EN 16923:2017
(Main)Foodstuffs - Determination of T-2 toxin and HT-2 toxin in cereals and cereal products for infants and young children by LC-MS/MS after SPE cleanup
Foodstuffs - Determination of T-2 toxin and HT-2 toxin in cereals and cereal products for infants and young children by LC-MS/MS after SPE cleanup
This European Standard describes a method for the determination of T-2 toxin and HT-2 toxin in cereals and cereal based products e.g. oats, intended for nutrition of infants and young children by high performance liquid chromatography (HPLC) coupled with tandem mass spectrometry (MS/MS) after cleanup by solid phase extraction (SPE) [5].
The method has been validated for HT-2 toxin in oat flour at levels of 9,3 µg/kg and 28,1 µg/kg, oat flakes at levels of 16,5 µg/kg and 21,4 µg/kg, and breakfast cereals (containing oat flakes) at a level of 8,1 µg/kg and for T-2 toxin in oat flour at levels of 4,4 µg/kg and 8,3 µg/kg, oat flakes at levels of 4,9 µg/kg and 6,6 µg/kg and breakfast cereals (containing oat flakes) at a level of 3,5 µg/kg.
Laboratory experiences [6] have shown that the method is also applicable to highly swelling materials (dry cereal based porridges and modified starches), but these were not examined in the method validation study. Details are outlined in 6.3.
The method can also be applied to oat-by-products at higher levels of T-2- and HT-2 toxin. In this case, the dilution steps need to be considered [6].
The method can also be applied to cereals and cereal products for infants and young children based on e.g. wheat, barley, and rice. In this case, the method needs to be in-house-validated for each material. At the time of the interlaboratory study, planned range was 10 µg/kg to 100 µg/kg, and it is known from the pre-study that the method works well in the whole range, although final validation was only done in the range from 3,5 µg/kg to 28,1 µg/kg.
Lebensmittel - Bestimmung von T-2-Toxin und HT-2-Toxin in Getreide und Säuglings- und Kleinkindernahrung auf Getreidebasis mit LC-MS/MS nach SPE-Reinigung
Diese Europäische Norm legt ein Verfahren zur Bestimmung von T 2 Toxin und HT 2 Toxin durch Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) in Kopplung mit der Tandem-Massenspektrometrie (MS/MS) nach Festphasenreinigung (SPE, en: solid phase extraction) [5] in Getreide und getreidebasierten Produkten, z. B. Haferflocken, fest, die für die Ernährung von Säuglingen und Kleinkindern vorgesehen sind.
Das Verfahren wurde für HT 2 Toxin in Hafermehl bei Konzentrationen von 9,3 µg/kg und 28,1 µg/kg, in Haferflocken bei Konzentrationen von 16,5 µg/kg und 21,4 µg/kg und bei Frühstückscerealien (die Hafer-flocken enthalten) bei einer Konzentration von 8,1 µg/kg und für T 2 Toxin in Hafermehl bei Konzentrationen von 4,4 µg/kg und 8,3 µg/kg, in Haferflocken bei Konzentrationen von 4,9 µg/kg und 6,6 µg/kg und bei Frühstückscerealien (die Haferflocken enthalten) bei einer Konzentration von 3,5 µg/kg validiert.
Laborerfahrungen [6] haben gezeigt, dass das Verfahren auch für hochgradig aufquellende Materialien (auf trockenem Getreide basierendem Porridge und modifizierte Stärken) anwendbar ist, jedoch wurden diese in der Validierungsuntersuchung des Verfahrens nicht überprüft. Einzelheiten hierzu sind in 6.3 enthalten.
Das Verfahren kann ebenso bei Nebenprodukten von Hafer bei höheren Konzentrationen von T 2 Toxin und HT 2 Toxin angewendet werden. In diesem Fall müssen die Verdünnungsschritte berücksichtigt werden [6].
Das Verfahren kann auch auf Getreide und Getreideerzeugnisse auf der Basis von Weizen, Gerste und Reis für Säuglinge und Kleinkinder angewendet werden. In diesem Falle ist es erforderlich, das Verfahren im Labor für jedes Material zu validieren (in house Validation). Zum Zeitpunkt des Ringversuches war ein Bereich von 10 µg/kg bis 100 µg/kg zur Validierung vorgesehen, und die Vorstudien haben gezeigt, dass das Verfahren diesen gesamten Bereich gut abdeckt.
Produits alimentaires - Dosage des toxines T-2 et HT-2 dans les céréales et les produits céréaliers pour nourrissons et enfants en bas âge par CL-SM/SM après purification par SPE
La présente Norme européenne décrit une méthode de dosage des toxines T-2 et HT-2 dans les céréales et les produits céréaliers, par exemple l’avoine, destinés aux nourrissons et aux jeunes enfants par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) couplée à une spectrométrie de masse en tandem (SM/SM) après purification par extraction en phase solide (SPE) [5].
La méthode a été validée pour la toxine HT-2 présente dans la farine d’avoine à des niveaux de 9,3 µg/kg et 28,1 µg/kg, dans les flocons d’avoine à des niveaux de 16,5 µg/kg et 21,4 µg/kg et dans les céréales de petit-déjeuner (contenant des flocons d’avoine) à un niveau de 8,1 µg/kg, et pour la toxine T-2 présente dans la farine d’avoine à des niveaux de 4,4 µg/kg et 8,3 µg/kg, dans les flocons d’avoine à des niveaux de 4,9 µg/kg et 6,6 µg/kg et dans les céréales de petit-déjeuner (contenant des flocons d’avoine) à un niveau de 3,5 µg/kg.
Les expériences menées en laboratoire [6] ont démontré que la méthode est également applicable aux matières qui gonflent beaucoup (bouillies à base de céréales sèches et amidons modifiés), mais ces matières n’ont pas été examinées lors de l’étude de validation de la méthode. Le paragraphe 6.3 fournit plus d’informations.
La méthode peut également être appliquée aux sous-produits de l’avoine à des teneurs en toxines T-2 et HT-2 plus élevées. Dans ce cas, les étapes de dilution doivent être prises en compte [6].
La méthode peut également être appliquée aux céréales et aux produits céréaliers pour nourrissons et enfants en bas âge à base par exemple de blé, d’orge et de riz. Dans ce cas, la méthode doit être validée en interne pour chaque matrice. Lors de l’étude interlaboratoires, l’étendue prévue à l’étude allait de 10 µg/kg à 100 µg/kg et il est connu, grâce à l’étude préalable, que la méthode fonctionne bien sur toute l’étendue de la gamme, bien que la validation finale ait seulement été faite pour la gamme de concentrations de 3,5 µg/kg à 28,1 µg/kg.
Živila - Določevanje toksinov T-2 in HT-2 v žitu in žitnih proizvodih za dojenčke in majhne otroke z LC-MS/MS po čiščenju s SPE
Ta evropski standard opisuje metodo za določanje vsebnosti toksinov T-2 in HT-2 v žitu in žitnih proizvodih za dojenčke in majhne otroke s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti (HPLC) skupaj s tandemsko masno spektrometrijo (MS/MS) po čiščenju z ekstrakcijo na trdni fazi (SPE) [5].
Metoda je potrjena za toksin HT-2 v ovseni moki pri koncentracijah 9,3 μg/kg in 28,1 μg/kg, ovsenih kosmičih pri koncentracijah 16,5 μg/kg in 21,4 μg/kg ter žitih za zajtrk (ki vsebujejo ovsene kosmiče) pri koncentracijah 8,1 μg/kg, ter za toksin T-2 v ovseni moki pri koncentracijah 4,4 μg/kg in 8,3 μg/kg, ovsenih kosmičih pri koncentracijah 4,9 μg/kg in 6,6 μg/kg ter žitih za zajtrk (ki vsebujejo ovsene kosmiče) pri koncentraciji 3,5 μg/kg.
Laboratorijske izkušnje [6] kažejo, da se metoda uporablja tudi za materiale, ki močno nabreknejo (kaše iz suhih žit in modificiranih škrobov), vendar ti materiali niso bili raziskani v študiji validativnosti metode. Podrobnosti so opredeljene v točki 6.3.
Metoda se lahko uporabi tudi za stranske proizvode iz ovsa z višjimi ravnmi toksinov T-2 in HT-2. V tem primeru je treba upoštevati korake za redčenje [6].
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.Lebensmittel - Bestimmung von T-2-Toxin und HT-2-Toxin in Getreide und Säuglings- und Kleinkindernahrung auf Getreidebasis mit LC-MS/MS nach SPE-ReinigungProduits alimentaires - Dosage des toxines T-2 et HT-2 dans les céréales et les produits céréaliers pour nourrissons et enfants en bas âge par CL-SM/SM après purification par SPEFoodstuffs - Determination of T-2 toxin and HT-2 toxin in cereals and cereal products for infants and young children by LC-MS/MS after SPE cleanup67.230Predpakirana in pripravljena hranaPrepackaged and prepared foods67.060QMLKCereals, pulses and derived productsICS:Ta slovenski standard je istoveten z:EN 16923:2017SIST EN 16923:2017en,fr,de01-september-2017SIST EN 16923:2017SLOVENSKI
STANDARD
EUROPEAN STANDARD NORME EUROPÉENNE EUROPÄISCHE NORM
EN 16923
May
t r s y ICS
x yä r x râ
x yä t u r English Version
Foodstuffs æ Determination of Tæ t toxin and HTæ t toxin in cereals and cereal products for infants and young children Produits alimentaires æ Dosage des toxines Tæ t et HTæ t dans les céréales et les produits céréaliers pour purification par SPE
Lebensmittel æ Bestimmung von Tæ tæToxin und HTæ tæToxin in Getreide und Säuglingsæ und nach SPEæReinigung This European Standard was approved by CEN on
t y February
t r s yä
egulations which stipulate the conditions for giving this European Standard the status of a national standard without any alterationä Upætoædate lists and bibliographical references concerning such national standards may be obtained on application to the CENæCENELEC Management Centre or to any CEN memberä
translation under the responsibility of a CEN member into its own language and notified to the CENæCENELEC Management Centre has the same status as the official versionsä
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s x { t uã t r s y ESIST EN 16923:2017
Example chromatograms (API 4000™) . 13 Annex B (informative)
Example conditions for suitable LC-MS/MS systems . 17 Annex C (informative)
Precision data . 24 Bibliography . 26
Eluent for LC-MS/MS. Examples of eluents suitable for LC-MS/MS systems are given in Annex B. Filter the solution through a membrane filter (5.18). 4.6
Nitrogen, purity of at least 99,9 %. 4.7
Activated charcoal for column chromatography (particle size: 63 µm to 200 µm). 4.8
Aluminium oxide (neutral, for liquid chromatography). 4.9
Finely ground/pulverized diatomaceous earth (diatomite, kieselgur), e.g. Celite® 545. 4.10
Siliconization reagent, e.g. SurfaSil™1) (optional). 4.11
Cyclohexane, analytical quality, (optional). 4.12
Preparation of the diluted siliconization reagent, (optional). Add e.g. 50 ml of a siliconization reagent (4.10) to 950 ml cyclohexane (4.11). 4.13
Formic acid, HPLC quality. 4.14
Ammonia solution, substance concentration c(NH3) = 13,4 mol/l or mass concentration (NH3) = 250 g/l. 4.15
Ammonium acetate (CH3CO2NH4), LC-MS/MS quality. 4.16 Anti-clogging material, such as washed sea sand, glass beads, or polyethylene beads, (optional). 4.17 Stock solution of T-2 toxin, mass concentration
= 100
4.18 Stock solution of HT-2 toxin,
= 100
4.19 Internal standard solution of [13C24]-T-2 toxin,
= 25
Other suitable isotopic labelled standards of T-2 toxin than the [13C24]-T-2 toxin may be used. 4.20 Internal standard solution of [13C22]-HT-2 toxin,
= 25
Other suitable isotopic labelled standards of HT-2 toxin than the [13C22]-HT-2 toxin may be used. 4.21 Mixed standard solution,
= 500 ng/ml. Pipette 25 µl of each T-2 toxin and HT-2 toxin stock solution (4.17 and 4.18), respectively, into a 5 ml volumetric flask, and dilute up to the mark with solvent mixture (4.3). This solution can be stored at
« s z °C for 12 months.
1) Surfasil ™ is a trade name of a product commercially available from various suppliers. This information is given for the convenience of users of this European Standard and does not constitute an endorsement by CEN of the products named. Equivalent products may be used if they can be shown to lead to the same results. SIST EN 16923:2017
= 1000 ng/ml Dilute 200 µl of the internal standard solutions (4.19 and 4.20) with solvent mixture (4.3) in a 5 ml volumetric flask. This solution can be stored at – 18 °C for 6 months. 4.23 Calibration solutions. For the calibration of the measuring system, prepare calibration solutions within a range from 5 ng/ml to 100 ng/ml. Prepare e.g. the following calibration solutions as outlined in Table 1: Table 1 — Examples of suitable calibration solutions Calibration solution Mass concentration per analyte Mass concentration per isotope labelled analyte Mixed standard solution (4.21) Mixed internal standard solution (4.22) Solvent mixture (4.3)
ng/ml ng/ml µl µl µl IS-Blank 0 50 – 50 950 1 5 50 10 50 940 2 10 50 20 50 930 3 20 50 40 50 910 4 40 50 80 50 870 5 60 50 120 50 830 6 80 50 160 50 790 7 100 50 200 50 750 5 Apparatus and equipment Usual laboratory apparatus and, in particular, the following. 5.1 Laboratory balance, accuracy of 0,01 g. 5.2 Analytical balance, accuracy of 0,1 mg. 5.3 Ultrasonic bath. 5.4 Laboratory shaker for test tubes. 5.5 Manual dispensers, microlitre syringes or microlitre pipettes for 10 µl to 5 ml. 5.6 Dispenser, suitable for 20 ml. 5.7 250 ml-Erlenmeyer flasks with stoppers, or 250 ml-centrifuge tubes. SIST EN 16923:2017
Syringe filters (0,45 µm), or centrifugal filters (e.g. Durapore® PVDF (0,45 µm), or Millipore Ultrafree-MC® 0,5 ml), fitting with centrifuge for reaction vessels, e.g. Eppendorf® vessels2). 5.9 Folded filter, pore size 4 µm to 7 µm, diameter 100 mm. 5.10
Laboratory centrifuge. 5.11
Cartridges (6 ml), made from polypropylene (PP) and corresponding frits from polyethylene (PE), or commercially available SPE columns, e.g. CHROMABOND® Carbon/Alox/Celite®2), 6 ml, 500 mg. 5.12
SPE vacuum/elution station. 5.13
Laboratory shaker, e.g. overhead shaker. 5.14
Laboratory blender, e.g. Ultra Turrax®2). 5.15 Test tubes, suitable for a volume up to 10,0 ml. 5.16 Siliconized test tubes (optional). After thorough cleaning of the test tubes (5.15), fill up to the top with the diluted siliconization reagent (4.12) and allow them to stand for 1 min. Then, pouring out the reagent solution, make sure to collect it for repeated usage. Afterwards rinse the tubes with cyclohexane (4.11) and acetonitrile (4.1) or methanol (4.2) successively in this order. The rinsing solutions may be used again. Finally rinse the tubes twice with double-distilled water and allow them to dry. WARNING — Surfasil™2) being a chloride silane solvent, readily reacts with water by forming hydrochloric acid vapour. Ther
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Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.