Cosmetics — Analytical methods — Nitrosamines: Detection and determination of N-nitrosodiethanolamine (NDELA) in cosmetics by HPLC, post-column photolysis and derivatization

ISO 10130:2009 describes a method for the detection and quantification of N‑nitrosodiethanolamine (NDELA) in cosmetics and raw materials used in cosmetics by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) coupled with post-column photolysis and derivatization. This method is not applicable to the detection and/or quantification of nitrosamines other than NDELA, nor to the detection and/or quantification of NDELA in products other than cosmetics or raw materials used in cosmetics. If a product has the possibility of either NDELA contamination from the ingredients or NDELA formation by the composition of ingredients, the method will be applied for the testing of cosmetic products and is an alternative to ISO 15819. This method is not applicable to matrices containing oxidation dyes.

Cosmétiques — Méthodes analytiques — Nitrosamines: Recherche et dosage de la N-nitrosodiéthanolamine (NDELA) dans les cosmétiques par CLHP, photolyse et dérivation post-colonne

L'ISO 10130:2009 décrit une méthode de recherche et de quantification de la NDELA dans les cosmétiques et les matières premières utilisées dans les cosmétiques par CLHP, photolyse et dérivation post-colonne. La présente méthode ne s'applique pas à la recherche et/ou à la quantification des nitrosamines autres que la NDELA, ni à la recherche et/ou à la quantification de la NDELA dans les produits autres que les cosmétiques ou les matières premières utilisées dans les cosmétiques. Si un produit est susceptible d'être contaminé par la NDELA contenue dans ses ingrédients ou que la formation de NDELA est possible du fait de la composition en ingrédients, alors la méthode est à appliquer lors des essais des produits cosmétiques et constitue une alternative à l'ISO 15819. Le présente méthode ne s'applique pas aux matrices contenant des colorants d'oxydation.

Kozmetika - Analizne metode - Nitrozamini: detekcija in določevanje N-nitrozodietanolamina (NDELA) v kozmetičnih izdelkih s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti, s postopkom fotolize in derivatizacije za kolono

Ta mednarodni standard opisuje metodo za detekcijo in količinsko določevanje n-nitrozodietanolamina (NDELA) v kozmetičnih izdelkih in surovinah, uporabljenih v kozmetičnih izdelkih, s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti (HPLC), združeno s postopkom fotolize in derivacije za kolono. Ta metoda se ne uporablja za detekcijo in/ali količinsko določevanje N-nitrozaminov, ki niso NDELA, niti za detekcijo in/ali količinsko določevanje NDELA v proizvodih, ki niso kozmetični, oziroma surovinah, uporabljenih v kozmetičnih proizvodih. Če za proizvod obstaja možnost bodisi kontaminacije z NDELA zaradi sestavin bodisi tvorbe NDELA zaradi sestave sestavin, se ta metoda uporabi za preskušanje kozmetičnih izdelkov ter nadomešča ISO 15819. Ta metoda ne velja za matrice, ki vsebujejo oksidacijska barvila.

General Information

Status
Published
Publication Date
02-Dec-2009
Technical Committee
Drafting Committee
Current Stage
9093 - International Standard confirmed
Start Date
25-Jul-2015
Completion Date
07-Mar-2021

Buy Standard

Standard
ISO 10130:2009 - Cosmetics -- Analytical methods -- Nitrosamines: Detection and determination of N-nitrosodiethanolamine (NDELA) in cosmetics by HPLC, post-column photolysis and derivatization
English language
13 pages
sale 15% off
Preview
sale 15% off
Preview
Standard
ISO 10130:2010
English language
18 pages
sale 10% off
Preview
sale 10% off
Preview
e-Library read for
1 day
Standard
ISO 10130:2009 - Cosmétiques -- Méthodes analytiques -- Nitrosamines: Recherche et dosage de la N-nitrosodiéthanolamine (NDELA) dans les cosmétiques par CLHP, photolyse et dérivation post-colonne
French language
14 pages
sale 15% off
Preview
sale 15% off
Preview

Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10130
First edition
2009-12-15
Cosmetics — Analytical methods —
Nitrosamines: Detection and
determination of N-nitrosodiethanolamine
(NDELA) in cosmetics by HPLC, post-
column photolysis and derivatization
Cosmétiques — Méthodes analytiques — Nitrosamines: Recherche et
dosage de la N-nitrosodiéthanolamine (NDELA) dans les cosmétiques
par CLHP, photolyse et dérivation post-colonne
Reference number
ISO 10130:2009(E)
ISO 2009
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 10130:2009(E)
PDF disclaimer

This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but

shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In

downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat

accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.

Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation

parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In

the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2009

All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,

electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or

ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2009 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 10130:2009(E)
Contents Page

Foreword ............................................................................................................................................................iv

Introduction.........................................................................................................................................................v

1 Scope......................................................................................................................................................1

2 Principle..................................................................................................................................................1

3 Reagents.................................................................................................................................................1

4 Apparatus...............................................................................................................................................2

5 Sample preparation and storage .........................................................................................................3

5.1 General...................................................................................................................................................3

5.2 Standards preparation..........................................................................................................................4

5.2.1 Primary stock solution..........................................................................................................................4

5.2.2 Secondary stock solution.....................................................................................................................4

5.2.3 Working solutions .................................................................................................................................4

5.3 Sample preparation...............................................................................................................................4

5.3.1 General...................................................................................................................................................4

5.3.2 SPE clean–up.........................................................................................................................................5

5.3.3 Alternative sample preparation for samples non-dispersible in water (DCM clean-up) ................5

6 Procedure...............................................................................................................................................5

6.1 General...................................................................................................................................................5

6.2 Chromatographic conditions ...............................................................................................................5

6.3 Set-up of the reaction system ..............................................................................................................6

7 Calculation of results............................................................................................................................6

7.1 Calibration curve ...................................................................................................................................6

7.2 Experimental conditions for the validity of the measurement..........................................................6

7.3 Calculation of concentrations..............................................................................................................6

8 Test report..............................................................................................................................................7

Annex A (informative) Examples of calibration curves and typical chromatograms ..................................8

Annex B (normative) Photolysis and reaction of nitrite with Griess reagent to form the azo dye...........11

Annex C (normative) Configuration of the post-column reactor system....................................................12

Bibliography......................................................................................................................................................13

© ISO 2009 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 10130:2009(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies

(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO

technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been

established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and

non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the

International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.

International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.

The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards

adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an

International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent

rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.

ISO 10130 was prepared by Technical Committee ISO/TC 217, Cosmetics.
iv © ISO 2009 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 10130:2009(E)
Introduction

Human exposure to N-nitrosamines can occur through diverse sources such as the environment, food or

personal care products. As a result of their perceived carcinogenic potential on several animal species,

minimization of exposure to N-nitrosamines is recognized as important to the preservation of human health.

Among N-nitrosamines, N-nitrosodiethanolamine (NDELA) has been recognized as a potential contaminant of

cosmetics.

In this context, several analytical methods have been developed to detect and determine the presence of

NDELA in cosmetics. Examples of these methods are gas chromatography/thermal energy analysis, and high

performance liquid chromatography coupled either with a mass spectrometry determination or with photolysis

and colorimetric quantification. The latter method uses specific technology to ensure specificity towards

NDELA, to minimize the risk of artefactual formation of the analyte of interest and to allow precise

quantification.

This analytical method uses High Performance Liquid Chromatography (HPLC) coupled with post-column

photolysis and derivatization, in order to separate and detect trace levels of NDELA from a cosmetic

ingredient or product matrix with specificity for NDELA.

This International Standard refers to a collaborative study (Reference [2]) involving seven laboratories and

published in 2006. Validation criteria are given in Reference [2].
© ISO 2009 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 10130:2009(E)
Cosmetics — Analytical methods — Nitrosamines: Detection
and determination of N-nitrosodiethanolamine (NDELA) in
cosmetics by HPLC, post-column photolysis and derivatization
1 Scope

This International Standard describes a method for the detection and quantification of

N-nitrosodiethanolamine (NDELA) in cosmetics and raw materials used in cosmetics by high performance

liquid chromatography (HPLC) coupled with post-column photolysis and derivatization.

This method is not applicable to the detection and/or quantification of nitrosamines other than NDELA, nor to

the detection and/or quantification of NDELA in products other than cosmetics or raw materials used in

cosmetics.

If a product has the possibility of either NDELA contamination from the ingredients or NDELA formation by the

composition of ingredients, the method will be applied for the testing of cosmetic products and is an alternative

to ISO 15819.
This method is not applicable to matrices containing oxidation dyes.
2 Principle

Extraction of the nitrosamine NDELA from cosmetic samples is carried out with water. Clean-up is performed

either using solid phase extraction (SPE clean-up, see 5.3.2) with a C18 cartridge or dichloromethane (DCM

clean-up, see 5.3.3) when the samples are not dispersible in water. The extracts are analysed by HPLC, post-

column photolysis and derivatization. NDELA is separated from the cosmetic matrix using reversed-phase

liquid chromatography. The N-nitroso bond is cleaved by UV photolysis with the formation of nitrite ion.

According to the Griess reaction, the nitrite functional group is diazotized with sulfanilamide in an acid medium

and is then coupled with N-(1-naphthyl)ethylenediamine dihydrochloride (NED) to form a purple-coloured azo

dye that is quantitatively determined spectrophotometrically at a maximum wavelength, λ , of 540 nm (see

max
Annex B).

The presence of NDELA can be confirmed by repeating the analysis without photolysis (no nitrite ion is then

produced because the N-nitroso bond is not cleaved). The absence of a chromatographic peak at the

retention time of NDELA in the chromatogram confirms that the peak observed in the first analysis

corresponds to NDELA.
3 Reagents
3.1 Methanol, HPLC grade.
3.2 Water, HPLC grade.
3.3 Dichloromethane, HPLC grade.

3.4 N-Nitrosodiethanolamine, with known purity greater than 95 %. CAS No. [116-57-7].

© ISO 2009 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 10130:2009(E)
3.5 Orthophosphoric acid, 85 %, analytical grade.
3.6 Ammonium acetate, analytical grade.
3.7 Ammonium acetate solution, 1 mol/l.
Dissolve 77,08 g of ammonium acetate (3.6) in up to 1,0 l of water (3.2).
3.8 Ammonium acetate solution, 0,02 mol/l.

Take 20 ml of 1 mol/l ammonium acetate solution (3.7) and dilute to 1 l with water (3.2).

3.9 N-(1-Naphthyl) ethylenediamine dihydrochloride, with known purity greater than 98 %. CAS

No. [1465-25-4].
This reagent should be sealed and stored in the absence of light.
3.10 Sulfanilamide, with known purity greater than 99 %. CAS No. [63-74-1].
3.11 Griess reagent.

Dissolve 0,25 g N-(1-naphthyl) ethylenediamine dihydrochloride (3.9) in water (3.2) and dilute to 250 ml in a

volumetric flask. Dissolve 4,0 g of sulfanilamide (3.10) in 250 ml of a 5 % (mass/volume) aqueous solution of

85 % orthophosphoric acid (3.5). Mix the reagents together in an amber glass bottle and keep the mixture

away from the light.

The mixture can be used for five days and shall, in any case, remain colourless when it is stored between 2 °C

and 8 °C.
4 Apparatus
Use standard laboratory glassware and equipment, and the following.
4.1 Mechanical shaker or Vortex ® mixer .
4.2 High performance glass vial, 20 ml with Poly-Cone® lined urea screw caps.
4.3 Microtube 1,5 ml, for centrifugation in polypropylene.
4.4 Low dead-volume mixing tee.

4.5 Sample processing station, in SPE application (such as Vacmaster® or Visiprep® ) sample

processing station.

4.6 Centrifuge, capable of reaching not less than 20 000g with a temperature control.

1) 1)

4.7 Solid-phase extraction columns, e.g. Sep Pak® C18 cartridges Waters or Bakerbond® C18-6 ml,

500 mg reversed phase octadecylsilane bonded to silica gel 40 µm average particle diameter (APD), 60 Ă.

4.8 High performance liquid chromatograph, equipped with a pulse damper, eluent reservoir, a pump,

an injection system, data processing, e.g. an integrator, coupled with a UV/visible detector equipped with a

tungsten lamp, of sensitivity 0,001 AUFS or 0,0005 AUFS (AUFS: absorbance units full scan).

1) Poly
...

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 10130:2010
01-november-2010
.R]PHWLND$QDOL]QHPHWRGH1LWUR]DPLQLGHWHNFLMDLQGRORþHYDQMH1
QLWUR]RGLHWDQRODPLQD 1'(/$ YNR]PHWLþQLKL]GHONLKVWHNRþLQVNRNURPDWRJUDILMR
YLVRNHORþOMLYRVWLVSRVWRSNRPIRWROL]HLQGHULYDWL]DFLMH]DNRORQR
Cosmetics - Analytical methods - Nitrosamines: Detection and determination of N-
nitrosodiethanolamine (NDELA) in cosmetics by HPLC, post-column photolysis and
derivatization
Cosmétiques - Méthodes analytiques - Nitrosamines: Recherche et dosage de la N-
nitrosodiéthanolamine (NDELA) dans les produits cosmétiques par CLHP, photolyse
post-colonne et dérivation
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 10130:2009
ICS:
71.100.70 .R]PHWLND7RDOHWQL Cosmetics. Toiletries
SULSRPRþNL
SIST ISO 10130:2010 en,fr

2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

---------------------- Page: 1 ----------------------
SIST ISO 10130:2010
---------------------- Page: 2 ----------------------
SIST ISO 10130:2010
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10130
First edition
2009-12-15
Cosmetics — Analytical methods —
Nitrosamines: Detection and
determination of N-nitrosodiethanolamine
(NDELA) in cosmetics by HPLC, post-
column photolysis and derivatization
Cosmétiques — Méthodes analytiques — Nitrosamines: Recherche et
dosage de la N-nitrosodiéthanolamine (NDELA) dans les cosmétiques
par CLHP, photolyse et dérivation post-colonne
Reference number
ISO 10130:2009(E)
ISO 2009
---------------------- Page: 3 ----------------------
SIST ISO 10130:2010
ISO 10130:2009(E)
PDF disclaimer

This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but

shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In

downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat

accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.

Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation

parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In

the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2009

All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,

electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or

ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2009 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
SIST ISO 10130:2010
ISO 10130:2009(E)
Contents Page

Foreword ............................................................................................................................................................iv

Introduction.........................................................................................................................................................v

1 Scope......................................................................................................................................................1

2 Principle..................................................................................................................................................1

3 Reagents.................................................................................................................................................1

4 Apparatus...............................................................................................................................................2

5 Sample preparation and storage .........................................................................................................3

5.1 General...................................................................................................................................................3

5.2 Standards preparation..........................................................................................................................4

5.2.1 Primary stock solution..........................................................................................................................4

5.2.2 Secondary stock solution.....................................................................................................................4

5.2.3 Working solutions .................................................................................................................................4

5.3 Sample preparation...............................................................................................................................4

5.3.1 General...................................................................................................................................................4

5.3.2 SPE clean–up.........................................................................................................................................5

5.3.3 Alternative sample preparation for samples non-dispersible in water (DCM clean-up) ................5

6 Procedure...............................................................................................................................................5

6.1 General...................................................................................................................................................5

6.2 Chromatographic conditions ...............................................................................................................5

6.3 Set-up of the reaction system ..............................................................................................................6

7 Calculation of results............................................................................................................................6

7.1 Calibration curve ...................................................................................................................................6

7.2 Experimental conditions for the validity of the measurement..........................................................6

7.3 Calculation of concentrations..............................................................................................................6

8 Test report..............................................................................................................................................7

Annex A (informative) Examples of calibration curves and typical chromatograms ..................................8

Annex B (normative) Photolysis and reaction of nitrite with Griess reagent to form the azo dye...........11

Annex C (normative) Configuration of the post-column reactor system....................................................12

Bibliography......................................................................................................................................................13

© ISO 2009 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 5 ----------------------
SIST ISO 10130:2010
ISO 10130:2009(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies

(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO

technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been

established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and

non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the

International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.

International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.

The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards

adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an

International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent

rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.

ISO 10130 was prepared by Technical Committee ISO/TC 217, Cosmetics.
iv © ISO 2009 – All rights reserved
---------------------- Page: 6 ----------------------
SIST ISO 10130:2010
ISO 10130:2009(E)
Introduction

Human exposure to N-nitrosamines can occur through diverse sources such as the environment, food or

personal care products. As a result of their perceived carcinogenic potential on several animal species,

minimization of exposure to N-nitrosamines is recognized as important to the preservation of human health.

Among N-nitrosamines, N-nitrosodiethanolamine (NDELA) has been recognized as a potential contaminant of

cosmetics.

In this context, several analytical methods have been developed to detect and determine the presence of

NDELA in cosmetics. Examples of these methods are gas chromatography/thermal energy analysis, and high

performance liquid chromatography coupled either with a mass spectrometry determination or with photolysis

and colorimetric quantification. The latter method uses specific technology to ensure specificity towards

NDELA, to minimize the risk of artefactual formation of the analyte of interest and to allow precise

quantification.

This analytical method uses High Performance Liquid Chromatography (HPLC) coupled with post-column

photolysis and derivatization, in order to separate and detect trace levels of NDELA from a cosmetic

ingredient or product matrix with specificity for NDELA.

This International Standard refers to a collaborative study (Reference [2]) involving seven laboratories and

published in 2006. Validation criteria are given in Reference [2].
© ISO 2009 – All rights reserved v
---------------------- Page: 7 ----------------------
SIST ISO 10130:2010
---------------------- Page: 8 ----------------------
SIST ISO 10130:2010
INTERNATIONAL STANDARD ISO 10130:2009(E)
Cosmetics — Analytical methods — Nitrosamines: Detection
and determination of N-nitrosodiethanolamine (NDELA) in
cosmetics by HPLC, post-column photolysis and derivatization
1 Scope

This International Standard describes a method for the detection and quantification of

N-nitrosodiethanolamine (NDELA) in cosmetics and raw materials used in cosmetics by high performance

liquid chromatography (HPLC) coupled with post-column photolysis and derivatization.

This method is not applicable to the detection and/or quantification of nitrosamines other than NDELA, nor to

the detection and/or quantification of NDELA in products other than cosmetics or raw materials used in

cosmetics.

If a product has the possibility of either NDELA contamination from the ingredients or NDELA formation by the

composition of ingredients, the method will be applied for the testing of cosmetic products and is an alternative

to ISO 15819.
This method is not applicable to matrices containing oxidation dyes.
2 Principle

Extraction of the nitrosamine NDELA from cosmetic samples is carried out with water. Clean-up is performed

either using solid phase extraction (SPE clean-up, see 5.3.2) with a C18 cartridge or dichloromethane (DCM

clean-up, see 5.3.3) when the samples are not dispersible in water. The extracts are analysed by HPLC, post-

column photolysis and derivatization. NDELA is separated from the cosmetic matrix using reversed-phase

liquid chromatography. The N-nitroso bond is cleaved by UV photolysis with the formation of nitrite ion.

According to the Griess reaction, the nitrite functional group is diazotized with sulfanilamide in an acid medium

and is then coupled with N-(1-naphthyl)ethylenediamine dihydrochloride (NED) to form a purple-coloured azo

dye that is quantitatively determined spectrophotometrically at a maximum wavelength, λ , of 540 nm (see

max
Annex B).

The presence of NDELA can be confirmed by repeating the analysis without photolysis (no nitrite ion is then

produced because the N-nitroso bond is not cleaved). The absence of a chromatographic peak at the

retention time of NDELA in the chromatogram confirms that the peak observed in the first analysis

corresponds to NDELA.
3 Reagents
3.1 Methanol, HPLC grade.
3.2 Water, HPLC grade.
3.3 Dichloromethane, HPLC grade.

3.4 N-Nitrosodiethanolamine, with known purity greater than 95 %. CAS No. [116-57-7].

© ISO 2009 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 9 ----------------------
SIST ISO 10130:2010
ISO 10130:2009(E)
3.5 Orthophosphoric acid, 85 %, analytical grade.
3.6 Ammonium acetate, analytical grade.
3.7 Ammonium acetate solution, 1 mol/l.
Dissolve 77,08 g of ammonium acetate (3.6) in up to 1,0 l of water (3.2).
3.8 Ammonium acetate solution, 0,02 mol/l.

Take 20 ml of 1 mol/l ammonium acetate solution (3.7) and dilute to 1 l with water (3.2).

3.9 N-(1-Naphthyl) ethylenediamine dihydrochloride, with known purity greater than 98 %. CAS

No. [1465-25-4].
This reagent should be sealed and stored in the absence of light.
3.10 Sulfanilamide, with known purity greater than 99 %. CAS No. [63-74-1].
3.11 Griess reagent.

Dissolve 0,25 g N-(1-naphthyl) ethylenediamine dihydrochloride (3.9) in water (3.2) and dilute to 250 ml in a

volumetric flask. Dissolve 4,0 g of sulfanilamide (3.10) in 250 ml of a 5 % (mass/volume) aqueous solution of

85 % orthophosphoric acid (3.5). Mix the reagents together in an amber glass bottle and keep the mixture

away from the light.

The mixture can be used for five days and shall, in any case, remain colourless when it is stored between 2 °C

and 8 °C.
4 Apparatus
Use standard laboratory glassware and equipment, and the following.
4.1 Mechanical shaker or Vortex ® mixer .
4.2 High performance glass vial, 20 ml with Poly-Cone® lined urea screw caps.
4.3 Microtube 1,5 ml, for centrifugation in polypropylene.
4.4 Low dead-volume mixing tee.

4.5 Sample processing station, in SPE application (such as Vacmaster® or Visiprep® ) sample

processing station.
4.6 Centrifuge, capable of reaching not less than 20 000g with a tempera
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 10130
Première édition
2009-12-15
Cosmétiques — Méthodes analytiques —
Nitrosamines: Recherche et dosage de la
N-nitrosodiéthanolamine (NDELA) dans
les cosmétiques par CLHP, photolyse et
dérivation post-colonne
Cosmetics — Analytical methods — Nitrosamines: Detection and
determination of N-nitrosodiethanolamine (NDELA) in cosmetics by
HPLC, post-column photolysis and derivatization
Numéro de référence
ISO 10130:2009(F)
ISO 2009
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 10130:2009(F)
PDF – Exonération de responsabilité

Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier

peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence

autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées

acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute

responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.

Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info

du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir

l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,

veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2009

Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous

quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit

de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.

ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2009 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 10130:2009(F)
Sommaire Page

Avant-propos .....................................................................................................................................................iv

Introduction.........................................................................................................................................................v

1 Domaine d'application ..........................................................................................................................1

2 Principe...................................................................................................................................................1

3 Réactifs...................................................................................................................................................1

4 Appareillage...........................................................................................................................................2

5 Préparation et conservation des échantillons....................................................................................4

5.1 Généralités.............................................................................................................................................4

5.2 Préparation des étalons........................................................................................................................4

5.2.1 Solution-mère........................................................................................................................................4

5.2.2 Solutions stocks....................................................................................................................................4

5.2.3 Solutions de travail ...............................................................................................................................4

5.3 Préparation des échantillons ...............................................................................................................5

5.3.1 Généralités.............................................................................................................................................5

5.3.2 Purification SPE.....................................................................................................................................5

5.3.3 Autre mode de préparation des échantillons non dispersibles dans l'eau (purification

DCM) .......................................................................................................................................................5

6 Mode opératoire.....................................................................................................................................6

6.1 Généralités.............................................................................................................................................6

6.2 Conditions chromatographiques.........................................................................................................6

6.3 Installation du système de réaction ....................................................................................................6

7 Calcul des résultats...............................................................................................................................7

7.1 Courbe d'étalonnage.............................................................................................................................7

7.2 Conditions expérimentales de validité du mesurage ........................................................................7

7.3 Calcul des concentrations....................................................................................................................7

8 Rapport d'essai......................................................................................................................................8

Annexe A (informative) Exemples de courbe d'étalonnage et de chromatogrammes ................................9

Annexe B (normative) Photolyse et réaction du nitrite au réactif de Griess jusqu'à formation du

colorant azoïque ..................................................................................................................................12

Annexe C (normative) Configuration du système de réacteur post-colonne.............................................13

Bibliographie.....................................................................................................................................................14

© ISO 2009 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 10130:2009(F)
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de

normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée

aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du

comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non

gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec

la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.

Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,

Partie 2.

La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes

internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur

publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres

votants.

L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne

pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 10130 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 217, Cosmétiques.
iv © ISO 2009 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 10130:2009(F)
Introduction

L'exposition humaine aux N-nitrosamines peut se produire au contact de sources diverses présentes dans

l'environnement, la nourriture ou les produits de soin personnels. Ces substances ayant montré un effet

cancérigène notoire sur plusieurs espèces animales, il est reconnu qu'une restriction d'exposition aux

N-nitrosamines est d'une importance primordiale pour la préservation de la santé humaine. Parmi les

N-nitrosamines, il a été établi que la N-nitrosodiéthanolamine (NDELA) est un contaminant potentiel des

cosmétiques.

Dans ce contexte, plusieurs méthodes analytiques ont été développées pour rechercher et doser sa présence

dans les cosmétiques, comme la chromatographie en phase gazeuse couplée à l'analyse d'énergie

thermique (TEA), la chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) couplée, soit à une

détermination par spectrométrie de masse, soit à une photolyse avec quantification colorimétrique. Cette

dernière méthode nécessite l'usage d'une technologie particulière dans le but de garantir une sélectivité

maximale lors de la recherche de la NDELA, afin de limiter le plus possible le risque de formation artefactuelle

de l'analyte recherché et de permettre une quantification précise de la substance.

La présente méthode analytique emploie la chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP)

associée à une photolyse et à une dérivation post-colonne afin de séparer et de rechercher les traces de

NDELA dans un ingrédient cosmétique ou dans une matrice de produit présentant une sélectivité à la NDELA.

La présente Norme internationale fait référence à une étude menée en collaboration par sept laboratoires

(Référence [2]) et publiée en 2006. Des critères de validation sont donnés dans la Référence [2].

© ISO 2009 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 10130:2009(F)
Cosmétiques — Méthodes analytiques — Nitrosamines:
Recherche et dosage de la N-nitrosodiéthanolamine (NDELA)
dans les cosmétiques par CLHP, photolyse et dérivation post-
colonne
1 Domaine d'application

La présente Norme internationale décrit une méthode de recherche et de quantification de la NDELA dans les

cosmétiques et les matières premières utilisées dans les cosmétiques par CLHP, photolyse et dérivation post-

colonne.

La présente méthode ne s'applique pas à la recherche et/ou à la quantification des nitrosamines autres que la

NDELA, ni à la recherche et/ou à la quantification de la NDELA dans les produits autres que les cosmétiques

ou les matières premières utilisées dans les cosmétiques.

Si un produit est susceptible d'être contaminé par la NDELA contenue dans ses ingrédients ou que la

formation de NDELA est possible du fait de la composition en ingrédients, alors la méthode est à appliquer

lors des essais des produits cosmétiques et constitue une alternative à l'ISO 15819.

Le présente méthode ne s'applique pas aux matrices contenant des colorants d'oxydation.

2 Principe

L'extraction de la nitrosamine NDELA des échantillons cosmétiques est réalisée avec de l'eau. La purification

est effectuée soit par extraction en phase solide (purification SPE, voir 5.3.2) à l'aide d'une cartouche C18,

soit à l'aide de dichlorométhane (purification DCM, voir 5.3.3) lorsque les échantillons ne peuvent pas se

disperser dans l'eau. Les extraits sont analysés par CLHP, photolyse et dérivation post-colonne. La NDELA

est séparée de la matrice cosmétique par chromatographie en phase liquide inverse. La liaison N-nitroso est

coupée par photolyse UV avec formation d'ion nitrite. Selon la réaction de Griess, le groupe fonctionnel nitrite

est diazoté par du sulfanilamide en milieu acide puis associé à du chlorhydrate de N-(1-naphthyl)éthylène

diamine (NED) pour former un colorant azoïque pourpre qui est ensuite dosé quantitativement par

spectrophotométrie à λ 540 nm (voir Annexe B).
max

La présence de NDELA peut être confirmée en procédant à une nouvelle analyse sans photolyse (aucun ion

nitrite n'est alors produit car la liaison N-nitroso n'est pas coupée). L'absence de pic chromatographique au

temps de rétention de la NDELA sur le chromatogramme confirme que le pic observé lors de la première

analyse correspond bien à la NDELA.
3 Réactifs
3.1 Méthanol, qualité CLHP.
3.2 Eau, qualité CLHP.
3.3 Dichlorométhane, qualité CLHP.
© ISO 2009 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 10130:2009(F)

3.4 N-Nitrosodiéthanolamine, de pureté connue supérieure à 95 %. Numéro CAS: [116-57-7].

3.5 Acide orthophosphorique 85 %, de qualité analytique.
3.6 Acétate d'ammonium, de qualité analytique.
3.7 Solution d'acétate d'ammonium, à 1 mol/l.
Dissoudre 77,08 g d'acétate d'ammoniun (3.6) dans 1,0 l d'eau (3.2).
3.8 Solution d'acétate d'ammonium, à 0,02 mol/l.

Prélever 20 ml de solution d'acétate d'ammonium 1 mol/l (3.7) et compléter à 1 l avec de l'eau (3.2).

3.9 Chlorhydrate de N-(1-naphthyl)éthylène diamine, de pureté connue supérieure à 98 %.

Numéro CAS: [1465-25-4].

Il convient que ce réactif soit scellé et conservé hermétiquement à l'abri de la lumière.

3.10 Sulfanilamide, de pureté connue supérieure à 99 %. Numéro CAS: [63-74-1].
3.11 Réactif de Griess.

Dissoudre, dans une fiole jaugée, 0,25 g de chlorhydrate de N-(1-naphthyl)éthylène diamine (3.9) dans de

l'eau (3.2) et compléter à 250 ml. Dissoudre 4,0 g de sulfanilamide (3.10) dans 250 ml d'une solution aqueuse

à 5 % (masse/volume) d'acide orthophosphorique 85 % (3.5). Mélanger les réactifs dans un flacon en verre

ambré et conserver le mélange à l'abri de la lumière.

Le mélange peut être utilisé pendant 5 jours et doit, en tout cas, rester incolore lorsqu'il est conservé à une

température comprise entre 2 °C et 8 °C.
4 Appareillage

Utiliser une verrerie et un matériel de laboratoire normalisés, ainsi que l'équipement suivant.

®1)
4.1 Agitateur mécanique ou de type Vortex .

4.2 Flacon en verre à haute performance, de 20 ml, avec un bouchon à vis (type Poly-Cone lined

urea).
4.3 Microtube en polypropylène, de 1,5 ml destiné à la centrifugation.
4.4 Té de mélange à faible volume mort.

4.5 Station de traitement d'échantillon, pour application SPE (telle que les systèmes Vacmaster ou

®1)
Visiprep .

4.6 Centrifugeuse, pouvant atteindre au moins 20 000g et pouvant réguler la température.

® ® ® ®

1) Vortex , Poly-Cone , Vacmaster , Visiprep sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché.

Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que

l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif des produits ainsi désignés.
2 © ISO 2009 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 10130:2009(F)
®2) ®2)

4.7 Colonnes d'extraction en phase solide, par exemple Sep Pak cartouches C18 ou Bakerbond

C18 – 6 ml, avec 500 mg d'octadécylsilane en phase inverse fixée sur gel de silice, de 40 µm de diamètre de

particule moyen (APD), 60 Ă.

4.8 Chromatographe pour chromatographie en phase liquide à haute performance, muni d'un

amortisseur d'impulsions, d'un réservoir d'éluant, d'une pompe, d'un syst
...

Questions, Comments and Discussion

Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.