ISO 10504:1998
(Main)Starch derivatives — Determination of the composition of glucose syrups, fructose syrups and hydrogenated glucose syrups — Method using high-performance liquid chromatography
Starch derivatives — Determination of the composition of glucose syrups, fructose syrups and hydrogenated glucose syrups — Method using high-performance liquid chromatography
Produits dérivés de l'amidon — Détermination de la composition des sirops de glucose, des sirops de fructose et des sirops de glucose hydrogénés — Méthode par chromatographie en phase liquide à haute performance
La présente Norme internationale spécifie une méthode d'analyse par chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) pour déterminer la composition de solutions de dextrose, de sirops de glucose, de sirops contenant du fructose, de sirops de glucose hydrogénés, de sorbitol, de mannitol et de maltitol. Les constituants sont, en particulier, le glucose, le maltose, le maltotriose, le fructose, le sorbitol, le mannitol, le maltitol et les malto-oligosaccharides.L'utilisation d'une colonne remplie de résines échangeuses de cations est indispensable.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10504
First edition
1998-10-01
Starch derivatives — Determination
of the composition of glucose syrups,
fructose syrups and hydrogenated glucose
syrups — Method using high-performance
liquid chromatography
Produits dérivés de l’amidon — Détermination de la composition des sirops
de glucose, des sirops de fructose, et des sirops de glucose hydrogénés —
Méthode par chromatographie en phase liquide à haute performance
A
Reference number
ISO 10504:1998(E)
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ISO 10504:1998(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (ISO member bodies). The work of
preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented
on that committee. International organizations, governmental and non-
governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 10504 was prepared by Technical Commitee
ISO/TC 93, Starch (including derivatives and by-products).
Annex A of this International Standard is for information only.
© ISO 1998
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
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Printed in Switzerland
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INTERNATIONAL STANDARD ISO ISO 10504:1998(E)
Starch derivatives — Determination of the composition of glucose
syrups, fructose syrups and hydrogenated glucose syrups —
Method using high-performance liquid chromatography
1 Scope
This International Standard describes a high-performance liquid chromatographic (HPLC) method for measuring the
composition of dextrose solutions, glucose syrups, fructose-containing syrups, hydrogenated glucose syrups,
sorbitol, mannitol and maltitol. The constituents are mainly glucose, maltose, maltotriose, fructose, sorbitol,
mannitol, maltitol and malto-oligosaccharides.
The use of a column packed with cation-exchange resin is essential.
2 Normative references
The following standards contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of this
International Standard. At the time of the publication, the editions indicated were valid. All standards are subject to
revision, and parties to agreements based on this International Standard are encouraged to investigate the
possibility of applying the most recent editions of the standards indicated below. Members of IEC and ISO maintain
registers of currently valid International Standards.
ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods.
ISO 5381:1983,
Starch hydrolysis products — Determination of water content — Modified Karl Fischer method.
3 Principle
Saccharide components are separated using high-performance liquid chromatography. Separation is achieved
using a cation-exchange column with water as the eluent. The eluted components are detected by means of a
differential refractometer, and quantified using an electronic integrator.
4 Reagents
All reagents used shall be of recognized analytical reagent grade.
4.1 Special distilled water
The water used may be double-distilled of quality grade 1 in accordance with ISO 3696. The most suitable is
demineralized water, which prevents contamination of the ion-exchange resin.
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The water should be filtered by passage through a 0,22 μm filter. Also, it should be degassed by treatment under
vacuum, or by use of an in-line degassing unit. The water should be maintained under an inert atmosphere, and
preferably at 70 °C to inhibit microbial growth.
NOTE Some commercial water-purification devices produce water which is both filtered and degassed.
4.2 Primary standard solutions
Prepare solutions (see annex A) containing 10 % (or less) dry matter, according to the sensitivity of the
refractometer, with compositions as close as possible to that of the samples to be analysed.
NOTE Suitable reference materials for the constituents listed in clause 1 can be obtained from established chemical
companies.
4.3 Ion-exchange resins, for off-line demineralization of samples.
Salts present in the sample will co-elute from the column, and will be detected by the refractometer, causing errors
in the determination. These salts shall first be removed by ion-exchange resins. The most convenient way is to have
an in-line guard column cartridge system (5.5), but this may also be carried out off-line using the following resins.
a) Cation type:
+
— strong cation exchanger, 4 % cross-linked polystyrene divinylbenzene, in the H form;
— 200 mesh to 400 mesh in the dry form.
b) Anion type:
— weak anion exchanger, 4 % cross-linked polystyrene divinylbenzene support containing tertiary amine
groups, in the free base form;
— 200 mesh to 400 mesh in the dry form.
NOTE While resins meeting these specifications are available from more than one supplier, their performance is variable.
1)
Experience in several laboratories shows that the resins sold by Bio-Rad (AG50W - X4, AG3 - X4) perform satisfactorily.
5 Apparatus
5.1 Liquid chromatograph, equipped with the following:
— a pump, pulseless, that delivers a constant flow, at the rate required;
— a differential refractometer, thermostatically controlled;
— a thermostatically controlled column oven, capable of maintaining the column at temperatures up to 95 °C, to
within ± 0,5 °C.
, comprising a loop injector (manual or part of autosampler) with a capacity of 20 μl or less.
5.2 Sample injector
, comprising an electronic integrator with calculating and recording capabilities, compatible with the
5.3 Integrator
voltage output of the detector.
, comprising a pre-packed cation-exchange column in the form best suited for the
5.4 Separation column
analysis.
1) This information is given for the convenience of users of this International Standard and does not constitute an endorsement
by ISO of these products. Equivalent products may be used if they can be shown to lead to the same results.
2
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ISO 10504:1998(E)
The recommended resin is 6 % to 8 % cross-linked sulfonated polystyrene divinylbenzene with a bead diameter of
9 μm to 25 μm.
NOTE Acceptable columns are available from several major column suppliers.
5.5 Guard columns, custom-prepared dual-cartridge system, inserted unheated in-line, to demineralize the
sample.
2)
NOTE There are a few systems available but with varying efficiency. The Bio-Rad guard cartridges 125-0118 have been
shown in several laboratories to be the most effective in all respects.
5.6 Sample filtration system, comprising a syringe to which suitable membrane disc filters can be attached.
These should be of 0,45 μm pore size.
NOTE Commercially available syrups are usually highly refined, and a 0,45 μm filter is suitable. However, if blockage of the
chromatograph is too frequent, a 0,22 μm filter should be used.
6 Procedure
6.1 Choice of column
For general applications, a cation-exchange resin in the calcium form should be used, in particular for fructose
syrups and hydrogenated glucose syrups. However, the separation of maltose at a high content from maltotriose is
difficult when the maltotriose content is about 6 % or more. In suc
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 10504
Première édition
1998-10-01
Produits dérivés de l’amidon —
Détermination de la composition des sirops
de glucose, des sirops de fructose, et des
sirops de glucose hydrogénés — Méthode
par chromatographie en phase liquide à
haute performance
Starch derivatives — Determination of the composition of glucose syrups,
fructose syrups and hydrogenated glucose syrups — Method using high-
performance liquid chromatography
A
Numéro de référence
ISO 10504:1998(F)
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ISO 10504:1998(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de
l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en
ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 10504 a été élaborée par le comité technique
TC/ISO 93, Amidon (amidon, fécules), dérivés et sous-produits.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement à
titre d’information.
© ISO 1998
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord
écrit de l'éditeur.
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NORME INTERNATIONALE ISO ISO 10504:1998(F)
Produits dérivés de l’amidon — Détermination de la composition
des sirops de glucose, des sirops de fructose, et des sirops de
glucose hydrogénés — Méthode par chromatographie en phase
liquide à haute performance
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode d'analyse par chromatographie en phase liquide à haute
performance (CLHP) pour déterminer la composition de solutions de dextrose, de sirops de glucose, de sirops
contenant du fructose, de sirops de glucose hydrogénés, de sorbitol, de mannitol et de maltitol. Les constituants
sont, en particulier, le glucose, le maltose, le maltotriose, le fructose, le sorbitol, le mannitol, le maltitol et les malto-
oligosaccharides.
L'utilisation d'une colonne remplie de résines échangeuses de cations est indispensable.
2 Références normatives
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui en est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Au moment de la publication, les éditions indiquées
étaient en vigueur. Toute norme est sujette à révision et les parties prenantes des accords fondés sur la présente
Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les éditions les plus récentes des normes
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de l'ISO possèdent le registre des Normes internationales en vigueur
à un moment donné.
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai.
ISO 5381:1983, Produits d'hydrolyse de l'amidon ou de la fécule — Dosage de l'eau — Méthode Karl Fischer
modifiée.
3 Principe
Les différents saccharides sont séparés par chromatographie en phase liquide à haute performance. La séparation
est obtenue en utilisant une colonne échangeuse de cations avec de l’eau comme éluant. Les éluats sont détectés
par un réfractomètre différentiel et quantifiés à l'aide d'un intégrateur électronique.
1
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ISO 10504:1998(F)
4 Réactifs
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
4.1 Eau distillée spéciale
L'eau utilisée peut être de l’eau bidistillée de qualité 1 selon l’ISO 3696. La mieux adaptée est l'eau déminéralisée,
qui évite la contamination de la résine échangeuse d'ions.
Il convient de filtrer l'eau sur membrane de 0,22 μm. Il est également recommandé de la dégazer par un traitement
sous vide, ou à l'aide d'un appareil de dégazage monté en ligne. Il convient de conserver l'eau sous atmosphère
inerte et, de préférence, à une température de 70 °C pour inhiber la croissance microbienne.
NOTE Certains modules brevetés de purification d'eau produisent de l'eau filtrée et dégazée.
4.2 Solutions étalons de départ
Préparer des solutions (voir annexe A) dont la teneur en matière sèche est inférieure ou égale à 10 %, en fonction
de la sensibilité du réfractomètre, et dont les compositions sont aussi proches que possible de celles des
échantillons à analyser.
NOTE Les produits de référence appropriés pour les éléments énumérés dans l’article 1 peuvent être obtenus auprès
d'industries chimiques reconnues.
pour la déminéralisation des échantillons à l’extérieur
4.3 Résines échangeuses d’ions,
Les sels présents dans l'échantillon coélueront de la colonne et seront détectés par le réfractomètre, faussant ainsi
la détermination. Ces sels doivent d’abord être éliminés par échanges d'ions. La meilleure façon est d'utiliser un
système de cartouches (5.5) constituant une pré-colonne de déminéralisation montée en amont de la colonne
chromatographique, mais cela peut aussi être réalisé à l’extérieur en utilisant les résines suivantes:
a) Type cation:
+
— résine de polystyrène divinylbenzène, réticulé à 4 %, fortement échangeuse de cations sous forme H ;
— granulométrie sous forme de poudre: 200 mesh à 400 mesh.
b) Type anion:
— résine de polystyrène divinylbenzène faiblement basique, réticulé à 4 %, faiblement échangeuse d'anions
et contenant des groupes amines tertiaires, sous forme base libre;
— granulométrie sous forme de poudre: 200 mesh à 400 mesh.
NOTE Bien que de nombreuses résines répondant à ces spécifications soient proposées par divers fournisseurs, leurs
performances sont variables. L'expérience a montré dans divers laboratoires que les résines vendues par Bio-Rad (AG50W -
1)
X4, AG3 - X4) donnent des résultats satisfaisants.
1) Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que
l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif des produits ainsi désignés. Des produits équivalents peuvent être utilisés s'il
est démontré qu'ils conduisent aux mêmes résultats.
2
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ISO 10504:1998(F)
5 Appareillage
5.1 Chromatographe en phase liquide, équipé
— d'une pompe péristaltique à débit constant à la vitesse requise;
— d'un détecteur réfractométrique différentiel thermostaté;
— d'un four pour colonne à contrôle thermostatique, capable de maintenir la colonne à des températures allant
jusqu'à 95 °C, à ± 0,5 °C.
5.2 Injecteur d'échantillon, comprenant une boucle d'échantillonnage (manuelle ou faisant partie du système
automatique d'échantillonnage) ayant une capacité de 20 μl ou moins.
5.3 Intégrateur électronique, dont la capacité de calcul et d'enregistrement est compatible avec la tension à la
sortie du détecteur.
5.4 Colonne de séparation, comprenant une colonne pré-remplie échangeuse de cations, sous la forme la mieux
adaptée à l'analyse envisagée.
La résine recommandée est un polystyrène divinylbenzène sulfoné réticulé de 6 % à 8 %, le diamètre des particules
étant compris entre 9 μm et 25 μm.
NOTE On peut se procurer des colonnes de qualité acceptable auprès des principaux fournisseurs.
5.5 Pré-colonne: système de cartouches doubles préparé sur mesure, monté en ligne et non chauffé, pour
déminéraliser l’échantillon.
NOTE Les systèmes disponibles sur le marché sont peu nombreux et leur efficacité est variable. Les cartouches Bio-Rad
2)
125-0118 ont montré dans différents laboratoires qu'elles permettaient d'obtenir les meilleurs résultats à tout point de vue.
comprenant une seringue sur laquelle peuvent être adaptées des
5.6 Système de filtration de l'échantillon,
membranes filtrantes circulaires appropriées.
Il convient que leur porosité soit d'environ 0,45 μm.
NOTE Les sirops existant sur le marché sont en général très raffinés, et un filtre de 0,45 μm de porosité suffit. Cependant, si
le chromatographe s'obture trop souvent, il est recommandé d’utiliser un filtre de 0,22 μm de porosité.
6 Mode opératoire
6.1 Choix de la colonne
Pour les applications générales, il convient d'utiliser une colonne échangeuse de cations sous forme calcium, et ce
particulièrement s'il s'agit de sirops de fructose et de glucose hydrogénés. Cependant, la séparation
maltose/maltotriose
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.