ISO 5738:2004

Milk and milk products — Determination of copper content — Photometric method (Reference method)

ISO 5738|IDF 76:2004 specifies a reference method for the determination of the copper content of milk and milk products. The method is applicable to: a) milk, skimmed milk and buttermilk; b) evaporated milk and sweetened condensed milk; c) whole and skimmed milk powder; d) cream and butter; e) butterfat; f) ice-cream; g) hard, semi-hard and soft cheeses of various ages, and processed cheese; and h) caseins, caseinates and coprecipitates. The method is suitable for determining copper contents as low as 0,05 mg/kg in test samples of butter and butterfat.

Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en cuivre — Méthode photométrique (Méthode de référence)

L'ISO 5738|FIL 76:2004 spécifie une méthode de référence pour la détermination de la teneur en cuivre du lait et des produits laitiers. La méthode est applicable aux produits suivants: lait, lait écrémé et babeurre; lait concentré non sucré et lait concentré sucré; lait sec entier et écrémé; crème et beurre; matière grasse de beurre; crème glacée; fromage à pâte molle, à pâte dure ou demi-dure de différents âges et fromage fondu; et caséines, caséinates, et coprécipités. La méthode permet de déterminer des teneurs en cuivre de l'ordre de 0,05 mg/kg dans des échantillons de beurre et de matière grasse d'origine beurrière.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 06-Sep-2004
• ICS: 67.100.01 - Milk and milk products in general
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 28-Aug-2020

Relations

• Revises: ISO 5738:1980 - Milk and milk products — Determination of copper content — Photometric reference method
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 5738
IDF
76
Second edition
2004-09-01

Milk and milk products — Determination
of copper content — Photometric method
(Reference method)
Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en cuivre —
Méthode photométrique (Méthode de référence)




Reference numbers
ISO 5738:2004(E)
IDF 76:2004(E)
©
ISO and IDF 2004

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ISO 5738:2004(E)
IDF 76:2004(E)
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ISO 5738:2004(E)
IDF 76:2004(E)
Contents Page
Foreword. iv
Foreword. v
1 Scope. 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus. 3
7 Sampling . 4
8 Procedure. 4
8.1 Preparation of test sample. 4
8.2 Weighing and pretreatment of the test portion. 6
8.3 Digestion. 7
8.4 Colour development . 7
8.5 Blank test . 8
8.6 Photometric measurements. 8
8.7 Number of determinations . 8
8.8 Calibration curve. 8
9 Calculation and expression of results . 8
9.1 Calculation. 8
9.2 Expression of results. 9
10 Precision . 9
10.1 Interlaboratory test . 9
10.2 Repeatability. 9
10.3 Reproducibility . 9
11 Test report. 9
Annex A (informative) Results of interlaboratory test . 10
Bibliography . 11
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IDF 76:2004(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 5738IDF 76 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC International.
It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
This edition of ISO 5738IDF 76 cancels and replaces the first edition of ISO 5738 (ISO 5738:1980), which
has been technically revised.
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ISO 5738:2004(E)
IDF 76:2004(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National
Committee in every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF
Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO and AOAC International in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of
the National Committees casting a vote.
ISO 5738IDF 76 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC International.
It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
All work was carried out by Joint ISO/IDF/AOAC Action Team on Minor compounds, of the Standing
Committee on Minor components and characterization of physical properties, under the aegis of its project
leader, Dr G. Ellen (NL).
This edition of ISO 5738IDF 76 cancels and replaces the first edition of IDF 76 (IDF 76A:1980), which has
been technically revised.

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ISO 5738:2004(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 76:2004(E)

Milk and milk products — Determination of copper content —
Photometric method (Reference method)
1 Scope
This International Standard specifies a reference method for the determination of the copper content of milk
and milk products.
The method is applicable to
a) milk, skimmed milk and buttermilk,
b) evaporated milk and sweetened condensed milk,
c) whole and skimmed milk powder,
d) cream and butter,
e) butterfat,
f) ice-cream,
g) hard, semi-hard and soft cheeses of various ages, and processed cheese, and
h) caseins, caseinates and coprecipitates.
The method is suitable for determining copper contents as low as 0,05 mg/kg in test samples of butter and
butterfat.
NOTE See IDF 68 for details of butterfat.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 648:1977, Laboratory glassware — One-mark pipettes
ISO 835-1:1981, Laboratory glassware — Graduated pipettes — Part 1: General requirements
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
copper content
mass fraction of substances determined by the procedure described in this International Standard
NOTE The copper content is expressed as milligrams per kilogram.
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ISO 5738:2004(E)
IDF 76:2004(E)
4 Principle
The organic material in the test sample is digested with a mixture of nitric and sulfuric acids (preceded in the
case of cream, butter and butterfat by removal of the fat). The solution is neutralized with ammonia solution
followed by complexing the copper as a salt of diethyl dithiocarbamic acid. The copper(II) salt is extracted with
amyl acetate. The absorbance of the yellow solution is measured photometrically.
The presence of bismuth and/or tellurium interferes with the determination of copper. See the check for
absence and the method of removal specified in 8.6.
5 Reagents
All reagents shall be of analytical grade and, with the exception of the copper(ll) sulfate standard solutions
(5.12), shall be free from copper.
5.1 Water, double distilled, with the final distillation being carried out in a copper-free distillation unit.
5.2 Ethanol (CH CH OH), with a volume fraction of about 96 %.
3 2
Distil the ethanol, if necessary, in a copper-free distillation unit.
5.3 Diethyl ether [C H ) O]
2 5 2
Distil the diethyl ether, if necessary, in a copper-free distillation unit.
5.4 Light petroleum (petroleum ether), with boiling range between 40 °C and 60 °C.
Distil the light petroleum, if necessary, in a copper-free distillation unit.
5.5 Nitric acid, concentrated, ρ (HNO ) = 1,42 g/ml.
20 3
Distil in a copper-free distillation unit. Discard the first 50 ml.
5.6 Sulfuric acid
5.6.1 Sulfuric acid, concentrated, ρ (H SO ) = 1,84 g/ml.
20 2 4
5.6.2 Sulfuric acid, dilute, c(H SO ) = 0,5 mol/l).
2 4
5.7 Hydrogen peroxide solution, ρ (H O ) = 1,099 g/ml to 1,103 g/ml.
20 2 2
5.8 Ammonia solution, concentrated, ρ (NH ) = 0,91 g/ml.
20 3
Purify the ammonia solution, if necessary, by vacuum distillation in a copper-free distillation unit.
5.9 Citrate/EDTA solution
Dissolve 400 g of ammonium citrate [(NH ) C H O ] and 100 g of EDTA disodium salt dihydrate
4 3 6 5 7
[(ethylenedinitrilo)-tetraacetic acid disodium salt dihydrate] (Na C H N O⋅2H O) in water (5.1) in a
2 10 14 2 8 2
1 000 ml one-mark volumetric flask (6.12). Dilute to the mark with water.
Purify the citrate/EDTA solution, if necessary, as follows.
Add three drops of phenolphthalein solution (5.13) to the citrate/EDTA solution. Then add sufficient ammonia
solution (5.8) until the solution remains pale pink. Add 10 mg of sodium diethyl dithiocarbamate (5.10). Warm
the solution in a water bath (6.5) set at 60 °C for about 10 min to completely dissolve the sodium diethyl
dithiocarbamate. Cool to ambient temperature.
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IDF 76:2004(E)
Extract the solution in a 2 l separation funnel five times with 15 ml of amyl acetate (5.11). Repeat the whole
purification procedure until the last 15 ml portion of amyl acetate remains colourless.
5.10 Sodium diethyl dithiocarbamate solution [(C H ) NCSSNa]
2 5 2
Dissolve 400 mg of sodium diethyl dithiocarbamate trihydrate [C H ) NCSSNa⋅3H O] in 90 ml of water (5.1)
2 5 2 2
in a 100 ml one-mark volumetric flask (6.12). Dilute to the mark with ammonia solution (5.8).
Store the solution in the dark in a refrigerator at between 0 °C and 8 °C. Renew the solution every week.
5.11 Amyl acetate
Dry 1 l of amyl acetate on 15 g of anhydrous sodium sulfate for 24 h. Distil in a copper-free distillation unit.
Collect the fraction distilled at between 136 °C and 140 °C.
Instead of amyl acetate, xylene distilled in a copper-free distillation unit may be used.
5.12 Copper(ll) sulfate standard solutions
5.12.1 Copper stock solution
Dissolve 196,5 mg of copper(ll) sulfate pentahydrate (CuSO⋅5H O) in an amount of water in a 1 000 ml one-
4 2
mark volumetric flask (6.12). Carefully add 5 ml of dilute sulfuric acid (5.6.2) and mix. Dilute to the mark with
water (5.1).
5.12.2 Copper working solution
Prepare this solution on the day of use.
Use a one-mark pipette (6.11) to add 10 ml of copper stock solution (5.12.1) to 5 ml of dilute sulfuric acid
(5.6.2) previously added to a 500 ml one-mark volumetric flask (6.12) and mix. Dilute to the mark with water.
NOTE 1 ml of the copper working solution contains 1 µg of Cu.
5.13 Phenolphthalein solution
Dissolve 1 g of phenolphthalein in 100 ml of 90 % ethanol (volume fraction).
5.14 Potassium cyanide solution (KCN), with a mass fraction of 5 % KCN.
WARNING — Take safety precautions as KCN is poisonous. It is the responsibility of the user of this
standard to establish safety and health practices and to determine the applicability of regulatory
limitations prior to use.
5.15 Sodium hydroxide solution, c(NaOH) = 1 mol/l.
6 Apparatus
6.1 Glassware
Keep the clean glassware in 10 % nitric acid (mass fraction). Before use, rinse three times with distilled water
and then three times with double-distilled water. Dry, if necessary, by successively rinsing with ethanol and
diethyl ether.
6.2 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 1 mg, with a readability of 0,1 mg.
6.3 Appropriate grinding or grating device.
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ISO 5738:2004(E)
IDF 76:2004(E)
6.4 Sieve, made of copper-free material, with nominal size of aperture 0,5 mm.
6.5 Water baths, capable of operating at 20 °C ± 2 °C, at 40 °C ± 1 °C, at 45 °C ± 1 °C, at 60 °C ± 1 °C, at
between 30 °C and 40 °C, at between 40 °C and 60 °C, at between 60 °C and 65 °C and at between 80 °C
and 90 °C.
6.6 Micro gas burner.
6.7 Digestion flasks, (Kjeldahl flasks) with ground-glass stoppers, calibrated on the lower part of the neck
at 50 ml.
6.8 Glass beads, kept in 10 % nitric acid (mass fraction), as for the glassware (6.1).
6.9 Graduated cylinders, of capacity 5 ml and 25 ml.
6.10 Graduated pipettes, of capacity 5 ml and 25 ml with 0,1 ml graduations, complying with
ISO 835-1:1981, class A.
6.11 One-mark pipettes, capable of delivering 1 ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml and 20 ml, complying with
ISO 648:1977, class A.
6.12 One-mark volumetric flasks, of capacity 100 ml, 500 ml and 1 000 ml.
6.13 Spectrophotometer, capable of operating at 436 nm, equipped with cells of 10 mm optical path length.
7 Sampling
It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method
is given in ISO 707.
Take precautions to avoid copper contamination during sampling. Store glass sampling jars in 10 % nitric a
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 5738
FIL
76
Deuxième édition
2004-09-01


Lait et produits laitiers — Détermination
de la teneur en cuivre — Méthode
photométrique (Méthode de référence)
Milk and milk products — Determination of copper content —
Photometric method (Reference method)




Numéros de référence
ISO 5738:2004(F)
FIL 76:2004(F)
©
ISO et FIL 2004

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ISO 5738:2004(F)
FIL 76:2004(F)
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Publié en Suisse

ii © ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés

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ISO 5738:2004(F)
FIL 76:2004(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Avant-propos. v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage. 4
6.1 Verrerie. 4
7 Échantillonnage . 4
8 Mode opératoire . 5
8.1 Préparation de I'échantillon pour essai. 5
8.2 Pesée et prétraitement de la prise d'essai. 7
8.3 Minéralisation . 8
8.4 Développement de la coloration. 8
8.5 Essai à blanc . 8
8.6 Mesures photométriques . 8
8.7 Nombre de déterminations. 9
8.8 Courbe d'étalonnage. 9
9 Calcul et expression des résultats. 9
9.1 Calcul. 9
9.2 Expression des résultats. 9
10 Fidélité. 10
10.1 Essai interlaboratoires . 10
10.2 Répétabilité. 10
10.3 Reproductibilité. 10
11 Rapport d'essai . 10
Annexe A (informative) Résultats de l'essai interlaboratoires. 11
Bibliographie . 12

© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés iii

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ISO 5738:2004(F)
FIL 76:2004(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 5738FIL 76 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration avec l'AOAC
International. Elle est publiée conjointement par l'ISO et la FIL, et séparément par l'AOAC International.
Cette édition de l'ISO 5738FIL 76 annule et remplace la première édition de l'ISO 5738 (ISO 5738:1980), qui
fait l'objet d'une révision technique.
iv © ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés

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ISO 5738:2004(F)
FIL 76:2004(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l'ISO et avec
l'AOAC International pour l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et d'échantillonnage pour le lait et
les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux votants.
L'ISO 5738FIL 76 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration avec l'AOAC
International. Elle est publiée conjointement par l'ISO et la FIL, et séparément par l'AOAC International.
Tous les travaux ont été effectués par le groupe de travail conjoint ISO/FIL/AOAC sur les Éléments dans le
lait et les produits laitiers, du comité permanent sur les Composants mineurs et caractérisation des propriétés
physiques, sous l'égide de son chef de projet, le Dr G. Ellen (NL).
Cette édition de l'ISO 5738FIL 76 annule et remplace la première édition de la FIL 76 (FIL 76A:1980), qui a
fait l'objet d'une révision technique.

© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés v

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ISO 5738:2004(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 76:2004(F)

Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en
cuivre — Méthode photométrique (Méthode de référence)
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de référence pour la détermination de la teneur en
cuivre du lait et des produits laitiers.
La méthode est applicable aux produits suivants:
a) lait, lait écrémé et babeurre,
b) lait concentré non sucré et lait concentré sucré,
c) lait sec entier et écrémé,
d) crème et beurre,
e) matière grasse de beurre,
f) crème glacée,
g) fromage à pâte molle, à pâte dure ou demi-dure de différents âges et fromage fondu, et
h) caséines, caséinates et coprécipités.
La méthode permet de déterminer des teneurs en cuivre de l'ordre de 0,05 mg/kg dans des échantillons de
beurre et de matière grasse d'origine beurrière.
NOTE Voir l'IDF 68 pour des détails sur la matière grasse de beurre.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 648:1977, Verrerie de laboratoire — Pipettes à un trait
ISO 835-1:1981, Verrerie de laboratoire — Pipettes graduées — Partie 1: Spécifications générales
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
teneur en cuivre
fraction massique de substances, déterminée selon la méthode décrite dans la présente Norme internationale
NOTE La teneur en cuivre est exprimée en milligrammes de cuivre par kilogramme.
© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés 1

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ISO 5738:2004(F)
FIL 76:2004(F)
4 Principe
Digestion de la matière organique dans la prise d'essai à l'aide d'un mélange formé d'acide nitrique et d'acide
sulfurique (précédée de I'élimination de la matière grasse dans le cas de la crème, du beurre et de la matière
grasse de beurre). Après neutralisation à l'aide d'ammoniaque, formation d'un complexe cuivrique à I'état de
sel de l'acide diéthyldithiocarbamique. Extraction du sel de cuivre(II) par l'acétate d'amyle. Mesurage par
photométrie de I'absorbance de la solution jaune.
La présence de bismuth et/ou de tellure interfère avec le dosage du cuivre. Voir le contrôle de l'absence et le
mode d'élimination spécifiés en 8.6.
5 Réactifs
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique et exempts de cuivre, à l'exception de la solution étalon de
sulfate de cuivre(II) (5.12).
5.1 Eau, bidistillée, la distillation finale étant réalisée au moyen d'un appareillage exempt de cuivre.
5.2 Éthanol (CH CH OH), à environ 96 % (fraction volumique).
3 2
Distiller l'éthanol, si nécessaire, à l'aide d'un appareil exempt de cuivre.
5.3 Éther diéthylique [(C H ) O].
2 5 2
Distiller l'éther diéthylique, si nécessaire, à l'aide d'un un appareil exempt de cuivre.
5.4 Éther de pétrole, intervalle de distillation entre 40 °C et 60 °C.
Distiller l'éther de pétrole, si nécessaire, à l'aide d'un appareil exempt de cuivre.
5.5 Acide nitrique, concentré, ρ (HNO ) = 1,42 g/ml.
20 3
Distiller à l'aide d'un appareil exempt de cuivre. Rejeter les premiers 50 ml de distillat.
5.6 Acide sulfurique
5.6.1 Acide sulfurique, concentré, ρ (H SO ) = 1,84 g/ml.
20 2 4
5.6.2 Acide sulfurique, dilué, c(H SO ) = 0,5 mol/l.
2 4
5.7 Peroxyde d'hydrogène, solution, ρ (H O ) comprise entre 1,099 g/ml et 1,103 g/ml.
20 2 2
5.8 Solution d'ammoniaque, concentrée, ρ (NH ) = 0,91 g/ml.
20 3
Purifier la solution d'ammoniaque, si nécessaire, par distillation sous vide, à l'aide d'un appareil exempt de
cuivre.
5.9 Solution de citrate d'ammonium-EDTA
Dans une fiole jaugée à un trait d'une capacité de 1 000 ml (6.12), dissoudre dans de l'eau (5.1)
400 g de citrate d'ammonium [(NH ) C H O ] et 100 g de sel disodique dihydraté d'EDTA [acide
4 3 6 5 7
(éthylènedinitrilotétraacétique, sel disodique dihydraté] (Na C H N O ,2H O). Diluer avec de l'eau jusqu'au
2 10 14 2 8 2
trait de 1 000 ml.
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Si nécessaire, purifier cette solution de citrate d'ammonium-EDTA de la manière suivante:
Ajouter trois gouttes de la solution de phénolphthaléine (5.13) à la solution de citrate d'EDTA. Puis ajouter la
quantité nécessaire d'ammoniaque (5.8) jusqu'à ce que la solution prenne une couleur rose pâle. Ajouter
10 mg de diéthyldithiocarbamate de sodium (5.10). Chauffer la solution dans un bain d'eau (6.5) réglé à 60 °C
pendant environ 10 min afin de dissoudre complètement le diéthyldithiocarbamate de sodium. Laisser refroidir
à la température ambiante.
Extraire la solution à cinq reprises dans une ampoule à décanter de 2 l avec 15 ml d'acétate d'amyle (5.11).
Répéter tout le mode opératoire de purification jusqu'à ce que la dernière prise de 15 ml d'acétate d'amyle
reste incolore.
5.10 Solution de diéthyldithiocarbamate de sodium [(C H ) NCSSNa]
2 5 2
Dans une fiole jaugée à un trait de 100 ml (6.12), dissoudre 400 mg de diéthyldithiocarbamate de sodium
trihydraté [(C H ) NCSSNa,3H O] dans 90 ml d'eau (5.1). Diluer jusqu'au trait de 100 ml avec la solution
2 5 2 2
d'ammoniaque (5.8).
Conserver la solution à l'abri de la lumière dans un réfrigérateur à une température comprise entre 0 °C et
8 °C. Renouveler la solution chaque semaine.
5.11 Acétate d'amyle
Sécher 1 l d'acétate d'amyle sur 15 g de sulfate de sodium anhydre durant 24 h. Distiller à l'aide d'un appareil
exempt de cuivre. Recueillir la fraction distillée entre 136 °C et 140 °C.
Au lieu de l'acétate d'amyle, il est possible d'utiliser du xylène distillé à l'aide d'un appareil exempt de cuivre.
5.12 Solutions étaIons de sulfate de cuivre(II)
5.12.1 Solution mère de cuivre
Dans une fiole jaugée à un trait d'une capacité de 1 000 ml (6.12), dissoudre dans de l'eau 196,5 mg de
sulfate du cuivre(Il) pentahydraté (CuSO ,5H O). Ajouter avec précaution 5 ml d'acide sulfurique (5.6.2) et
4 2
mélanger. Diluer avec de l'eau (5.1) jusqu'au trait de 1 000 ml.
5.12.2 Solution de travail de cuivre
Préparer cette solution le jour de l'utilisation.
Utiliser une pipette à un trait (6.11) pour ajouter dans une fiole jaugée à un trait de 500 ml (6.12) 10 ml de la
solution mère de cuivre (5.12.1) à 5 ml d'acide sulfurique (5.6.2) et mélanger. Diluer jusqu'au trait de 500 ml
avec de l'eau.
NOTE 1 ml de la solution de travail de cuivre contient 1 µg de Cu.
5.13 Solution de phénolphthaléine
Dissoudre 1 g de phénolphthaléine dans 100 ml d'éthanol à 90 % (fraction volumique).
5.14 Solution de cyanure de potassium (KCN), à 5 % (fraction massique) de KCN.
AVERTISSEMENT — Prendre toutes précautions de sécurité utiles car le CKN est un poison. Il
incombe à l'utilisateur de la présente Norme internationale d'établir, avant de l'utiliser, des pratiques
appropriées d'hygiène et de sécurité et de déterminer l'applicabilité de restrictions réglementaires
locales.
5.15 Solution d'hydroxyde de sodium, c(NaOH) = 1 mol/l.
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6 Appareillage
6.1 Verrerie
Conserver la verrerie propre dans de l'acide nitrique à 10 % (fraction massique). Avant l'usage, rincer trois fois
avec de l'eau distillée et trois fois avec de l'eau bidistillée. Sécher, si nécessaire, en rinçant successivement
avec de I'éthanol et de l'éther diéthylique.
6.2 Balance analytique, capable de mesurer à 1 mg près, avec une précision de lecture de 0,1 mg.
6.3 Appareil de broyage ou râpe approprié(e).
6.4 Tamis, à ouverture de maille nominale de 0,5 mm, en matériau exempt de cuivre.
6.5 Bains d'eau, permettant de maintenir des températures égales à 20 °C ± 2 °C, à 40 °C ± 1 °C, à
45 °C ± 1 °C, à 60 °C ± 1 °C ou comprises entre 30 °C et 40 °C, comprises entre 40 °C et 60 °C, comprises
entre 60 °C et 65 °C et comprises entre 80 °C et 90 °C.
6.6 Microbrûleurs à gaz.
6.7 Tubes ou ballons de minéralisation (Kjeldahl), munis de bouchons en verre rodé et portant un trait
repère à 50 ml sur la partie inférieure du col.
6.8 Billes en verre, conservées dans de l'acide nitrique à 10 % (fraction massique), comme la verrerie
(6.1).
6.9 Éprouvettes graduées, de 5 ml et 25 ml.
6.10 Pipettes graduées, de 5 ml et 25 ml, graduées en 0,1 ml, conformes à I'ISO 835-1:1981, classe A.
6.11 Pipettes à un trait, permettant de délivrer 1 ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml et 20 ml, conformes à I'ISO 648:1977,
classe A.
6.12 Fioles jaugées à un trait, de 100 ml, 500 ml et 1 000 ml de capacité.
6.13 Spectrophotomètre, munis d'une cuvette d'un trajet optique de 10 mm, permettant de faire des
lectures à 436 nm.
7 Échantillonnage
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, non endommagé ni modifié
lors du transport et de la conservation.
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une
méthode d'échantillonnage recommandée est donnée dans l'ISO 707.
Pendant l'échantillonnage, prendre des précautions pour éviter une contamination par le cuivre. Conserver les
récipients en verre utilisés pour l'échantillonnage dans de l'acide nitrique à 10 % (fraction massique).
Conserver l'échantillon de façon à éviter toute modification ou détérioration de sa composition.
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8 Mode opératoire
8.1 Préparation de I'échantillon pour essai
AVERTISSEMENT — Au
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