SIST ISO 14371:2013
Water quality - Determination of fresh water sediment toxicity to Heterocypris incongruens (Crustacea, Ostracoda)
Water quality - Determination of fresh water sediment toxicity to Heterocypris incongruens (Crustacea, Ostracoda)
This International Standard specifies a method for the determination of lethal as well as sublethal effects of contaminated sediments on the ostracod crustacean Heterocypris incongruens after 6 d exposure.
The method is applicable not only to fresh water sediments, but also by extension to solid wastes and soils after addition of (uncontaminated) water.
The method can also be applied to chemicals or preparations which are spiked into a reference sediment.
This International Standard is not applicable to the testing of sediments from the estuarine or marine environment.
Qualité de l'eau - Détermination de la toxicité des sédiments d'eau douce envers Heterocypris incongruens (Crustacea, Ostracoda)
La présente Norme internationale spécifie une méthode de détermination des effets létaux et sublétaux de sédiments contaminés sur le crustacé ostracode Heterocypris incongruens après 6 jours d'exposition.
La méthode est applicable non seulement aux sédiments d'eau douce mais également, par extension, aux déchets solides et aux sols après ajout d'eau (non contaminée).
La méthode peut également être appliquée aux produits chimiques ou aux préparations qui sont introduits dans un sédiment de référence.
La présente Norme internationale n'est pas applicable aux essais sur les sédiments estuariens ou marins.
Kakovost vode - Določevanje strupenosti sedimenta celinskih vod s Heterocypris incongruens (Crustacea, Ostracoda)
Ta mednarodni standard določa metodo za določanje letalnih in subletalnih vplivov onesnaženih sedimentov na rake dvoklopnike Heterocypris incongruens po 6 dneh izpostavljenosti. Ta metoda se uporablja za sladkovodne sedimente ter tudi trdne odpadke in prsti, ki jim je bila dodana (neonesnažena) voda. Metodo je mogoče uporabiti tudi za kemikalije ali preparate, primešane referenčnemu sedimentu. Ta mednarodni standard ne velja za preskušanje sedimentov v rečnih ustjih ali morju.
General Information
Standards Content (Sample)
SLOVENSKI STANDARD
01-september-2013
.DNRYRVWYRGH'RORþHYDQMHVWUXSHQRVWLVHGLPHQWDFHOLQVNLKYRGV+HWHURF\SULV
LQFRQJUXHQV &UXVWDFHD2VWUDFRGD
Water quality - Determination of fresh water sediment toxicity to Heterocypris
incongruens (Crustacea, Ostracoda)
Qualité de l'eau - Détermination de la toxicité des sédiments d'eau douce envers
Heterocypris incongruens (Crustacea, Ostracoda)
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 14371:2012
ICS:
13.060.70 Preiskava bioloških lastnosti Examination of biological
vode properties of water
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 14371
First edition
2012-03-01
Water quality — Determination of fresh
water sediment toxicity to Heterocypris
incongruens (Crustacea, Ostracoda)
Qualité de l’eau — Détermination de la toxicité des sédiments d’eau
douce envers Heterocypris incongruens (Crustacea, Ostracoda)
Reference number
©
ISO 2012
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or ISO’s
member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2012 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction . v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Test environment . 2
6 Reagents, test organisms and media . 2
7 Apparatus and material . 3
8 Special precautions for sampling, transportation, storage and treatment of the
sediment samples . 4
9 Procedure . 4
9.1 Hatching of the cysts . 4
9.2 Pre-feeding of the ostracod neonates . 4
9.3 Length measurement of the neonates . 4
9.4 Addition of sediment and algal food to the test container . 5
9.5 Transfer of the ostracod neonates into the test container . 5
9.6 Incubation of the test system . 6
9.7 Measurements . 6
10 Reference test . 8
11 Tests on pure chemicals or preparations .10
12 Validity criteria .10
13 Test report .10
Annex A (informative) Culturing of Heterocypris incongruens for cyst production . 11
Annex B (informative) Precision data.13
Bibliography .15
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International
Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 14371 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 5,
Biological methods.
iv © ISO 2012 – All rights reserved
Introduction
The evaluation of harmful effects on water quality has for several years involved the performance of biological
tests. Historically, toxicity tests have mainly focused on the impact of pollutants present in the water column of
aquatic ecosystems, without considering the hazard of toxicants present and accumulating in the sediments.
“Direct contact” tests in which the test organisms are exposed to the whole sediment have been gradually
developed with endobenthic species, such as chironomid larvae [Chironomus riparius or Chironomus dilutus
(formerly C. tentans)] or epibenthic amphipod crustaceans (Hyalella azteca).
The test specified in this International Standard is a direct contact test for determination of the percentage
mortality and/or growth inhibition on the fresh water ostracod Heterocypris incongruens (Ramdohr, 1808) after
6 d exposure to a whole sediment (see References [1], [2]).
H. incongruens is a cosmopolitan ostracod species, which has to date already been used extensively for toxicity
testing not only of whole sediments, but also by extension on sludges and soils (see References [3]–[21]).
The direct contact test with H. incongruens has a sensitivity which is quite similar to that of the amphipod
crustacean Hyalella azteca and the midge larva Chironomus riparius (see References [22]–[25]).
The assays are performed with neonates hatched from dormant eggs (cysts), which bypasses the need for
culturing or maintaining live stock cultures of test organisms.
H. incongruens neonates (150 µm to 200 µm) are substantially smaller than Hyalella azteca and Chironomus
riparius, and the assays can be performed in much smaller test containers, hence require much less bench
space and incubator space.
The effects are evaluated after a shorter exposure time (6 d) than in the assays with the amphipod crustacean
(10 d to 28 d) and midge larvae species (10 d to 28 d).
INTERNATIONAL STANDARD ISO 14371:2012(E)
Water quality — Determination of fresh water sediment toxicity
to Heterocypris incongruens (Crustacea, Ostracoda)
WARNING — Persons using this International Standard should be familiar with normal laboratory
practice. This standard does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with
its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices and to
ensure compliance with any national regulatory conditions.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted in accordance with this International
Standard be carried out by suitably qualified staff.
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of lethal as well as sublethal effects of
contaminated sediments on the ostracod crustacean Heterocypris incongruens after 6 d exposure.
The method is applicable not only to fresh water sediments, but also by extension to solid wastes and soils after
addition of (uncontaminated) water.
The method can also be applied to chemicals or preparations which are spiked into a reference sediment.
This International Standard is not applicable to the testing of sediments from the estuarine or marine environment.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are indispensable
for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition
of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 5667-15:2009, Water quality — Sampling — Part 15: Guidance on the preservation and handling of sludge
and sediment samples
ISO 5667-16, Water quality — Sampling — Part 16: Guidance on biotesting of samples
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
neonate
newly hatched individual
3.2
pre-feeding
feeding of the neonates (3.1) with a small amount of dried algae (Spirulina) prior to the test
4 Principle
Freshly hatched Heterocypris incongruens larvae are exposed to the sediment sample under analysis and the
percentage mortality of the test organisms is determined after 6 d exposure.
If the percentage mortality is low (e.g. <30 %), the growth inhibition of the organisms in the sediment sample is
determined in comparison to the control sediment, as a sublethal effect criterion.
5 Test environment
The test shall be carried out in the dark, in a temperature-controlled room or incubator at (25 ± 1) °C in the
test containers.
Maintain the atmosphere free from toxic dusts or vapours. The use of control solutions is a double check that
the test is performed in an atmosphere free from toxic dusts and vapours.
6 Reagents, test organisms and media
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified.
6.1 Test organisms. The test organisms are neonates of the fresh water ostracod Heterocypris incongruens
which are hatched from dormant eggs (cysts) of this crustacean.
Cysts of H. incongruens are obtained from laboratory cultures, as described in Annex A, or can be purchased
1)
from a specialized company .
6.2 Pure water, having a conductivity below 10 µS/cm.
6.3 Test medium, prepared by dissolving the following mineral substances in 1 l of pure water (6.2):
NaHCO 96 mg
CaSO•2H O 60 mg
4 2
MgSO 60 mg
KCl 4 mg
This test medium corresponds to a synthetic water of moderate hardness, i.e. containing CaCO at concentrations
of 80 mg/l to 100 mg/l (see Reference [26]). Thus prepared, the medium has a pH of 7,6 ± 0,3.
The test medium can be used for two weeks when stored in a refrigerator (4 °C to 7 °C) in the dark.
Aerate the test medium until the dissolved oxygen concentration has reached the air saturation value and until
the pH has stabilized. If necessary, adjust the pH to 7,6 ± 0,3 using a sodium hydroxide or hydrochloric acid
solution. The concentration of the acid or base required shall be selected so that the volume to be admixed is
as small as possible. Bring the temperature of the test medium up to (25 ± 1) °C prior to use.
6.4 Algal food.
6.4.1 Spirulina suspension. A suspension of powder of the blue-green alga Spirulina platensis prepared by mixing
150 mg dry mass Spirulina in 10 ml pure water (6.2). Spirulina powder is available commercially in health stores.
6.4.2 Green algae. A 25 ml suspension of green algae (e.g. Scenedesmus spp.) at a concentration of around
1,5 × 10 cells/ml, prepared with test medium (6.3).
The algae can also be encapsulated in algal beads, which can be stored for long periods of time in a refrigerator,
[31]
and “de-immobilized” at the time of use (see ISO 8692:2012 , Annexes B and C).
1) MicroBioTests Inc., Mariakerke (Gent), Belgium, is an example of a supplier able to provide suitable Heterocypris
incongruens cysts. This information is given for the convenience of the users of this document and does not constitute
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 14371
First edition
2012-03-01
Water quality — Determination of fresh
water sediment toxicity to Heterocypris
incongruens (Crustacea, Ostracoda)
Qualité de l’eau — Détermination de la toxicité des sédiments d’eau
douce envers Heterocypris incongruens (Crustacea, Ostracoda)
Reference number
©
ISO 2012
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or ISO’s
member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2012 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction . v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Test environment . 2
6 Reagents, test organisms and media . 2
7 Apparatus and material . 3
8 Special precautions for sampling, transportation, storage and treatment of the
sediment samples . 4
9 Procedure . 4
9.1 Hatching of the cysts . 4
9.2 Pre-feeding of the ostracod neonates . 4
9.3 Length measurement of the neonates . 4
9.4 Addition of sediment and algal food to the test container . 5
9.5 Transfer of the ostracod neonates into the test container . 5
9.6 Incubation of the test system . 6
9.7 Measurements . 6
10 Reference test . 8
11 Tests on pure chemicals or preparations .10
12 Validity criteria .10
13 Test report .10
Annex A (informative) Culturing of Heterocypris incongruens for cyst production . 11
Annex B (informative) Precision data.13
Bibliography .15
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International
Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 14371 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 5,
Biological methods.
iv © ISO 2012 – All rights reserved
Introduction
The evaluation of harmful effects on water quality has for several years involved the performance of biological
tests. Historically, toxicity tests have mainly focused on the impact of pollutants present in the water column of
aquatic ecosystems, without considering the hazard of toxicants present and accumulating in the sediments.
“Direct contact” tests in which the test organisms are exposed to the whole sediment have been gradually
developed with endobenthic species, such as chironomid larvae [Chironomus riparius or Chironomus dilutus
(formerly C. tentans)] or epibenthic amphipod crustaceans (Hyalella azteca).
The test specified in this International Standard is a direct contact test for determination of the percentage
mortality and/or growth inhibition on the fresh water ostracod Heterocypris incongruens (Ramdohr, 1808) after
6 d exposure to a whole sediment (see References [1], [2]).
H. incongruens is a cosmopolitan ostracod species, which has to date already been used extensively for toxicity
testing not only of whole sediments, but also by extension on sludges and soils (see References [3]–[21]).
The direct contact test with H. incongruens has a sensitivity which is quite similar to that of the amphipod
crustacean Hyalella azteca and the midge larva Chironomus riparius (see References [22]–[25]).
The assays are performed with neonates hatched from dormant eggs (cysts), which bypasses the need for
culturing or maintaining live stock cultures of test organisms.
H. incongruens neonates (150 µm to 200 µm) are substantially smaller than Hyalella azteca and Chironomus
riparius, and the assays can be performed in much smaller test containers, hence require much less bench
space and incubator space.
The effects are evaluated after a shorter exposure time (6 d) than in the assays with the amphipod crustacean
(10 d to 28 d) and midge larvae species (10 d to 28 d).
INTERNATIONAL STANDARD ISO 14371:2012(E)
Water quality — Determination of fresh water sediment toxicity
to Heterocypris incongruens (Crustacea, Ostracoda)
WARNING — Persons using this International Standard should be familiar with normal laboratory
practice. This standard does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with
its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices and to
ensure compliance with any national regulatory conditions.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted in accordance with this International
Standard be carried out by suitably qualified staff.
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of lethal as well as sublethal effects of
contaminated sediments on the ostracod crustacean Heterocypris incongruens after 6 d exposure.
The method is applicable not only to fresh water sediments, but also by extension to solid wastes and soils after
addition of (uncontaminated) water.
The method can also be applied to chemicals or preparations which are spiked into a reference sediment.
This International Standard is not applicable to the testing of sediments from the estuarine or marine environment.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are indispensable
for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition
of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 5667-15:2009, Water quality — Sampling — Part 15: Guidance on the preservation and handling of sludge
and sediment samples
ISO 5667-16, Water quality — Sampling — Part 16: Guidance on biotesting of samples
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
neonate
newly hatched individual
3.2
pre-feeding
feeding of the neonates (3.1) with a small amount of dried algae (Spirulina) prior to the test
4 Principle
Freshly hatched Heterocypris incongruens larvae are exposed to the sediment sample under analysis and the
percentage mortality of the test organisms is determined after 6 d exposure.
If the percentage mortality is low (e.g. <30 %), the growth inhibition of the organisms in the sediment sample is
determined in comparison to the control sediment, as a sublethal effect criterion.
5 Test environment
The test shall be carried out in the dark, in a temperature-controlled room or incubator at (25 ± 1) °C in the
test containers.
Maintain the atmosphere free from toxic dusts or vapours. The use of control solutions is a double check that
the test is performed in an atmosphere free from toxic dusts and vapours.
6 Reagents, test organisms and media
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified.
6.1 Test organisms. The test organisms are neonates of the fresh water ostracod Heterocypris incongruens
which are hatched from dormant eggs (cysts) of this crustacean.
Cysts of H. incongruens are obtained from laboratory cultures, as described in Annex A, or can be purchased
1)
from a specialized company .
6.2 Pure water, having a conductivity below 10 µS/cm.
6.3 Test medium, prepared by dissolving the following mineral substances in 1 l of pure water (6.2):
NaHCO 96 mg
CaSO•2H O 60 mg
4 2
MgSO 60 mg
KCl 4 mg
This test medium corresponds to a synthetic water of moderate hardness, i.e. containing CaCO at concentrations
of 80 mg/l to 100 mg/l (see Reference [26]). Thus prepared, the medium has a pH of 7,6 ± 0,3.
The test medium can be used for two weeks when stored in a refrigerator (4 °C to 7 °C) in the dark.
Aerate the test medium until the dissolved oxygen concentration has reached the air saturation value and until
the pH has stabilized. If necessary, adjust the pH to 7,6 ± 0,3 using a sodium hydroxide or hydrochloric acid
solution. The concentration of the acid or base required shall be selected so that the volume to be admixed is
as small as possible. Bring the temperature of the test medium up to (25 ± 1) °C prior to use.
6.4 Algal food.
6.4.1 Spirulina suspension. A suspension of powder of the blue-green alga Spirulina platensis prepared by mixing
150 mg dry mass Spirulina in 10 ml pure water (6.2). Spirulina powder is available commercially in health stores.
6.4.2 Green algae. A 25 ml suspension of green algae (e.g. Scenedesmus spp.) at a concentration of around
1,5 × 10 cells/ml, prepared with test medium (6.3).
The algae can also be encapsulated in algal beads, which can be stored for long periods of time in a refrigerator,
[31]
and “de-immobilized” at the time of use (see ISO 8692:2012 , Annexes B and C).
1) MicroBioTests Inc., Mariakerke (Gent), Belgium, is an example of a supplier able to provide suitable Heterocypris
incongruens cysts. This information is given for the convenience of the users of this document and does not constitute an
endorsement by ISO of this supplier.
2 © ISO 2012 – All rights reserved
6.5 Lugol solution, to immobilize and fix the test organisms at the end of the test.
Lugol solution is prepared by mixing 5 g iodine (I ) and 10 g potassium iodide (KI) with 85 ml pure water (6.2).
6.6 Control sediment. Commercial (not toxic and not calcareous) river sand or marine sand, which is water
2)
washed and sieved to eliminate dirt and debris, and air-dried is a suitable control sediment provided it is of the
category “medium size” sand, with a granulometry 0/2 (i.e. a particle size range between 0 mm and 2 mm).
At the time of testing, the control sediment shall first be “water saturated” as follows.
Fill a small glass beaker with control sediment and pour test medium (6.3) on it until the sediment is completely
wet. During this operation, the sediment shall be stirred with a spatula to ensure complete water saturation.
Supernatant test medium shall be decanted.
6.7 Reference substance. Copp
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 14371
Première édition
2012-03-01
Qualité de l’eau — Détermination de
la toxicité des sédiments d’eau douce
envers Heterocypris incongruens
(Crustacea, Ostracoda)
Water quality — Determination of fresh water sediment toxicity to
Heterocypris incongruens (Crustacea, Ostracoda)
Numéro de référence
©
ISO 2012
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quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit
de l’ISO à l’adresse ci-après ou du comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2012 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction . v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Environnement d’essai . 2
6 Réactifs, organismes d’essai et milieux d’essai . 2
7 Appareillage et matériel . 3
8 Précautions spéciales relatives à l’échantillonnage, au transport, au stockage et au traitement
des échantillons de sédiment . 4
9 Mode opératoire . 4
9.1 Éclosion des cystes . 4
9.2 Première alimentation des ostracodes nouveau-nés . 4
9.3 Mesurage de la longueur des nouveau-nés . 5
9.4 Ajout de sédiment et de nourriture algale dans le récipient d’essai . 5
9.5 Transfert des ostracodes nouveau-nés dans les récipients d’essai . 6
9.6 Incubation du système d’essai . 6
9.7 Mesurages . 6
10 Essai de référence . 9
11 Essais sur des produits chimiques purs ou des préparations .10
12 Critères de validité .10
13 Rapport d’essai . 11
Annexe A (informative) Culture d’Heterocypris incongruens pour la production de cystes .12
Annexe B (informative) Données de fidélité .14
Bibliographie .16
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d’élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de droits
de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir
identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L’ISO 14371 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l’eau, sous-comité SC 5,
Méthodes biologiques.
iv © ISO 2012 – Tous droits réservés
Introduction
Pendant plusieurs années, l’évaluation des effets néfastes sur la qualité de l’eau dépendait de la performance
des essais biologiques. D’un point de vue historique, les essais de toxicité visaient principalement à évaluer
l’impact des polluants présents dans la colonne d’eau des écosystèmes aquatiques, sans tenir compte du
danger que représentent les substances toxiques présentes et qui s’accumulent dans les sédiments.
Des «essais par contact direct», dans lesquels les organismes d’essai sont exposés aux sédiments bruts,
ont été progressivement développés avec des espèces endobenthiques, notamment les larves de chironome
[Chironomus riparius ou Chironomus dilutus (anciennement C. tentans)] ou les crustacés amphipodes
épibenthiques (Hyalella azteca).
L’essai spécifié dans la présente Norme internationale est un essai par contact direct permettant de déterminer
le pourcentage de mortalité et/ou d’inhibition de la croissance sur l’ostracode d’eau douce Heterocypris
incongruens (Ramdohr, 1808) après 6 jours d’exposition à des sédiments bruts (voir Références [1], [2]).
H. incongruens est une espèce d’ostracode ubiquiste qui est, à ce jour, couramment utilisée non seulement
pour les essais de toxicité des sédiments bruts, mais également, par extension, des boues et des sols (voir
Références [3]-[21]).
La sensibilité de l’essai par contact direct avec H. incongruens est assez similaire à celle des crustacés
amphipodes Hyalella azteca et à celle des larves de chironome Chironomus riparius (voir Références [22]-[25]).
Les essais sont effectués avec des nouveau-nés obtenus par éclosion d’œufs quiescents (cystes), ce qui
permet de ne pas avoir besoin de cultiver ou de conserver des souches d’organismes d’essai.
Les nouveau-nés d’H. incongruens (150 µm à 200 µm) étant significativement de plus petite taille que ceux
d’Hyalella azteca et de Chironomus riparius, les essais peuvent être effectués dans des récipients d’essai
beaucoup plus petits et nécessitent moins de place sur la paillasse et dans l’incubateur.
Les effets sont évalués après une période d’exposition (6 jours) plus courte que celle des essais utilisant les
crustacés amphipodes (10 jours à 28 jours) et les larves de chironome (10 jours à 28 jours).
NORME INTERNATIONALE ISO 14371:2012(F)
Qualité de l’eau — Détermination de la toxicité des
sédiments d’eau douce envers Heterocypris incongruens
(Crustacea, Ostracoda)
AVERTISSEMENT — Il convient que l’utilisateur de la présente Norme internationale connaisse bien
les pratiques courantes de laboratoire. La présente Norme internationale n’a pas pour but de traiter
tous les problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l’utilisateur
d’établir des pratiques appropriées en matière d’hygiène et de sécurité, et de s’assurer de la conformité
à la réglementation nationale en vigueur.
IMPORTANT — Il est absolument essentiel que les essais réalisés conformément à la présente Norme
internationale soient exécutés par un personnel ayant reçu une formation adéquate.
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de détermination des effets létaux et sublétaux de
sédiments contaminés sur le crustacé ostracode Heterocypris incongruens après 6 jours d’exposition.
La méthode est applicable non seulement aux sédiments d’eau douce mais également, par extension, aux
déchets solides et aux sols après ajout d’eau (non contaminée).
La méthode peut également être appliquée aux produits chimiques ou aux préparations qui sont introduits
dans un sédiment de référence.
La présente Norme internationale n’est pas applicable aux essais sur les sédiments estuariens ou marins.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l’application du présent document. Pour les
références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s’applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 5667-15:2009, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 15: Lignes directrices pour la conservation et
le traitement des échantillons de boues et de sédiments
ISO 5667-16, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 16: Lignes directrices pour les essais biologiques
des échantillons
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
nouveau-né
individu nouvellement éclos
3.2
première alimentation
alimentation des nouveau-nés (3.1) avec une petite quantité d’algues séchées (Spiruline) avant l’essai
4 Principe
Les larves d’Heterocypris incongruens fraîchement écloses sont exposées à l’échantillon de sédiment à
analyser et le pourcentage de mortalité des organismes d’essai est déterminé après 6 jours d’exposition.
Si le pourcentage de mortalité est faible (par exemple <30 %), l’inhibition de la croissance des organismes dans
l’échantillon de sédiment est déterminée par rapport à celle obtenue avec le sédiment de contrôle, comme
critère d’effet sublétal.
5 Environnement d’essai
L’essai doit être effectué à l’abri de la lumière, dans une pièce ou un incubateur thermostaté à (25 ± 1) °C dans
les récipients d’essai.
L’atmosphère doit être exempte de poussières ou de vapeurs toxiques. L’utilisation de solutions de contrôle permet
aussi de vérifier que l’essai se déroule dans une atmosphère dépourvue de poussières et de vapeurs toxiques.
6 Réactifs, organismes d’essai et milieux d’essai
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
6.1 Organismes d’essai
Les organismes d’essai sont des nouveau-nés d’ostracodes d’eau douce Heterocypris incongruens obtenus
par éclosion d’œufs quiescents (cystes) de ce crustacé.
Les cystes d’H. incongruens proviennent des cultures de laboratoire décrites dans l’Annexe A. Ils peuvent
1)
également être achetés auprès d’un organisme spécialisé .
6.2 Eau pure, ayant une conductivité inférieure à 10 µS/cm.
6.3 Milieu d’essai, préparé en dissolvant les substances minérales suivantes dans 1 l d’eau pure (6.2):
NaHCO 96 mg
CaSO , 2H O 60 mg
4 2
MgSO 60 mg
KCl 4 mg
Ce milieu d’essai correspond à une eau synthétique de dureté modérée, c’est-à-dire contenant du CaCO à
des concentrations de 80 mg/l à 100 mg/l (voir Référence [26]). Ainsi préparé, le milieu a un pH de 7,6 ± 0,3.
Le milieu d’essai peut être utilisé pendant deux semaines lorsqu’il est conservé au réfrigérateur (entre 4 °C et
7 °C) et à l’abri de la lumière.
Aérer le milieu d’essai jusqu’à ce que la concentration en oxygène dissous atteigne la valeur de saturation
de l’air et jusqu’à ce que le pH soit stable. Si nécessaire, ajuster le pH à 7,6 ± 0,3 en utilisant une solution
d’hydroxyde de sodium ou d’acide chlorhydrique. La concentration de l’acide ou de la base requis doit être
choisie de façon que le volume à mélanger soit le plus faible possible. Avant utilisation, porter la température
du milieu d’essai à (25 ± 1) °C.
6.4 Nourriture algale
6.4.1 Suspension de Spiruline. Suspension de poudre de l’algue bleue-verte Spirulina platensis préparée
en mélangeant 150 mg en masse sèche de Spiruline dans 10 ml d’eau pure (6.2). La poudre de Spiruline est
disponible dans les magasins diététiques.
1) MicroBioTests Inc., Mariakerke (Gent), Belgique, est un exemple de fournisseur de cystes d’Heterocypris incongruens
appropriés. Cette information est donnée à l’intention des utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l’ISO
approuve ou recommande l’emploi exclusif du fournisseur ainsi désigné.
2 © ISO 2012 – Tous droits réservés
6.4.2 Algues vertes. Suspension de 25 ml d’algues vertes (par exemple Scenedesmus spp.) à une
concentration d’environ 1,5 × 10 cellules/ml, préparée avec le milieu d’essai (6.3).
Les algue
...
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