1 Mode de calcul et formule
La concentration, exprimée en pourcentage en volume, de
dioxyde de carbone dans l’air intergranulaire de 1 kg de grains
63 . Analyse par le procédé gazométrique
aprés 24 h d’incubation à 25 OC, est égale à
Évacuer l’air de la seringue (4.3.21, traverser avec l’aiguille le
septum en caoutchouc du récipient contenant la prise d’essai,
Cl + c-2 1 000
actionner le piston plusieurs fois pour mélanger l’air de la serin-
2 Xn?o
gue avec l’atmosphère du récipient. Pomper environ 10 ml de
I’atmosphére du récipient dans la seringue et retirer l’aiguille du
où
septum.
Cl et sont les résultats des deux mesures de concentra-
c2
tion, en pourcentage en volume, sur chaque prise d’essai ;
Transférer rapidement la quantité convenable de l’échantillon
gazeux de la seringue dans l’appareil d’analyse (4.3.4). (Si
m. est la masse, en grammes, de la prise d’essai.
l’échantillon gazeux ne peut être transféré rapidement, planter
l’aiguille dans un bouchon de caoutchouc.) Déterminer la con-
Prendre comme résultat la moyenne arithmétique des valeurs
centration de dioxyde de carbone dans l’échantillon gazeux en
obtenues dans les deux déterminations si les conditions de
l’exprimant en pourcentage en volume. Répéter l’analyse sur la
répétabilité sont remplies (voir 7.1.2).
même prise d’essai.
7.1.2 Répétabilité
64 . Analyse par le procédé à infrarouge
La différence entre les résultats de deux déterminations effec-
tuées rapidement l’une aprés l’autre par le même analyste ne
Placer les vannes (4, ,4.5) de manière à isoler le circuit qui passe
contenant la prise d’essai. Régler le zéro de doit pas excéder 0,2 % ( Vl V).
a travers le récipient
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 6639-4 : 1987 (FI
7.2 Procédé à infrarouge Tableau 1 - Interprétation des résultats de l’analyse
par le procédé gazométrique
7.2.1 Mode de calcul et formule
Production
de dioxyde
La concentration, exprimée en microlitres par litre, de dioxyde
de carbone,
% CO2 WV), Interprétation
de carbone dégagé en 1 min dans l’air intergranulaire dans 1 kg
pour 1 kg
de grain, est égale à
après 24 h
d’incubation
1000
Probablement pas d’infestation. Répéter
cx-
mg moins de 0,2 l’analyse sur un autre échantillon, pour
confirmer.
_~--___-- - - - -
où
Légère infestation possible. Répéter
l’analyse sur un autre échantillon pour
02
C est la concentration, en microlitres par litre, de dioxyde
confirmer.
-_-~ -.-- _
de carbone dégagé en 1 min dans l’air intergranulaire de la
Infestation faible à moyenne. Grain
prise d’essai ;
0,3 à 0,5 impropre à une conservation supérieure à
2 mois sans traitement.
--- ---
m. est la masse, en grammes, de la prise d’essai.
Infestation moyenne à forte. Le grain doit
0,6 à 0,9
être désinsectisé immédiatement.
--~--
Prendre comme résultat la moyenne arithmétique des valeurs ----
lnfestation forte. Grain en mauvais état
obtenues dans les deux déterminations, si les conditions de
1,O et plus
sanitaire et impropre au stockage.
répétabilité sont remplies (voir 7.2.2).
Tableau 2 - Interprétation des résultats de l’analyse
7.2.2 Répétabilité
par le procédé à infrarouge
La différence entre les résultats de deux déterminations, effec-
Production
de dioxyde
tuées rapidement l’une après l’autre par le même analyste, ne
de carbone,
doit pas excéder 2 pl/(l.min). Interprétation
@/(l.min),
pour 1 kg
de grain
Probablement pas d’infestation. De petits
pics persistants peuvent indiquer une très
moins de 1.0
8 Interprétation des résultats
faible infestation. Répéter l’analyse sur un
autre échantillon, pour confirmer.
----~
lnfestation faible possible. Répéter l’analyse
8.1 Procédé gazométrique
l,o à 1,9
sur un autre échantillon pour confirmer.
-_ ~-
Pour le blé, les pois cassés, les haricots, les haricots beurre, le
Infestation faible à moyenne. Grain
riz poli, le mai’s jaune et d’autres grains durs semblables, sans 2,0 à 3,9 impropre au stockage de plus de 2 mois
sans désinsectisation.
enveloppe, analysés par le procédé gazométrique, I’interpréta-
--- --- .- _-~-
tion des résultats est donnée dans le tableau 1 s
Infestation moyenne à forte. Le grain doit
4,0 à 5,9
être désinsectisé immédiatement.
~ -. --~
NOTE - Pour les autres grains, il est nécessaire de faire une correction
Forte infestation. Grain en mauvais état
6,0 et plus
pour tenir compte du volume spécifique de l’air interstitiel. La concen-
sanitaire et impropre au stockage.
tration en dioxyde de carbone est multipliée dans ce cas par un facteur
de correction. Quelques-uns des facteurs correctifs sont les suivants :
-
graines de lin : 0,89
9 Procès-verbal d’essai
-
maÏs blanc à gros grains : 1,18
Le procès-verbal d’essai doit indiquer la méthode utilisée, le
-
orge : 1,25 nombre de déterminations effectuées et le résultat obtenu. II
doit mentionner, en outre, tous les détails opératoires non
-
avoine : 1,39
prévus dans la présente partie de I’ISO 6639 ou facultatifs, ainsi
que les incidents éventuels susceptibles d’avoir agi sur le
résultat.
8.2 Procédé à infrarouge
Le procès-verbal d’essai doit donner tous les renseignements
L’interprétation est donnée dans le tableau 2. nécessaires à l’identification complète de l’échantillon.
6
---------------------- Page: 8 ----------------------
. ISO 6639-4 : 1987 (FI
Section deux: Méthode à la ninhydrine
13 Mode opératoire
10 Principe
d’essai, débarrassée au préalable des
Broyage d’une prise
13.1 Prdparation de l’échantillon pour essai et
m blanc imprégné de ninhydrine.
insectes libres, contre un papier
prise d’essai
Quand un grain infesté est broyé, les acides aminés des fluides
Utiliser le tamis (11.1) pour séparer les particules étrangères et
corporels de l’insecte réagissent avec la ninhydrine du papier en
les insectes libres de l’échantillon. Si nécessaire, identifier et
donnant une tache pourpre. Les acides aminés du grain ne sont
compter les insectes libres par espèce et par stade.
pas libérés et ne réagissent pas.
Peser l’échantillon tamisé et le diviser en utilisant le diviseur
NOTE - Un grain à teneur en eau élevée peut réagir avec le papier
(11.3) pour obtenir les prises d’essai requises (voir 13.3 et
après 2 ou 3 jours.
chapitre 15). Chaque prise d’essai doit contenir au moins
1 000 grains (voir ISO 520). Les prises d’essai des grains de ’
Comptage des taches pourpres sur le papier. Le nombre de
grande taille sont concassées grossiérement et tamisées une
taches indique le niveau de I’infestation cachée dans I’échan-
nouvelle fois.
tillon.
Peser une prise d’essai et/ou compter le nombre de grains
qu’elle contient. Préparer le détecteur d’infestation (11.4) et
passer la prise d’essai dans l’appareil en se conformant aux indi-
11 Appareillage
cations du fabricant.
11.1 Tamis (voir 4.1).
13.2 Détermination
11.2 Appareil de concassage, si nécessaire, pour concas-
Enlever la bande de papier correspondant à la prise d’essai en
ser grossièrement les grains de grande taille.
prenant soin de ne toucher que le bout de la bande, car les
acides aminés de la peau réagissent également avec la ninhy-
drine en donnant des taches pourpres (ceci peut être évité en
11.3 Diviseur d’échantillons pour grains (voir ISO 950).
utilisant des pinces ou des gants de chirurgien), et attendre le
temps nécessaire à l’apparition des taches. À 20 OC et
11.4 Détecteur d’infestation, manuel ou électrique, con-
au-dessus, les taches pourpres apparaissent en 1 h, bien que
sistant essentiellement en deux rouleaux aplatisseurs en acier, à l’intensité de couleur soit maximum au bout de 24 h. À tempé-
surface rugueuse, écartés de 0,75 mm, et entre lesquels passe
rature plus basse, ou si l’on veut obtenir un développement
une bande de papier imprégnée de ninhydrine (voir figure 3).
plus rapide, le papier peut être chauffe à l’étuve à 50 OC ou
passé avec précaution (pour éviter I’ignition) au-dessus de la
flamme d’une lampe à alcool ou prés d’une lampe électrique à
NOTE - L’appareil de Ashman Simon convient.
incandescence.
11.5 Papier traité à la ninhydrine
Quand les taches pourpres sont apparues, entourer chacune
d’elles avec un cercle en prenant soin de distinguer les taches
Utiliser un rouleau de papier blanc de 57 mm de large et 50 m
qui peuvent parfois fusionner.
de long, déjà imprégné avec de la ninhydrine ou préparé de la
façon suivante.
Ne pas tenir compte taches sur le papier qui ne sont pas de
couleur pourpre.
Faire passer le papier non traité dans une solution à 10 g/l de
ninhydrine dans un alcool industriel dénaturé. Enrouler le papier Compter le nombre de points repérés.
et le laisser sécher à l’obscurité pendant au moins 3 jours, entre
20 et 25 OC et 40 a 60 % d’humidité relative. Envelopper le rou-
leau de papier traité dans une feuille métallique et le stocker à
13.3 Nombre de déterminations
l’abri de la lumière, si possible entre 20 et 25 OC et entre 40 et
60 % d’humidité relative. Dans ces conditions, le papier reste
Effectuer deux déterminations sur le même échantillon pour
utilisable pendant 2 à 3 ans.
essai. (Voir également chapitre 15.)
11.6 Balance, précise à 0,l g près.
14 Expression des résultats
12 Ëchantillonnage
Exprimer I’infestation en nombre d’insectes cachés par kilo-
Utiliser des échantillons obtenus comme décrit dans gramme ou par 100 grains et prendre comme résultat la
I’ISO 6639/2. moyenne arithmétique des deux déterminations.
7
---------------------- Page: 9 ----------------------
1s0 6639/4-1986 (FI
15 Interprétation des résultats indiquent la présence d’une faible infestation. Beaucoüp de
taches indiquent une forte infestation et le grain doit être traité
Si aucun insecte n’est détecté dans les deux prises d’essai, immédiatement. Cependant, avant toute décision, il faut déter-
l’essai sera répété jusqu’à obtention d’un total de 10 prises miner si le grain n’a pas déjà été traité et depuis combien de
d’essai avant de conclure que le grain est sain. II ne faut cepen- temps. En effet, les insectes morts continuent à réagir avec la
dant pas oublier que les oeufs et les petites larves peuvent ninhydrine jusqu’à ce que les fluides corporels aient séché. Le
échapper à ce mode de détection. Par conséquent, si c’est pos-
dessèchement d’un insecte peut prendre plusieurs semaines.
sible, le grain apparemment sain peut être de nouveau analysé
2 à 4 semaines plus tard.
L’efficacité de la méthode varie également avec les espèces 16 Procès-verbal d’essai
d’insectes et la taille et le type de grain analysé. II ne semble pas
possible de recommander l’application d’un coefficient de Le procès-verbal d’essai doit indiquer la méthode utilisée, le
correction pour ces différents types de grains et espèces nombre de déterminations effectuées et le résultat obtenu. II
d’insectes. doit mentionner, en outre, tous les détails opératoires non
prévus dans la présente partie de I’ISO 6639 ou facultatifs, ainsi
En général, un résultat positif doit être révélé pour indiquer que que les incidents éventuels susceptibles d’avoir agi sur le
le stockage du grain est hasardeux. Une tache pourpre repré- résultat.
sente un insecte dans la prise d’essai et quelques taches pour-
pres irrégulièrement réparties sur le papier, si elles sont confir- Le procès-verbal d’essai doit donner tous les renseignements
mées par des résultats similaires de plusieurs prises d’essai, nécessaires à l’identification complète de l’échantillon.
---------------------- Page: 10 ----------------------
60 6639-4 : 1987 IF)
Taches pourpres
/FA,: Prise d’essai
Rouleau de papier
traité à la ninhydrir
ie
Rouleaux d’acier A
Sortie du
A papier utilisé
c Grain aplati
Figure 3 -
Exemple d’appareil pour la détection de I’infestation cachée par le papier à la ninhydrine
---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO 6639-4 : 1987 (F)
Section trois: Méthode par flottation des grains entiers
diviseur d’échantillons (18.5) en prises d’essai, contenant cha-
17 Principe
cune environ 500 grains. Compter les grains de la prise d’essai.
L’infestation cachée réduit la masse du grain. Quand un
mélange de grains sains et infestés est immergé dans une solu-
21.2 Détermination
tion de densité appropriée pour que les grains sains coulent
tout juste, les grains infestés flottent à la surface. La séparation
Placer la prise d’essai dans le bécher (18.6) contenant la solu-
est imparfaite, car les grains contenant de jeunes stades larvai-
tion pour l’analyse. Mélanger avec précaution et laisser reposer
res ont tendance à couler, et des grains non infestés avec une
pendant 10 min, en mélangeant briévement à des intervalles de
réserve d’air dans le sillon ou un autre défaut peuvent flotter.
1 min, pour laisser échapper les bulles d’air emprisonnées par
Les grains qui flottent sont disséqués, pour confirmer la pré-
les grains. Quand les grains ont été laissés à reposer une der-
sence ou l’absence d’insectes.
niére fois, retirer les grains qui flottent à l’aide de l’écumoire
(18.7). Trier et compter tous les grains présentant des signes
évidents d’infestation (trous ou tunnels visibles par transpa-
18 Appareillage
rence). Couper les grains restants avec un instrument adéquat
et compter ceux qui contiennent des larves, des nymphes ou
18.1 Densimdtre à liquide, pour mesurer la densité relative
des adultes d’insectes.
dans une gamme de 1,100 à 1,300.
18.2 Éprouvette gradube, de 500 ml de capacité.
21.3 Nombre de déterminations
18.3 Tamis (voir 4.1).
Effectuer deux déterminations sur le même échantillon pour
essai.
18.4 Balance, précise à 0,Ol g près.
18.5 Diviseur d’échantillons pour grains (voir ISO 950).
22 Expression des résultats
18.6 Bécher, de 1 000 ml de capacité.
22.1 Mode de calcul
18.7 Écumoire, pour enlever les grains qui flottent.
.
Exprimer I’infestation en pourcentage en nombre de grains
19 Échantillonnage infestés et prendre comme résultat la moyenne arithmétique
des deux déterminations.
Utiliser des échantillons obtenus comme décrit dans
I’ISO 6639/2.
22.2 Répétabilité
20 Solution pour la flottation La différence entre le résultat de chaque détermination et la
moyenne ne doit pas dépasser la limite indiquée sur la figure 5.
Une solution de densité appropriée est préparée en dissolvant
Si cette limite de répétabilité est dépassée, répéter
...
ISO
6639-4
NORME INTERNATIONALE
Première édition
1987-02-01
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEXflYHAPOAHAFl OPrAHM3A~MR Il0 CTAH)JAPTM3A~MM
Céréales et légumineuses - Détermination de
I’infestation cachée par les insectes -
Partie 4:
Méthodes rapides
Determination of hidden insect infesta tion -
Cereals and pulses -
Part 4: Rapid methods
Numéro de référence
ISO 6639-4: 1987 (F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est normalement confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comite membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique cr& à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 6639-4 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles ahmen taires.
La section cinq annule et remplace la Norme internationale ISO 1162-1975.
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la dernière édition.
0 Organisation internationale de normalisation, 1987
0
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 6639-4 : 1987 (F)
NORME INTERNATIONALE
Céréales et légumineuses - Détermination de
I’infestation cachée par les insectes -
Partie 4:
Méthodes rapides
0 Introduction
Section deux : Méthode à la ninhydrine (chapitres 10 à 16)
La présente Norme internationale décrit des méthodes de
La méthode est applicable à tout grain sec favorable à une’
détermination de I’infestation cachée par les insectes, dans les
infestation interne, tel que le blé, le sorgho, le riz et les grains
céréales et les légumineuses. Elle comprend les parties
de taille similaire. Les gros grains comme le maïs doivent être
suivantes :
partiellement concassés avant l’analyse. Ce traitement mécani-
que des gros grains peut libérer ou détruire une partie des
Partie 1: Principes généraux.
insectes, ce qui rend l’interprétation des résultats peu fidèle. Le
nombre d’oeufs et des premiers stades larvaires peut être sous-
Partie 2: Échantillonnage.
estimé mais, sur ce point, la méthode n’est pas moins efficace
Partie 3: Méthode de référence.
que les autres.
Partie 4: Méthodes rapides.
Section trois: Mbthode par flottation des grains entiers
(chapitres 17 à 24)
1’ Objet et domaine d’application
La méthode convient pour détecter I’infestation cachée dans la
La présente partie de I’ISO 6639 spécifie cinq méthodes rapides
plupart des céréales et des légumineuses, mais seulement de
d’estimation du degré d’infestation cachée ou de detection de
façon qualitative.
la présence d’insectes dans un échantillon de céréales ou de
légumineuses.
Section quatre : Méthode acoustique (chapitres 25 à 31)
NOTE - Les caractéristiques guidant le choix d’une méthode rapide
La méthode convient pour détecter les insectes vivants et les
sont résumées dans le tableau de I’ISO 6639/1.
larves se nourrissant à l’intérieur des grains. Elle ne permet pas
de détecter les larves ou les adultes morts, ni les oeufs ou les
Section un: MAthode par détermination du dbgagement
nymphes (stades inactifs).
de dioxyde de carbone (chapitres 3 à 9)
La méthode est initialement destinée aux grains entiers. Elle
Section cinq : MÉithode aux rayons X (chapitres 32 à 36)
n’est pas applicable
La méthode convient pour détecter les larves et les adultes,
a) aux produits dérivés de grains finement broyés, car il
vivants ou morts, à l’intérieur des grains. Les insectes récem-
existe un risque d’aspiration de particules du produit avec
ment tués (par exemple, par une fumigation) peuvent être diffi-
les échantillons d’air, ou
ciles à distinguer de ceux qui sont encore en vie.
b) aux grains et à leurs produits, quand ils ont une teneur
en eau superieure à 15 % (mlm) à cause du risque d’interfé-
2 Références
rence avec les résultats de la mesure du dioxyde de carbone
produit par les grains et les micro-organismes.
ISO 520, C&&ales et legumineuses - Détermination de la
masse de I m grains.
De plus, la méthode ne peut être utilisée pour mesurer rapide-
ment la production de dioxyde de carbone des grains sur les-
ISO 565, Tamis de contrôle -
TISSUS métalliques, tôles perfo-
quels le gaz est déjà adsorbé en grande quantité, par exemple
rees et feuilles électroformées - Dimensions nominales des
pour les grains stockés en atmosphère confinée, ou lorsqu’il
ouvertures.
existe des signes extérieurs évidents de forte infestation.
I SO 712, Céréales et produits cerealiers - Determina tion de la
La méthode peut être utilisée pour le grain broyé grossiére-
teneur en eau (Methode de référence pratique).
ment, pourvu que le produit ait été tamisé avant l’analyse pour
éliminer les particules fines et les insectes libres.
ISO 950, Céréales - khan tillonnage (des grains J.
La méthode ne permet pas de détecter la présence d’insectes
ISO 951, Légumineuses en sacs - Échantillonnage.
morts à tous les stades de leur développement.
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 6639-4: 1987 (F)
Section un: Méthode par détermination du dégagement de
dioxyde de carbone
4.4.2 Analyseur de gaz à infrarouge, avec deux étendues
3 Principe
de mesure pour le dioxyde de carbone, commutables (0 à
50 @A et 0 à 500 pl/l) et pouvant fonctionner avec de l’air sec
Incubation d’une prise d’essai du produit à température fixe
déterminée dans un récipient étanche au gaz, et estimation, par en tant que gaz vecteur obtenu à partir de bouteilles d’air com-
un procédé gazométrique ou infrarouge, de la quantité de primé, d’une conduite d’air sous pression ou d’une pompe à
membrane étanche, permettant d’atteindre un débit de
dioxyde de carbone produit pendant un intervalle de temps
déterminé, assimilée au métabolisme respiratoire du produit. 2 000 ml/min.
NOTE - Cette méthode est basée sur un travail de recherche qui a
4.4.3 Récipients à échantillons étanches, n’excédant pas
montré que la respiration peut être utilisée pour détecter les insectes
750 ml de capacité. Ces récipients sont constitués par un cylin-
présents dans les produits, et que le volume d’air intergranulaire du
dre réalisé dans un matériau étanche aux gaz, de 100 mm de
grain en vrac tassé est approximativement constant. La respiration
diamètre environ, obturé à la partie inférieure et pouvant rece-
naturelle du grain sec ou d’un produit du grain, est très faible. Celle des
voir un couvercle amovible à fermeture étanche à la partie supé-
insectes est beaucoup plus élevée et le dégagement de dioxyde de car-
rieure (voir 4.3.1). Le cylindre est muni de deux orifices avec
bone dans du grain sec ou dans un produit dérivé est un signe d’infes-
ajutage pour l’introduction de l’air à la partie inférieure après
tation si toutes les précautions ont été prises pour éviter toute pollution
raccordement à la canalisation d’air purifié et l’expulsion à la
extérieure et pour s’assurer que I’adsorption du dioxyde de carbone par
le grain est réduite au minimum.
partie supérieure (voir figure 2).
4.4.4 Source d’air comprimé (canalisation d’air sous pres-
sion, bouteille d’air liquide, pompe à membrane) avec un déten-
4 Appareillage
deur. Une vanne de réglage du débit et un débitmètre sont
incorporés au circuit d’air pour la régulation.
4.1 Tamis, à ouverture de maille laissant passer les fines par-
4.4.5 Vannes à trois voies, à commande manuelle ou élec-
ticules et les insectes, mais retenant le produit à analyser (voir
trique.
ISO 565).
4.4.6 Épurateur et dessiccateur d’air, installés sur le circuit
4.2 Balance, précise à 0,l g près.
en amont du récipient à échantillons. L’épurateur est constitué
par un flacon laveur à solution d’hydroxyde de sodium à 10 %
(mlm). Le dessiccateur contient un agent déshydratant, par
4.3 Appareillage pour l’analyse gazométrique (voir
exemple du chlorure de calcium.
figure 1).
4.4.7 Indicateur d’air humide, placé entre le récipient à
4.3.1 Récipients à échantillons étanches, ne dépassant
échantillons et l’analyseur (gel de silice avec indicateur de satu-
pas 750 ml de capacité. Chaque récipient doit être fermé avec
ration).
un bouchon étanche muni d’un septum en caoutchouc.
4.3.2 Seringues et aiguilles, pour prélever des échantillons
5 Échantillonnage
de l’air intergranulaire. La seringue doit être complètement
étanche et doit avoir une capacité suffisante pour l’analyse.
Utiliser un échantillon obtenu comme décrit dans I’ISO 6639/2.
Toutes les seringues en verre, de 20 ml de capacité, con-
viennent.
4.3.3 Incubateur ou enceinte climatique, susceptible de
6 Mode opératoire
maintenir une température de 25 k 1 OC (voir 4.4.1).
6.1 Préparation de l’échantillon pour essai
Utiliser le tamis (4.1) pour éliminer les particules fines et les
insectes libres de l’échantillon. Si nécessaire, identifier les
insectes et compter le nombre d’adultes, de nymphes et de lar-
ves pour chaque espèce.
4.4 Appareillage pour l’analyse par infrarouge (voir
figure 2).
Pour parvenir progressivement aux conditions d’analyse, placer
l’échantillon pendant 24 h dans l’incubateur (4.3.3) ou la cham-
bre climatisée (4.4.1) à 25 OC, dans un sac en tissu à maille ser-
4.4.1 Enceinte climatique
rée ou un bocal à large ouverture, grillagé ou à couvercle
ouvert, recouvert par un dispositif étanche aux insectes, mais
L’appareillage d’analyse doit être installé dans une pièce à
température et humidité relative contrôlées, de préférence à permettant les échanges gazeux (voir ISO 6639/3, para-
25 - + 1 OC et 70 $s 5 % d’humidité relative. graphe 5.4).
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
. Is06639-4: 1SW)
F-
I
/
G
/
H
-
-
me-
-
.-
-
-
-
-
--
-.-
k
I
A Récipient étanche pour la prise d’essai
B Seringue hypodermique
Tube d’admission de l’air
C
D Robinet à trois voies
E
Réservoir d’air de 4 ml (volume mesuré à la graduation ((0 N du tube FI
F Tube capillaire gradué en 100 parties égales de 0 à 1,00 ml
G
Bulbe de 1,5 ml
H Graduation repére
J Réservoir à mercure (raccordé avec un systéme permettant d’ajuster le niveau du mercure dans le tube F)
K Tube en U contenant une solution d’hydroxyde de potassium
L Tube à cristaux de soude pour protéger le contenu du tube K du dioxvde de carbone atmosphérique
Figure 1
- Exemple d’appareil d’analyse gazométrique
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 6639-4 : 1987 (FI
-
-
-
K
E E
t 1 1
1
.N
,H] 'L
.
A Source d’air sec (bouteille ou ligne d’air sous pression)
A’ Pompe à membrane étanche aux gaz
B Détendeur de pression
Épurateur d’air [flacon laveur avec une solution d’hydroxyde de sodium (NaOH) à 10 % Ww)l
C
D Dessiccateur d’air [chlorure de calcium 1 CaCl$, anhydrel
Vannes à trois voies (manuelles ou électriques)
E
F Raccords rapides étanches
G Récipient pour la prise d’essai
H Indicateur d’air humide (gel de silice avec indicateur de saturation)
J Débitmètre avec vanne à pointeau de réglage
K Analyseur à infrarouge
M Enregistreur potentiométrique (facultatif)
N Sortie d’air
Figure 2 - Schéma de l’appareillage pour l’analyse du dégagement de dioxyde de carbone par infrarouge
avec ses accessoires
4
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 6639-4 : 1987 (FI
l’analyseur après 5 min de purge des conduits avec de l’air puri-
Avant de préparer le récipient étanche (6.21, tamiser I’échantil-
fié au débit de 1 I/min, l’appareil étant placé sur l’échelle de
Ion pour enlever les insectes adultes libres.
plus grande sensibilité (étendue de mesure de 0 à 50 @/II.
Étaler l’échantillon en couche mince sur un plateau ou sur une
Relier les ajutages du récipient contenant la prise d’essai à la
autre surface plane appropriée et le laisser exposé à l’air pen-
dant 15 à 30 min (pour permettre au dioxyde de carbone conduite d’arrivée d’a ir et à l’analyseur (voir figure a.
adsorbe de s’échapper). L’aération est moins importante pour
le procédé à infrarouge mais, si elle n’est pas réalisée, le procès- Diriger le flux d’air à travers la prise d’essai en manoeuvrant les
verbal d’essai (chapitre 9) doit le mentionner. vannes à trois voies, avec l’analyseur placé sur l’échelle de sen-
sibilité la plus faible (étendue de mesure de 0 à 500 pl/l); faire
Immédiatement avant de remplir le récipient étanche, détermi- circuler l’air purifié du débit de 1 I/min à travers la prise d’essai
pendant 15 min. Commuter ensuite l’analyseur sur I’echelle de
ner la teneur en eau de l’échantillon par la méthode de I’ISO 712
sur des échantillons prélevés conformément aux indications de grande sensibilite (étendue de mesure de 0 à 50 @/II. Effectuer
la lecture du dégagement permanent de dioxyde de carbone
I’ISO 950 ou de I’ISO 951.
dans la prise d’essai directement sur le cadran de l’analyseur, en
microlitres par litre par minute, ou sur l’enregistreur.
6.2 Préparation du récipient et de la prise d’essai
NOTE - L’automatisation des différentes opérations peut être réalisée
par un programmateur électronique et des électro-vannes. La mesure
Laisser le récipient à échantillons (4.3.1 ou 4.4.3) ouvert pour
peut également s’effectuer par séquences mais cela nécessite un
permettre l’élimination de l’eau et/ou du dioxyde de carbone,
système d’intégration des surfaces des pics successifs pour déterminer
puis le peser à 0,l g près.
avec précision le dégagement de dioxyde de carbone dans la prise
d’essai.
Verser approximativement 300 g d’échantillon pour essai dans
le récipient. Secouer le récipient pour tasser le produit par
Avec les appareils à échelle non linéaire, la valeur lue au cadran
vibration et ajouter à nouveau une fraction supplémentaire de
est transformée en microlitres par litre, en utilisant la courbe
I’echantillon pour essai jusqu’au remplissage complet.
d’étalonnage de l’analyseur.
Peser le récipient renfermant la prise d’ essai à 0,l g prés, et en
I
.
déduire la masse de la prise d’essai. 65 Nombre de déterminations
Effectuer deux déterminations sur le même échantillon pour
NOTE - L’homogénéité du remplissage et du tassement du produit
dans le récipient n’est pas essentielle quand la méthode d’analyse par essai.
infrarouge est utilisée.
Fermer hermétiquement le récipient avec le dispositif
Expression des résultats
prévu pour chaque procédé (voir 4.3.1 ou 4. 4.3).
Placer le récipient contenant la prise d’essai dans l’incubateur
7.1 Procédé gazométrique
ou la chambre climatisée (4.3.3) pendant 24 h pour l’analyse
par le procédé gazométrique. Avec le procédé à infrarouge, le
récipient est relié directement à l’appareillage d’analyse.
7.1.1 Mode de calcul et formule
La concentration, exprimée en pourcentage en volume, de
dioxyde de carbone dans l’air intergranulaire de 1 kg de grains
63 . Analyse par le procédé gazométrique
aprés 24 h d’incubation à 25 OC, est égale à
Évacuer l’air de la seringue (4.3.21, traverser avec l’aiguille le
septum en caoutchouc du récipient contenant la prise d’essai,
Cl + c-2 1 000
actionner le piston plusieurs fois pour mélanger l’air de la serin-
2 Xn?o
gue avec l’atmosphère du récipient. Pomper environ 10 ml de
I’atmosphére du récipient dans la seringue et retirer l’aiguille du
où
septum.
Cl et sont les résultats des deux mesures de concentra-
c2
tion, en pourcentage en volume, sur chaque prise d’essai ;
Transférer rapidement la quantité convenable de l’échantillon
gazeux de la seringue dans l’appareil d’analyse (4.3.4). (Si
m. est la masse, en grammes, de la prise d’essai.
l’échantillon gazeux ne peut être transféré rapidement, planter
l’aiguille dans un bouchon de caoutchouc.) Déterminer la con-
Prendre comme résultat la moyenne arithmétique des valeurs
centration de dioxyde de carbone dans l’échantillon gazeux en
obtenues dans les deux déterminations si les conditions de
l’exprimant en pourcentage en volume. Répéter l’analyse sur la
répétabilité sont remplies (voir 7.1.2).
même prise d’essai.
7.1.2 Répétabilité
64 . Analyse par le procédé à infrarouge
La différence entre les résultats de deux déterminations effec-
tuées rapidement l’une aprés l’autre par le même analyste ne
Placer les vannes (4, ,4.5) de manière à isoler le circuit qui passe
contenant la prise d’essai. Régler le zéro de doit pas excéder 0,2 % ( Vl V).
a travers le récipient
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 6639-4 : 1987 (FI
7.2 Procédé à infrarouge Tableau 1 - Interprétation des résultats de l’analyse
par le procédé gazométrique
7.2.1 Mode de calcul et formule
Production
de dioxyde
La concentration, exprimée en microlitres par litre, de dioxyde
de carbone,
% CO2 WV), Interprétation
de carbone dégagé en 1 min dans l’air intergranulaire dans 1 kg
pour 1 kg
de grain, est égale à
après 24 h
d’incubation
1000
Probablement pas d’infestation. Répéter
cx-
mg moins de 0,2 l’analyse sur un autre échantillon, pour
confirmer.
_~--___-- - - - -
où
Légère infestation possible. Répéter
l’analyse sur un autre échantillon pour
02
C est la concentration, en microlitres par litre, de dioxyde
confirmer.
-_-~ -.-- _
de carbone dégagé en 1 min dans l’air intergranulaire de la
Infestation faible à moyenne. Grain
prise d’essai ;
0,3 à 0,5 impropre à une conservation supérieure à
2 mois sans traitement.
--- ---
m. est la masse, en grammes, de la prise d’essai.
Infestation moyenne à forte. Le grain doit
0,6 à 0,9
être désinsectisé immédiatement.
--~--
Prendre comme résultat la moyenne arithmétique des valeurs ----
lnfestation forte. Grain en mauvais état
obtenues dans les deux déterminations, si les conditions de
1,O et plus
sanitaire et impropre au stockage.
répétabilité sont remplies (voir 7.2.2).
Tableau 2 - Interprétation des résultats de l’analyse
7.2.2 Répétabilité
par le procédé à infrarouge
La différence entre les résultats de deux déterminations, effec-
Production
de dioxyde
tuées rapidement l’une après l’autre par le même analyste, ne
de carbone,
doit pas excéder 2 pl/(l.min). Interprétation
@/(l.min),
pour 1 kg
de grain
Probablement pas d’infestation. De petits
pics persistants peuvent indiquer une très
moins de 1.0
8 Interprétation des résultats
faible infestation. Répéter l’analyse sur un
autre échantillon, pour confirmer.
----~
lnfestation faible possible. Répéter l’analyse
8.1 Procédé gazométrique
l,o à 1,9
sur un autre échantillon pour confirmer.
-_ ~-
Pour le blé, les pois cassés, les haricots, les haricots beurre, le
Infestation faible à moyenne. Grain
riz poli, le mai’s jaune et d’autres grains durs semblables, sans 2,0 à 3,9 impropre au stockage de plus de 2 mois
sans désinsectisation.
enveloppe, analysés par le procédé gazométrique, I’interpréta-
--- --- .- _-~-
tion des résultats est donnée dans le tableau 1 s
Infestation moyenne à forte. Le grain doit
4,0 à 5,9
être désinsectisé immédiatement.
~ -. --~
NOTE - Pour les autres grains, il est nécessaire de faire une correction
Forte infestation. Grain en mauvais état
6,0 et plus
pour tenir compte du volume spécifique de l’air interstitiel. La concen-
sanitaire et impropre au stockage.
tration en dioxyde de carbone est multipliée dans ce cas par un facteur
de correction. Quelques-uns des facteurs correctifs sont les suivants :
-
graines de lin : 0,89
9 Procès-verbal d’essai
-
maÏs blanc à gros grains : 1,18
Le procès-verbal d’essai doit indiquer la méthode utilisée, le
-
orge : 1,25 nombre de déterminations effectuées et le résultat obtenu. II
doit mentionner, en outre, tous les détails opératoires non
-
avoine : 1,39
prévus dans la présente partie de I’ISO 6639 ou facultatifs, ainsi
que les incidents éventuels susceptibles d’avoir agi sur le
résultat.
8.2 Procédé à infrarouge
Le procès-verbal d’essai doit donner tous les renseignements
L’interprétation est donnée dans le tableau 2. nécessaires à l’identification complète de l’échantillon.
6
---------------------- Page: 8 ----------------------
. ISO 6639-4 : 1987 (FI
Section deux: Méthode à la ninhydrine
13 Mode opératoire
10 Principe
d’essai, débarrassée au préalable des
Broyage d’une prise
13.1 Prdparation de l’échantillon pour essai et
m blanc imprégné de ninhydrine.
insectes libres, contre un papier
prise d’essai
Quand un grain infesté est broyé, les acides aminés des fluides
Utiliser le tamis (11.1) pour séparer les particules étrangères et
corporels de l’insecte réagissent avec la ninhydrine du papier en
les insectes libres de l’échantillon. Si nécessaire, identifier et
donnant une tache pourpre. Les acides aminés du grain ne sont
compter les insectes libres par espèce et par stade.
pas libérés et ne réagissent pas.
Peser l’échantillon tamisé et le diviser en utilisant le diviseur
NOTE - Un grain à teneur en eau élevée peut réagir avec le papier
(11.3) pour obtenir les prises d’essai requises (voir 13.3 et
après 2 ou 3 jours.
chapitre 15). Chaque prise d’essai doit contenir au moins
1 000 grains (voir ISO 520). Les prises d’essai des grains de ’
Comptage des taches pourpres sur le papier. Le nombre de
grande taille sont concassées grossiérement et tamisées une
taches indique le niveau de I’infestation cachée dans I’échan-
nouvelle fois.
tillon.
Peser une prise d’essai et/ou compter le nombre de grains
qu’elle contient. Préparer le détecteur d’infestation (11.4) et
passer la prise d’essai dans l’appareil en se conformant aux indi-
11 Appareillage
cations du fabricant.
11.1 Tamis (voir 4.1).
13.2 Détermination
11.2 Appareil de concassage, si nécessaire, pour concas-
Enlever la bande de papier correspondant à la prise d’essai en
ser grossièrement les grains de grande taille.
prenant soin de ne toucher que le bout de la bande, car les
acides aminés de la peau réagissent également avec la ninhy-
drine en donnant des taches pourpres (ceci peut être évité en
11.3 Diviseur d’échantillons pour grains (voir ISO 950).
utilisant des pinces ou des gants de chirurgien), et attendre le
temps nécessaire à l’apparition des taches. À 20 OC et
11.4 Détecteur d’infestation, manuel ou électrique, con-
au-dessus, les taches pourpres apparaissent en 1 h, bien que
sistant essentiellement en deux rouleaux aplatisseurs en acier, à l’intensité de couleur soit maximum au bout de 24 h. À tempé-
surface rugueuse, écartés de 0,75 mm, et entre lesquels passe
rature plus basse, ou si l’on veut obtenir un développement
une bande de papier imprégnée de ninhydrine (voir figure 3).
plus rapide, le papier peut être chauffe à l’étuve à 50 OC ou
passé avec précaution (pour éviter I’ignition) au-dessus de la
flamme d’une lampe à alcool ou prés d’une lampe électrique à
NOTE - L’appareil de Ashman Simon convient.
incandescence.
11.5 Papier traité à la ninhydrine
Quand les taches pourpres sont apparues, entourer chacune
d’elles avec un cercle en prenant soin de distinguer les taches
Utiliser un rouleau de papier blanc de 57 mm de large et 50 m
qui peuvent parfois fusionner.
de long, déjà imprégné avec de la ninhydrine ou préparé de la
façon suivante.
Ne pas tenir compte taches sur le papier qui ne sont pas de
couleur pourpre.
Faire passer le papier non traité dans une solution à 10 g/l de
ninhydrine dans un alcool industriel dénaturé. Enrouler le papier Compter le nombre de points repérés.
et le laisser sécher à l’obscurité pendant au moins 3 jours, entre
20 et 25 OC et 40 a 60 % d’humidité relative. Envelopper le rou-
leau de papier traité dans une feuille métallique et le stocker à
13.3 Nombre de déterminations
l’abri de la lumière, si possible entre 20 et 25 OC et entre 40 et
60 % d’humidité relative. Dans ces conditions, le papier reste
Effectuer deux déterminations sur le même échantillon pour
utilisable pendant 2 à 3 ans.
essai. (Voir également chapitre 15.)
11.6 Balance, précise à 0,l g près.
14 Expression des résultats
12 Ëchantillonnage
Exprimer I’infestation en nombre d’insectes cachés par kilo-
Utiliser des échantillons obtenus comme décrit dans gramme ou par 100 grains et prendre comme résultat la
I’ISO 6639/2. moyenne arithmétique des deux déterminations.
7
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1s0 6639/4-1986 (FI
15 Interprétation des résultats indiquent la présence d’une faible infestation. Beaucoüp de
taches indiquent une forte infestation et le grain doit être traité
Si aucun insecte n’est détecté dans les deux prises d’essai, immédiatement. Cependant, avant toute décision, il faut déter-
l’essai sera répété jusqu’à obtention d’un total de 10 prises miner si le grain n’a pas déjà été traité et depuis combien de
d’essai avant de conclure que le grain est sain. II ne faut cepen- temps. En effet, les insectes morts continuent à réagir avec la
dant pas oublier que les oeufs et les petites larves peuvent ninhydrine jusqu’à ce que les fluides corporels aient séché. Le
échapper à ce mode de détection. Par conséquent, si c’est pos-
dessèchement d’un insecte peut prendre plusieurs semaines.
sible, le grain apparemment sain peut être de nouveau analysé
2 à 4 semaines plus tard.
L’efficacité de la méthode varie également avec les espèces 16 Procès-verbal d’essai
d’insectes et la taille et le type de grain analysé. II ne semble pas
possible de recommander l’application d’un coefficient de Le procès-verbal d’essai doit indiquer la méthode utilisée, le
correction pour ces différents types de grains et espèces nombre de déterminations effectuées et le résultat obtenu. II
d’insectes. doit mentionner, en outre, tous les détails opératoires non
prévus dans la présente partie de I’ISO 6639 ou facultatifs, ainsi
En général, un résultat positif doit être révélé pour indiquer que que les incidents éventuels susceptibles d’avoir agi sur le
le stockage du grain est hasardeux. Une tache pourpre repré- résultat.
sente un insecte dans la prise d’essai et quelques taches pour-
pres irrégulièrement réparties sur le papier, si elles sont confir- Le procès-verbal d’essai doit donner tous les renseignements
mées par des résultats similaires de plusieurs prises d’essai, nécessaires à l’identification complète de l’échantillon.
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60 6639-4 : 1987 IF)
Taches pourpres
/FA,: Prise d’essai
Rouleau de papier
traité à la ninhydrir
ie
Rouleaux d’acier A
Sortie du
A papier utilisé
c Grain aplati
Figure 3 -
Exemple d’appareil pour la détection de I’infestation cachée par le papier à la ninhydrine
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ISO 6639-4 : 1987 (F)
Section trois: Méthode par flottation des grains entiers
diviseur d’échantillons (18.5) en prises d’essai, contenant cha-
17 Principe
cune environ 500 grains. Compter les grains de la prise d’essai.
L’infestation cachée réduit la masse du grain. Quand un
mélange de grains sains et infestés est immergé dans une solu-
21.2 Détermination
tion de densité appropriée pour que les grains sains coulent
tout juste, les grains infestés flottent à la surface. La séparation
Placer la prise d’essai dans le bécher (18.6) contenant la solu-
est imparfaite, car les grains contenant de jeunes stades larvai-
tion pour l’analyse. Mélanger avec précaution et laisser reposer
res ont tendance à couler, et des grains non infestés avec une
pendant 10 min, en mélangeant briévement à des intervalles de
réserve d’air dans le sillon ou un autre défaut peuvent flotter.
1 min, pour laisser échapper les bulles d’air emprisonnées par
Les grains qui flottent sont disséqués, pour confirmer la pré-
les grains. Quand les grains ont été laissés à reposer une der-
sence ou l’absence d’insectes.
niére fois, retirer les grains qui flottent à l’aide de l’écumoire
(18.7). Trier et compter tous les grains présentant des signes
évidents d’infestation (trous ou tunnels visibles par transpa-
18 Appareillage
rence). Couper les grains restants avec un instrument adéquat
et compter ceux qui contiennent des larves, des nymphes ou
18.1 Densimdtre à liquide, pour mesurer la densité relative
des adultes d’insectes.
dans une gamme de 1,100 à 1,300.
18.2 Éprouvette gradube, de 500 ml de capacité.
21.3 Nombre de déterminations
18.3 Tamis (voir 4.1).
Effectuer deux déterminations sur le même échantillon pour
essai.
18.4 Balance, précise à 0,Ol g près.
18.5 Diviseur d’échantillons pour grains (voir ISO 950).
22 Expression des résultats
18.6 Bécher, de 1 000 ml de capacité.
22.1 Mode de calcul
18.7 Écumoire, pour enlever les grains qui flottent.
.
Exprimer I’infestation en pourcentage en nombre de grains
19 Échantillonnage infestés et prendre comme résultat la moyenne arithmétique
des deux déterminations.
Utiliser des échantillons obtenus comme décrit dans
I’ISO 6639/2.
22.2 Répétabilité
20 Solution pour la flottation La différence entre le résultat de chaque détermination et la
moyenne ne doit pas dépasser la limite indiquée sur la figure 5.
Une solution de densité appropriée est préparée en dissolvant
Si cette limite de répétabilité est dépassée, répéter
...
Questions, Comments and Discussion
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