ISO 3356:2009

Milk — Determination of alkaline phosphatase

ISO 3356|IDF 63:2009 specifies a method for the determination of alkaline phosphatase activity in milk. The method applies to alkaline phosphatase activities not less than 1 µg of phenol per millilitre. The method is also suitable for the determination of alkaline phosphatase activity in milk powder, buttermilk and buttermilk powder, whey and whey powder.

Lait — Détermination de la phosphatase alcaline

L'ISO 3356|FIL 63:2009 spécifie une méthode pour la détermination de l'activité phosphatasique alcaline du lait. La méthode s'applique aux activités phosphatasiques alcalines supérieures ou égales à 1 µg de phénol par millilitre. La méthode convient également à la détermination de l'activité phosphatasique alcaline du lait en poudre, du babeurre et de la poudre de babeurre, du sérum et de la poudre de sérum.

Mleko - Določevanje alkalne fosfataze

Ta mednarodni standard določa metodo za določevanje aktivnosti alkalne fosfataze v mleku.
Metoda velja za aktivnosti alkalne fosfataze, večjih od 1 µg fenola na mililiter. Metoda je prav tako primerna za določevanje aktivnosti alkalne fosfataze v mleku v prahu, pinjencu in pinjencu v prahu, sirotki in sirotki v prahu.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 01-Mar-2009
• ICS: 67.100.10 - Milk and processed milk products
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 23-Dec-2022
• Ref Project: SIST ISO 3356:2011 - Milk -- Determination of alkaline phosphatase

Relations

• Revises: ISO 3356:1975 - Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk powder, whey and whey powder — Determination of phosphatase activity (Reference method)
• Effective Date: 15-Apr-2008
• Revised: SIST ISO 3356:2001 - Milk and dried milk, buttermilk and buttermilk powder, whey and whey powder -- Determination of phosphatase activity (Reference method)
• Effective Date: 12-May-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 3356
IDF
63
Second edition
2009-03-01

Milk — Determination of alkaline
phosphatase
Lait — Détermination de la phosphatase alcaline




Reference numbers
ISO 3356:2009(E)
IDF 63:2009(E)
©
ISO and IDF 2009

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ISO 3356:2009(E)
IDF 63:2009(E)
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and IDF national committees. In the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the ISO Central Secretariat at the
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©  ISO and IDF 2009
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO or IDF at the respective
address below.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
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Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Published in Switzerland

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ISO 3356:2009(E)
IDF 63:2009(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 3356⎪IDF 63 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and
IDF.
This second edition of ISO 3356⎪IDF 63 cancels and replaces the first edition of ISO 3356:1975, which has
been technically revised.
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ISO 3356:2009(E)
IDF 63:2009(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit organization representing the dairy sector worldwide.
IDF membership comprises National Committees in every member country as well as regional dairy
associations having signed a formal agreement on cooperation with IDF. All members of IDF have the right to
be represented at the IDF Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of
IDF National Committees casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 3356|IDF 63 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk
and milk products. It is being published jointly by ISO and IDF.
All work was carried out by the Joint ISO-IDF Action Team on Heat treatment of the Standing Committee on
Minor components and characterization of physical properties under the aegis of its project leader, Mrs.
M. Nicolas (FR).
This edition of ISO 3356⎪IDF 63 cancels and replaces IDF 63:1971, which has been technically revised.


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ISO 3356:2009(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 63:2009(E)

Milk — Determination of alkaline phosphatase
WARNING — The use of this International Standard may involve hazardous materials, operations and
reagents. Persons using this International Standard should be familiar with normal laboratory
practice. This International Standard does not purport to address all the safety problems, if any,
associated with its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health
practices and to ensure compliance with any national regulatory conditions.
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of alkaline phosphatase activity in milk.
The method applies to alkaline phosphatase activities not less than 1 µg of phenol per millilitre.
The method is also suitable for the determination of alkaline phosphatase activity in milk powder, buttermilk
and buttermilk powder, whey and whey powder.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
alkaline phosphatase activity
ALP activity
〈alkaline phosphatase activity in milk〉 quantity of phenol liberated by the sample determined according to the
procedure specified in this International Standard
NOTE The alkaline phosphatase activity is expressed as the quantity of phenol, in micrograms, liberated by 1 ml of
the sample or of reconstituted sample, under the conditions specified in this International Standard. Other International
[6] [7]
Standards (e.g. ISO 11816-1⎪IDF 155-1 , ISO 22160⎪IDF 209 ) express alkaline phosphatase activity in milliunits per
litre. The literature gives information on the equivalence of the different units used to express the alkaline phosphatase
activity.
3 Principle
The sample is diluted with a buffer at pH 10,6 and incubated at a temperature of 37 °C for 1 h. Under these
conditions, any alkaline phosphatase present in the sample liberates phenol from the disodium
phenylphosphate added. The phenol liberated reacts with a quinoneimide (dibromoquinonechlorimide) to
produce dibromoindophenol (blue colour) which is measured photometrically at 610 nm.
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and only distilled water or water
of equivalent purity.
© ISO and IDF 2009 – All rights reserved 1

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ISO 3356:2009(E)
IDF 63:2009(E)
4.1 Barium borate-hydroxide buffer solution
Dissolve 25,0 g of barium hydroxide [Ba(OH) ·8H O], carbonate free, in water in a 500 ml one-mark
2 2
volumetric flask (5.8). Make up to the mark with water and mix.
Dissolve 11,0 g of boric acid (H BO ) in water in another 500 ml one-mark volumetric flask (5.8). Make up to
3 3
the mark with water and mix.
Warm both solutions to 50 °C. Add one to the other and mix by stirring. Cool the solution obtained rapidly to
about 20 °C. Adjust the pH of the solution, if necessary, to 10,6 ± 0,1 with an additional amount of barium
hydroxide solution. Filter the solution through filter paper (5.10).
Store the filtered barium borate-hydroxide buffer solution in a tightly stoppered container. Before use, dilute
the buffer solution with an equal volume of water.
4.2 Colour development buffer solutions
4.2.1 Colour buffer solution I
Dissolve 6,0 g of sodium metaborate (NaBO ) or 12,6 g of NaBO⋅4H O, and 20,0 g of sodium chloride (NaCl)
2 2 2
in water in a 1 000 ml one-mark volumetric flask (5.8). Make up to the mark with water and mix.
4.2.2 Colour buffer solution II
Transfer 10 ml of buffer solution I (4.2.1) to a 100 ml one-mark volumetric flask (5.8). Make up to the mark
with water and mix.
4.3 Buffer substrate solution
4.3.1 Disodium phenylphosphate dihydrate (Na C H PO⋅2H O), containing no more than 0,01 % mass
2 6 5 4 2
fraction phenol.
4.3.2 Dissolve 0,1 g of disodium phenylphosphate dihydrate (4.3.1) in 100 ml of diluted barium borate-
hydroxide buffer solution (4.1).
4.4 Zinc-copper precipitant solution
Dissolve 3,0 g of zinc sulfate (ZnSO⋅7H O) and 0,6 g of copper sulfate (CuSO⋅5H O) in water in a 100 ml
4 2 4 2
one-mark volumetric flask (5.8). Make up to the mark with water and mix.
4.5 2,6-Dibromoquinonechloroimide (BQC) solution, Gibb's reagent.
Dissolve 40 mg ± 1 mg of BQC (C H Br ClNO) in 10 ml of ethanol 96 % volume fraction.
6 2 2
Store the solution in a dark coloured bottle at 4 °C ± 2 °C. Reject if discoloured or more than 1 month old.
4.6 Copper sulfate solution
Dissolve 0,05 g of copper sulfate (CuSO⋅5H O) in water in a 100 ml one-mark volumetric flask (5.8). Make up
4 2
to the 100 ml mark with water and mix.
2 © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

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ISO 3356:2009(E)
IDF 63:2009(E)
4.7 Sodium hydroxide solution, c(NaOH) = 0,5 mol/l.
4.8 Phenol standard solutions
4.8.1 Phenol standard stock solution
Transfer a weighed amount of 200 mg ± 2 mg of anhydrous phenol of purity higher than 99,5 % mass fraction
into a 100 ml one-mark volumetric flask (5.8). Dissolve the phenol in water. Make up to the mark with water
and mix.
The phenol standard stock solution remains stable at 4 °C ± 2 °C for 6 weeks.
4.8.2 Phenol standard working solutions
Pipette 10 ml of pheno
...

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 3356:2011
01-junij-2011
1DGRPHãþD
SIST ISO 3356:2001
0OHNR'RORþHYDQMHDONDOQHIRVIDWD]H
Milk -- Determination of alkaline phosphatase
Lait -- Détermination de la phosphatase alcaline
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 3356:2009
ICS:
67.100.10 0OHNRLQSUHGHODQLPOHþQL Milk and processed milk
SURL]YRGL products
SIST ISO 3356:2011 en,fr
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

---------------------- Page: 1 ----------------------

SIST ISO 3356:2011

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SIST ISO 3356:2011


INTERNATIONAL ISO
STANDARD 3356
IDF
63
Second edition
2009-03-01

Milk — Determination of alkaline
phosphatase
Lait — Détermination de la phosphatase alcaline




Reference numbers
ISO 3356:2009(E)
IDF 63:2009(E)
©
ISO and IDF 2009

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SIST ISO 3356:2011
ISO 3356:2009(E)
IDF 63:2009(E)
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and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
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Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and
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IDF membership comprises National Committees in every member country as well as regional dairy
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be represented at the IDF Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of
IDF National Committees casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 3356|IDF 63 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk
and milk products. It is being published jointly by ISO and IDF.
All work was carried out by the Joint ISO-IDF Action Team on Heat treatment of the Standing Committee on
Minor components and characterization of physical properties under the aegis of its project leader, Mrs.
M. Nicolas (FR).
This edition of ISO 3356⎪IDF 63 cancels and replaces IDF 63:1971, which has been technically revised.


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SIST ISO 3356:2011
ISO 3356:2009(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 63:2009(E)

Milk — Determination of alkaline phosphatase
WARNING — The use of this International Standard may involve hazardous materials, operations and
reagents. Persons using this International Standard should be familiar with normal laboratory
practice. This International Standard does not purport to address all the safety problems, if any,
associated with its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health
practices and to ensure compliance with any national regulatory conditions.
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of alkaline phosphatase activity in milk.
The method applies to alkaline phosphatase activities not less than 1 µg of phenol per millilitre.
The method is also suitable for the determination of alkaline phosphatase activity in milk powder, buttermilk
and buttermilk powder, whey and whey powder.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
alkaline phosphatase activity
ALP activity
〈alkaline phosphatase activity in milk〉 quantity of phenol liberated by the sample determined according to the
procedure specified in this International Standard
NOTE The alkaline phosphatase activity is expressed as the quantity of phenol, in micrograms, liberated by 1 ml of
the sample or of reconstituted sample, under the conditions specified in this International Standard. Other International
[6] [7]
Standards (e.g. ISO 11816-1⎪IDF 155-1 , ISO 22160⎪IDF 209 ) express alkaline phosphatase activity in milliunits per
litre. The literature gives information on the equivalence of the different units used to express the alkaline phosphatase
activity.
3 Principle
The sample is diluted with a buffer at pH 10,6 and incubated at a temperature of 37 °C for 1 h. Under these
conditions, any alkaline phosphatase present in the sample liberates phenol from the disodium
phenylphosphate added. The phenol liberated reacts with a quinoneimide (dibromoquinonechlorimide) to
produce dibromoindophenol (blue colour) which is measured photometrically at 610 nm.
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and only distilled water or water
of equivalent purity.
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SIST ISO 3356:2011
ISO 3356:2009(E)
IDF 63:2009(E)
4.1 Barium borate-hydroxide buffer solution
Dissolve 25,0 g of barium hydroxide [Ba(OH) ·8H O], carbonate free, in water in a 500 ml one-mark
2 2
volumetric flask (5.8). Make up to the mark with water and mix.
Dissolve 11,0 g of boric acid (H BO ) in water in another 500 ml one-mark volumetric flask (5.8). Make up to
3 3
the mark with water and mix.
Warm both solutions to 50 °C. Add one to the other and mix by stirring. Cool the solution obtained rapidly to
about 20 °C. Adjust the pH of the solution, if necessary, to 10,6 ± 0,1 with an additional amount of barium
hydroxide solution. Filter the solution through filter paper (5.10).
Store the filtered barium borate-hydroxide buffer solution in a tightly stoppered container. Before use, dilute
the buffer solution with an equal volume of water.
4.2 Colour development buffer solutions
4.2.1 Colour buffer solution I
Dissolve 6,0 g of sodium metaborate (NaBO ) or 12,6 g of NaBO⋅4H O, and 20,0 g of sodium chloride (NaCl)
2 2 2
in water in a 1 000 ml one-mark volumetric flask (5.8). Make up to the mark with water and mix.
4.2.2 Colour buffer solution II
Transfer 10 ml of buffer solution I (4.2.1) to a 100 ml one-mark volumetric flask (5.8). Make up to the mark
with water and mix.
4.3 Buffer substrate solution
4.3.1 Disodium phenylphosphate dihydrate (Na C H PO⋅2H O), containing no more than 0,01 % mass
2 6 5 4 2
fraction phenol.
4.3.2 Dissolve 0,1 g of disodium phenylphosphate dihydrate (4.3.1) in 100 ml of diluted barium borate-
hydroxide buffer solution (4.1).
4.4 Zinc-copper precipitant solution
Dissolve 3,0 g of zinc sulfate (ZnSO⋅7H O) and 0,6 g of copper sulfate (CuSO⋅5H O) in water in a 100 ml
4 2 4 2
one-mark volumetric flask (5.8). Make up to the mark with water and mix.
4.5 2,6-Dibromoquinonechloroimide (BQC) solution, Gibb's reagent.
Dissolve 40 mg ± 1 mg of BQC (C H Br ClNO) in 10 ml of ethanol 96 % volume fraction.
6 2 2
Store the solution in a dark coloured bottle at 4 °C ± 2 °C. Reject if discoloured or more than 1 month old.
4.6 Copper sulfate solution
Dissolve 0,05 g of copper sulfate (CuSO⋅5H O) in water in a 100 ml one-mark volumetric flask (5.8). Make up
4 2
to the 100 ml mark with water and mix.
2 © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

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SIST ISO 3356:2011
ISO 3356:2009(E)
IDF 63:2009(E)
4.7 Sodium hydroxide solution, c(NaOH) = 0,5 mol/l.
4.8 Phenol stand
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 3356
FIL
63
Deuxième édition
2009-03-01


Lait — Détermination de la phosphatase
alcaline
Milk — Determination of alkaline phosphatase




Numéros de référence
ISO 3356:2009(F)
FIL 63:2009(F)
©
ISO et FIL 2009

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ISO 3356:2009(F)
FIL 63:2009(F)
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soit de l'ISO soit de la FIL, à l'une ou l'autre des adresses ci-après.
ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
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Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
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Publié en Suisse

ii © ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés

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ISO 3356:2009(F)
FIL 63:2009(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 3356⎪FIL 63 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération Internationale de Laiterie (FIL). Elle est publiée conjointement
par l'ISO et la FIL.
Cette deuxième édition de l'ISO 3356⎪FIL 63 annule et remplace la première édition de l'ISO 3356:1975, qui a
fait l'objet d'une révision technique.
© ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés iii

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ISO 3356:2009(F)
FIL 63:2009(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération Internationale de Laiterie) est une organisation sans but lucratif représentant le secteur
laitier mondial. Les membres de la FIL se composent des Comités Nationaux dans chaque pays membre et
des associations laitières régionales avec lesquelles la FIL a signé des accords de coopération. Tout membre
de la FIL a le droit de faire partie des Comités permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux
techniques. La FIL collabore avec l'ISO pour l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et
d'échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux de la FIL votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 3356⎪FIL 63 a été élaborée par la Fédération Internationale de Laiterie (FIL) et le comité technique
ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publiée conjointement
par la FIL et l'ISO.
L'ensemble des travaux a été confié à l'Équipe d'Action mixte ISO-FIL sur le Traitement thermique du Comité
permanent chargé des Composants mineurs et caractérisation des propriétés physiques, sous la conduite de
son chef de projet, Mme M. Nicolas (FR).
Cette édition de l'ISO 3356⎪FIL 63 annule et remplace la FIL 63:1971, qui a fait l’objet d’une révision
technique.

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ISO 3356:2009(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 63:2009(F)

Lait — Détermination de la phosphatase alcaline
AVERTISSEMENT — L'utilisation de la présente Norme internationale peut impliquer l'utilisation de
produits et la mise en œuvre de modes opératoires et de réactifs à caractère dangereux. Il convient
que l'utilisateur de la présente Norme internationale connaisse bien les pratiques courantes de
laboratoire. La présente Norme internationale n'a pas pour but de traiter tous les problèmes de
sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l'utilisateur d'établir des pratiques
appropriées en matière d'hygiène et de sécurité, et de s'assurer de la conformité à la réglementation
nationale en vigueur.
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode pour la détermination de l'activité phosphatasique
alcaline du lait.
La méthode s'applique aux activités phosphatasiques alcalines supérieures ou égales à 1 µg de phénol par
millilitre.
La méthode convient également à la détermination de l'activité phosphatasique alcaline du lait en poudre, du
babeurre et de la poudre de babeurre, du sérum et de la poudre de sérum.
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
2.1
activité phosphatasique alcaline
APA
〈activité phosphatasique alcaline dans le lait〉 quantité de phénol libéré par l'échantillon, déterminée
conformément au mode opératoire spécifié dans la présente Norme internationale
NOTE L'activité phosphatasique alcaline est exprimée en quantité de phénol, en microgrammes, libéré par 1 ml de
l'échantillon ou de l'échantillon reconstitué, dans les conditions spécifiées dans la présente Norme internationale. D'autres
[6] [7]
Normes internationales (par exemple l'ISO 11816-1⎪FIL 155-1 , l'ISO 22160⎪FIL 209 ) expriment l'activité
phosphatasique alcaline en milliunités par litre. La documentation scientifique fournit des informations sur l'équivalence
des différentes unités utilisées pour exprimer l'activité phosphatasique alcaline.
3 Principe
L'échantillon est dilué avec une solution tampon de pH 10,6 et est incubé pendant 1 h à une température de
37 °C. Dans ces conditions, la phosphatase alcaline éventuellement présente dans l'échantillon libère du
phénol à partir du phénylphosphate disodique ajouté. Le phénol libéré réagit avec une imidoquinone
(dibromo-quinone chlorimide) produisant du dibromo-indophénol (couleur bleue) qui est mesuré par
photométrie à une longueur d'onde de 610 nm.
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ISO 3356:2009(F)
FIL 63:2009(F)
4 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue, et de l'eau
distillée ou de l'eau de pureté équivalente.
4.1 Solution tampon de borate-hydroxyde de baryum
Dissoudre dans l'eau 25,0 g d'hydroxyde de baryum [Ba(OH) , 8H O], exempt de carbonate, dans une fiole
2 2
jaugée à un trait de 500 ml (5.8). Diluer au trait avec de l'eau et mélanger.
Dissoudre 11,0 g d'acide borique (H BO ) dans l'eau dans une autre fiole jaugée à un trait de 500 ml (5.8).
3 3
Diluer au trait avec de l'eau et mélanger.
Chauffer les deux solutions à 50 °C. Les mélanger ensemble en agitant. Refroidir rapidement la solution
obtenue à environ 20 °C. Ajuster le pH, si nécessaire, à 10,6 ± 0,1 par addition de solution d'hydroxyde de
baryum. Filtrer la solution à travers du papier filtre (5.10).
Conserver la solution tampon filtrée de borate-hydroxyde de baryum dans un récipient bouché
hermétiquement. Avant utilisation, diluer la solution tampon avec un volume égal d'eau.
4.2 Solutions tampon pour le développement de la coloration
4.2.1 Solution tampon de couleur I
Dissoudre dans l'eau 6,0 g de métaborate de sodium (NaBO ) ou 12,6 g de NaBO , 4H O, et 20,0 g de
2 2 2
chlorure de sodium (NaCl) dans une fiole jaugée à un trait de 1 000 ml (5.8). Diluer au trait avec de l'eau et
mélanger.
4.2.2 Solution tampon de couleur II
Transférer 10 ml de la solution tampon I (4.2.1) dans une fiole jaugée à un trait de 100 ml (5.8). Diluer au trait
avec de l'eau et mélanger.
4.3 Substrat tamponné
4.3.1 Phénylphosphate disodique dihydraté (Na C H PO , 2H O), renfermant un fraction massique de
2 6 5 4 2
phénol inférieure ou égale à 0,01 %.
4.3.2 Dissoudre 0,1 g de phénylphosphate disodique dihydraté (4.3.1) dans 100 ml de solution tampon de
borate-hydroxyde de baryum dilué (4.1).
4.4 Défécant zinc-cuivre
Dissoudre dans l'eau 3,0 g de sulfate de zinc (ZnSO , 7H O) et 0,6 g de sulfate de cuivre (CuSO , 5H O)
4 2 4 2
dans une fiole jaugée à un trait de 100 ml (5.8). Diluer au trait avec de l'eau et mélanger.
4.5 Solution de 2,6-dibromoquinone chlorimide (BQC), réactif de Gibb.
Dissoudre 40 mg ± 1 mg de BQC (C H Br ClNO) dans 10 ml d'éthanol à 96 % en fraction volumique.
6 2 2
Conserver la solution dans un flacon de couleur foncée à 4 °C ± 2 °C. Rejeter la solution si elle est décolorée
ou si elle a plus d'un mois.
4.6 Solution de sulfate de cuivre
Dissoudre dans l'eau 0,05 g de sulfate de cuivre (CuSO , 5H O) dans une fiole jaugée à un trait de
4 2
100 ml (5.8). Diluer au trait avec de l'eau et mélanger.
4.7 Solution d'hydroxyde de sodium, c(NaOH) = 0,5 mol/l.
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ISO 3356:2009(F)
FIL 63:2009(F)
4.8 Solutions étalons de phénol
4.8.1 Solution étalon mère de phénol
Peser 200 mg ± 2 mg de phénol anhydre de pureté supérieure à 99,5 % en fraction massique, et transférer
dans une fiole jaugée à un trait de 100 ml (5.8). Dissoudre le phénol dans l'eau. Diluer au trait avec de l'eau et
mélanger.
La solution étalon mère de phénol reste stable pendant six semaines à 4 °C ± 2 °C.
4.8.2 Solutions étalons de travail de phénol
À l'aide d'une pipette, introduire 10 ml de solution étalon mère de phénol (4.8.1) dans une fiole jaugée à un
t
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