ISO/TS 27106:2009

Cheese — Determination of nisin A content by LC-MS and LC-MS-MS

ISO/TS 27106|IDF/RM 217:2009 specifies a method for the quantitative determination of the nisin A content in cheese. The method is suitable for measuring low levels of nisin A with a quantification limit of 1 mg/kg.

Fromage — Détermination de la teneur en nisine A par CL-SM et CL-SM-SM

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 19-Nov-2009
• ICS: 67.100.30 - Cheese
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 07-Apr-2022

Standards Content (Sample)

ТЕХНИЧЕСКИЕ ISO/TS
УСЛОВИЯ 27106
IDF/RM
217
Первое издание
2009-12-01

Сыр. Определение содержания низина
А с применением жидкостной
хроматографии - масс-спектрометрии
(LS-MS) и жидкостной хроматографии -
тандемной - масс - спектрометрии (LS-
MS-MS)
Cheese — Determination of nisin A content by LC-MS and LC-
MS-MS



Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочные номера
ISO/TS 27106:2009(R)
IDF/RM 217:2009(R)
©
ISO и IDF 2009

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/TS 27106:2009(R)
IDF/RM 217:2009(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или вывести на экран, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на загрузку интегрированных шрифтов в компьютер, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Ни Центральный секретариат ISO, ни IDF не несут никакой ответственности в этом отношении.
Adobe торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO и национальными комитетами IDF. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба
проинформировать Центральный секретариат по адресу, приведенному ниже.


ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ


©  ISO и IDF 2009
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO или IDF по соответствующему адресу, указанному ниже.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Опубликовано в Швейцарии

ii © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/TS 27106:2009(R)
IDF/RM 217:2009(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией
национальных организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных
стандартов обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член,
заинтересованный в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть
представленным в этом комитете. Международные правительственные и неправительственные
организации, имеющие связи с ISO, также принимают участие в работах. Что касается стандартизации
в области электротехники, ISO работает в тесном сотрудничестве с Международной
электротехнической комиссией (IEC).
Проекты международных стандартов разрабатываются по правилам, указанным в Директивах ISO/IEC,
Часть 2.
Главная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании
При других обстоятельствах, особенно когда существует срочная потребность рынка в таких
документах, технический комитет может принять решение о публикации других типов нормативного
документа:
— общедоступные технические условия ISO (ISO/PAS) представляют собой соглашение между
техническими экспертами в рабочей группе ISO и принимаются к публикации после одобрения
более чем 50 % членов основного комитета, участвующих в голосовании;
— технические условия ISO (ISO/TS) представляют собой соглашение между членами технического
комитета и принимаются к публикации после одобрения 2/3 членов комитета, участвующих в
голосовании.
ISO/PAS или ISO/TS пересматриваются каждые три года для принятия решения либо о продлении их
действия на следующие три года, либо о переработке для придания им статуса международного
стандарта, либо о прекращении срока действия. Если принимается решение о продлении действия
ISO/PAS или ISO/TS, они снова пересматриваются через следующие три года и тогда должны быть
или преобразованы в международный стандарт или отменены.
Обращается внимание на то, что некоторые элементы данного документа могут быть объектом
патентных прав. ISO не несет ответственности за идентификацию какого-либо одного или всех таких
патентных прав.
ISO/TS 27106⎪IDF/RM 217 были разработаны Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты,
Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты, и Международной молочной федерацией (IDF).
Они издаются совместно ISO и IDF.
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/TS 27106:2009(R)
IDF/RM 217:2009(R)
Предисловие
Международная молочная федерация (IDF) является некоммерческой организацией,
представляющей мировой молочный сектор. Членами IDF являются национальные комитеты в каждой
стране-члене, а также региональные молочные ассоциации, подписавшие официальное соглашение о
сотрудничестве с IDF. Все члены IDF имеют право быть представленными в постоянных комитетах
IDF, выполняющих техническую работу. IDF сотрудничает с ISO в разработке стандартных методов
анализа и отбора проб молока и молочных продуктов.
Главной задачей постоянных комитетов является разработка международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые рабочими группами и постоянными комитетами рассылаются
национальным комитетам на голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов
требует одобрения не менее 50% национальных комитетов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего международного стандарта могут быть
объектом патентных прав. IDF не несет ответственности за идентификацию какого-либо одного или
всех патентных прав.
ISO/TS 27106⏐IDF/RM 217 были подготовлены Международной молочной федерацией (IDF) и
Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные
продукты. Этот стандарт публикуется совместно IDF и ISO.
Вся работа была проделана Совместной инициативной группой ISO-IDF по Пищевым добавкам и
витаминам Постоянного комитета по Методам анализа добавок и контаминантов под руководством
разработчика проекта Mr. T. Berger (Швейцария)

iv © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/TS 27106:2009(R)
ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ
IDF/RM 217:2009(R)

Сыр. Определение содержания низина А с применением
жидкостной хроматографии - масс-спектроскопии (LS-
MS) и жидкостной хроматографии - тандемной - масс -
спектроскопии (LS-MS-MS)
1 Область применения
Настоящие технические условия устанавливают метод для количественного определения низина А в
сыре.
Этот метод является подходящим для измерения низких уровней низина А с количественным
пределом 1 мг/кг.
ПРИМЕЧАНИЕ Низин является пептидом, образуемым некоторыми бактериями (например, Lactococcus lactis
subsp. Lactis), замедляющим или разрушающим другие микроорганизмы. Он широко используется как
естественный консервант для пищевых продуктов, например овощей, сыра, мяса и какао. В сыроделии низин
используется для предотвращения позднего вспучивания. Его использование ограничено максимальными
уровнями в окончательном продукте. Низин образуется в двух формах, низин A и низин Z, которые различаются
одной аминокислотой. Этот метод применим только для определения низина А.
2 Термины и определения
Применительно к настоящему документу используются следующие термины и определения.
2.1
содержание низина А
nisin A content
массовая доля вещества, определенная методом, установленным в этих технических условиях
ПРИМЕЧАНИЕ Содержание низина А выражается в миллиграммах на килограмм.
3 Сущность метода
Пробу растирают и экстрагируют с помощью муравьиной кислоты при 80 °C. После
ультрацентрифугирования интерферирующие белки отделяют посредством фильтрования через
ультрафильтрующую (UF) мембрану. В очищенном экстракте низин А отделяют, используя
полимерную стационарную фазу, и детектируют методом масс-спектрометрии (с использованием MS-
MS как опции).
4 Реактивы и стандартные вещества
Используются реактивы только признанной аналитической чистоты и дистиллированная вода или вода
как минимум эквивалентной чистоты, если нет других указаний.
4.1 Исходный раствор коровьего сывороточного альбумина (BSA). Растворяют 10 мг BSA
(чистота > 96 % массовой доли), в 10 мл воды.
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются 1

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO/TS 27106:2009(R)
IDF/RM 217:2009(R)
4.2 Буферный раствор коровьего сывороточного альбумина (BSA). Смешивают 80 мл воды с
20 мл ацетонитрила (4.6), 0,5 мл муравьиной кислоты (4.3), 0,01 мл трифторуксусной кислоты (4.5) и
1 мл исходного раствора BSA (4.1).
4.3 Муравьиная кислота (HCOOH).
4.4 Раствор муравьиной кислоты, ρ = 5 g/l. Пипеткой вводят 0,41 мл муравьиной кислоты
HCOOH
(4.3) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 100 мл (5.12). Дополняют до метки водой и
перемешивают.
4.5 Трифторуксусная кислота (CF COOH).
3
4.6 Ацетонитрил (CH CN), “чистый”.
3
4.7 Метанол (CH OH).
3
1)
4.8 Нисин A, чистотой > 95 % массовой доли .
5 Оборудование
Используется обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее.
5.1 Лабораторная центрифуга, обеспечивающая создание радиального ускорения как минимум
3 000g.
5.2 Ультрацентрифуга, создающая радиальное ускорение 20 800g.
2)
5.3 Ультрафильтрующая мембрана, коэффициент распределения по размеру пор 30 kD .
3)
5.4 Мембранный фильтр, размер пор 0,22 мкм .
5.5 Весы, обеспечивающие взвешивание с точностью до 10 мг, считываемость до 1 мг.
5.6 Аналитические весы, обеспечивающие взвешивание с точностью до 0,1 мг, считываемость до
0,01 мг.
5.7 Водяная баня, обеспечивающая встряхивание и поддержание температуры 80 °C ± 2 °C.
5.8 Ультразвуковая ванна, обеспечивающая встряхивание и поддержание температуры 80
°C ± 2 °C.
5.9 Терка для сыра, с размером отверстий приблизительно 2 мм.
5.10 LC-MS оборудование.

1) Ambicin N является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация дается только
для удобства пользователей этих технических условий и не является поддержкой данного продукта со стороны
ISO или IDF.
2) Millipore Centricon YM-30 является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация
дается только для удобства пользователей этих технических условий и не является поддержкой данного продукта
со стороны ISO или IDF.
3) Millipore Millex-GV PVDF 0,22 мкм является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта
информация дается только для удобства пользователей этих технических условий и не является поддержкой
данного продукта со стороны ISO или IDF
2 © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page:
...

TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 27106
IDF/RM
217
First edition
2009-12-01

Cheese — Determination of nisin A
content by LC-MS and LC-MS-MS
Fromage — Détermination de la teneur en nisine A par CL-SM et
CL-SM-SM




Reference numbers
ISO/TS 27106:2009(E)
IDF/RM 217:2009(E)
©
ISO and IDF 2009

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/TS 27106:2009(E)
IDF/RM 217:2009(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. Neither the ISO Central
Secretariat nor the IDF accepts any liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies
and IDF national committees. In the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the ISO Central Secretariat at the
address given below.


COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT


©  ISO and IDF 2009
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO or IDF at the respective
address below.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Published in Switzerland

ii © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/TS 27106:2009(E)
IDF/RM 217:2009(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
In other circumstances, particularly when there is an urgent market requirement for such documents, a
technical committee may decide to publish other types of document:
⎯ an ISO Publicly Available Specification (ISO/PAS) represents an agreement between technical experts in
an ISO working group and is accepted for publication if it is approved by more than 50 % of the members
of the parent committee casting a vote;
⎯ an ISO Technical Specification (ISO/TS) represents an agreement between the members of a technical
committee and is accepted for publication if it is approved by 2/3 of the members of the committee casting
a vote.
An ISO/PAS or ISO/TS is reviewed after three years in order to decide whether it will be confirmed for a
further three years, revised to become an International Standard, or withdrawn. If the ISO/PAS or ISO/TS is
confirmed, it is reviewed again after a further three years, at which time it must either be transformed into an
International Standard or be withdrawn.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO/TS 27106⎪IDF/RM 217 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee
SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO
and IDF.
© ISO and IDF 2009 – All rights reserved iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/TS 27106:2009(E)
IDF/RM 217:2009(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit organization representing the dairy sector worldwide.
IDF membership comprises National Committees in every member country as well as regional dairy
associations having signed a formal agreement on cooperation with IDF. All members of IDF have the right to
be represented on the IDF Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
The main task of Standing Committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the Standing Committees are circulated to the National Committees for endorsement prior to
publication as an International Standard. Publication as an International Standard requires approval by at least
50% of IDF National Committees casting a vote.
In other circumstances, particularly when there is an urgent market requirement for such documents, a
Standing Committee may decide to publish an other type of normative document which is called by IDF:
Reviewed method. Such a method represents an agreement between the members of a Standing Committee
and is accepted for publication if it is approved by at least 50 % of the committee members casting a vote. A
Reviewed method is equal to an ISO/PAS or ISO/TS and will, therefore, also be published jointly under ISO
conditions.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO/TS 27106⎪IDF/RM 217 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical
Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published
jointly by IDF and ISO.
All work was carried out by the Joint ISO-IDF Action Team on Food additives and vitamins of the Standing
Committee on Analytical methods for additives and contaminants under the aegis of its project leader,
Mr. T. Berger (CH).

iv © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/TS 27106:2009(E)
TECHNICAL SPECIFICATION
IDF/RM 217:2009(E)

Cheese — Determination of nisin A content by LC-MS and
LC-MS-MS
1 Scope
This Technical Specification specifies a method for the quantitative determination of the nisin A content in
cheese.
The method is suitable for measuring low levels of nisin A with a quantification limit of 1 mg/kg.
NOTE Nisin is a peptide produced by some bacteria (e.g. Lactococcus lactis subsp. Lactis) inhibiting or destroying
other microorganisms. It is widely used as a natural preservative for foods, e.g. vegetables, cheese, meat, and cacao. In
cheese making, nisin is used to prevent late blowing. Its use is restricted to maximum levels in the final product. Nisin
appears in two forms, nisin A and nisin Z, which differ in one amino acid. This method is applicable to the determination of
nisin A only.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
nisin A content
mass fraction of substance determined by the procedure specified in this Technical Specification
NOTE The nisin A content is expressed in milligrams per kilogram.
3 Principle
The sample is grated and extracted with dilute formic acid at 80 °C. After ultracentrifugation, interfering
proteins are separated by means of filtration through an ultrafiltration (UF) membrane. In the purified extract,
nisin A is separated using a polymeric stationary phase and detected using mass spectrometry (with MS-MS
as an option).
4 Reagents and reference substances
Use only reagents of recognized analytical grade and distilled water or water of at least equivalent purity,
unless otherwise specified.
4.1 Bovine serum albumin (BSA) stock solution. Dissolve 10 mg of BSA (purity > 96 % mass fraction), in
10 ml water.
4.2 Bovine serum albumin (BSA) buffer solution. Mix 80 ml water with 20 ml of acetonitrile (4.6), 0,5 ml
of formic acid (4.3), 0,01 ml of trifluoracetic acid (4.5) and 1 ml of BSA stock solution (4.1).
4.3 Formic acid (HCOOH).
4.4 Formic acid solution, ρ = 5 g/l. Pipette 0,41 ml of formic acid (4.3) into a 100 ml one-mark
HCOOH
volumetric flask (5.12). Make up to the mark with water and mix.
© ISO and IDF 2009 – All rights reserved 1

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO/TS 27106:2009(E)
IDF/RM 217:2009(E)
4.5 Trifluoracetic acid (CF COOH).
3
4.6 Acetonitrile (CH CN), “pure”.
3
4.7 Methanol (CH OH).
3
1)
4.8 Nisin A, of purity > 95 % mass fraction .
5 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
5.1 Laboratory centrifuge, capable of producing a radial acceleration of at least 3 000g.
5.2 Ultracentrifuge, capable of producing a radial acceleration of 20 800g.
2)
5.3 Ultrafiltration membrane, of pore size 30 kD .
3)
5.4 Membrane filter, of pore size 0,22 µm .
5.5 Balance, capable of weighing to the nearest 10 mg, with a readability of 1 mg.
5.6 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,1 mg, with a readability of 0,01 mg.
5.7 Water bath, capable of shaking and maintaining a temperature of 80 °C ± 2 °C.
5.8 Ultrasonic bath, capable of shaking and maintaining a temperature of 80 °C ± 2 °C.
5.9 Cheese grater, with openings of size approximately 2 mm.
5.10 LC-MS equipment.
5.10.1 Elution gradient pumping system, capable of operating at 0,25 ml/min.
5.10.2 Manual or automatic injector, capable of injecting volumes of 5 µl.
5.10.3 Column heater, capable of maintaining a column temperature of 40 °C ± 2 °C.
)
4
5.10.4 Column, reversed phase, PLRP-S, 300 Å , 3 µm, 150 mm × 2 mm.
5.10.5 Mass spectrometer detector, capable of operating in ion mode ESI+ at m/z 839,6.
5.11 LC-MS-MS equipment (optional).

1) Ambicin N is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of
users of this document a
...