ISO 3890-2:2009

Milk and milk products — Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) — Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation

ISO 3890-2|IDF 75-2:2009 specifies test methods for the purification of the crude extracts obtained by the general methods given in ISO 3890-1|IDF 75-1. It also gives recommended methods for the determination of the residues of organochlorine compounds in milk and milk products, together with confirmatory tests and clean-up procedures.

Lait et produits laitiers — Détermination des résidus de composés organochlorés (pesticides) — Partie 2: Méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts et tests de confirmation

L'ISO 3890-2|FIL 75-2:2009 spécifie des méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts obtenus avec les méthodes générales données dans l'ISO 3890-1|FIL 75-1. Elle donne également des méthodes recommandées pour la détermination des résidus de composés organochlorés dans le lait et les produits laitiers ainsi que des tests de confirmation et des techniques de purification.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 08-Oct-2009
• ICS: 67.100.01 - Milk and milk products in general
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 16-Feb-2022

Relations

• Revises: ISO 3890-2:2000 - Milk and milk products — Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) — Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation
• Effective Date: 28-Feb-2009

Standards Content (Sample)

МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 3890-2
IDF
75-2
Второе издание
2009-10-15

Молоко и молочные продукты.
Определение остатков
хлорорганических соединений
(пестицидов).
Часть 2.
Методы очистки экстрактов из сырья и
подтверждение
Milk and milk products. Determination of residues of organochlorine
compounds (pesticides).
Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation



Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочные номера
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2:2009(R)
©
ISO и IDF 2009

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2 :2009(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на интегрированные шрифты и они не будут установлены на компьютере, на котором ведется редактирование. В
случае загрузки настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение
лицензионных условий фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe – торговый знак фирмы Adobe Системаs Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованные для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике Общее Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.


ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ


© ISO и IDF 2009
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по
адресу, приведенному ниже, или в комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Опубликовано в Швейцарии

ii © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2 :2009(R)
Содержание Страница
Предисловие .iv
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Метод A: Разделение жидкость – жидкость ацетонитрилом и очистка на колонке
Флорисил (Florisil) .1
4 Метод B: Разделение жидкость – жидкость диметилформамидом (DMF) и очистка на
колонке с оксидом алюминия.4
5 Метод C: Разделение жидкость – жидкость диметилформамидом (DMF) и очистка на
колонке Florisil .7
6 Метод D: Хроматография на колонке с оксидом алюминия точно определенной
активности .9
7 Метод E: Хроматография на колонке с оксидом алюминия.11
8 Метод F: Хроматография на колонке с частично дезактивированным адсорбентом
Florisil.14
9 Метод G: Хроматография на колонке с частично дезактивированным силикагелем.16
10 Метод H: Гель-проникающая хроматография .18
11 Испытания на подтверждение и методика дополнительной очистки.20
12 Процедура дополнительной очистки .29
Библиография.31

© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2:2009(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией
национальных организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных
стандартов обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член ISO,
заинтересованный в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть
представленным в этом комитете. Международные организации, правительственные и
неправительственные, имеющие связи с ISO, также принимают участие в работах. ISO
непосредственно сотрудничает с Международной электротехнической комиссией (IEC) по всем
вопросам электротехнической стандартизации.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, приведенными в
Директивах ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, одобренные техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам
на голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего документа могут быть объектом патентных
прав. ISO не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных
прав.
ISO 3890-2⎪IDF 75-2 разработан Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты,
Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты, и Международной федерацией молочной
промышленности (IDF). Этот стандарт должен быть опубликован совместно ISO и IDF.
ISO 3890⎪IDF 75 состоит из следующих частей под общим названием Молоко и молочные продукты.
Определение остатков хлорорганических соединений (пестицидов):
⎯ Часть 1. Общие положения и методы экстракции
⎯ Часть 2. Методы очистки экстрактов из сырья и подтверждение
Настоящее второе издание ISO 3890-2⎪IDF 75-2 отменяет и заменяет первое издание (ISO 3890-2:2000),
которое было подвергнуто незначительному пересмотру.
iv © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2 :2009(R)
Предисловие
Международная федерация по молочному животноводству (IDF) является некоммерческой
организацией, представляющей всемирное молочное животноводство. Членами IDF являются
Национальные комитеты каждой страны-члена, а также региональные ассоциации по молочному
животноводству, которые имеют подписанное официальное соглашение о совместной деятельности с
IDF. Каждый член IDF имеет право быть представленным в Постоянных комитетах IDF,
осуществляющих техническую работу. IDF сотрудничает с ISO по вопросам разработки стандартных
методов анализа и отбора проб молока и молочных продуктов.
Основная задача Постоянных комитетов заключается в подготовке международных стандартов.
Проекты международных стандартов, принятые Рабочими группами и Постоянными комитетами,
рассылаются Национальным комитетам для голосования. Их опубликование в качестве
международных стандартов требует одобрения не менее 50 % Национальных комитетов IDF,
принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего документа могут быть объектом патентных
прав. IDF не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных
прав.
ISO 3890-2⎪IDF 75-2 подготовлен Международной федерацией молочной промышленности (IDF) и
Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные
продукты. Этот стандарт должен быть опубликован совместно IDF и ISO.
Вся работа была проведена под руководством совместной ISO-IDF Группы экспертов (E12 — Остатки
пестицидов), которая в настоящее время входит в состав совместной ISO-IDF Рабочей группы по
Органическим загрязнителям и ветеринарным остаткам, Постоянного комитета по Аналитическим
методам определения добавок и загрязнителей.
ISO 3890⎪IDF 75 состоит из следующих частей под общим названием Молоко и молочные продукты.
Определение остатков хлорорганических соединений (пестицидов):
⎯ Часть 1. Общие положения и методы экстракции
⎯ Часть 2. Методы очистки экстрактов из сырья и подтверждение
Настоящее издание ISO 3890-2⎪IDF 75-2, вместе с ISO 3890-1⎪IDF 75-1, отменяет и заменяет стандарт
IDF 75C:1991, который был подвергнут незначительному пересмотру.

© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются v

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ
IDF 75-2:2009(R)

Молоко и молочные продукты. Определение остатков
хлорорганических соединений (пестицидов).
Часть 2.
Методы очистки экстрактов из сырья и подтверждение
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Применение настоящей части ISO 3890⎪IDF 75 может включать
использование опасных материалов, операций и оборудования. В этой части ISO 3890⎪IDF 75 не
ставится цель решить все проблемы безопасности, связанные с её применением.
Пользователь этой части ISO 3890⎪IDF 75 сам несет ответственность за обеспечение охраны
здоровья и техники безопасности, а также определение применимости регламентных
ограничений до её использования.
1 Область применения
Данная часть ISO 3890⎪IDF 75 устанавливает методы очистки экстрактов из сырья, полученных
общими методами, приведенными в ISO 3890-1⎪IDF 75-1. В ней также приводятся рекомендованные
методы определения остатков хлорорганических соединений в молоке и молочных продуктах наряду с
испытаниями на подтверждение и методиками очистки.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными при применении данного
документа. Для жестких ссылок применяется только цитированное издание документа. Для плавающих
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Молоко и молочные продукты. Определение остатков хлорорганических
веществ (пестицидов). Часть 1. Общие положения и методы экстракции
3 Метод A: Разделение жидкость – жидкость ацетонитрилом и очистка на
1)
колонке Флорисил (Florisil)
3.1 Принцип
См. Ссылку [3].
Хлорорганические соединения наряду с жиром экстрагируют из пробы одним из методов, описанных в
ISO 3890-1⎪IDF 75-1. Экстракт концентрируют почти досуха, затем снова растворяют в петролейном
эфире, и разделяют хлорорганические соединения в ацетонитриле. После перемешивания
ацетонитрила с избытком воды, разделяют хлорорганические соединения в петролейном эфире.
1)
Органическую фазу очищают хроматографическим методом на колонке Florisil (синтетический

1) Florisil (например, полученный из Floridin Co.) является примером подходящего продукта, имеющегося в
продаже. Эта информация дается для удобства пользователей данной части ISO 3890⎪IDF 75 и не означает
поддержки этого продукта со стороны ISO или IDF.
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются 1

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2:2009(R)
силикат магния), используя в качестве растворителя для элюирования смесь петролейного эфира и
диэтилового эфира. Элюаты концентрируют и затем исследуют методом газожидкостной
хроматографии (GLC).
Специальный метод включен для сыра.
3.2 Реактивы
Используют только реактивы признанной аналитической чистоты, если нет иных указаний, и
дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
3.2.1 Петролейный эфир, температурный интервал кипения от 40 °C до 60 °C.
Перегоняют над таблетками гидроксида калия или гидроксида натрия.
3.2.2 Ацетонитрил (CH CN), насыщенный петролейным эфиром.
3
Для очистки смешивают 4 л ацетонитрила с 1 мл ортофосфорной кислоты и 30 г пентоксида фосфора
в круглодонной стеклянной колбе. Добавляют стеклянных бусинок и перегоняют при температуре от
81 °C до 82 °C. Не допускается поднимать температуру выше 82 °C.
Смешивают очищенный ацетонитрил с петролейным эфиром, пока не произойдет разделение фаз.
3.2.3 Диэтиловый эфир (C H OC H ), не содержащий пероксида.
2 5 2 5
Перегоняют и стабилизируют с помощью абсолютного этанола (C H OH) с объемной долей 2 %.
2 5
3.2.4 Растворитель A для элюирования (элюент А): смесь диэтилового эфира (3.2.3) и
петролейного эфира (3.2.1) (6:94 частей по объему).
Высушивают над безводным сульфатом натрия (3.2.6) массой 10 – 25 г.
3.2.5 Растворитель B, для элюирования (элюент В): смесь диэтилового эфира (3.2.3) и
петролейного эфира (3.2.1) (15:85 частей по объему).
Высушивают над безводным сульфатом натрия (3.2.6) массой 10 – 25 г.
3.2.6 Сульфат натрия (Na SO ),гранулированный, безводный.

2 4
Нагревают при температуре 500 °C ± 25 °C в течение 4 ч. Охлаждают и хранят в закупоренной бутыли.
1)
3.2.7 Адсорбент: Florisil , от 60 до 100 меш.
Активируют путем нагревания при температуре 650 °C ± 25 °C в течение 4 ч и немедленно пересыпают
адсорбент в надежно закупориваемые бутыли, которые хранят в темном месте. Перед использованием
нагревают до температуры 130 °C в течение не менее 5 ч.
Адсорбент рекомендуется хранить либо при температуре 130 °C ± 2 °C, либо при комнатной
температуре в эксикаторе. В последнем случае, однако, адсорбент необходимо нагревать до
температуры 130 °C ± 2 °C каждые 2 дня.
Каждую партию адсорбента рекомендуется проверять время от времени следующим образом.
Пропускают 1 мл стандартного раствора гексана, содержащего 0,1 мг/л линдана, гептахлорэпоскида,
альдрина и диэлдрина и 0,3 мг/л эндрина через адсорбционную колонку (см. ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009,
9.3) Элюируют и концентрируют в соответствии с 3.4.3. Определяют методом газовой хроматографии.
2 © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2 :2009(R)
Адсорбент считается удовлетворительным, если линдан, гептахлор, альдрин и гептахлорэпоксид
количественно обнаруживаются в элюенте A (3.2.4), а диэлдрин и эндрин в элюенте B (3.2.5).
3.2.8 Раствор хлорида натрия (NaCl), раствор с массовой долей 2 %.
Нагревают твердый хлорид натрия при температуре 500 °C ± 25 °C в течение 4 ч, прежде чем
приготовить раствор.
3.2.9 Этанол (C H OH), абсолютный.
2 5
3.2.10 Оксалат натрия (Na C O ) или оксалат калия (K C O ).
2 2 4 2 2 4
3.3 Аппаратура
Используют обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее.
3.3.1 Хроматографические колонки, внутренним диаметром 20 мм и длиной 300 мм, с запорными
кранами из политетрафторэтилена (PTFE) и дисками из спеченного стекла или пробками из
стекловаты.
2)
3.3.2 Роторный испаритель [Kuderna-Danish или равноценный], с колбой вместимостью 500 мл и
мерной пробиркой.
3.3.3 Высокоскоростной блендер.
3.3.4 Делительные воронки, вместимостью 125 мл и 1 000 мл.
3.4 Методика
3.4.1 Экстракция жира и хлорорганических соединений
3.4.1.1 Общие методы.
См. ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Приложение A.
3.4.1.2 Специальный метод для сыра
Помещают достаточное количество мелко нарезанной пробы (для получения 3 г жира), примерно 2 г
оксалата натрия или оксалата калия (3.2.10) и 100 мл этанола (3.2.9) в высокоскоростной смеситель
(3.3.3) и смешивают от 2 мин до 3 мин. (Если опыт с данным продуктом показывает, что эмульсии не
разрушатся при центрифугировании, то добавляют 1 мл воды на 2 г пробы перед смешиванием.)
Переливают гомогенизированную густую смесь в емкость для центрифугирования вместимостью 500 мл,
добавляют 50 мл диэтилового эфира (3.2.3), и энергично встряхивают в течение 1 мин. Добавляют 50 мл
петролейного эфира (3.2.1) и энергично встряхивают в течение 1 мин – 2 мин (или делят на две емкости
вместимостью по 250 мл и экстрагируют каждую 25 мл петролейного эфира путем энергичного
встряхивания в течение 1 мин – 2 мин). Продолжают в соответствии с ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, A.6.3.3.
3.4.2 Разделение жидкость – жидкость
Взвешивают с точностью до 0,01 г от 1 г до 3 г экстрагированного жира в делительную воронку
вместимостью 125 мл (3.3.4) и растворяют в 15 мл петролейного эфира (3.2.1). Добавляют 30 мл
ацетонитрила, насыщенного петролейным эфиром (3.2.2), и энергично встряхивают в течение
1 мин – 2 мин. После разделения фаз сливают нижний слой ацетонитрила в делительную воронку

2) Пример подходящего оборудования, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства
пользователей данной части ISO 3890⎪IDF 75 и не означает поддержки этого оборудования со стороны ISO или
IDF.
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются 3

---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2:2009(R)
вместимостью 1 000 мл (3.3.4), содержащую 700 мл раствора хлорида натрия (3.2.8) и 100 мл
петролейного эфира (3.2.1). Энергично встряхивают слой петролейного эфира, оставшийся в
делительной воронке вместимостью 125 мл, три раза, добавляя порции по 30 мл ацетонитрила (3.2.2).
Объединяют ацетонитриловые экстракты в делительной воронке вместимостью 1 000 мл и осторожно
встряхивают. Сливают нижний водный слой во вторую делительную воронку вместимостью 1000 мл и
встряхивают ее в течение 12 с со 100 мл петролейного эфира. Объединяют фазы петролейного эфира
из двух делительных воронок вместимостью 1 000 мл. Дважды промывают порциями по 100 мл воды
или раствора хлорида натрия (3.2.8). Сушат над сульфатом натрия (3.2.6) и фильтруют в колбу
роторного испарителя вместимостью 500 мл (3.3.2) с присоединенной градуированной трубкой.
Споласкивают сульфат натрия три раза порциями по 10 мл петролейного эфира (3.2.1). Затем
концентрируют раствор петролейного эфира до 10 мл, используя роторный испаритель (3.3.2).
1)
3.4.3 Очистка на адсорбенте Florisil
Добавляют в хроматографическую колонку (3.3.1) слой адсорбента (3.2.7) высотой 100 мм. Сверху
помещают слой высотой 10 мм сульфата натрия (3.2.6) и промывают 40 мл – 50 мл петролейного
эфира (3.2.1). Пипеткой наливают 10 мл концентрата петролейного эфира (3.4.2) в колонку (3.3.1),
дважды сполоснув контейнер порциями приблизительно по 5 мл петролейного эфира. Элюируют в
колбу испарителя (3.3.2) с градуированной трубкой, используя 200 мл растворителя А для
элюирования (3.2.4). Скорость элюирования не должна превышать 5 мл/мин. Меняют приемники и
элюируют аналогичным образом, используя 200 мл растворителя В для элюирования (3.2.5).
Концентрируют два элюата по отдельности до требуемого меньшего объема с помощью роторного
испарителя (3.3.2). Исследуют каждый элюат на газожидкостном хроматографе. Если требуется
дальнейшая очистка, ее можно выполнить на второй свежеприготовленной колонке с адсорбентом или
в соответствии с ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Приложение A.
Первый элюат содержит HCB, изомеры HCH, гептахлор, гептахлорэпоксид, альдрин, DDE, TDE и DDT.
Второй элюат содержит диэлдрин и эндрин.
3.5 Газовая хроматография
См. ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, 6.2. В отношении предварительных испытаний, и т.д., см. ISO 3890-
1⎪IDF 75-1:2009, Разделы с 10 по 14.
4 Метод B: Разделение жидкость – жидкость диметилформамидом (DMF) и
очистка на колонке с оксидом алюминия
4.1 Принцип
См. Ссылки [4] и [5].
Хлорорганические соединения наряду с жиром экстрагируют из пробы для испытания одним из
методов, описанных в ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Раздел A.6, затем остаток, разделяют с помощью
диметилформамида. После добавления раствора сульфата натрия хлорорганические соединения
разделяют в н-гексане. Органическую фазу очищают хроматографическим методом на колонке с
нейтральным оксидом алюминия, используя в качестве растворителя для элюирования н-гексан.
Элюат концентрируют и затем исследуют методом газожидкостной хроматографии (GLC).
Специальные методы описаны для молока и сливочного масла.
4.2 Реактивы
Используют только реактивы признанной аналитической чистоты, если нет иных указаний, и
дистиллированную или деминерализованную воду или воду равноценной чистоты.
4 © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2 :2009(R)
4.2.1 н-Гексан [CH (CH ) CH ], температурный интервал кипения от 68 °C до 70 °C.
3 2 4 3
Исследуют чистоту с помощью газовой хроматографии в рабочих условиях колонки. Перегоняют над
гидроксидом калия, если необходимо.
4.2.2 Ацетон (CH COCH ), общего назначения, аналитической чистоты.
3 3
4.2.3 Диметилформамид (DMF).
Исследуют полученный с помощью н-гексана экстракт разбавленного водного раствора на мешающие
пики методом газожидкостной хроматографии. Снова перегоняют растворитель, если необходимо, и
собирают фракцию с интервалом кипения от 152 °C до 154 °C.
4.2.4 н-Гексан, насыщенный диметилформамидом.
4.2.5 Диметилформамид, насыщенный н-гексаном.
4.2.6 Песок, промытый кислотой.
Нагревают при температуре 500 °C в течение 4 ч, затем охлаждают и хранят в закупоренном сосуде.
4.2.7 Сульфат натрия (Na SO ), гранулированный, безводный.
2 4
Нагревают при температуре 500 °C в течение 4 ч, затем охлаждают и хранят в закупоренном сосуде.
4.2.8 Оксид алюминия (Al O ), нейтральный, активированный.
2 3
Нагревают оксид алюминия при температуре 500 °C в течение 4 ч, затем охлаждают. Осторожно
добавляют 7 частей воды к 93 частям оксида алюминия (массовая доля) и тщательно перемешивают
полученное вещество в закрытом сосуде в течение не менее 90 мин. Хранят сосуд в плотно
закупоренном состоянии и используют оксид алюминия в течение 10 дней.
4.2.9 Раствор сульфата натрия, раствор с массовой долей 2 %.
4.3 Аппаратура
Обычная лабораторная аппаратура и, в частности, следующая.
4.3.1 Экстрактор Сокслета.
2)
4.3.2 Роторный испаритель [Kuderna-Danish или равноценный], с колбой вместимостью 500 мл и
мерной пробиркой.
4.3.3 Высокоскоростной блендер.
4.3.4 Хроматографические колонки, внутренним диаметром 12 мм и длиной 300 мм, с запорными
кранами из PTFE.
3)
4.3.5 Колонки микро-Шнайдер .

3) Пример подходящего оборудования, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства
пользователей данной части ISO 3890⎪IDF 75 и не означает поддержки этого оборудования со стороны ISO или
IDF.
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются 5

---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2:2009(R)
4.4 Методика
4.4.1 Экстракция жира и хлорорганических соединений
4.4.1.1 Общие методы
См. ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Приложение A.
4.4.1.2 Специальные методы
4.4.1.2.1 Молоко
Переносят в следующей последовательности: 40 мл хорошо перемешанного молока, 80 мл ацетона
(4.2.2) и 80 мл н-гексана (4.2.1) в стакан вихревого смесителя вместимостью 250 мл. Гомогенизируют
смесь в течение 3 мин. Сразу же переносят смесь в пробирку для центрифугирования вместимостью
250 мл, промывают лопасти мешалки 10 мл н-гексана, затем 5 мл воды и добавляют промывные воды
в пробирку.
–1
Центрифугируют пробирку в центрифуге с частотой вращения 2 500 мин в течение 5 мин. Отделяют
слой растворителя н-гексана и пропускают его через короткую колонку с безводным сульфатом натрия
(4.2.7). Промывают содержимое пробирки два раза порциями по 25 мл н-гексана и пропускают
промывные воды через колонку. Концентрируют объединенные экстракты до объема равного
примерно 15 мл в роторном испарителе (4.3.2). Переносят раствор в делительную воронку
вместимостью 100 мл с меткой на 25 мл и доводят объем до 25 мл. (См. также 7.4.1.2.2 для молока.)
4.4.1.2.2 Сливочное масло
Растворяют 5 г осветленного молочного жира (расплавленного и декантированного через фильтр) в
10 мл н-гексана. Переносят раствор в делительную воронку вместимостью 100 мл тремя
последовательными порциями по 5 мл н-гексана.
4.4.2 DMF-разделение жира и хлорорганических соединений
Экстрагируют жир из 25 мл раствора гексана (4.4.1) с помощью 10 мл диметилформамида (DMF),
насыщенного н-гексаном (4.2.5), путем встряхивания в делительной воронке. Спустя 2 – 3 мин,
спускают нижний слой DMF во вторую делительную воронку вместимостью 100 мл (оставляя всю
межфазную эмульсию в первой делительной воронке. Повторяют экстракцию раствора н-гексана
двумя порциями по 10 мл DMF (4.2.5). Соединяют экстракты DMF и промывают их 10 мл н-гексана,
насыщенного DMF (4.2.4).
Отделяют 10 мл н-гексана и промывают еще 10 мл DMF (4.2.5). Отбрасывают н-гексан и добавляют
промывные воды в исходный экстракт диметилформамида объемом 30 мл в делительной воронке
вместимостью 500 мл (или предпочтительно 350 мл). Добавляют 6 мл н-гексана (4.2.1) и энергично
встряхивают в течение 2 мин 200 мл раствора сульфата натрия (4.2.9).
Выдерживают в течение 20 мин для разделения. Собирают н-гексановую фазу путем осторожного
вращения с образованием завихрения. Сливают водный слой и отбрасывают, сушат делительную
воронку фильтровальной бумагой и сливают н-гексан в мерную емкость с горлышком на шлифе,
которая содержит 15 мл растворителя. Споласкивают делительную воронку небольшими порциями н-
гексана и добавляют промывные воды в емкость.
3)
Соединяют емкость с колонкой микро-Шнайдер (4.3.5) и концентрируют н-гексановый экстракт
примерно до 2 мл.
6 © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2 :2009(R)
4.4.3 Очистка на оксиде алюминия н-гексаном
Переливают суспензию из 5 г приготовленного оксида алюминия (4.2.8) в н-гексане (4.2.1) в
хроматографическую колонку (4.3.4) с пробкой из промытой растворителем хлопковой ваты
(ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, A.5.15). Дают оксиду алюминия осесть и покрывают 30 –миллиметровым
слоем безводного сульфата натрия (4.2.7). Сливают н-гексан, пока мениск не достигнет верхней части
слоя сульфата натрия. Добавляют н-гексановый экстракт (4.4.2) и смывают в колонку с помощью
порций н-гексана объемом 2 мл.
Элюируют 50 мл н-гексана (4.2.1) со скоростью потока, не превышающей 5 мл/мин, собирая элюат в
роторном испарителе (4.3.2). Концентрируют элюат до объема приблизительно равного 5 мл.
3)
Отсоединяют мерную пробирку, прикрепляют колонку Микро-Шнайдер (4.3.5) и концентрируют элюат
до 1 мл.
4.5 Газовая хроматография
См. ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, 6.2. В отношении предварительных испытаний, и т.д., см.
ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Разделы 10 – 14.
5 Метод C: Разделение жидкость – жидкость диметилформамидом (DMF) и
1)
очистка на колонке Florisil
5.1 Принцип
См. Ссылку [6].
Хлорорганические соединения наряду с жиром экстрагируют из пробы методом, описанным в 5.4.1.
Экстракт концентрируют почти досуха, затем снова растворяют в петролейном эфире. Разделяют
хлорорганические соединения в диметилформамиде. После добавления раствора сульфата натрия
хлорорганические соединения далее разделяют в петролейном эфире.
1)
Органическую фазу очищают хроматографическим методом на колонке Florisil , используя в качестве
растворителя для элюирования смесь петролейного эфира с диэтиловым эфиром. Элюаты
концентрируют и затем исследуют методом газожидкостной хроматографии (GLC).
5.2 Реактивы
Используют только реактивы признанной аналитической чистоты, если нет иных указаний, и
дистиллированную или деминерализованную воду или воду равноценной чистоты.
5.2.1 Петролейный эфир, температурный интервал кипения от 30 °C до 40 °C, повторной перегонки.
5.2.2 Диэтиловый эфир (C H OC H ), не содержащий пероксидов.
2 5 2 5
5.2.3 Петролейный эфир, температурный интервал кипения от 60 °C до 80 °C, повторной перегонки.
5.2.4 Растворитель для элюирования, смесь диэтилового эфира (5.2.2) и петролейного эфира
(5.2.1) (6:94 частей по объему).
1)
5.2.5 Адсорбент: Флорисил , от 60 до100 меш.
Нагревают адсорбент при температуре 650 °C в течение 2 ч в муфельной печи. Охлаждают до
температуры 130 °C и выдерживают в течение 5 ч при этой температуре в сушильном шкафу. После
этого дают остыть до комнатной температуры в эксикаторе и затем переносят в
воздухонепроницаемый, плотно закупоренный сосуд. Добавляют 5 частей дистиллированной воды к
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются 7

---------------------- Page: 12 ----------------------
ISO 3890-2:2009(R)
IDF 75-2:2009(R)
95 частям адсорбента (по объему) и встряхивают до исчезновения комков. Оставляют на 24 ч и
встряхивают перед употреблением.
5.2.6 Сульфат натрия (Na SO ), гранулированный, безводный.
2 4
Нагревают при температуре 500 °C ± 25 °C в течение 4 ч. Охлаждают и хранят в закупоренном сосуде.
5.2.7 Диметилформамид (DMF), насыщенный петролейным эфиром.
Перегоняют DMF и собирают фракцию с интервалом кипения от 152 °C до 154 °C. Насыщают
петролейным эфиром (5.2.1).
5.2.8 Петролейный эфир (5.2.1), насыщенный диметилформамидом.
5.2.9 Раствор сульфата натрия, 2 %-ный раствор.
5.2.10 н-Гексан [CH (CH ) CH ]
3 2 4 3
5.3 Аппаратура
Обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее.
5.3.1 Высокоскоростной блендер
2)
5.3.2 Рот
...

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 3890-2
IDF
75-2
Second edition
2009-10-15

Milk and milk products — Determination
of residues of organochlorine
compounds (pesticides) —
Part 2:
Test methods for crude extract
purification and confirmation
Lait et produits laitiers — Détermination des résidus de composés
organochlorés (pesticides) —
Partie 2: Méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts et tests
de confirmation




Reference numbers
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
©
ISO and IDF 2009

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. Neither the ISO Central
Secretariat nor the IDF accepts any liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies
and IDF national committees. In the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the ISO Central Secretariat at the
address given below.


COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT


©  ISO and IDF 2009
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO or IDF at the respective
address below.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Published in Switzerland

ii © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Method A: Liquid-liquid partitioning with acetonitrile and clean-up on a Florisil column .1
4 Method B: Liquid-liquid partitioning with dimethylformamide (DMF) and clean-up on an
alumina column .4
5 Method C: Liquid-liquid partitioning with dimethylformamide (DMF) and clean-up on a
1)
Florisil column.6
6 Method D: Column chromatography on aluminium oxide of precisely defined activity .8
7 Method E: Column chromatography on alumina column .11
1)
8 Method F: Column chromatography on partially deactivated Florisil .13
9 Method G: Column chromatography on partially deactivated silica gel .15
10 Method H: Gel-permeation chromatography.17
11 Confirmatory tests and additional clean-up procedure .18
12 Additional clean-up procedure .27
Bibliography.29

© ISO and IDF 2009 – All rights reserved iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 3890-2⎪IDF 75-2 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and
IDF.
ISO 3890⎪IDF 75 consists of the following parts, under the general title Milk and milk products —
Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides):
⎯ Part 1: General considerations and extraction methods
⎯ Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation
This second edition of ISO 3890-2⎪IDF 75-2 cancels and replaces the first edition (ISO 3890-2:2000), of which
it constitutes a minor revision.
iv © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit organization representing the dairy sector worldwide.
IDF membership comprises National Committees in every member country as well as regional dairy
associations having signed a formal agreement on cooperation with IDF. All members of IDF have the right to
be represented on the IDF Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
The main task of Standing Committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the National Committees for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of the IDF National Committees
casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 3890-2⎪IDF 75-2 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical Committee
ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published jointly by IDF
and ISO.
All work was carried out by the former Joint ISO-IDF Group of Experts (E12 — Pesticide residues) which is
now part of the Joint ISO-IDF Action Team on Organic contaminants and Veterinary residues, of the Standing
Committee on Analytical methods for additives and contaminants.
ISO 3890⎪IDF 75 consists of the following parts, under the general title Milk and milk products —
Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides):
⎯ Part 1: General considerations and extraction methods
⎯ Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation
This edition of ISO 3890-2⎪IDF 75-2, together with ISO 3890-1⎪IDF 75-1, cancels and replaces IDF 75C:1991,
of which it constitutes a minor revision.

© ISO and IDF 2009 – All rights reserved v

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 75-2:2009(E)

Milk and milk products — Determination of residues of
organochlorine compounds (pesticides) —
Part 2:
Test methods for crude extract purification and confirmation
WARNING — The use of this part of ISO 3890⎪IDF 75 may involve hazardous materials, operations and
equipment. This part of ISO 3890⎪IDF 75 does not purport to address all the safety problems
associated with its use. It is the responsibility of the user of this part of ISO 3890⎪IDF 75 to establish
health and safety practices and determine the applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This part of ISO 3890⎪IDF 75 specifies test methods for the purification of the crude extracts obtained by the
general methods given in ISO 3890-1⎪IDF 75-1. It also gives recommended methods for the determination of
the residues of organochlorine compounds in milk and milk products, together with confirmatory tests and
clean-up procedures.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Milk and milk products — Determination of residues of organochlorine compounds
(pesticides) — Part 1: General considerations and extraction methods
1)
3 Method A: Liquid-liquid partitioning with acetonitrile and clean-up on a Florisil
column
3.1 Principle
See Reference [3].
Organochlorine compounds, together with the fat, are extracted from the sample by one of the procedures
specified in ISO 3890-1⎪IDF 75-1. The extract is concentrated almost to dryness, then redissolved in light
petroleum and the organochlorine compounds are partitioned into acetonitrile. After mixing the acetonitrile with
an excess of water, the organochlorine compounds are partitioned into light petroleum. This organic phase is
1)
purified chromatographically on a Florisil (synthetic magnesium silicate) column using a mixture of light
petroleum and diethyl ether as eluting solvent. The eluates are concentrated then examined by gas liquid
chromatography (GLC).

1) Florisil (e.g. from Floridin Co.) is an example of a suitable product available commercially. This information is given for
the convenience of users of this part of ISO 3890⎪IDF 75 and does not constitute an endorsement by ISO or IDF of this
product.
© ISO and IDF 2009 – All rights reserved 1

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
A special method is described for cheese.
3.2 Reagents
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
3.2.1 Light petroleum, boiling range 40 °C to 60 °C.
Distil over potassium hydroxide or sodium hydroxide pellets.
3.2.2 Acetonitrile (CH CN), saturated with light petroleum.
3
To purify, mix 4 l of acetonitrile with 1 ml of orthophosphoric acid and 30 g of phosphorus pentoxide in a
round-bottomed glass flask. Add glass beads and distil at a temperature of between 81 °C and 82 °C. Do not
allow the temperature to exceed 82 °C.
Mix the purified acetonitrile with light petroleum until phase separation just occurs.
3.2.3 Diethyl ether (C H OC H ), peroxide-free.
2 5 2 5
Distil and stabilize with 2,0 % volume fraction absolute ethanol (C H OH).
2 5
3.2.4 Eluting solvent A: mixture of diethyl ether (3.2.3) and light petroleum (3.2.1) (6 + 94 parts by volume).
Dry over 10 g to 25 g of anhydrous sodium sulfate (3.2.6).
3.2.5 Eluting solvent B: mixture of diethyl ether (3.2.3) and light petroleum (3.2.1) (15 + 85 parts by
volume).
Dry over 10 g to 25 g of anhydrous sodium sulfate (3.2.6).
3.2.6 Sodium sulfate (Na SO ), granular, anhydrous.
2 4
Heat at 500 °C ± 25 °C for 4 h. Cool and store in a stoppered bottle.
1)
3.2.7 Adsorbent: Florisil , 60 mesh to 100 mesh.
Activate by heating at 650 °C ± 25 °C for 4 h and immediately pour the adsorbent into well-stoppered bottles
and store in the dark. Before use, heat to 130 °C for at least 5 h.
The adsorbent should be stored either at 130 °C ± 2 °C or at room temperature in a desiccator. In the latter
case it should, however, be heated to 130 °C ± 2 °C every 2 days.
Each batch of adsorbent should be checked from time to time as follows.
Pass 1 ml of a standard hexane solution containing 0,1 mg/l of lindane, heptachlor epoxide, aldrin and dieldrin,
and 0,3 mg/l of endrin through the adsorption column (see ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, 9.3). Elute and
concentrate as specified in 3.4.3. Determine by gas chromatography.
The adsorbent is satisfactory if lindane, heptachlor, aldrin and heptachlor epoxide are found quantitatively in
the eluting solvent A (3.2.4) and dieldrin and endrin in the eluting solvent B (3.2.5).
3.2.8 Sodium chloride solution (NaCl), 2 % mass fraction solution.
Heat solid sodium chloride at 500 °C ± 25 °C for 4 h before making up the solution.
2 © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
3.2.9 Ethanol (C H OH), absolute.
2 5
3.2.10 Sodium oxalate (Na C O ) or potassium oxalate (K C O ).
2 2 4 2 2 4
3.3 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
3.3.1 Chromatographic columns, of internal diameter 20 mm and length 300 mm, and with
polytetrafluoroethylene (PTFE) stopcocks and sintered glass discs or glass wool plugs.
2)
3.3.2 Rotary evaporator [Kuderna-Danish or equivalent], with flask of capacity 500 ml, and with
graduated tube attached.
3.3.3 High-speed blender.
3.3.4 Separating funnels, of capacities 125 ml and 1 000 ml.
3.4 Procedure
3.4.1 Extraction of fat and organochlorine compounds.
3.4.1.1 General methods.
See ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Annex A.
3.4.1.2 Special method for cheese
Place enough diced sample (to provide 3 g of fat), about 2 g of sodium oxalate or potassium oxalate (3.2.10)
and 100 ml of ethanol (3.2.9) in a high-speed blender (3.3.3) and blend for 2 min to 3 min. (If experience with
the product indicates that emulsions are not broken by centrifuging, add 1 ml of water per 2 g of sample
before blending.) Pour the homogenized slurry into a 500 ml centrifuge bottle, add 50 ml of diethyl
ether (3.2.3), and shake vigorously for 1 min. Add 50 ml of light petroleum (3.2.1) and shake vigorously for
1 min to 2 min (or divide between two 250 ml bottles and extract each by shaking vigorously for 1 min to 2 min
with 25 ml of light petroleum). Proceed as in ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, A.6.3.3.
3.4.2 Liquid-liquid partitioning
Weigh, to the nearest 0,01 g, 1 g to 3 g of the extracted fat into a 125 ml separating funnel (3.3.4) and
dissolve in 15 ml of light petroleum (3.2.1). Add 30 ml of acetonitrile saturated with light petroleum (3.2.2) and
shake vigorously for 1 min to 2 min. After phase separation, run the lower acetonitrile layer into a 1 000 ml
separating funnel (3.3.4) containing 700 ml of sodium chloride solution (3.2.8) and 100 ml of light
petroleum (3.2.1). Vigorously shake the light petroleum layer left in the 125 ml separating funnel three times
with 30 ml portions of the acetonitrile (3.2.2).
Combine the acetonitrile extracts in the 1 000 ml separating funnel and then shake carefully. Drain the lower,
aqueous phase into a second 1 000 ml separating funnel and shake it for 12 s with 100 ml of light petroleum.
Combine the light petroleum phases from the two 1 000 ml separating funnels. Wash twice with 100 ml
portions of water or the sodium chloride solution (3.2.8). Dry over sodium sulfate (3.2.6) and filter into the
500 ml rotary evaporator flask (3.3.2) with attached graduated tube. Rinse the sodium sulfate three times with
10 ml portions of light petroleum (3.2.1). Then concentrate the light petroleum solution to 10 ml using the
rotary evaporator (3.3.2).

2) Example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of users of this
part of ISO 3890⎪IDF 75 and does not constitute an endorsement by ISO or IDF of this product.
© ISO and IDF 2009 – All rights reserved 3

---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
1)
3.4.3 Clean-up on Florisil
Add to a chromatographic column (3.3.1) a 100 mm layer of adsorbent (3.2.7). Cover with a 10 mm layer of
sodium sulfate (3.2.6) and rinse with 40 ml to 50 ml of light petroleum (3.2.1). Pipette 10 ml of the light
petroleum concentrate (3.4.2) on to the column (3.3.1), rinsing the container twice with approximately 5 ml
portions of light petroleum. Elute into an evaporator flask (3.3.2) with attached graduated tube, using 200 ml of
the eluting solvent A (3.2.4). The elution rate should not exceed 5 ml/min. Change the receivers and elute in
the same way using 200 ml of the eluting solvent B (3.2.5).
Concentrate the two eluates separately to the required small volume using the rotary evaporator (3.3.2).
Examine each eluate by GLC. Should further purification be necessary, this can be carried out on a second,
freshly prepared adsorbent column or as in ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Annex A.
The first eluate contains any HCB, the HCH isomers, heptachlor, heptachlor epoxide, aldrin, DDE, TDE and
DDT. The second eluate contains dieldrin and endrin.
3.5 Gas chromatography
See ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, 6.2. For preliminary tests, etc., see ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Clauses 10
to 14.
4 Method B: Liquid-liquid partitioning with dimethylformamide (DMF) and clean-up
on an alumina column
4.1 Principle
See References [4] and [5].
Organochlorine compounds, together with the fat, are extracted from the test sample by the procedure
described in ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Clause A.6, then the residues are partitioned with
dimethylformamide. After addition of sodium sulfate solution, the organochlorine compounds are further
partitioned into n-hexane. The organic phase is purified by chromatography on neutral aluminium oxide using
n-hexane as the eluting solvent. The eluate is concentrated then examined by GLC.
Special methods are described for milk and butter.
4.2 Reagents
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
4.2.1 n-Hexane [CH (CH ) CH ], boiling range 68 °C to 70 °C.
3 2 4 3
Examine for gas chromatographic purity under working column conditions. Distil over potassium hydroxide, if
necessary.
4.2.2 Acetone (CH COCH ), general-purpose, reagent grade.
3 3
4.2.3 Dimethylformamide (DMF).
Examine an n-hexane extract of a dilute aqueous solution for interference peaks by GLC. Redistil the solvent,
if necessary, and collect the fraction with boiling range 152 °C to 154 °C.
4.2.4 n-Hexane, saturated with dimethylformamide.
4 © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
4.2.5 Dimethylformamide, saturated with n-hexane.
4.2.6 Sand, acid washed.
Heat at 500 °C for 4 h, then cool and store in a stoppered bottle.
4.2.7 Sodium sulfate (Na SO ), granular, anhydrous.
2 4
Heat at 500 °C for 4 h, then cool and store in a stoppered bottle.
4.2.8 Aluminium oxide (Al O ), neutral, activated.
2 3
Heat aluminium oxide to 500 °C for 4 h, then cool. Carefully add 7 parts of water to 93 parts of aluminium
oxide (mass fraction) and mix the solid thoroughly in a closed vessel for at least 90 min. Keep the vessel well
stoppered and use the aluminium oxide within 10 days.
4.2.9 Sodium sulfate solution, 2 % mass fraction solution.
4.3 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
4.3.1 Soxhlet extraction apparatus.
2)
4.3.2 Rotary evaporator [Kuderna-Danish or equivalent], with flask of capacity 500 ml, and with
graduated tube attached.
4.3.3 High-speed blender.
4.3.4 Chromatographic columns, of internal diameter 12 mm and length 300 mm, with PTFE stopcocks.
3)
4.3.5 Micro-Snyder columns.
4.4 Procedure
4.4.1 Extraction of fat and organochlorine compounds
4.4.1.1 General methods
See ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Annex A.
4.4.1.2 Special methods
4.4.1.2.1 Milk
Transfer, in the following order, 40 ml of well-mixed milk, 80 ml of acetone (4.2.2) and 80 ml of
n-hexane (4.2.1) to a 250 ml vortex beaker. Homogenize the mixture for 3 min. Transfer it immediately to a
250 ml centrifuge tube, washing the mixer blades with 10 ml of n-hexane, then with 5 ml of water, and add the
washings to the tube.

3) Example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of users of this
part of ISO 3890⎪IDF 75 and does not constitute an endorsement by ISO or IDF of this product.
© ISO and IDF 2009 – All rights reserved 5

---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
−1
Spin the tube in a centrifuge at a rotational frequency of 2 500 min for 5 min. Separate the n-hexane solvent
layer and pass it through a short column of anhydrous sodium sulfate (4.2.7). Wash the contents of the tube
with two successive 25 ml portions of n-hexane and run the washings through the column. Reduce the
combined extracts to about 15 ml in the rotary evaporator (4.3.2). Transfer the solution to a 100 ml separating
funnel graduated at 25 ml and adjust the volume to 25 ml. (See also 7.4.1.2.2 for milk.)
4.4.1.2.2 Butter
Dissolve 5 g of clarified butterfat (melted and decanted through a filter) in 10 ml of n-hexane. Transfer the
solution to a 100 ml separating funnel using three successive 5 ml portions of n-hexane.
4.4.2 DMF-partitioning of fat and organochlorine compounds
Extract the fat from the 25 ml of hexane solution (4.4.1) with 10 ml of dimethylformamide (DMF) saturated with
n-hexane (4.2.5), by shaking in a separating funnel. After 2 min to 3 min, run the lower DMF layer into a
second 100 ml separating funnel (retaining any interfacial emulsion in the first separating funnel). Repeat the
extraction of the n-hexane solution with two further 10 ml portions of DMF (4.2.5). Combine the DMF extracts
and wash them with 10 ml of n-hexane saturated with DMF (4.2.4).
Separate the 10 ml of n-hexane and wash with a further 10 ml of DMF (4.2.5). Reject the n-hexane and add
the washings to the original 30 ml of DMF extract in a 500 ml (or preferably 350 ml) separating funnel. Add
6 ml of n-hexane (4.2.1) and shake vigorously for 2 min with 200 ml of sodium sulfate solution (4.2.9).
Allow to stand for 20 min to separate. Collect the n-hexane phase by gentle swirling. Drain the aqueous layer
to waste, dry the separating funnel with filter paper and drain the n-hexane into a graduated tube with a
ground-glass neck which holds 15 ml of solvent. Rinse the separating funnel with small quantities of n-hexane
and add these to the tube.
3)
Fit the tube with a micro-Snyder column (4.3.5) and concentrate the n-hexane extract to about 2 ml.
4.4.3 Clean-up on aluminium oxide with n-hexane
Pour a slurry of 5 g of prepared aluminium oxide (4.2.8) in n-hexane (4.2.1) into a chromatographic
column (4.3.4) containing a solvent-washed cotton wool plug (ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, A.5.15). Allow the
aluminium oxide to settle and cover it with a 30 mm layer of anhydrous sodium sulfate (4.2.7). Drain the
n-hexane until the meniscus reaches the top of the sodium sulfate layer. Add the n-hexane extract (4.4.2) and
wash into the column with 2 ml portions of n-hexane.
Elute at a flow rate not exceeding 5 ml/min with 50 ml of n-hexane (4.2.1), collecting the eluate in the rotary
evaporator (4.3.2). Concentrate the eluate to approximately 5 ml. Detach the graduated tube, fit a micro-
3)
Snyder column (4.3.5) and concentrate the eluate to 1 ml.
4.5 Gas chromatography
See ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, 6.2. For preliminary tests, etc., see ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Clauses 10
to 14.
5 Method C: Liquid-liquid partitioning with dimethylformamide (DMF) and clean-up
1)
on a Florisil column
5.1 Principle
See Reference [6].
6 © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
Organochlorine compounds, together with the fat, are extracted from the sample by the procedure specified in
5.4.1. The extract is concentrated almost to dryness, then dissolved in light petroleum. The organochlorine
compounds are partitioned into dimethylformamide. After addition of sodium sulfate solution, the
organochlorine compounds are further partitioned into light petroleum.
1)
The organic phase is purified by chromatography on Florisil , using a mixture of light petroleum and diethyl
ether as the eluting solvent. The eluate is concentrated then examined by GLC.
5.2 Reagents
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
5.2.1 Light petroleum, boiling range 30 °C to 40 °C, redistilled.
5.2.2 Diethyl ether (C H OC H ), peroxide-free.
2 5 2 5
5.2.3 Light petroleum, boiling range 60 °C to 80 °C, redistilled.
5.2.4 Eluting solvent, mixture of diethyl ether (5.2.2) and light petroleum (5.2.1) (6 + 94 parts by volume).
1)
5.2.5 Adsorbent: Florisil , 60 mesh to100 mesh.
Heat the adsorbent at 650 °C for 2 h in a muffle furnace. Cool to 130 °C and keep for 5 h at this temperature
in a drying oven. Afterwards, allow to cool to room temperature in a desiccator, then transfer to an airtight,
stoppered jar. Add 5 parts of distilled water to 95 parts of the adsorbent (by volume) and shake until free of
lumps. Allow to stand for 24 h and shake before use.
5.2.6 Sodium sulfate (Na SO ), granular, anhydrous.
2 4
Heat at 500 °C ± 25 °C for 4 h. Cool and store in a stoppered bottle.
5.2.7 Dimethylformamide (DMF), saturated with light petroleum.
Distil DMF and collect the fraction with boiling range 152 °C to 154 °C. Saturate this with light
petroleum (5.2.1).
5.2.8 Light petroleum (5.2.1), saturated with dimethylformamide.
5.2.9 Sodium sulfate solution, 2 % solution.
5.2.10 n-Hexane [CH (CH ) CH ].
3 2 4 3
5.3 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
5.3.1 High-speed blender.
2)
5.3.2 Rotary evaporator [Kuderna-Danish or equivalent], with flask of capacity 500 ml, and with
graduated tube attached.
5.3.3 Chromatographic column, of internal diameter 20 mm and length 300 mm, with a sintered glass
plate and a PTFE stopcock.
© ISO and IDF 2009 – All rights reserved 7

---------------------- Page: 12 ----------------------
ISO 3890-2:2009(E)
IDF 75-2:2009(E)
5.4 Procedure
5.4.1 Extraction of fat and organochlorine compounds
For general methods, see ISO 3890-1⎪IDF 75-1:2009, Annex A.
5.4.2 DMF-partitioning of fat and pesticides
Dissolve the sample extract, containing 2 g to 5 g of fat, in 25 ml of light petroleum saturated with DMF (5.2.8).
Transfer to a 250 ml separating funnel. Extract with small portions of a measured quantity (e.g. 75 ml) of DMF
saturated with light petroleum (5.2.7) added to the separating funnel. Shake vigorously for 1 min to 2 min each
time and drain the DMF phase into a 500 ml separating funnel. Mix the combined phases with 200 ml of
sodium sulfate solution (5.2.9) and shake for 1 min to 2 min each with one 40 ml and three 25 ml portions of
light petroleum (5.2.3). Collect the light petroleum phases and wash with about 10 ml of water. Dry over
sodium sulfate (5.2.6) and filter through a plug of cotton wool. After addition of about 5 ml of n-hexane (5.2.10)
through the cotton wool plug, reduce to a volume of about 5 ml in the rotary evaporator (5.3.2).
1)
5.4.3 Clean-up on Florisil with light petroleum
Half-fill the chromatographic column (5.3.3) with light petroleum (5.2.3). Add 20 g of deactivated
adsorbent (5.2.5) in small portions through a funnel, keeping the PTFE stopcock partly open and gently
tapping the column. Use only columns that are free from visible inclusions of air. Cover with a 20 mm layer of
anhydrous sodium sulfate (5.2.6) and allow the light petroleum to drain to the surface of the column filling.
Transfer the sample extract on to the column with several millilitres of the eluting solvent (5.2.4). Allow it to
enter into the column, filling by opening the tap until the meniscus reaches the layer of sodium sulfate (5.2.6).
Wash the original container with several millilitres of eluting solvent (5.2.4) and proceed as above. Elute the
column with 200 ml of the eluting solvent into a 500 ml round-bottomed flask at a flow rate not exceeding
5 ml/min. Concentrate the eluate in a rotary evaporator (5.3.2) to 5 ml. Transfer the concentrated extract to a
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 3890-2
FIL
75-2
Deuxième édition
2009-10-15

Lait et produits laitiers — Détermination
des résidus de composés organochlorés
(pesticides) —
Partie 2:
Méthodes d'essai pour la purification des
extraits bruts et tests de confirmation
Milk and milk products — Determination of residues of organochlorine
compounds (pesticides) —
Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation




Numéros de référence
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
©
ISO et FIL 2009

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO et la FIL
déclinent toute responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO et les comités nationaux de la FIL. Dans le cas peu probable où
surviendrait un problème d'utilisation, veuillez en informer le Secrétariat central de l'ISO à l'adresse donnée ci-dessous.


DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT


©  ISO et FIL 2009
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
soit de l'ISO soit de la FIL, à l'une ou l'autre des adresses ci-après.
ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Bruxelles
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Publié en Suisse

ii © ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives.1
3 Méthode A: Séparation liquide-liquide à l'aide d'acétonitrile et purification sur colonne de
Florisil.1
4 Méthode B: Séparation liquide-liquide à l'aide de diméthylformamide (DMF) et purification
sur colonne d'alumine.4
5 Méthode C: Séparation liquide-liquide à l'aide de diméthylformamide (DMF) et purification
1)
sur colonne de Florisil .7
6 Méthode D: Chromatographie sur colonne d'oxyde d'aluminium d'activité définie avec
précision.9
7 Méthode E: Chromatographie sur colonne d'oxyde d'aluminium.11
1)
8 Méthode F: Chromatographie sur colonne de Florisil partiellement désactivé.14
9 Méthode G: Chromatographie sur colonne de gel de silice partiellement désactivé .16
10 Méthode H: Chromatographie par perméation de gel .18
11 Tests de confirmation et procédé supplémentaire de purification .20
12 Procédé supplémentaire de purification.29
Bibliographie.31

© ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 3890-2⎪FIL 75-2 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération Internationale de Laiterie (FIL). Elle est publiée conjointement
par l'ISO et la FIL.
L'ISO 3890⎪FIL 75 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait et produits laitiers —
Détermination des résidus de composés organochlorés (pesticides):
⎯ Partie 1: Considérations générales et méthodes d'extraction
⎯ Partie 2: Méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts et tests de confirmation
Cette deuxième édition de l'ISO 3890-2⎪FIL 75-2 annule et remplace la première édition (ISO 3890-2:2000),
dont elle constitue une révision mineure.

iv © ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération Internationale de Laiterie) est une organisation sans but lucratif représentant le secteur
laitier mondial. Les membres de la FIL se composent des Comités Nationaux dans chaque pays membre et
des associations laitières régionales avec lesquelles la FIL a signé des accords de coopération. Tout membre
de la FIL a le droit de faire partie des Comités permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux
techniques. La FIL collabore avec l'ISO pour l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et
d'échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
La tâche principale des Comités permanents est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de
Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont soumis aux Comités
Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 50 % au moins
des Comités Nationaux de la FIL votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 3890-2⎪FIL 75-2 a été élaborée par la Fédération Internationale de Laiterie (FIL) et le comité technique
ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publiée conjointement
par la FIL et l'ISO.
L'ensemble des travaux a été confié à l'ancien Groupe d'Experts mixte ISO-FIL (E12 — Résidus de
pesticides) qui fait maintenant partie de l'Équipe d'Action mixte ISO-FIL Contaminants organiques et résidus
vétérinaires, du Comité permanent chargé des Méthodes analytiques pour additifs et contaminants.
L'ISO 3890⎪FIL 75 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait et produits laitiers —
Détermination des résidus de composés organochlorés (pesticides):
⎯ Partie 1: Considérations générales et méthodes d'extraction
⎯ Partie 2: Méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts et tests de confirmation
Cette édition de l'ISO 3890-2⎪FIL 75-2, conjointement à l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1, annule et remplace la
FIL 75C:1991, dont elle constitue une révision mineure.

© ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés v

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 75-2:2009(F)

Lait et produits laitiers — Détermination des résidus de
composés organochlorés (pesticides) —
Partie 2:
Méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts et tests
de confirmation
AVERTISSEMENT — L'utilisation de la présente partie de l'ISO 3890⎪FIL 75 peut impliquer l'utilisation
de produits et la mise en œuvre de modes opératoires et d'appareillages à caractère dangereux. La
présente partie de l'ISO 3890⎪FIL 75 ne prétend pas aborder tous les problèmes de sécurité qui sont
liés à son utilisation. Il incombe à l'utilisateur d'établir des pratiques appropriées en matière d'hygiène
et de sécurité et de déterminer l’applicabilité des restrictions réglementaires avant de l’utiliser.
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 3890⎪FIL 75 spécifie des méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts
obtenus avec les méthodes générales données dans l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1. Elle donne également des
méthodes recommandées pour la détermination des résidus de composés organochlorés dans le lait et les
produits laitiers ainsi que des tests de confirmation et des techniques de purification.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009, Lait et produits laitiers — Détermination des résidus de composés organochlorés
(pesticides) — Partie 1: Considérations générales et méthodes d'extraction
3 Méthode A: Séparation liquide-liquide à l'aide d'acétonitrile et purification sur
1)
colonne de Florisil
3.1 Principe
Voir Référence [3].
Extraction des composés organochlorés ainsi que de la matière grasse de l'échantillon par l'une des
méthodes spécifiées dans l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1. Concentration de l'extrait presque jusqu'à sec, puis
redissolution dans l'éther de pétrole et séparation des composés organochlorés dans l'acétonitrile. Après

1) Florisil (fourni par exemple par Floridin Co.) est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette
information est donnée à l'intention des utilisateurs de la présente partie de l'ISO 3890⎪FIL 75 et ne signifie nullement que
l'ISO ou la FIL approuvent ou recommandent l'emploi exclusif du produit ainsi désigné.
© ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés 1

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
mélange de l'acétonitrile avec un excès d'eau, séparation des composés organochlorés dans l'éther de
1)
pétrole. Purification de la phase organique par chromatographie sur une colonne de Florisil (silicate de
magnésium synthétique) en utilisant comme éluant un mélange d'éther de pétrole et d'éther diéthylique.
Concentration des éluats pour examen par chromatographie en phase gazeuse.
Une méthode particulière est décrite pour le fromage.
3.2 Réactifs
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l'eau distillée ou déminéralisée, ou de l'eau de pureté équivalente.
3.2.1 Éther de pétrole, ayant un point d'ébullition compris entre 40 °C et 60 °C.
Distiller sur pastilles d'hydroxyde de potassium ou d'hydroxyde de sodium.
3.2.2 Acétonitrile (CH CN), saturé d'éther de pétrole.
3
Pour la purification, mélanger 4 l d'acétonitrile avec 1 ml d'acide orthophosphorique et 30 g de pentoxyde de
phosphore dans un ballon en verre à fond rond. Ajouter des billes en verre et distiller à une température
comprise entre 81 °C et 82 °C. La température ne doit pas dépasser 82 °C.
Mélanger l'acétonitrile purifié avec suffisamment d'éther de pétrole pour qu'une séparation des phases se
produise.
3.2.3 Éther diéthylique (C H OC H ), exempt de peroxydes.
2 5 2 5
Distiller et stabiliser avec 2,0 % en fraction volumique d'éthanol absolu (C H OH).
2 5
3.2.4 Solvant d'élution A: mélange d'éther diéthylique (3.2.3) et d'éther de pétrole (3.2.1) (6 + 94 parties
en volume).
Sécher sur 10 g à 25 g de sulfate de sodium anhydre (3.2.6).
3.2.5 Solvant d'élution B: mélange d'éther diéthylique (3.2.3) et d'éther de pétrole (3.2.1) (15 + 85 parties
en volume).
Sécher sur 10 g à 25 g de sulfate de sodium anhydre (3.2.6).
3.2.6 Sulfate de sodium (Na SO ), en granulés, anhydre.
2 4
Chauffer à 500 °C ± 25 °C pendant 4 h. Laisser refroidir et conserver dans un flacon bouché.
1)
3.2.7 Adsorbant: Florisil , 60 mesh à 100 mesh.
Activer l'adsorbant par chauffage à 650 °C ± 25 °C pendant 4 h, le verser immédiatement dans des flacons
bien bouchés et le conserver dans l'obscurité. Avant usage, chauffer à 130 °C pendant au moins 5 h.
Il convient de conserver l'adsorbant soit à 130 °C ± 2 °C soit à la température ambiante dans un dessiccateur.
Dans ce dernier cas, cependant, il est recommandé de le chauffer à 130 °C ± 2 °C tous les 2 jours.
Il convient que chaque lot d'adsorbant soit contrôlé de temps en temps de la façon suivante.
2 © ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
Faire passer 1 ml d'une solution étalon d'hexane contenant 0,1 mg/l de lindane, d'heptachlore époxyde,
d'aldrine et de dieldrine et 0,3 mg/l d'endrine à travers la colonne d'absorption (voir
l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009, 9.3). Éluer et concentrer comme spécifié en 3.4.3. Déterminer la récupération
par chromatographie en phase gazeuse.
L'adsorbant est satisfaisant si le lindane, l'heptachlore, l'aldrine et l'heptachlore époxyde sont trouvés
quantitativement dans le solvant d'élution A (3.2.4) et la dieldrine et l'endrine dans le solvant
d'élution B (3.2.5).
3.2.8 Chlorure de sodium (NaCl), solution aqueuse à 2 % en fraction massique.
Chauffer le chlorure de sodium à 500 °C ± 25 °C pendant 4 h avant de préparer la solution.
3.2.9 Éthanol (C H OH), absolu.
2 5
3.2.10 Oxalate de sodium (Na C O ) ou oxalate de potassium (K C O ).
2 2 4 2 2 4
3.3 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
3.3.1 Colonnes de chromatographie, ayant un diamètre intérieur de 20 mm et une longueur de 300 mm,
munies de robinets en polytétrafluoroéthylène (PTFE) et de disques en verre fritté ou de tampons de laine de
verre.
2)
3.3.2 Évaporateur rotatif [appareil de Kuderna-Danish ou équivalent], avec fiole d'évaporation de 500 ml
de capacité, et relié à un tube gradué.
3.3.3 Mélangeur à grande vitesse.
3.3.4 Ampoules à décanter, ayant une capacité de 125 ml et 1 000 ml.
3.4 Mode opératoire
3.4.1 Extraction de la matière grasse et des composés organochlorés
3.4.1.1 Méthodes générales
Voir l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009, Annexe A.
3.4.1.2 Méthode particulière pour le fromage
Placer dans un mélangeur à grande vitesse (3.3.3) une quantité suffisante d'échantillon coupé en morceau
(pour obtenir 3 g de matière grasse), 2 g environ d'oxalate de sodium ou d'oxalate de potassium (3.2.10) et
100 ml d'éthanol (3.2.9) et mélanger pendant 2 min à 3 min. (Si, par expérience, on sait qu'avec le produit les
émulsions ne sont pas cassées par la centrifugation, ajouter 1 ml d'eau pour 2 g d'échantillon avant de
mélanger.) Verser la suspension homogénéisée dans un flacon à centrifuger de 500 ml, ajouter 50 ml d'éther
diéthylique (3.2.3) et secouer vigoureusement pendant 1 min. Ajouter 50 ml d'éther de pétrole (3.2.1) et
secouer vigoureusement pendant 1 min à 2 min (ou répartir le mélange dans deux flacons de 250 ml et
extraire chacun par agitation vigoureuse pendant 1 min à 2 min avec 25 ml d'éther de pétrole). Procéder
comme décrit dans l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009, A.6.3.3.

2) Exemple d'appareil approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs de la
présente partie de l'ISO 3890⎪FIL 75 et ne signifie nullement que l'ISO ou la FIL approuvent ou recommandent l'emploi
exclusif du produit ainsi désigné.
© ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés 3

---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
3.4.2 Séparation liquide-liquide
Peser, à 0,01 g près, 1 g à 3 g de la matière grasse extraite dans une ampoule à décanter de 125 ml (3.3.4)
et dissoudre dans 15 ml d'éther de pétrole (3.2.1). Ajouter 30 ml d'acétonitrile saturé d'éther de pétrole (3.2.2)
et agiter vigoureusement pendant 1 min à 2 min. Après séparation des phases, faire couler la couche
inférieure d'acétonitrile dans une ampoule à décanter de 1 000 ml (3.3.4) contenant 700 ml d'une solution de
chlorure de sodium (3.2.8) et 100 ml d'éther de pétrole (3.2.1). Secouer vigoureusement la couche d'éther de
pétrole restée dans l'ampoule à décanter de 125 ml par trois fois avec des portions de 30 ml
d'acétonitrile (3.2.2).
Rassembler les extraits d'acétonitrile dans l'ampoule à décanter de 1 000 ml, puis secouer avec précaution.
Soutirer la phase aqueuse inférieure dans une seconde ampoule à décanter de 1 000 ml et la secouer
pendant 12 s avec 100 ml d'éther de pétrole. Rassembler les phases éther de pétrole provenant des deux
ampoules à décanter de 1 000 ml. Laver deux fois avec des portions de 100 ml d'eau ou de solution de
chlorure de sodium (3.2.8). Sécher sur sulfate de sodium (3.2.6) et filtrer dans la fiole d'évaporation de 500 ml
de l'évaporateur rotatif (3.3.2) muni d'un tube gradué. Rincer la colonne de sulfate de sodium trois fois avec
des portions de 10 ml d'éther de pétrole (3.2.1). Ensuite, concentrer la solution d'éther de pétrole jusqu'à
10 ml à l'aide de l'évaporateur rotatif (3.3.2).
1)
3.4.3 Purification sur colonne de Florisil
Placer dans une colonne chromatographique (3.3.1) une couche d'adsorbant (3.2.7) de 100 mm. Couvrir
d'une couche de 10 mm de sulfate de sodium (3.2.6) et rincer le tout avec 40 ml à 50 ml d'éther de
pétrole (3.2.1). Introduire sur la colonne (3.3.1), à la pipette, les 10 ml de l'extrait concentré dans l'éther de
pétrole obtenu en 3.4.2 et rincer le récipient deux fois avec des portions d'environ 5 ml d'éther de pétrole.
Éluer ensuite dans une fiole d'évaporation (3.3.2) munie d'un tube gradué en utilisant 200 ml du solvant
d'élution A (3.2.4). Il convient que la vitesse d'élution ne dépasse pas 5 ml/min. Changer les fioles de
réception et éluer de la même façon en utilisant 200 ml du solvant d'élution B (3.2.5).
Concentrer les deux éluats séparément jusqu'au petit volume désiré en utilisant l'évaporateur rotatif (3.3.2).
Examiner chaque éluat par chromatographie en phase gazeuse. Si une purification supplémentaire se révèle
nécessaire, celle-ci peut être conduite sur une seconde colonne d'adsorbant récemment préparé ou comme
indiqué dans l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009, Annexe A.
Le premier éluat contient un peu d'HCB, les isomères HCH, l'heptachlore, l'heptachlore époxyde, l'aldrine, le
DDE, le TDE et le DDT. Le second éluat contient la dieldrine et l'endrine.
3.5 Chromatographie en phase gazeuse
Voir l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009, 6.2. Pour les essais préliminaires, etc., voir l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009,
Articles 10 à 14.
4 Méthode B: Séparation liquide-liquide à l'aide de diméthylformamide (DMF) et
purification sur colonne d'alumine
4.1 Principe
Voir Références [4] et [5].
Extraction des composés organochlorés ainsi que de la matière grasse de l'échantillon pour essai par la
méthode décrite dans l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009, Article A.6, puis séparation des résidus dans le
diméthylformamide. Après addition d'une solution de sulfate de sodium, séparation des composés
organochlorés dans le n-hexane. Purification de la phase organique par chromatographie sur oxyde
d'aluminium neutre en utilisant comme éluant le n-hexane. Concentration de l'éluat pour examen par
chromatographie en phase gazeuse.
Des méthodes particulières sont décrites pour le lait et le beurre.
4 © ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
4.2 Réactifs
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l'eau distillée ou déminéralisée, ou de l'eau de pureté équivalente.
4.2.1 n-Hexane [CH (CH ) CH ], ayant un point d'ébullition compris entre 68 °C et 70 °C.
3 2 4 3
Vérifier la pureté par chromatographie en phase gazeuse dans les conditions de travail de la colonne. Si
nécessaire, distiller sur hydroxyde de potassium.
4.2.2 Acétone (CH COCH ), d'utilisation courante, qualité réactif.
3 3
4.2.3 Diméthylformamide (DMF).
Examiner un extrait au n-hexane d'une solution aqueuse diluée pour déceler les pics susceptibles d'interférer
lors de l'analyse par chromatographie en phase gazeuse. Redistiller le solvant, si nécessaire, et recueillir la
fraction dont le point d'ébullition est compris entre 152 °C et 154 °C.
4.2.4 n-Hexane, saturé de diméthylformamide.
4.2.5 Diméthylformamide, saturée de n-hexane.
4.2.6 Sable, lavé à l'acide.
Chauffer pendant 4 h à 500 °C, puis refroidir et conserver dans un flacon bouché.
4.2.7 Sulfate de sodium (Na SO ), en granulés, anhydre.
2 4
Chauffer pendant 4 h à 500 °C, puis refroidir et conserver dans un flacon bouché.
4.2.8 Oxyde d'aluminium (Al O ), neutre, activé.
2 3
Chauffer l'oxyde d'aluminium pendant 4 h à 500 °C, puis refroidir. Ajouter avec précaution 7 parties d'eau à
93 parties d'oxyde d'aluminium (fraction massique) et mélanger soigneusement dans un récipient fermé
pendant au moins 90 min. Maintenir le récipient bien bouché et utiliser l'oxyde d'aluminium dans les 10 jours
qui suivent.
4.2.9 Sulfate de sodium, solution aqueuse à 2 % en fraction massique.
4.3 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
4.3.1 Appareil d'extraction Soxhlet.
2)
4.3.2 Évaporateur rotatif [appareil de Kuderna-Danish ou équivalent], avec fiole d'évaporation de 500 ml
de capacité, et relié à un tube gradué.
4.3.3 Mélangeur à grande vitesse.
4.3.4 Colonnes de chromatographie, ayant un diamètre intérieur de 12 mm et une longueur de 300 mm,
munies de robinets en PTFE.
© ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés 5

---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
3)
4.3.5 Microcolonnes Snyder .
4.4 Mode opératoire
4.4.1 Extraction de la matière grasse et des composés organochlorés
4.4.1.1 Méthodes générales
Voir l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009, Annexe A.
4.4.1.2 Méthodes particulières
4.4.1.2.1 Lait
Introduire, dans l'ordre, 40 ml de lait bien mélangé, 80 ml d'acétone (4.2.2) et 80 ml de n-hexane (4.2.1) dans
un bécher vortex de 250 ml. Homogénéiser ce mélange pendant 3 min. Le transférer immédiatement dans un
tube à centrifuger de 250 ml en lavant les lames du mixer avec 10 ml de n-hexane, puis avec 5 ml d'eau, et
ajouter les lavages dans le tube.
−1
Placer le tube dans une centrifugeuse à une fréquence de rotation de 2 500 min pendant 5 min. Recueillir la
couche de solvant n-hexane et la faire passer à travers une courte colonne de sulfate de sodium
anhydre (4.2.7). Laver le contenu du tube avec deux fractions successives de 25 ml de n-hexane et faire
passer les lavages à travers la colonne. Réduire les extraits rassemblés jusqu'à 15 ml environ dans
l'évaporateur rotatif (4.3.2). Transférer la solution dans une ampoule à décanter de 100 ml, graduée à 25 ml,
et ajuster le volume à 25 ml. (Voir également 7.4.1.2.2 pour le lait).
4.4.1.2.2 Beurre
Dissoudre 5 g de matière grasse butyrique clarifiée (fondue et décantée sur filtre) dans 10 ml de n-hexane.
Transférer la solution dans une ampoule à décanter de 100 ml à l'aide de trois portions successives de 5 ml
de n-hexane.
4.4.2 Séparation de la matière grasse et des composés organochlorés à l'aide de DMF
Extraire la matière grasse des 25 ml de solution d'hexane (4.4.1) avec 10 ml de diméthylformamide (DMF)
saturée de n-hexane (4.2.5) en l'agitant dans une ampoule de décantation. Après 2 min à 3 min, recueillir la
couche inférieure de DMF dans une seconde ampoule à décanter de 100 ml (en retenant toute émulsion
interfaciale dans la première ampoule à décanter). Répéter l'extraction de la solution de n-hexane avec deux
portions supplémentaires de 10 ml de DMF (4.2.5). Combiner les extraits DMF et les Iaver avec 10 ml de
n-hexane saturé de DMF (4.2.4).
Séparer la fraction de 10 ml de n-hexane et la laver avec une nouvelle portion de 10 ml de DMF (4.2.5).
Rejeter le n-hexane et ajouter les lavages à l'extrait initial de 30 ml de DMF dans une ampoule à décanter de
500 ml (ou de préférence de 350 ml). Ajouter 6 ml de n-hexane (4.2.1) et secouer vigoureusement pendant
2 min avec 200 ml de solution de sulfate de sodium (4.2.9).
Laisser reposer pendant 20 min pour permettre la séparation. Rassembler la phase à base de n-hexane par
agitation douce en tournant. Éliminer la phase aqueuse, sécher l'ampoule à décanter avec un papier filtre et
recueillir le n-hexane dans un tube gradué, à col rodé, pouvant contenir 15 ml de solvant. Rincer l'ampoule à
décanter avec de petites quantités de n-hexane et les ajouter au tube.
3)
Relier le tube à une microcolonne Snyder (4.3.5) et concentrer l'extrait au n-hexane à environ 2 ml.

3) Exemple d'appareil approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs de la
présente partie de l'ISO 3890⎪FIL 75 et ne signifie nullement que l'ISO ou la FIL approuvent ou recommandent l'emploi
exclusif du produit ainsi désigné.
6 © ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO 3890-2:2009(F)
FIL 75-2:2009(F)
4.4.3 Purification sur colonne d'oxyde d'aluminium à l'aide de n-hexane
Préparer une suspension de 5 g d'oxyde d'aluminium (4.2.8) dans le n-hexane (4.2.1) et la verser dans une
colonne de chromatographie (4.3.4) contenant un petit tampon de laine de coton lavé au solvant (voir
l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009, A.5.15). Laisser l'oxyde d'aluminium se déposer et le recouvrir d'une couche de
sulfate de sodium anhydre de 30 mm (4.2.7). Laisser s'écouler le n-hexane jusqu'à ce que le ménisque
atteigne le haut de la couche de sulfate de sodium. Ajouter l'extrait (4.4.2) au n-hexane et laver la colonne
avec des portions de 2 ml de n-hexane.
Éluer à un débit d'élution n'excédant pas 5 ml/min avec 50 ml de n-hexane (4.2.1); recueillir l'éluat dans
l'évaporateur rotatif (4.3.2). Concentrer l'éluat à approximativement 5 ml. Détacher le tube gradué, l'adapter
3)
sur une microcolonne Snyder (4.3.5) et poursuivre la réduction de l'éluat jusqu'à un volume de 1 ml.
4.5 Chromatographie en phase gazeuse
Voir l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009, 6.2. Pour les essais préliminaires, etc., voir l'ISO 3890-1⎪FIL 75-1:2009,
Articles 10 à 14.
5 Méthode C: Séparation liquide-liquide à l'aide de diméthylformamide (DMF) et
1)
purification sur colonne de Florisil
5.1 Principe
Voir Référence [6].
Extraction des composés organochlorés ainsi que de la matière grasse de l'échantillon par la méthode
spécifiée en 5.4.1. Concentration de l'extrait presque jusqu'à sec, puis dissolution dans l'éther de pétrole et
séparation des composés organochlorés dans le diméthylformamide. Après addition d'une solution de sulfate
de sodium, séparation supplémentaire des composés organochlorés dans l'éther de pétrole.
1)
Purification de la phase organique par chromatographie sur Florisil en utilisant comme éluant un mélange
d'éther de pétrole et d'éther diéthylique. Concentration de l'éluat pour examen par chromatographie en phase
gazeuse.
5.2 Réactifs
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l'eau distillée ou déminéralisée, ou de l'eau de pureté équivalente.
5.2.1 Éther de pétrole, redistillé
...