ISO/TS 27105:2009

Milk and milk products — Determination of hen's egg white lysozyme by HPLC

ISO/TS 27105|IDF/RM 216:2009 specifies a method for the quantitative determination of hen's egg white lysozyme in milk and milk products. The method is suitable for measuring low levels of hen's egg white lysozyme with a quantification limit of 5 mg/kg.

Lait et produits laitiers — Détermination de lysozyme de blanc d'oeufs par CLHP

L'ISO/TS 27105|FIL/MR 216:2009 spécifie une méthode pour la détermination quantitative de lysozyme de blanc d'œufs dans le lait et les produits laitiers. La méthode est adaptée au mesurage de faibles niveaux de lysozyme de blanc d'œufs avec une limite de quantification de 5 mg/kg.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 26-Nov-2009
• Withdrawal Date: 26-Nov-2009
• ICS: 67.100.01 - Milk and milk products in general
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 24-Mar-2016

Relations

• Revised: ISO 27105:2016 - Milk and cheese — Determination of hen's egg white lysozyme content by high performance liquid chromatography
• Effective Date: 20-Jul-2013

Standards Content (Sample)

ТЕХНИЧЕСКИЕ ISO/TS
УСЛОВИЯ 27105
IDF/RM
216
Первое издание
2009-12-01

Молоко и молочные продукты.
Определение содержания лизоцима
белка куриного яйца методом
высокоэффективной жидкостной
хроматографии (HPLC)
Milk and milk products — Determination of hen’s egg white lysozyme by
HPLC





Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO


Ссылочные номера
ISO/TS 27105:2009(R)
IDF/RM 216:2009(R)
©
ISO и IDF 2009

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(R)
IDF/RM 216:2009(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или вывести на экран, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на загрузку интегрированных шрифтов в компьютер, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Ни Центральный секретариат ISO, ни IDF не несут никакой ответственности в этом отношении.
Adobe торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO и национальными комитетами IDF. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба
проинформировать Центральный секретариат по адресу, приведенному ниже.


ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ


©  ISO и IDF 2009
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO или IDF по соответствующему адресу, указанному ниже.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Опубликовано в Швейцарии

ii © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(R)
IDF/RM 216:2009(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией
национальных организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных
стандартов обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член,
заинтересованный в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть
представленным в этом комитете. Международные правительственные и неправительственные
организации, имеющие связи с ISO, также принимают участие в работах. Что касается стандартизации
в области электротехники, ISO работает в тесном сотрудничестве с Международной
электротехнической комиссией (IEC).
Проекты международных стандартов разрабатываются по правилам, указанным в Директивах ISO/IEC,
Часть 2.
Главная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании
При других обстоятельствах, особенно когда существует срочная потребность рынка в таких
документах, технический комитет может принять решение о публикации других типов нормативного
документа:
— общедоступные технические условия ISO (ISO/PAS) представляют собой соглашение между
техническими экспертами в рабочей группе ISO и принимаются к публикации после одобрения
более чем 50 % членов основного комитета, участвующих в голосовании;
— технические условия ISO (ISO/TS) представляют собой соглашение между членами технического
комитета и принимаются к публикации после одобрения 2/3 членов комитета, участвующих в
голосовании.
ISO/PAS или ISO/TS пересматриваются каждые три года для принятия решения либо о продлении их
действия на следующие три года, либо о переработке для придания им статуса международного
стандарта, либо о прекращении срока действия. Если принимается решение о продлении действия
ISO/PAS или ISO/TS, они снова пересматриваются через следующие три года и тогда должны быть
или преобразованы в международный стандарт или отменены.
Обращается внимание на то, что некоторые элементы данного документа могут быть объектом
патентных прав. ISO не несет ответственности за идентификацию какого-либо одного или всех таких
патентных прав.
ISO/TS 27105⎪IDF/RM 216 были разработаны Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты,,
Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты, и Международной молочной федерацией (IDF).
Они издаются совместно ISO и IDF.
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(R)
IDF/RM 216:2009(R)
Предисловие
Международная молочная федерация (IDF) является некоммерческой организацией,
представляющей мировой молочный сектор. Членами IDF являются национальные комитеты в каждой
стране-члене, а также региональные молочные ассоциации, подписавшие официальное соглашение о
сотрудничестве с IDF. Все члены IDF имеют право быть представленными в постоянных комитетах IDF,
выполняющих техническую работу. IDF сотрудничает с ISO в разработке стандартных методов
анализа и отбора проб молока и молочных продуктов.
Главной задачей постоянных комитетов является разработка международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые рабочими группами и постоянными комитетами рассылаются
национальным комитетам на голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов
требует одобрения не менее 50% национальных комитетов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего международного стандарта могут быть
объектом патентных прав. IDF не несет ответственности за идентификацию какого-либо одного или
всех патентных прав.
ISO/TS 27105⏐IDF/RM 216 были подготовлены Международной молочной федерацией (IDF) и
Техническим комитетом ISO/TC 34 Пищевые продукты, Подкомитетом SC 5 Молоко и молочные
продукты. Этот стандарт публикуется совместно IDF и ISO.
Вся работа была проделана Совместной инициативной группой ISO-IDF по Пищевым добавкам и
витаминам Постоянного комитета по Методам анализа добавок и контаминантов под руководством
главных разработчиков проекта Dr. T. Berger (Швейцария) и Prof. L. Pellegrino (Италия).


iv © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(R)
ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ
IDF/RM 216:2009(R)

Молоко и молочные продукты. Определение содержания
лизоцима белка куриного яйца методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC)
1 Область применения
Настоящие технические условия устанавливают метод для количественного определения лизоцима
белка куриного яйца в молоке и молочных продуктах.
Этот метод является подходящим для измерения низких уровней лизоцима белка куриного яйца с
количественным пределом 5 мг/кг.
2 Термины и определения
Применительно к настоящему документу используются следующие термины и определения.
2.1
содержание лизоцима белка куриного яйца
hen's egg white lysozyme content
массовая доля вещества, определенная по процедуре, установленной в этих технических условиях
ПРИМЕЧАНИЕ Содержание лизоцима выражается в миллиграммах на килограмм.
3 Сущность метода
Казеин и денатурированный сывороточный белок осаждают из молочных продуктов в
изоэлектрической точке при pH 4,3 (сыр и твердые молочные продукты) или при pH 2,2 (молоко и
жидкие молочные продукты). Лизоцим белка куриного яйца, растворимый в кислоте, затем определяют
с использованием обращено-фазовой HPLC и флуоресцентного детектирования. Пик лизоцима может
быть верифицирован с помощью системы LC/MS (жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии) (см.
приложение A).
4 Реактивы и стандартные вещества
Используются реактивы только признанной аналитической чистоты, если нет других указаний, и только
дистиллированная вода или вода эквивалентной чистоты.
4.1 Реактивы
4.1.1 Раствор хлорида натрия, c(NaCl) = 1 моль/л.
Растворяют 58,44 г хлорида натрия в 1 л воды.
4.1.2 Раствор соляной кислоты, c(HCl) = 1 моль/л.
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются 1

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(R)
IDF/RM 216:2009(R)
Добавляют 4,0 мл соляной кислоты с массовой долей 37 % в мерную колбу с одной меткой
вместимостью 50 мл (5.9). Дополняют до метки водой и перемешивают.
4.1.3 Раствор гидроксида натрия, c(NaOH) = 1 моль/л.
Добавляют 2,6 мл соляной кислоты с массовой долей 50 % в мерную колбу с одной меткой
вместимостью 50 мл (5.9). Дополняют до метки водой и перемешивают.
4.1.4 Трифторуксусная кислота (CF COOH).
3
4.1.5 Ацетонитрил (CH CN), класс HPLC .
3
4.1.6 Вода, класс HPLC.
4.2 Лизоцим
1)
Чистый лизоцим белка куриного яйца .
ПРИМЕЧАНИЕ Лизоцим (EC 3.2.1.17, мурамидаза) является ферментом, широко распространенным в природе,
например в белке куриного яйца (приблизительно от 3 г/100 г до 4 г/100 г), слюне и слезной жидкости. Лизоцим
обладает защитной функцией, оказывая литическое (разрушающее) действие на стенку клеток некоторых
бактерий. Лизоцим белка куриного яйца используется при изготовлении сыров, чтобы предотвратить позднее
вспучивание в полутвердых и твердых сырах.
5 Оборудование и материалы
Используется обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее.
5.1 pH-метр.
2)
5.2 Гофрированный фильтр, диаметром 150 мм .
3)
5.3 Мембранный фильтр, размер пор 0,22 мкм .
5.4 Весы, обеспечивающие взвешивание с точностью до 100 мг, считываемость до 10 мг.
5.5 Аналитические весы, обеспечивающие взвешивание с точностью до 0,1 мг, считываемость до 0,01 мг.
5.6 Магнитная мешалка.
5.7 Гомогенизатор, обеспечивающий частоту вращения от 2 500 об/мин до 3 000 об/мин.

1) Sigma L-7651 является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация дается
только для удобства пользователей этих технических условий и не является поддержкой данного продукта со
стороны ISO или IDF.
2) Schleicher & Schuell 595½ является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта
информация дается только для удобства пользователей этих технических условий и не является поддержкой
данного продукта со стороны ISO или IDF
3) Millex-GV PVDF 0,22 мкм является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация
дается только для удобства пользователей этих технических условий и не является поддержкой данного продукта
со стороны ISO или IDF.
2 © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(R)
IDF/RM 216:2009(R)
5.8 HPLC оборудование.
5.8.1 Насосная система с формированием градиента элюирования, обеспечивающая скорость
течения 1,0 мл/мин.
5.8.2 Ручной или автоматический инжектор, обеспечивающий объемы инжектирования 50 мк
...

TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 27105
IDF/RM
216
First edition
2009-12-01

Milk and milk products — Determination
of hen's egg white lysozyme by HPLC
Lait et produits laitiers — Détermination de lysozyme de blanc d'œufs
par CLHP



Reference numbers
ISO/TS 27105:2009(E)
IDF/RM 216:2009(E)
©
ISO and IDF 2009

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(E)
IDF/RM 216:2009(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. Neither the ISO Central
Secretariat nor the IDF accepts any liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies
and IDF national committees. In the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the ISO Central Secretariat at the
address given below.


COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT


©  ISO and IDF 2009
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO or IDF at the respective
address below.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Published in Switzerland

ii © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(E)
IDF/RM 216:2009(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
In other circumstances, particularly when there is an urgent market requirement for such documents, a
technical committee may decide to publish other types of document:
— an ISO Publicly Available Specification (ISO/PAS) represents an agreement between technical experts in
an ISO working group and is accepted for publication if it is approved by more than 50 % of the members
of the parent committee casting a vote;
— an ISO Technical Specification (ISO/TS) represents an agreement between the members of a technical
committee and is accepted for publication if it is approved by 2/3 of the members of the committee casting
a vote.
An ISO/PAS or ISO/TS is reviewed after three years in order to decide whether it will be confirmed for a
further three years, revised to become an International Standard, or withdrawn. If the ISO/PAS or ISO/TS is
confirmed, it is reviewed again after a further three years, at which time it must either be transformed into an
International Standard or be withdrawn.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO/TS 27105⎪IDF/RM 216 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee
SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO
and IDF.
© ISO and IDF 2009 – All rights reserved iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(E)
IDF/RM 216:2009(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit organization representing the dairy sector worldwide.
IDF membership comprises National Committees in every member country as well as regional dairy
associations having signed a formal agreement on cooperation with IDF. All members of IDF have the right to
be represented on the IDF Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the National Committees for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of the IDF National Committees
casting a vote.
In other circumstances, particularly when there is an urgent market requirement for such documents, a
Standing Committee may decide to publish an other type of normative document which is called by IDF:
Reviewed method. Such a method represents an agreement between the members of a Standing Committee
and is accepted for publication if it is approved by at least 50 % of the committee members casting a vote.
A Reviewed method is equal to an ISO/PAS or ISO/TS and will, therefore, also be published jointly under ISO
conditions.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO/TS 27105⎪IDF/RM 216 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical
Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published
jointly by IDF and ISO.
All work was carried out by the Joint ISO-IDF Action Team on Food additives and vitamins of the Standing
Committee on Analytical methods for additives and contaminants under the aegis of its project leaders,
Dr. T. Berger (CH) and Prof. L. Pellegrino (IT).

iv © ISO and IDF 2009 – All rights reserved

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(E)
TECHNICAL SPECIFICATION
IDF/RM 216:2009(E)

Milk and milk products — Determination of hen's egg white
lysozyme by HPLC
1 Scope
This Technical Specification specifies a method for the quantitative determination of hen's egg white lysozyme
in milk and milk products.
The method is suitable for measuring low levels of hen's egg white lysozyme with a quantification limit of
5 mg/kg.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
hen's egg white lysozyme content
mass fraction of substance determined by the procedure specified in this Technical Specification
NOTE The lysozyme content is expressed in milligrams per kilogram.
3 Principle
Casein and denatured whey proteins from milk and milk products are precipitated isoelectrically at pH 4,3
(cheese and solid milk products) or at pH 2,2 (milk and liquid milk products). Acid-soluble hen's egg white
lysozyme is then determined by reversed-phase HPLC and fluorescence detection. The lysozyme peak can
be verified by LC/MS (see annex A).
4 Reagents and reference substances
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and only distilled water or water
of equivalent purity.
4.1 Reagents
4.1.1 Sodium chloride solution, c(NaCl) = 1 mol/l.
Dissolve 58,44 g of sodium chloride in 1 l water.
4.1.2 Hydrochloric acid solution, c(HCl) = 1 mol/l.
Аdd 4,0 ml of hydrochloric acid with mass fraction 37 % to a 50 ml one-mark volumetric flask (5.9). Make up to
the mark with water and mix.
© ISO and IDF 2009 – All rights reserved 1

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(E)
IDF/RM 216:2009(E)
4.1.3 Sodium hydroxide solution, c(NaOH) = 1 mol/l.
Add 2,6 ml of sodium hydroxide with a mass fraction of 50 % to a 50 ml one-mark volumetric flask (5.9). Make
up to the mark with water and mix.
4.1.4 Trifluoroacetic acid (CF COOH).
3
CN), HPLC grade.
4.1.5 Acetonitrile (CH
3
4.1.6 Water, HPLC grade.
4.2 Lysozyme
1)
Pure hen's egg white lysozyme .
NOTE Lysozyme (EC 3.2.1.17, muramidase) is an enzyme widely dispersed in nature, e.g. in hen's egg white
(approximately 3 g/100 g to 4 g/100 g), saliva, and tear liquid. Lysozyme has a preservative effect because of the lytic
activity on the cell wall of some bacteria. Hen's egg white lysozyme is used in cheesemaking to prevent late blowing of
semi-hard and hard cheeses.
5 Apparatus and materials
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
5.1 pH-meter.
2)
5.2 Fluted filter, of diameter 150 mm .
3)
5.3 Membrane filter, of pore size 0,22 µm .
5.4 Balance, capable of weighing to the nearest 100 mg, with a readability of 10 mg.
5.5 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,1 mg, with a readability of 0,01 mg.
5.6 Magnetic stirrer.
5.7 Homogenizer, capable of a rotational frequency of 2 500 r/min to 3 000 r/min.
5.8 HPLC equipment.
5.8.1 Elution gradient pumping system, capable of delivering a flow rate of 1,0 ml/min.
5.8.2 Manual or automatic injector, capable of injecting volumes of 50 µl.
5.8.3 Column heater, capable of maintaining a column temperature of 45 °C ± 2 °C.

1) Sigma L-7651 is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the
convenience of users of this Technical Specification and does not constitute an endorsement by ISO or IDF of this product.
2) Schleicher & Schuell 595½ is an example of a suitable product available commercially. This information is given for
the convenience of u
...

SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 27105
FIL/MR
216
Première édition
2009-12-01


Lait et produits laitiers — Détermination
de lysozyme de blanc d'œufs par CLHP
Milk and milk products — Determination of hen's egg white lysozyme by
HPLC



Numéros de référence
ISO/TS 27105:2009(F)
FIL/MR 216:2009(F)
©
ISO et FIL 2009

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(F)
FIL/MR 216:2009(F)
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO et la FIL
déclinent toute responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO et les comités nationaux de la FIL. Dans le cas peu probable où
surviendrait un problème d'utilisation, veuillez en informer le Secrétariat central de l'ISO à l'adresse donnée ci-dessous.


DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT


©  ISO et FIL 2009
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
soit de l'ISO soit de la FIL, à l'une ou l'autre des adresses ci-après.
ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Bruxelles
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Publié en Suisse

ii © ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(F)
FIL/MR 216:2009(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
Dans d'autres circonstances, en particulier lorsqu'il existe une demande urgente du marché, un comité
technique peut décider de publier d'autres types de documents:
— une Spécification publiquement disponible ISO (ISO/PAS) représente un accord entre les experts dans
un groupe de travail ISO et est acceptée pour publication si elle est approuvée par plus de 50 % des
membres votants du comité dont relève le groupe de travail;
— une Spécification technique ISO (ISO/TS) représente un accord entre les membres d'un comité technique
et est acceptée pour publication si elle est approuvée par 2/3 des membres votants du comité.
Une ISO/PAS ou ISO/TS fait l'objet d'un examen après trois ans afin de décider si elle est confirmée pour trois
nouvelles années, révisée pour devenir une Norme internationale, ou annulée. Lorsqu'une ISO/PAS ou
ISO/TS a été confirmée, elle fait l'objet d'un nouvel examen après trois ans qui décidera soit de sa
transformation en Norme internationale soit de son annulation.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO/TS 27105⎪FIL/MR 216 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération Internationale de Laiterie (FIL). Elle est publiée
conjointement par l'ISO et la FIL.
© ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(F)
FIL/MR 216:2009(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération Internationale de Laiterie) est une organisation sans but lucratif représentant le secteur
laitier mondial. Les membres de la FIL se composent des Comités Nationaux dans chaque pays membre et
des associations laitières régionales avec lesquelles la FIL a signé des accords de coopération. Tout membre
de la FIL a le droit de faire partie des Comités permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux
techniques. La FIL collabore avec l'ISO pour l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et
d'échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
La tâche principale des comités techniques est de préparer les Normes internationales. Les Normes
internationales provisoires adoptées par les groupes de travail et le Comités Permanents sont circulés aux
Comités nationaux pour approbation. La publication en tant que Norme internationale requiert l'approbation
d'au moins 50 % des Comité Nationaux de la FIL participant au vote.
Dans d'autres circonstances, particulièrement quand une demande urgente du marché survient pour de tels
documents, un Comité permanent peut décider de publier un autre type de document à valeur de norme que
la FIL appelle Méthode révisée. Une telle méthode illustre un consensus entre les membres d'un Comité
permanent et est acceptée pour publication si elle est approuvée par au moins 50 % des Comités Nationaux
émettant un vote. Une Méthode révisée est équivalente à une ISO/PAS ou à une ISO/TS et sera donc aussi
publiée conjointement selon les conditions ISO.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO/TS 27105⎪FIL/MR 216 a été élaborée par la Fédération Internationale de Laiterie (FIL) et le comité
technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publiée
conjointement par la FIL et l'ISO.
L'ensemble des travaux a été confié à l'Équipe d'Action mixte ISO-FIL, Additifs alimentaires et vitamines, du
Comité permanent chargé des Méthodes analytiques pour additifs et contaminants, sous la conduite de leurs
chefs de projet, Dr. T. Berger (CH) et Prof. L. Pellegrino (IT).

iv © ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(F)
SPÉCIFICATION TECHNIQUE
FIL/MR 216:2009(F)

Lait et produits laitiers — Détermination de lysozyme de blanc
d'œufs par CLHP
1 Domaine d'application
La présente Spécification technique spécifie une méthode pour la détermination quantitative de lysozyme de
blanc d'œufs dans le lait et les produits laitiers.
La méthode est adaptée au mesurage de faibles niveaux de lysozyme de blanc d'œufs avec une limite de
quantification de 5 mg/kg.
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
2.1
teneur en lysozyme de blanc d'œufs
fraction massique de substance, déterminée selon le mode opératoire spécifié dans la présente Spécification
technique
NOTE La teneur en lysozyme est exprimée en milligrammes par kilogramme.
3 Principe
Précipitation isoélectrique de la caséine et des protéines de lactosérum dénaturé provenant du lait et des
produits laitiers à pH 4,3 (fromage et produits laitiers solides) ou à pH 2,2 (lait et produits laitiers liquides), puis
détermination du lysozyme de blanc d'œufs soluble dans l'acide par chromatographie liquide haute
performance (CLHP) en phase inverse et détection par fluorescence. Le pic du lysozyme peut être vérifié par
chromatographie liquide/spectrométrie de masse (LC/MS) (voir Annexe A).
4 Réactifs et substances de référence
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue, et uniquement de
l'eau distillée ou de l'eau de pureté équivalente.
4.1 Réactifs
4.1.1 Solution de chlorure de sodium, c(NaCl) = 1 mol/l.
Dissoudre 58,44 g de chlorure de sodium dans 1 l d'eau.
4.1.2 Solution d'acide chlorhydrique c(HCl) = 1 mol/l.
Verser 4,0 ml d'acide chlorhydrique de fraction massique 37 % dans une fiole jaugée à un trait de 50 ml (5.9).
Compléter au trait avec de l'eau et mélanger.
© ISO et FIL 2009 – Tous droits réservés 1

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO/TS 27105:2009(F)
FIL/MR 216:2009(F)
4.1.3 Solution d'hydroxyde de sodium, c(NaOH) = 1 mol/l.
Verser 2,6 ml d'hydroxyde de sodium de fraction massique 50 % dans une fiole jaugée à un trait de
50 ml (5.9). Compléter au trait avec de l'eau et mélanger.
4.1.4 Acide trifluoroacétique (CF COOH).
3
4.1.5 Acétonitrile, (CH CN), qualité CLHP.
3
4.1.6 Eau, qualité CLHP.
4.2 Lysozyme
1)
Lysozyme de blanc d'œufs pur .
NOTE Le lysozyme (EC 3.2.1.17, muramidase) est un enzyme qui est très répandu dans la nature, par exemple
dans le blanc d'œufs (environ 3 g/100 g à 4 g/100 g), la salive et dans les larmes. Le lysozyme possède un effet
conservateur en raison de l'activité lytique sur la paroi de la cellule de certaines bactéries. Le lysozyme de blanc d'œufs
est utilisé dans la fabrication du fromage afin d'empêcher le gonflement tardif des fromages à pâte demi-dure et dure.
5 Appareillage et matériel
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 pH-mètre.
2)
5.2 Filtre cylindrique, de diamètre 150 mm .
3)
5.3 Membrane filtrante, de taille de pore 0,22 µm .
5.4 Balance, capable de peser à 100 mg près et d'une résolution de 10 mg.
5.5 Balance analytique, capable de peser à 0,1 mg près et d'une résolution de 0,01 mg.
5.6 Agitateur magnétique.
5.7 Homogénéisateur, capable de tourner à une fréquence de rotation de 2 500 r/min à 3 000 r/min.
5.8 Matériel CLHP.
5.8.1 Système de pompage pour la technique avec gradient d'élution, capable de fournir un débit de
1,0 ml/min.
5.8.2 Injecteur manuel ou automatique, capable d'injecter des volumes de 50 µl.

1) SIGMA L-7651 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à
l'intention des utilisateurs de la présente Spécification technique et ne signifie nullement que l'ISO ou la FIL approuvent ou
recommandent l'emploi exclusif de ce produit.
2) Schleicher & Schuell 595½ est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est
donnée à l'intention des utilisateurs de la présente Spécification technique et ne signifie nullement que l'ISO ou la FIL
approuvent ou recommandent l'emploi exclusif de ce produit.
3) Millex-GV PVDF 0,22 µm est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée
...