SIST ISO 6870:1995

Animal feeding stuffs -- Determination of zearalenone content

The limit of determination is approximately 50 micro-gram/kg. The method consists in extracting of a test portion with a mixture of acetonitrile and potassium chloride solution, filtrating, defatting, purifying, filtrating again, extracting into chloroform which is subsequently evaporated. Dissolution of the dry extract in a mixture of benzene and acetonitrile and thin layer chromatography. Determination by visual measurement or by measurement of the intensity of fluorescence under UV ligt by comparison with known quantities of zearalenone applied to the same plate. Confirmation using bis-diazotized benzidine reagent.

Aliments des animaux -- Dosage de la zéaralénone

Krma - Določanje vsebnosti zearaleona

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 30-Apr-1995
• Withdrawal Date: 31-Oct-2002
• ICS: 65.120 - Animal feeding stuffs
• Technical Committee: KŽP - Agricultural food products
• Current Stage: 9900 - Withdrawal (Adopted Project)
• Start Date: 01-Nov-2002
• Due Date: 01-Nov-2002
• Completion Date: 01-Nov-2002
• Ref Project: ISO 6870:1985 - Animal feeding stuffs — Determination of zearalenone content

Relations

• Revised: ISO 6870:2002 - Animal feeding stuffs — Qualitative determination of zearalenone
• Effective Date: 12-May-2008
• Revised: SIST ISO 6870:2002 - Animal feeding stuffs -- Qualitative determination of zearalenone
• Effective Date: 12-May-2008

Standards Content (Sample)

International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.ME>K~YHAPOfiHAR OPrAHM3Al.@lfl fl0 CTAHAAPTM3ALWIWORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Determination of zearalenone
Animal feeding stuffs -
content
- Dosage de Ia z&araknone
Aliments des animaux
First edition - 1985-11-15
Ref. No. ISO 68704985 (E)
UDC 636.085 : 543.8
agricultural products, animal feeding products, Chemical analysis, determination of content, zearalenone.
Descriptors :
Price based on 5 pages

---------------------- Page: 1 ----------------------
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national Standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through ISO technical committees. Esch member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the ISO Council. They are approved in accordance with ISO procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard ISO 6870 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products.
Users should note that all International Standards undergo revision from time to time
and that any reference made herein to any other International Standard implies its
latest edition, unless otherwise stated.
0 International Organkation for Standardkation, 1985
Printed in Switzerland

---------------------- Page: 2 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 68704985 (E)
Determination of zearalenone
Animal feeding stuffs -
content
1 Scope and field of application 3.4 Benzene/acetonitrile, 98 + 2 mixture, by volume.
WARNING - Benzene is toxic by inhalation and contact
This International Standard specifies a method for the deter-
with skin and is highly flammable.
mination of the zearalenone content of animal feeding stuffs
and, in particular, of maize.
3.5 Developing solvents.
NOTE - Although Sorghum gives interfering fluorescent spots iden-
tical to those of zearalenone, the method is still applicable to this feed,
because the R, values are different after development of the
3.51 Toluene/ethyl acetate/formic acid,
chromatogram in the second direction. These spots are not developed
6 + 3 + 1 mixture, by volume.
by the specified confirmation technique.
3.5.2 Chloroform/ethanol, 95 + 5 mixture, by volume.
The limit of determination of zearalenone is approximately
50 l-wb
3.6 Potassium chloride, 40 g/i Solution.
2 Principle
3.7 Lead acetate Solution, prepared as follows.
Extraction of a test Portion with a mixture of acetonitrile and
Weigh 200 g of lead acetate into a 1 000 ml one-mark
potassium chloride Solution, filtration, taking an aliquot Portion
volumetric flask, add 3 ml of acetic acid, dilute to the mark with
and defatting with iso-octane followed by purification in a mix-
water and mix.
ture of acetonitrile, water and lead acetate in the presence of
diatomaceous earth. After filtration, taking an aliquot Portion
and extraction into Chloroform which is subsequently
3.8 Bis-diazotized benzidine reagent, prepared as follows.
evaporated.
WARNING - Benzidine is a carcinogen, and is toxic by
Dissolution of the dry extract in a mixture of benzene and
inhalation, contact with the skin and ingestion.
acetonitrile and two-dimensional thin layer chromatography of
an aliquot Portion of this Solution. Determination of the
3.8.1 Preparation of 5 g/l benzidine Solution
zearalenone content by visual measurement or by measure-
ment of the intensity of fluorescence of the spot under UV light
Place 0,5 g of benzidine in a 100 ml flask containing 20 ml of
by comparison with known quantities of zearalenone applied to
water and 1,5 ml of hydrochloric acid and make up to volume
the same plate.
with water.
Confirmation of the identity of the zearalenone using bis-
Keep this Solution protected from light in a brown glass bottle.
diazotized benzidine reagent.
3.8.2 Preparation of the reagent
3 Reagents
Cool equal volumes of the benzidine Solution (3.8.1) and of a
100 g/l sodium nitrite solution to between 0 and -5 OC.
All the reagents shall be of recognized analytical grade and the
water used shall be distilled water or water of at least equivalent
Thoroughly mix the two solutions. The solution obtained is
purity.
dark purple and turbid. Leave to attain room temperature
(yellow colour) before use.
3.1 Acetonitrile.
Prepare this reagent just before use.
3.2 lso-octane.
3.9 Diatomaceous earth (Celite 545). hydrochloric acid
3.3 Chloroform. washed.
1

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 6870-1985 (E)
3.10 Nitrogen. 4.7 Shott wavelength UV lamp (wavelength 253 nm).
The intensity sf irradiation shall be such as to clearly distinguish
3.4 1 Zearalenone, Standard Solution of concentration
a spot of 25 ng of zearalenone on thin layer plate when the
10 pg/ml, in benzene.
lamp is placed at a distance of 100 mm from the plate.
Determine the absorption spectrum of the Solution between
WARNING
- In view of the danger of UV light to the
300 and 330 nm by means of a spectrometer, using 10 mm
eyes, eye-protection shall be worn.
silica Optical cells and using benzene as reference; record the
maximum absorbance, A, which is close to 317 nm.
4.8 Test-tube, of capacity 10 ml, with a polyethylene stop-
per.
Calculate the zearalenone concentration,
in microg rams
Per
millilitre, of the Solution, by means of the formula
4.9 Fluorodensitometer (optional, but desirable).
318 x A x 1 000
4.10 Water-bath, capable of being controlled at 60 OC.
6060
4.11 Conical flask, of capacity 500 ml, with a ground glass
where
stopper.
318 is the molar mass of zearalenone;
4.12 Separating funnels, of capacity 250 ml.
6 060 is the molar extinction coefficient.
4.13 Measuring cylinders, of capacities 100 and 250 ml.
4.14 Pipettes, of capacities 50 and 100 ml.
4 Apparatus
4.15 Microsyringes.
Usual laboratory equipment and in particular
4.1 Grinder, suitable for preparing a product to pass com-
5 Sampling
1 mm.
pletely through a sieve of aperture size
Take the laboratory Sample of the product to be tested in accor-
dance with the International Standard appropriate to the
4.2 Shaker, capable of producing about 100 oscillations
Per
product concerned, unless sampling for the determination of
minute.
zearalenone is excluded from its field of application. If an ap-
propriate International Standard does not exist the Parties con-
4.3 Filter Papers, medium grade (a rapid grade filter Paper
cerned shall resch agreement on this subject, taking into ac-
gives a turbid Solution; a slow grade filter Paper will become
count the characteristics of the product to be sampled.
clogged).
6 Procedure
4.4 Rotary evaporator with round bottom flask.
6.1 Preparation of the test Sample
4.5 Apparatus for thin layer chromatography, i.e. ap-
paratus required for the preparation of the plates (4.6) and ap-
Grind the Sample so that it Passes com etely throug ha sieve of
Pl
plication of spots (capillary pipettes or microsyringes), a
aperture size 1 mm. Mix thoroug hly.
developing tank, and apparatus for spraying the reagent (3.8)
on the plates.
6.2 Test Portion
4.6 Glass plates for thin layer chromatography, of
Weigh, to the nearest 0,Ol g, 50 g of the test Sample into the
dimensions 200 mm x 200 mm, prepared as follows (the quan-
conical flask (4.11).
tities indicated are sufficient for the preparation of 5 plates).
6.3 Extraction
Weigh 30 g of silica gel G-HR into a conical flask, add 60 ml of
water, stopper and mix thoroughly for 1 min. Spread the slurry
Add 180 ml of the ac
...

6870
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.ME~YHAPOAHAR OPTAHM3AUMR l-l0 CTAH~APTM3AlJWl*ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Aliments des animaux - Dosage de la zéaralénone
Animal feeding stuffs - De termina tion of zearalenone content
Première édition - 1985-l l-15
Réf. no : ISO 6870-1985 (FI
CDU 636.085: 543.8
analyse chimique, dosage, zéaralénone.
Descripteurs : produit agricole, produit alimentaire animale,
Prix basé sur 5 pages

---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requiérent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 6870 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la derniére édition.
Organisation internationale de normalisation, 1985
0
Imprimé en Suisse

---------------------- Page: 2 ----------------------
IsO 6870-1985 W
NORME INTERNATIONALE
- Dosage de la zéaralénone
Aliments des animaux
3.4 Mélange de benzène-acétonitrile, 98 + 2, en volume.
1 Objet et domaine d’application
Le benzène est une substance toxi-
AVERTISSEMENT -
La présente Norme internationale spécifie une méthode de
que par inhalation et contact avec la peau, et très inflam-
dosage de la zéaralenone dans les aliments des animaux et en
mable.
particulier dans le maïs.
NOTE - Bien que le sorgho présente des taches parasites de fluores-
3.5 Solvants de développement.
cence identiques à celles de la zéaralénone, la méthode est applicable à
cet aliment, car les valeurs de R, sont différentes après le développe-
3.51 Mélange toluène-acétate d’éthyle-acide formique,
ment du chromatogramme dans la seconde direction. Ces taches ne
6 + 3 + 1, en volume.
sont pas revélées par la technique de confirmation spécifiée.
La limite de détermination de la zéaralénone se situe aux envi-
3.5.2 Mélange chloroforme-éthanol, 95 + 5, en volume.
rons de 50 pg/kg.
3.6 Chlorure de potassium, solution à 40 g/l.
2 Principe
3.7 Acetate de plomb, solution préparée comme suit.
Extraction sur une prise d’essai par un mélange d’acetonitrile et
Peser dans une fiole de 1 000 ml, 200 g d’acétate de plomb,
de solution de chlorure de potassium, filtration, prélévement
ajouter 3 ml d’acide acétique, compléter au trait repére avec de
d’une partie aliquote suivi d’une délipidation à l’iso-octane puis
l’eau et homogénéiser.
d’une purification dans un mélange d’acétonitrile, d’eau et
d’acetate de plomb en présence de terre de diatomées. Après
3.8 Réactif à la benzidine bis-diazotée, préparé comme
filtration, prélévement d’une partie aliquote et extraction dans
suit.
du chloroforme qui est ensuite évaporé.
AVERTISSEMENT - La benzidine est une substance can-
Dissolution de l’extrait sec dans un mélange de benzène et
cérogène très toxique par inhalation, contact avec la
d’acétonitrile et chromatographie bidimensionnelle sur couche
peau et ingestion.
mince d’une partie aliquote de cette solution. Détermination de
la teneur en zearalénone par mesure visuelle ou par mesure, à
l’aide d’un fluorodensitomètre, de l’intensité de fluorescence de
3.8.1 Preparation d’une solution de benzidine à 5 g/l
la tache examinée a la lumière UV, par comparaison avec des
quantités connues d’un étalon de zearalenone placé sur la
Mettre 0,5 g de benzidine dans une fiole de 100 ml contenant
même plaque.
20 ml d’eau et 1,5 ml d’acide chlorhydrique, puis compléter
avec de l’eau.
Confirmation de l’identité de la zéaralénone à l’aide d’un réactif
à la benzidine bis-diazotée.
Conserver cette solution à l’abri de la lumière dans un flacon en
verre inactinique.
3 Réactifs
3.8.2 Preparation du reactif
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue et
Refroidir entre 0 et - 5 OC des volumes égaux de la solution de
l’eau utilisée doit être de l’eau distillée ou de l’eau de pureté au
benzidine (3.8.1) et d’une solution de nitrite de sodium à
moins équivalente.
100 gll.
Mélanger avec soin les deux solutions. La solution obtenue est
3.1 Acetonitrile.
trouble et de couleur pourpre fonce. La laisser se réchauffer à la
température du laboratoire avant utilisation (solution de couleur
3.2 lso-octane.
jaune).
Préparer ce réactif extemporanément.
3.3 Chloroforme.

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 68704985 (FI
Les plaques prêtes à l’emploi conviennent dans la mesure où
3.9 Terre de diatomées (Celite 5451, lavée à l’acide
chlorhydrique. elles donnent des résultats semblables à ceux obtenus avec des
plaques préparées comme indiqué ci-dessus.
3.10 Azote.
4.7 Lampe UV à ondes courtes (longueur d’onde 253 nm).
3.11 Zéaralénone, solution étalon à 10 pg/ml dans le ben-
L’intensité d’irradiation doit permettre de distinguer encore net-
zène.
tement une tache de 25 ng de zéaralénone sur une plaque pour
chromatographie sur couche mince, à une distance de 100 mm
Déterminer le spectre d’absorption de la solution entre 300 et
de la lampe.
330 nm, à l’aide d’un spectromètre, dans une cuve en silice de
10 mm d’épaisseur, par rapport au benzène, et relever le maxi- AVERTISSEMENT - La- lumière UV &ant dangereuse
mum d’absorbance (A) qui est proche de 317 nm.
pour les yeux, il y a lieu de porter des lunettes protectri-
ces.
Calculer la concentration en zéaralénone, en microg rammes
Par
millilitre, de la solution, à l’aide de la formu le
4.8 Tube à essais, de 10 ml de capacité avec bouchon de
polyéthyléne.
318 x A x 1 000
4.9 Fluorodensitomètre (éventuellement, mais de préfé-
6060
rente).
où
4.10 Bain d’eau, réglable à 60 OC.
318 est la masse molaire de la zéaralénone;
4.11 Fiole conique, de 500 ml de capacité, à joint rodé.
6060 est le coefficient d’extinction molaire.
4.12 . Ampoules & décanter, de 250 ml de capacité.
4.13 Éprouvettes graduées, de 100 et 250 ml de capacité.
4 Appareillage
Matériel courant de laboratoire, et notamment: 4.14 Pipettes, de 50 et 100 ml de capacité.
4.15 Microseringues.
Iroyeur, permettant d ‘obtenir un produit qui passe en
4.1 B
totalite au travers d’un tamis de 1 mm d’ouverture de maille.
5 Échantillonnage
4.2 Agitateur, permettant d’obtenir environ 100 oscillations
par minute.
Prélever l’échantillon pour laboratoire sur le produit à échantil-
lonner, en se conformant à la Norme internationale relative au
produit concerné, sauf si l’échantillonnage en vue de la déter-
4.3 Papier filtre, à filtration moyenne (un papier à filtration
mination de la zéaralénone est exclu de son domaine d’applica-
rapide donne une solution trouble, et un papier à filtration lente
tion. S’il n’existe pas de Norme internationale appropriée, les
entraîne des colmatages).
parties concernées doivent se mettre d’accord sur ce sujet, en
tenant compte des caractéristiques du produit à échantillonner.
44 . Apparei I rotatif à évaporatio n pression réduite
avec ballon & fond rond.
6 Mode opératoire
4.5 Appareillage pour chromatographie sur couche
mince, à savoir matériel nécessaire à la préparation des pla-
6.1 Préparation de l’échantillon pour essai
ques (4.6) et au dépôt des taches (pipettes capillaires ou micro-
de façon qu’il passe en totalité au travers
seringues), cuve de développement et appareil pour pulvériser Broyer I’echantillon
le réactif (3.8) sur les plaques. d’un tamis de 1 mm d’ouverture de maille 1. Bien homogénéiser.
6.2 Prise d’essai
4.6 Plaques de verre pour chromatographie sur couche
mince, de dimensions 200 mm x 200 mm, préparées comme
Peser, à 0,Ol g prés, 50 g de l’échantillon pour essai dans une
suit (les quantités indiquées conviennent pour la préparation de
fiole conique de 5
...

6870
Norme internationale
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.ME~YHAPOAHAR OPTAHM3AUMR l-l0 CTAH~APTM3AlJWl*ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Aliments des animaux - Dosage de la zéaralénone
Animal feeding stuffs - De termina tion of zearalenone content
Première édition - 1985-l l-15
Réf. no : ISO 6870-1985 (FI
CDU 636.085: 543.8
analyse chimique, dosage, zéaralénone.
Descripteurs : produit agricole, produit alimentaire animale,
Prix basé sur 5 pages

---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requiérent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 6870 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la derniére édition.
Organisation internationale de normalisation, 1985
0
Imprimé en Suisse

---------------------- Page: 2 ----------------------
IsO 6870-1985 W
NORME INTERNATIONALE
- Dosage de la zéaralénone
Aliments des animaux
3.4 Mélange de benzène-acétonitrile, 98 + 2, en volume.
1 Objet et domaine d’application
Le benzène est une substance toxi-
AVERTISSEMENT -
La présente Norme internationale spécifie une méthode de
que par inhalation et contact avec la peau, et très inflam-
dosage de la zéaralenone dans les aliments des animaux et en
mable.
particulier dans le maïs.
NOTE - Bien que le sorgho présente des taches parasites de fluores-
3.5 Solvants de développement.
cence identiques à celles de la zéaralénone, la méthode est applicable à
cet aliment, car les valeurs de R, sont différentes après le développe-
3.51 Mélange toluène-acétate d’éthyle-acide formique,
ment du chromatogramme dans la seconde direction. Ces taches ne
6 + 3 + 1, en volume.
sont pas revélées par la technique de confirmation spécifiée.
La limite de détermination de la zéaralénone se situe aux envi-
3.5.2 Mélange chloroforme-éthanol, 95 + 5, en volume.
rons de 50 pg/kg.
3.6 Chlorure de potassium, solution à 40 g/l.
2 Principe
3.7 Acetate de plomb, solution préparée comme suit.
Extraction sur une prise d’essai par un mélange d’acetonitrile et
Peser dans une fiole de 1 000 ml, 200 g d’acétate de plomb,
de solution de chlorure de potassium, filtration, prélévement
ajouter 3 ml d’acide acétique, compléter au trait repére avec de
d’une partie aliquote suivi d’une délipidation à l’iso-octane puis
l’eau et homogénéiser.
d’une purification dans un mélange d’acétonitrile, d’eau et
d’acetate de plomb en présence de terre de diatomées. Après
3.8 Réactif à la benzidine bis-diazotée, préparé comme
filtration, prélévement d’une partie aliquote et extraction dans
suit.
du chloroforme qui est ensuite évaporé.
AVERTISSEMENT - La benzidine est une substance can-
Dissolution de l’extrait sec dans un mélange de benzène et
cérogène très toxique par inhalation, contact avec la
d’acétonitrile et chromatographie bidimensionnelle sur couche
peau et ingestion.
mince d’une partie aliquote de cette solution. Détermination de
la teneur en zearalénone par mesure visuelle ou par mesure, à
l’aide d’un fluorodensitomètre, de l’intensité de fluorescence de
3.8.1 Preparation d’une solution de benzidine à 5 g/l
la tache examinée a la lumière UV, par comparaison avec des
quantités connues d’un étalon de zearalenone placé sur la
Mettre 0,5 g de benzidine dans une fiole de 100 ml contenant
même plaque.
20 ml d’eau et 1,5 ml d’acide chlorhydrique, puis compléter
avec de l’eau.
Confirmation de l’identité de la zéaralénone à l’aide d’un réactif
à la benzidine bis-diazotée.
Conserver cette solution à l’abri de la lumière dans un flacon en
verre inactinique.
3 Réactifs
3.8.2 Preparation du reactif
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue et
Refroidir entre 0 et - 5 OC des volumes égaux de la solution de
l’eau utilisée doit être de l’eau distillée ou de l’eau de pureté au
benzidine (3.8.1) et d’une solution de nitrite de sodium à
moins équivalente.
100 gll.
Mélanger avec soin les deux solutions. La solution obtenue est
3.1 Acetonitrile.
trouble et de couleur pourpre fonce. La laisser se réchauffer à la
température du laboratoire avant utilisation (solution de couleur
3.2 lso-octane.
jaune).
Préparer ce réactif extemporanément.
3.3 Chloroforme.

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 68704985 (FI
Les plaques prêtes à l’emploi conviennent dans la mesure où
3.9 Terre de diatomées (Celite 5451, lavée à l’acide
chlorhydrique. elles donnent des résultats semblables à ceux obtenus avec des
plaques préparées comme indiqué ci-dessus.
3.10 Azote.
4.7 Lampe UV à ondes courtes (longueur d’onde 253 nm).
3.11 Zéaralénone, solution étalon à 10 pg/ml dans le ben-
L’intensité d’irradiation doit permettre de distinguer encore net-
zène.
tement une tache de 25 ng de zéaralénone sur une plaque pour
chromatographie sur couche mince, à une distance de 100 mm
Déterminer le spectre d’absorption de la solution entre 300 et
de la lampe.
330 nm, à l’aide d’un spectromètre, dans une cuve en silice de
10 mm d’épaisseur, par rapport au benzène, et relever le maxi- AVERTISSEMENT - La- lumière UV &ant dangereuse
mum d’absorbance (A) qui est proche de 317 nm.
pour les yeux, il y a lieu de porter des lunettes protectri-
ces.
Calculer la concentration en zéaralénone, en microg rammes
Par
millilitre, de la solution, à l’aide de la formu le
4.8 Tube à essais, de 10 ml de capacité avec bouchon de
polyéthyléne.
318 x A x 1 000
4.9 Fluorodensitomètre (éventuellement, mais de préfé-
6060
rente).
où
4.10 Bain d’eau, réglable à 60 OC.
318 est la masse molaire de la zéaralénone;
4.11 Fiole conique, de 500 ml de capacité, à joint rodé.
6060 est le coefficient d’extinction molaire.
4.12 . Ampoules & décanter, de 250 ml de capacité.
4.13 Éprouvettes graduées, de 100 et 250 ml de capacité.
4 Appareillage
Matériel courant de laboratoire, et notamment: 4.14 Pipettes, de 50 et 100 ml de capacité.
4.15 Microseringues.
Iroyeur, permettant d ‘obtenir un produit qui passe en
4.1 B
totalite au travers d’un tamis de 1 mm d’ouverture de maille.
5 Échantillonnage
4.2 Agitateur, permettant d’obtenir environ 100 oscillations
par minute.
Prélever l’échantillon pour laboratoire sur le produit à échantil-
lonner, en se conformant à la Norme internationale relative au
produit concerné, sauf si l’échantillonnage en vue de la déter-
4.3 Papier filtre, à filtration moyenne (un papier à filtration
mination de la zéaralénone est exclu de son domaine d’applica-
rapide donne une solution trouble, et un papier à filtration lente
tion. S’il n’existe pas de Norme internationale appropriée, les
entraîne des colmatages).
parties concernées doivent se mettre d’accord sur ce sujet, en
tenant compte des caractéristiques du produit à échantillonner.
44 . Apparei I rotatif à évaporatio n pression réduite
avec ballon & fond rond.
6 Mode opératoire
4.5 Appareillage pour chromatographie sur couche
mince, à savoir matériel nécessaire à la préparation des pla-
6.1 Préparation de l’échantillon pour essai
ques (4.6) et au dépôt des taches (pipettes capillaires ou micro-
de façon qu’il passe en totalité au travers
seringues), cuve de développement et appareil pour pulvériser Broyer I’echantillon
le réactif (3.8) sur les plaques. d’un tamis de 1 mm d’ouverture de maille 1. Bien homogénéiser.
6.2 Prise d’essai
4.6 Plaques de verre pour chromatographie sur couche
mince, de dimensions 200 mm x 200 mm, préparées comme
Peser, à 0,Ol g prés, 50 g de l’échantillon pour essai dans une
suit (les quantités indiquées conviennent pour la préparation de
fiole conique de 5
...

SLOVENSKI SIST ISO 6870
prva izdaja
STANDARD
maj 1995
Krma - Dolo~anje vsebnosti zearalenona (prevzet standard
ISO 6870:1985 z metodo platnice)
Animal feeding stuffs - Determination of zearalenone content
Aliments des animaux - Dosage de la zéaralénone
Deskriptorji: kmetijski proizvodi, krmila, kemijska analiza, dolo~anje vsebnosti, zearalenon
Referen~na {tevilka
ICS 71.040.40 * 65.120 SIST ISO 6870:1995 (en)
Nadaljevanje na straneh od II do III in 1 do 5
© Standard je zalo`il in izdal Urad Republike Slovenije za standardizacijo in meroslovje pri Ministrstvu za znanost in tehnologijo.
Razmno`evanje ali kopiranje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

---------------------- Page: 1 ----------------------

SIST ISO 6870 : 1995
UVOD
Standard SIST ISO 6870, Krma - Dolo~anje vsebnosti zearalenona, prva izdaja, 1995, ima
status slovenskega standarda in je z metodo platnice prevzet mednarodni standard ISO 6870,
Animal feeding stuffs - Determination of zearalenone content, first edition, 1985-11-15.
PREDGOVOR
Mednarodni standard ISO 6870:1985 je pripravil tehni~ni odbor Mednarodne organizacije za
standardizacijo ISO/TC 34 Kmetijski pridelki in `ivilski proizvodi.
Odlo~itev za prevzem tega standarda po metodi platnice je sprejela delovna skupina WG 10
Analitika krme v okviru tehni~nega odbora USM/TC K@P Kmetijski pridelki in `ivilski proizvodi.
Ta slovenski standard je dne 1995-05-08 odobril direktor USM.
ZVEZA S STANDARDI
S prevzemom tega mednarodnega standarda veljajo naslednje zveze:
SIST ISO 6651:1995 (en) Krma - Dolo~anje vsebnosti aflatoksina B
1
SIST ISO 6654:1995 (en) Krma - Dolo~anje vsebnosti se~nine
SIST ISO 6866:1995 (en) Krma - Dolo~anje vsebnosti prostega in skupnega gosipola
SIST ISO 5498:1995 (en) Kmetijski pridelki in `ivilski proizvodi - Dolo~anje vsebnosti
surove vlaknine - Splo{na metoda
SIST ISO 5983:1995 (en) Krma - Dolo~anje vsebnosti du{ika in izra~un vsebnosti surovih
beljakovin
SIST ISO 5984:1995 (en) Krma - Dolo~anje surovega pepela
SIST ISO 5985:1995 (en) Krma - Dolo~anje pepela, netopnega v klorovodikovi kislini
SIST ISO 6490-1:1995 (en) Krma - Dolo~anje vsebnosti kalcija - 1. del: Titrimetri~na metoda
SIST ISO 6490-2:1995 (en) Krma - Dolo~anje vsebnosti kalcija - 2. del: Metoda atomske
absorpcijske spektrometrije
SIST ISO 6491:1995 (en) Krma - Dolo~anje vsebnosti skupnega fosforja - Spektrofoto-
metri~na metoda
SIST ISO 6495:1995 (en) Krma - Dolo~anje vsebnosti v vodi topnih kloridov
SIST ISO 6496:1995 (en) Krma - Dolo~anje vsebnosti vlage
SIST ISO 5506:1995 (en) Sojini proizvodi - Dolo~anje ureazne aktivnosti
SIST ISO 6541:1995 (en) Kmetijski pridelki in `ivilski proizvodi - Dolo~anje vsebnosti
surove vlaknine - Modificirana Scharrerjeva metoda
OSNOVA ZA IZDAJO STANDARDA
- Prevzem standarda ISO 6870:1985
II

---------------------- Page: 2 ----------------------

SIST ISO 6870 : 1995
OPOMBI
- Povsod, kjer se v besedilu standarda uporablja izraz “mednarodni standard”, to pomeni
v SIST ISO 6870:1995 “slovenski standard”.
- Uvod in predgovor nista sestavni del standarda.
Po mnenju Ministrstva za informiranje Republike Slovenije z dne 18. februarja 1992, {tev. 23/96-92, spada ta publikacija med
proizvode informativne narave iz 13. to~ke tarifne {tevilke 3, za katere se pla~uje 5-odstotni prometni davek.
III

---------------------- Page: 3 ----------------------

International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.ME>K~YHAPOfiHAR OPrAHM3Al.@lfl fl0 CTAHAAPTM3ALWIWORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Determination of zearalenone
Animal feeding stuffs -
content
- Dosage de Ia z&araknone
Aliments des animaux
First edition - 1985-11-15
Ref. No. ISO 68704985 (E)
UDC 636.085 : 543.8
agricultural products, animal feeding products, Chemical analysis, determination of content, zearalenone.
Descriptors :
Price based on 5 pages

---------------------- Page: 4 ----------------------

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national Standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through ISO technical committees. Esch member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the ISO Council. They are approved in accordance with ISO procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard ISO 6870 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products.
Users should note that all International Standards undergo revision from time to time
and that any reference made herein to any other International Standard implies its
latest edition, unless otherwise stated.
0 International Organkation for Standardkation, 1985
Printed in Switzerland

---------------------- Page: 5 ----------------------

INTERNATIONAL STANDARD ISO 68704985 (E)
Determination of zearalenone
Animal feeding stuffs -
content
1 Scope and field of application 3.4 Benzene/acetonitrile, 98 + 2 mixture, by volume.
WARNING - Benzene is toxic by inhalation and contact
This International Standard specifies a method for the deter-
with skin and is highly flammable.
mination of the zearalenone content of animal feeding stuffs
and, in particular, of maize.
3.5 Developing solvents.
NOTE - Although Sorghum gives interfering fluorescent spots iden-
tical to those of zearalenone, the method is still applicable to this feed,
because the R, values are different after development of the
3.51 Toluene/ethyl acetate/formic acid,
chromatogram in the second direction. These spots are not developed
6 + 3 + 1 mixture, by volume.
by the specified confirmation technique.
3.5.2 Chloroform/ethanol, 95 + 5 mixture, by volume.
The limit of determination of zearalenone is approximately
50 l-wb
3.6 Potassium chloride, 40 g/i Solution.
2 Principle
3.7 Lead acetate Solution, prepared as follows.
Extraction of a test Portion with a mixture of acetonitrile and
Weigh 200 g of lead acetate into a 1 000 ml one-mark
potassium chloride Solution, filtration, taking an aliquot Portion
volumetric flask, add 3 ml of acetic acid, dilute to the mark with
and defatting with iso-octane followed by purification in a mix-
water and mix.
ture of acetonitrile, water and lead acetate in the presence of
diatomaceous earth. After filtration, taking an aliquot Portion
and extraction into Chloroform which is subsequently
3.8 Bis-diazotized benzidine reagent, prepared as follows.
evaporated.
WARNING - Benzidine is a carcinogen, and is toxic by
Dissolution of the dry extract in a mixture of benzene and
inhalation, contact with the skin and ingestion.
acetonitrile and two-dimensional thin layer chromatography of
an aliquot Portion of this Solution. Determination of the
3.8.1 Preparation of 5 g/l benzidine Solution
zearalenone content by visual measurement or by measure-
ment of the intensity of fluorescence of the spot under UV light
Place 0,5 g of benzidine in a 100 ml flask containing 20 ml of
by comparison with known quantities of zearalenone applied to
water and 1,5 ml of hydrochloric acid and make up to volume
the same plate.
with water.
Confirmation of the identity of the zearalenone using bis-
Keep this Solution protected from light in a brown glass bottle.
diazotized benzidine reagent.
3.8.2 Preparation of the reagent
3 Reagents
Cool equal volumes of the benzidine Solution (3.8.1) and of a
100 g/l sodium nitrite solution to between 0 and -5 OC.
All the reagents shall be of recognized analytical grade and the
water used shall be distilled water or water of at least equivalent
Thoroughly mix the two solutions. The solution obtained is
purity.
dark purple and turbid. Leave to attain room temperature
(yellow colour) before use.
3.1 Acetonitrile.
Prepare this reagent just before use.
3.2 lso-octane.
3.9 Diatomaceous earth (Celite 545). hydrochloric acid
3.3 Chloroform. washed.
1

---------------------- Page: 6 ----------------------

ISO 6870-1985 (E)
3.10 Nitrogen. 4.7 Shott wavelength UV lamp (wavelength 253 nm).
The intensity sf irradiation shall be such as to clearly distinguish
3.4 1 Zearalenone, Standard Solution of concentration
a spot of 25 ng of zearalenone on thin layer plate when the
10 pg/ml, in benzene.
lamp is placed at a distance of 100 mm from the plate.
Determine the absorption spectrum of the Solution between
WARNING
- In view of the danger of UV light to the
300 and 330 nm by means of a spectrometer, using 10 mm
eyes, eye-protection shall be worn.
silica Optical cells and using benzene as reference; record the
maximum absorbance, A, which is close to 317 nm.
4.8 Test-tube, of capacity 10 ml, with a polyethylene stop-
per.
Calculate the zearalenone concentration,
in microg rams
Per
millilitre, of the Solution, by means of the formula
4.9 Fluorodensitometer (optional, but desirable).
318 x A x 1 000
4.10 Water-bath, capable of being controlled at 60 OC.
6060
4.11 Conical flask, of capacity 500 ml, with a ground glass
where
stopper.
318 is the molar mass of zearalenone;
4.12 Separating funnels, of capacity 250 ml.
6 060 is the molar extinction coefficient.
4.13 Measuring cylinders, of capacities 100 and 250 ml.
4.14 Pipettes, of capacities 50 and 100 ml.
4 Apparatus
4.15 Microsyringes.
...