Soil quality — Determination of dehydrogenases activity in soils — Part 2: Method using iodotetrazolium chloride (INT)

This document specifies a method for determining activity of dehydrogenases in soil, using 2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyltetrazolium chloride (INT)[1]-[5]. As the INT reduction is less sensitive to O2, the method is more robust than the TTC-method described in ISO 23753-1.

Qualité du sol — Détermination de l'activité des déshydrogénases dans les sols — Partie 2: Méthode au chlorure de iodotétrazolium (INT)

Le présent document spécifie une méthode de détermination de l'activité des déshydrogénases dans le sol à l'aide de chlorure de 2-(4-iodophényl)-3-(4-nitrophényl)-5-phényltétrazolium (INT).[1]-[5] Comme la réduction de l'INT est moins sensible à la présence d'O2, cette méthode est plus robuste que la méthode au CTT décrite dans l'ISO 23753‑1.

General Information

Status
Published
Publication Date
14-Feb-2019
Current Stage
6060 - International Standard published
Start Date
15-Feb-2019
Completion Date
15-Feb-2019
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ISO 23753-2:2019 - Soil quality -- Determination of dehydrogenases activity in soils
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ISO 23753-2:2019 - Qualité du sol -- Détermination de l'activité des déshydrogénases dans les sols
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Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 23753-2
Second edition
2019-02
Soil quality — Determination of
dehydrogenases activity in soils —
Part 2:
Method using iodotetrazolium
chloride (INT)
Qualité du sol — Détermination de l'activité des déshydrogénases
dans les sols —
Partie 2: Méthode au chlorure de iodotétrazolium (INT)
Reference number
ISO 23753-2:2019(E)
ISO 2019
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 23753-2:2019(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2019

All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may

be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting

on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address

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Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2019 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 23753-2:2019(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 1

5 Limitations .................................................................................................................................................................................................................. 1

6 Reagents and materials ................................................................................................................................................................................. 2

7 Apparatus ..................................................................................................................................................................................................................... 2

8 Procedure..................................................................................................................................................................................................................... 3

8.1 Establishment of standard curve ............................................................................................................................................ 3

8.2 Sampling ....................................................................................................................................................................................................... 3

9 Calculation .................................................................................................................................................................................................................. 4

10 Validity criteria ...................................................................................................................................................................................................... 4

10.1 Standard curve ........................................................................................................................................................................................ 4

10.2 Samples ......................................................................................................................................................................................................... 5

11 Test report ................................................................................................................................................................................................................... 5

Annex A (informative) Results of modified parameters ................................................................................................................... 6

Bibliography ................................................................................................................................................................................................................................ 8

© ISO 2019 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 23753-2:2019(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the

World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso

.org/iso/foreword .html.

This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 190, Soil quality, Subcommittee SC 4,

Biological characterization.

This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 23753-2:2005), which has been

technically revised. The main changes compared to the previous edition are as follows:

— a new Clause 5 “Limitations” has been added;

— in Clause 6, reagents and their preparation have been updated to new results (e.g. concentration of

Tris buffer of 100 mmol/l at pH 7,6, incubation time between 4 h to 6 h);
— new Tables 1 and 2 have been added;
— Clause 10 "Validity criteria" has been added;
— a new Annex A “Results of modified parameters” has been added;
— references in Clause 2 and the Bibliography have been updated.
A list of all the parts in the ISO 23753 series can be found on the ISO website.

Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A

complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2019 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 23753-2:2019(E)
Introduction

The soil microflora is responsible for the decomposition and conversion of organic substances, carbon,

nitrogen, sulfur and phosphorus cycles, soil aggregates stability and as a food source for microbivores.

Dehydrogenases, as intracellular enzymes and respiratory chain components of the microbial cells, play

a major role in the production of energy by organisms. They oxidize organic compounds by transferring

electrons to an acceptor (e.g. NAD ). Dehydrogenases are essential components of the enzyme system

of microorganisms. Dehydrogenase activity can therefore be used as an indicator of biological redox

systems and as a measure of the viable and physiologically active soil microbial community.

Microbial oxidative activity in soil is linked to respiratory activity, which could be approached with the

determination of dehydrogenases activity. Basal and induced respiration in soil could be affected by

soil management, practices and contamination.
© ISO 2019 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 23753-2:2019(E)
Soil quality — Determination of dehydrogenases activity
in soils —
Part 2:
Method using iodotetrazolium chloride (INT)
1 Scope

This document specifies a method for determining activity of dehydrogenases in soil, using

[1]-[5]

2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyltetrazolium chloride (INT) . As the INT reduction is

less sensitive to O , the method is more robust than the TTC-method described in ISO 23753-1.

2 Normative references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content

constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For

undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 11465, Soil quality — Determination of dry matter and water content on a mass basis —

Gravimetric method

ISO 18400-206, Soil quality — Sampling — Part 206: Collection, handling and storage of soil under aerobic

conditions for the assessment of microbiological processes, biomass and diversity in the laboratory

3 Terms and definitions
No terms and definitions are listed in this document.

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:

— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
4 Principle

INT solution is added to a soil sample and the mixture is incubated at 25 °C ± 1 °C for 4 h to 6 h depending

of soil uses (agricult
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 23753-2
Deuxième édition
2019-02
Qualité du sol — Détermination de
l'activité des déshydrogénases dans
les sols —
Partie 2:
Méthode au chlorure de
iodotétrazolium (INT)
Soil quality — Determination of dehydrogenases activity in soils —
Part 2: Method using iodotetrazolium chloride (INT)
Numéro de référence
ISO 23753-2:2019(F)
ISO 2019
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 23753-2:2019(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette

publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,

y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut

être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.

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Tél.: +41 22 749 01 11
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Publié en Suisse
ii © ISO 2019 – Tous droits réservés
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ISO 23753-2:2019(F)
Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 1

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 1

5 Restrictions ................................................................................................................................................................................................................ 2

6 Réactifs et produits ............................................................................................................................................................................................ 2

7 Appareillage .............................................................................................................................................................................................................. 3

8 Mode opératoire.................................................................................................................................................................................................... 3

8.1 Établissement de la courbe d’étalonnage ........................................................................................................................ 3

8.2 Échantillonnage ...................................................................................................................................................................................... 3

9 Calculs .............................................................................................................................................................................................................................. 4

10 Critères de validité ............................................................................................................................................................................................. 5

10.1 Courbe d’étalonnage .......................................................................................................................................................................... 5

10.2 Échantillons ............................................................................................................................................................................................... 5

11 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................................... 5

Annexe A (informative) Résultats obtenus avec les paramètres modifiés .................................................................... 6

Bibliographie .............................................................................................................................................................................................................................. 8

© ISO 2019 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 23753-2:2019(F)
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.

L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents

critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www

.iso .org/directives).

L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions

spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion

de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/avant -propos.

Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 190, Qualité du sol, sous-comité SC 4,

Caractérisation biologique.

Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 23753-2:2005), qui a fait l’objet

d’une révision technique. Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les

suivantes:
— un nouvel Article 5 «Restrictions» a été ajouté;

— à l’Article 6, les réactifs et leur préparation ont été mis à jour avec les nouveaux résultats (par

exemple, concentration du tampon Tris de 100 mmol/l à un pH de 7,6, durée d’incubation comprise

entre 4 h et 6 h);
— les nouveaux Tableaux 1 et 2 ont été ajoutés;
— l'Article 10 «Critères de validité» a été ajouté;

— une nouvelle Annexe A «Résultats obtenus avec les paramètres modifiés» a été ajoutée;

— les références de l’Article 2 et de la bibliographie ont été mises à jour.

Une liste de toutes les parties de la série ISO 23753 se trouve sur le site web de l’ISO.

Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent

document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes

se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
iv © ISO 2019 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 23753-2:2019(F)
Introduction

La microflore du sol est responsable de la décomposition et de la transformation des matières

organiques, des cycles du carbone, de l’azote, du soufre et du phosphore, de la stabilité des agrégats

du sol et sert de source de nourriture pour les organismes microbivores. Les déshydrogénases, en tant

qu’enzymes intracellulaires et composants de la chaîne respiratoire des cellules microbiennes, jouent

un rôle fondamental dans la production d’énergie par les organismes. Elles permettent l’oxydation

des composés organiques par le transfert d'électrons à un accepteur (par exemple, NAD ). Les

déshydrogénases sont des composants essentiels du système enzymatique des micro-organismes.

L’activité des déshydrogénases peut donc être utilisée comme indicateur des réactions biologiques

d’oxydoréduction ainsi que pour mesurer la communauté microbienne viable et physiologiquement

active dans le sol.

L’activité microbienne oxydative dans le sol est liée à l’activité respiratoire, qui pourrait être évaluée

approximativement en déterminant l’activité des déshydrogénases. La respiration basale et induite

dans le sol pourrait être affectée par la gestion, les pratiques de gestion et la contamination des sols.

© ISO 2019 – Tous droits réservés v
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NORME INTERNATIONALE ISO 23753-2:2019(F)
Qualité du sol — Détermination de l'activité des
déshydrogénases dans les sols —
Partie 2:
Méthode au chlorure de iodotétrazolium (INT)
1 Domaine d’application

Le présent document spécifie une méthode de détermination de l’activité des déshydrogénases dans

[1] [5]

le sol à l’aide de chlorure de 2-(4-iodophényl)-3-(4-nitrophényl)-5-phényltétrazolium (INT). -

Comme la réduction de l’INT est moins sensible à la présence d’O , cette méthode est plus robuste que la

méthode au CTT décrite dans l’ISO 23753-1.
2 Références normatives

Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur

contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.

Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les

éventuels amendements).

ISO 11465, Qualité du sol — Détermination de la teneur pondérale en matière sèche et en eau — Méthode

gravimétrique

ISO 18400-206, Qualité du sol — Échantillonnage — Partie 206: Collecte, manipulation et conservation de

sols destinés à l'évaluation de paramètres biologiques fonctionnels et structurels en laboratoire

3 Termes et définitions
Aucun terme n’est défini dans le présent document.

L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en

normalisation, consultables aux adresses suivantes:

— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp

— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/
4 Principe

La solution d’INT est ajoutée à un échantillon de sol et le mélange est incubé à 25 °C ± 1 °C pendant

4 h à 6 h, en fonction des usages du sol (sol agricole ou forestier, par exemple). L’iodonitrotétrazolium

formazan (INTF) formé est extrait à l’acétone et dosé par spectrophotométrie à une longueur d’onde

de 485 nm.

NOTE 1 Cette méthode est fondée sur une version modifiée de la méthode décrite dans la Référence [1].

NOTE 2 L’acétone est utilisé
...

Questions, Comments and Discussion

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