ISO 6888-1:1999
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 1: Technique using Baird-Parker agar medium
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) — Part 1: Technique using Baird-Parker agar medium
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus aureus et autres espèces) — Partie 1: Technique utilisant le milieu gélosé de Baird-Parker
La présente partie de l'ISO 6888 spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive dans les produits destinés à la consommation humaine ou à l'alimentation animale, par comptage des colonies obtenues sur milieu solide (milieu de Baird-Parker) après incubation en aérobiose à 35°C ou 37°C.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6888-1
First edition
1999-02-15
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal method for the
enumeration of coagulase-positive
staphylococci (Staphylococcus aureus
and other species) —
Part 1:
Technique using Baird-Parker agar medium
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le dénombrement
des staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus aureus et autres
espèces) —
Partie 1: Technique utilisant le milieu gélosé de Baird-Parker
A
Reference number
ISO 6888-1:1999(E)
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ISO 6888-1:1999(E)
Contents
1 Scope .1
2 Normative references .1
3 Terms and definitions .1
4 Principle.2
5 Diluent and culture media.2
6 Apparatus and glassware .5
7 Sampling.6
8 Preparation of test sample.6
9 Procedure .6
10 Expression of results .8
11 Precision.10
12 Test report .10
Bibliography.11
© ISO 1999
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means, electronic
or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from the publisher.
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Printed in Switzerland
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ISO 6888-1:1999(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
International Standard ISO 6888-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Agricultural food products,
Subcommittee SC 9, Microbiology.
This first edition of ISO 6888-1, together with ISO 6888-2, cancels and replaces ISO 6888:1983, which has been
technically revised.
ISO 6888 consists of the following parts, under the general title Microbiology of food and animal feeding stuffs —
Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other
species):
Part 1: Technique using Baird-Parker agar medium
Part 2: Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium
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ISO 6888-1:1999(E)
0 Introduction
0.1 Because of the large variety of food and feed products, this horizontal method may not be appropriate in every
detail for certain products. In this case, different methods, which are specific to these products, may be used if
absolutely necessary for justified technical reasons. Nevertheless, every attempt should be made to apply this
horizontal method as far as possible.
When this part of ISO 6888 is next reviewed, account will be taken of all information then available regarding the
extent to which this horizontal method has been followed and the reasons for deviations from this method in the
case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate and, for certain group of products, International Standards
and/or national standards may already exist that do not comply with this horizontal method. It is hoped that when
such standards are reviewed they will be changed to comply with this part of ISO 6888 so that eventually the only
remaining departures from this horizontal method will be those necessary for well-established technical reasons.
0.2 ISO 6888 describes two horizontal methods (part 1 and part 2) for the enumeration of coagulase-positive
staphylococci among which enterotoxinogenic strains are encountered. It is mainly concerned with Staphylococcus
aureus, but also with S. intermedius and certain strains of S. hyicus.
In the general case, use part 1 of ISO 6888. However, it is preferable to use the procedure described in part 2 (see
reference [1]) only for foodstuffs (such as cheeses made from raw milk and certain raw meat products) likely to be
contaminated by:
staphylococci forming atypical colonies on a Baird-Parker agar medium;
background flora which can obscure the colonies being sought.
0.3 For the purposes of this part of ISO 6888, the confirmation of staphylococci is based on a positive coagulase
reaction, but it is reconized that some strains of Staphylococcus aureus give weakly positive coagulase reactions.
These latter strains may be confused with other bacteria but they may be distinguished from such other bacteria by
the use of additional tests not included in this part of ISO 6888, such as the sensitivity to lysostaphin, the production
of haemolysin, of thermostable nuclease and of acid from mannitol (see reference [2]).
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INTERNATIONAL STANDARD © ISO ISO 6888-1:1999(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal
method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci
(Staphylococcus aureus and other species) —
Part 1:
Technique using Baird-Parker agar medium
1 Scope
This part of ISO 6888 specifies a horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci in
products intended for human consumption or feeding of animals, by counting of colonies obtained on a solid
medium (Baird-Parker medium) after aerobic incubation at 35 °C or 37 °C.
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this part of ISO 6888. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these publications
do not apply. However, parties to agreements based on this part of ISO 6888 are encouraged to investigate the
possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For undated
references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC maintain
registers of currently valid International Standards.
ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Rules for the preparation of the test sample, of initial
suspension and of decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of
the initial suspension and of decimal dilutions.
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examination.
3 Terms and definitions
For the purposes of this part of ISO 6888, the following terms and definitions apply.
3.1
coagulase-positive staphylococci
bacteria which form typical and/or atypical colonies on the surface of a selective culture medium and which show a
positive coagulase reaction when the test is performed following the method specified in this part of ISO 6888
3.2
enumeration of the coagulase-positive staphylococci
determination of the number of coagulase-postive staphylococci found per millilitre or per gram of sample when the
test is carried out according to the method specified in this part of ISO 6888
1
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4 Principle
4.1 Inoculation of the surface of a solid selective culture medium, using duplicate plates, with a specified quantity
of the test sample if the product is liquid, or with a specified quantity of the initial suspension in the case of other
products.
Inoculation, under the same conditions, using decimal dilutions of the test sample or of the initial suspension, with
two plates per dilution.
1)
4.2 Aerobic incubation of the plates at 35 °C or 37 °C and examination after both 24 h and 48 h.
4.3 Calculation of the number of coagulase-positive staphylococci per millilitre, or per gram, of sample from the
number of typical and/or atypical colonies obtained on plates at dilution levels chosen so as to give a significant
result, and confirmed by a positive coagulase test result.
5 Diluent and culture media
5.1 General
For current laboratory practice, see ISO 7218.
5.2 Diluent
See ISO 6887-1 and the specific standard dealing with the product to be examined.
2)
5.3 Baird-Parker agar medium
NOTE Commercially available media may be used. In such cases, the manufacturer's instructions should be followed
carefully.
5.3.1 Base medium
5.3.1.1 Composition
Pancreatic digest of casein 10,0 g
Yeast extract 1,0 g
Meat extract 5,0 g
Sodium pyruvate 10,0 g
L-Glycine 12,0 g
Lithium chloride 5,0 g
1)
Agar 12 g to 22 g
Water, to a final volume of 1 000 ml
1) Depending on the gel strength of the agar.
5.3.1.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete base in the water by boiling.
If necessary, adjust the pH so that after sterilization it is 7,2 ± 0,2 at 25 °C.
The temperature is agreed between the interested parties and is indicated in the test report.
1)
2) The agar medium is that of Baird-Parker (see reference [3]) with the addition of sulfamezathine (see reference [4]) if the
presence of Proteus is suspected.
2
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Transfer the medium in quantities of 100 ml to flasks or bottles (6.5) of appropriate capacity.
Sterilize the medium for 15 min at 121 °C.
5.3.2 Solutions
5.3.2.1 Potassium tellurite solution
5.3.2.1.1 Composition
1)
Potassium tellurite (K TeO ) 1,0 g
2 3
Water 100 ml
1) It is recommended to ensure beforehand that the
potassium tellurite available is suitable for this test (see
5.3.2.1.2).
5.3.2.1.2 Preparation
Dissolve the potassium tellurite completely in the water with minimal heating.
The solid should be readily soluble. If a white insoluble material is present in the water, discard the powder.
Sterilize by filtration using 0,22 μm pore size membranes.
The solution may be stored at the maximum for one month at +3 °C – 2 °C.
Discard the solution if a white precipitate forms.
5.3.2.2 Egg yolk emulsion (concentration approximately 20 % or according to the manufacturer's instructions)
NOTE If a commercial preparation is available, it should be used.
Use fresh hen eggs with intact shells. Clean the eggs with a brush using a liquid detergent. Rinse them under
running water, then disinfect the shells either by immersing them in ethanol (70 % volume fraction) for 30 s and
allowing them to dry in the air, or by spraying them with alcohol followed by flame sterilization.
Proceeding under aseptic conditions, break each egg and separate the yolk from its white by repeated transfer of
the yolk from one half of the shell to the other. Place the yolks in a sterile flask (6.5) and add four times their volume
of sterile water. Mix thoroughly. Heat the mixture in the water bath (6.4) set at 47 °C for 2 h and leave for 18 h to
24 h at +3 °C ± 2 °C to allow a precipitate to form. Aseptically collect the supernatant liquid into a fresh sterile flask
for use.
The emulsion may be stored at +3 °C ± 2 °C for a maximum of 72 h.
5.3.2.3 Sulfamezathine (sulfamethazine, sulfadimidine) solution
NOTE This is to be used only if Proteus species are suspected in the test sample.
5.3.2.3.1 Composition
Sulfamezathine 0,2 g
Sodium hydroxide solution, c(NaOH) = 0,1 mol/l 10 ml
Water 90 ml
3
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5.3.2.3.2 Preparation
Dissolve the sulfamezathine in the sodium hydroxide solution.
Dilute to 100 ml with the water.
Sterilize by filtration using 0,22 μm pore size membranes.
The solution may be stored at the maximum for one month at +3 °C ± 2 °C.
5.3.3 Complete medium
5.3.3.1 Composition
Base medium (5.3.1) 100 ml
Potassium tellurite solution (5.3.2.1) 1,0 ml
Egg-yolk emulsion (5.3.2.2) 5,0 ml
Sulfamezathine solution (5.3.2.3) (if necessary) 2,5 ml
5.3.3.2 Preparation
Melt the base medium, then cool it to approximately 47 °C by means of the water bath (6.4).
Add, under aseptic conditons, the two other solutions (5.3.2.1 and 5.3.2.2) and if necessary (if Proteus species are
suspected in the test sample) the sulfamezathine solution (5.3.2.3), each solution being previously warmed in a
water bath at 47 °C, mixing well after each addition.
5.3.4 Preparation of agar plates
Place the appropriate quantity of the complete medium (5.3.3) into sterile Petri dishes in order to obtain an agar
thickness of about 4 mm, and allow to solidify.
The plates may be stored, prior to drying, for up to 24 h at +3 °C ± 2 °C.
NOTE The manufacturer's instructions should be followed concerning the storage period for industrially prepared plates.
Before use, dry the plates, preferably with the lids off and the agar surface downwards, in an oven set at a
temperature between 25 °C and 50 °C, until the droplets have disappeared from the surface of t
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 6888-1
Première édition
1999-02-15
Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour le dénombrement des
staphylocoques à coagulase positive
(Staphylococcus aureus et autres
espèces) —
Partie 1:
Technique utilisant le milieu gélosé
de Baird-Parker
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the
enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus
and other species) —
Part 1: Technique using Baird-Parker agar medium
A
Numéro de référence
ISO 6888-1:1999(F)
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ISO 6888-1:1999(F)
Sommaire
1 Domaine d’application .1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions.1
4 Principe.2
5 Diluant et milieux de culture.2
6 Appareillage et verrerie.5
7 Échantillonnage .6
8 Préparation de l'échantillon pour essai.6
9 Mode opératoire.6
10 Expression des résultats .8
11 Fidélité .10
12 Rapport d'essai .10
Bibliographie.11
© ISO 1999
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit de l'éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 • CH-1211 Genève 20 • Suisse
Internet iso@iso.ch
Imprimé en Suisse
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© ISO
ISO 6888-1:1999(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
La Norme internationale ISO 6888-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits agricoles
alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie.
Cette première édition de l’ISO 6888-1, ensemble avec l’ISO 6888-2, annule et remplace l’ISO 6888:1983 qui a fait
l’objet d’une révision technique.
L’ISO 6888 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive (Staphylococcus aureus et autres
espèces):
Partie 1: Technique utilisant le milieu gélosé de Baird-Parker
Partie 2: Technique utilisant le milieu gélosé au plasma de lapin et au fibrinogène
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ISO 6888-1:1999(F)
0 Introduction
0.1 En raison de la grande diversité des produits alimentaires, il est possible que cette méthode horizontale ne soit
pas applicable dans tous ses détails à certains d'entre eux. Dans ce cas, des méthodes différentes, spécifiques à
ces produits, pourront être utilisées si cela s'avère absolument nécessaire pour des raisons techniques justifiées.
Néanmoins, il convient que tous les efforts soient faits pour appliquer cette méthode horizontale chaque fois que
possible.
Lors du prochain réexamen périodique de la présente partie de l'ISO 6888, il sera tenu compte de toutes les
évolutions intervenues depuis sa publication et, notamment, dans quelle mesure cette méthode horizontale aura été
suivie ainsi que les raisons des dérogations dans le cas de produits particuliers.
L'harmonisation de toutes les méthodes d'essai ne peut être réalisée de façon immédiate; de ce fait, il peut déjà
exister des Normes internationales et/ou nationales pour certains groupes de produits, qui ne concordent pas avec
la présente méthode horizontale. Lorsque de telles normes viendront en révision, il serait souhaitable de les aligner
avec les prescriptions de la présente partie de l'ISO 6888 et de ne conserver que les seules divergences justifiées
indispensables pour des raisons techniques.
0.2 L’ISO 6888 décrit deux méthodes horizontales (partie 1 et partie 2) pour le dénombrement des staphylocoques
à coagulase positive, parmi lesquels se rencontrent les souches entérotoxinogènes. Il s'agit principalement de
Staphylococcus aureus, mais également de S. intermedius et de certaines souches de S. hyicus.
Dans le cas général, utiliser la partie 1 de l'ISO 6888. Cependant, il est préférable d'utiliser le mode opératoire décrit
dans la partie 2 (voir la référence [1]) uniquement pour les denrées alimentaires (telles que les fromages au lait cru
et certains produits carnés crus) susceptibles d'être contaminées par
des staphylocoques formant des colonies non caractéristiques sur milieu gélosé de Baird-Parker;
une flore annexe pouvant masquer les colonies recherchées.
0.3 Pour les besoins de la présente partie de l'ISO 6888, la confirmation des staphylocoques repose sur une
réaction positive à la coagulase, mais il est reconnu que certaines souches de Staphylococcus aureus donnent une
réaction faiblement positive à la coagulase. Ces dernières souches peuvent être confondues avec d'autres
bactéries; il est possible d'en faire la distinction par des essais complémentaires non inclus dans la présente partie
de l'ISO 6888, telles la sensibilité à la lysostaphine, la production d’hémolysine, de nucléase thermostable et d’acide
à partir de mannitol (voir la référence [2]).
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NORME INTERNATIONALE © ISO ISO 6888-1:1999(F)
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour
le dénombrement des staphylocoques à coagulase positive
(Staphylococcus aureus et autres espèces) —
Partie 1:
Technique utilisant le milieu gélosé de Baird-Parker
1 Domaine d’application
La présente partie de l'ISO 6888 spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement des staphylocoques à
coagulase positive dans les produits destinés à la consommation humaine ou à l'alimentation animale, par
comptage des colonies obtenues sur milieu solide (milieu de Baird-Parker) après incubation en aérobiose à 35 °C
ou 37 °C.
2 Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente partie de l'ISO 6888. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes
aux accords fondés sur la présente partie de l'ISO 6888 sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les
éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non datées, la dernière
édition du document normatif en référence s’applique. Les membres de la CEI et de l'ISO possèdent le registre des
Normes internationales en vigueur à un moment donné.
ISO 6887-1, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions
décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de la suspension
mère et des dilutions décimales.
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques.
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente partie de l’ISO 6888, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
staphylocoques à coagulase positive
bactéries formant des colonies caractéristiques et/ou non caractéristiques à la surface d'un milieu de culture sélectif
et donnant une réaction positive à la coagulase, lorsque l'essai est effectué selon la méthode spécifiée dans la
présente partie de l'ISO 6888
3.2
dénombrement des staphylocoques à coagulase positive
détermination du nombre de staphylocoques à coagulase positive trouvé par millilitre ou par gramme d'échantillon,
lorsque l'essai est effectué selon la méthode spécifiée dans la présente partie de l'ISO 6888
1
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ISO 6888-1:1999(F)
4 Principe
4.1 Ensemencement en surface d'un milieu gélosé sélectif coulé dans deux séries de boîtes, avec une quantité
déterminée de l'échantillon pour essai si le produit à examiner est liquide, ou de la suspension mère dans le cas
d'autres produits.
Dans les mêmes conditions, ensemencement des dilutions décimales obtenues à partir de l'échantillon pour essai
ou de la suspension mère, à raison de deux boîtes par dilution.
1)
4.2 Incubation de ces boîtes à 35 °C ou à 37 °C en aérobiose et examen après 24 h et 48 h.
4.3 Calcul du nombre de staphylocoques à coagulase positive par millilitre ou par gramme d'échantillon, à partir du
nombre de colonies caractéristiques et/ou non caractéristiques obtenues dans les boîtes retenues aux niveaux de
dilution donnant un résultat significatif, et confirmées par un résultat positif de l'essai de la coagulase.
5 Diluant et milieux de culture
5.1 Généralités
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir l'ISO 7218.
5.2 Diluant
Voir l'ISO 6887-1 et la norme spécifique du produit à examiner.
2)
5.3 Milieu gélosé de Baird-Parker
NOTE Des milieux commercialisés peuvent être utilisés. Dans ce cas, il convient de se conformer strictement aux
prescriptions du fabricant.
5.3.1 Milieu de base
5.3.1.1 Composition
Digestat pancréatique de caséine 10,0 g
Extrait de levure 1,0 g
Extrait de viande 5,0 g
Pyruvate de sodium 10,0 g
L-Glycine 12,0 g
Chlorure de lithium 5,0 g
a
Agar-agar 12 g à 22 g
Eau, pour obtenir un volume final de 1 000 ml
a
Selon le pouvoir gélifiant de l'agar-agar.
1)
La température fait l'objet d'un accord entre les parties intéressées et est indiquée dans le rapport d'essai.
2)
Le milieu gélosé est celui de Baird-Parker (voir la référence [3]) avec addition de sulfamézathine (voir la référence [4]) dans
le cas où l'on suspecte la présence de Proteus.
2
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5.3.1.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau, en portant à ébullition.
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation il soit de 7,2 ± 0,2 à 25 °C.
Répartir le milieu, par quantités de 100 ml, dans des flacons ou fioles (6.5) de capacité appropriée.
Stériliser le milieu à 121 °C pendant 15 min.
5.3.2 Solutions
5.3.2.1 Solution de tellurite de potassium
5.3.2.1.1 Composition
a
Tellurite de potassium (K TeO ) 1,0 g
2 3
Eau 100 ml
a
Il est recommandé de s'assurer au préalable que le
tellurite de potassium dont on dispose convient pour cet essai
(voir 5.3.2.1.2).
5.3.2.1.2 Préparation
Dissoudre complètement le tellurite de potassium dans l'eau, en chauffant le moins possible.
Il convient que la poudre soit rapidement soluble. Si un composé blanc insoluble est présent dans l’eau, ne pas
retenir la poudre.
Stériliser par filtration sur des membranes de 0,22 μm de porosité.
La solution peut être conservée au maximum 1 mois à +3 °C – 2 °C.
Éliminer la solution si un précipité blanc se forme.
5.3.2.2 Émulsion de jaune d’œuf (à une concentration d'environ 20 % ou selon les instructions du fabricant)
NOTE Si une préparation commerciale est disponible, il convient de l’utiliser.
Utiliser des œufs frais de poule à coquille intacte. Nettoyer les œufs avec une brosse à l'aide d'un détergent liquide.
Les rincer à l'eau courante puis désinfecter les coquilles, soit en les plongeant dans l'éthanol à 70 % (fraction
volumique) pendant 30 s et les laissant sécher à l’air, soit en les pulvérisant d'alcool suivi de flambage.
En opérant de façon aseptique, casser chaque œuf et séparer le jaune du blanc par transferts répétés du jaune
d'une demi-coquille dans l'autre. Placer les jaunes dans un flacon stérile (6.5) et ajouter quatre fois leur volume
d'eau stérile. Mélanger vigoureusement. Chauffer le mélange dans le bain d'eau (6.4) réglé à 47 °C pendant 2 h et
entreposer à +3 °C – 2 °C pendant 18 h à 24 h pour laisser se former un précipité. Recueillir aseptiquement le
liquide surnageant dans un flacon récemment stérilisé pour l’utilisation.
L'émulsion peut être conservée 72 h au maximum à +3 °C – 2 °C.
5.3.2.3 Solution de sulfamézathine (sulfaméthazine, sulfadimidine)
NOTE À être utilisée seulement dans le cas où l'on suspecte la présence d’espèces de Proteus dans l’échantillon pour
essai.
3
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5.3.2.3.1 Composition
Sulfamézathine 0,2 g
Solution d'hydroxyde de sodium, c(NaOH) = 0,1 mol/l 10 ml
Eau 90 ml
5.3.2.3.2 Préparation
Dissoudre la sulfamézathine dans la solution d'hydroxyde de sodium.
Compléter à 100 ml avec de l'eau.
Stériliser par filtration sur des membranes de 0,22 μm de porosité.
La solution peut être conservée au maximum 1 mois à +3 °C ± 2 °C.
5.3.3 Milieu complet
5.3.3.1 Composition
Milieu de base (5.3.1) 100 ml
Solution de tellurite de potassium (5.3.2.1) 1,0 ml
Émulsion de jaune d'œuf (5.3.2.2) 5,0 ml
Solution de sulfamézathine (5.3.2.3) (si nécessaire) 2,5 ml
5.3.3.2 Préparation
Faire fondre le milieu de base, puis le refroidir à environ 47 °C au moyen du bain d'eau (6.4).
Ajouter, de façon aseptique, les deux autres solutions (5.3.2.1 et 5.3.2.2) et, si nécessaire (si l’on suspecte la
présence d’espèces de Proteus dans l’échantillon pour essai), la solution de sulfamézathine (5.3.2.3), chaque
solution étant préalablement réchauffée au bain d’eau à 47 °C, en mélangeant soigneusement après chaque
addition.
5.3.4 Préparation des boîtes de milieu gélosé
Couler la quantité nécessaire du milieu complet (5.3.3), dans des boîtes de Petri stériles de façon à obtenir une
épaisseur de gélose d'environ 4 mm, et laisser se solidifier.
Les boîtes peuvent être conservées, avant séchage, 24 h au maximum à +3 °C ± 2 °C.
NOTE Pour la durée de conservation de boîtes préparées industriellement, il convient de suivre les instructions du fabricant.
Avant utilisation, sécher les boîtes, de préférence avec le couvercle enlevé, et avec la surface de la gélose tournée
vers le bas, dans une étuve réglée entre 25 °C et 50 °C, jusqu’à disparition des gouttelettes à la surface du milieu.
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ISO 6888-1:1999(F)
5.4 Bouillon cœur-cervelle
5.4.1 Composition
Digestat enzymatique de tissus animaux 10,0 g
Extrait déshydraté de cervelle de veau 12,5 g
Extrait déshydraté de cœur de bœuf 5,0 g
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